- Phương pháp nhuộm kháng thể đặc hiệu đánh dấu men hay đánh dấu huỳnh quang, là các phương pháp phát hiện trực tiếp vi sinh vật muốn tìm có trong bệnh phẩm nhờ kháng thể đặc hiệu k[r]
(1)1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giáo trình
THỰC TẬP VI SINH GÂY BỆNH
Biên soạn: Dương Nhật Linh Nguyễn Văn Minh
Tp.HCM, naêm 2008
(2)2 MỤC LỤC
PHẦN 1: MỘT SỐ KỸ THUẬT CƠ BẢN Bài 1: Khảo sát trực tiếp
BÀI 2: Kỹ thuật kháng sinh đồ
PHẦN 2: MỘT SỐ KỸ THUẬT ĐỊNH DANH VI KHUẨN BÀI 1: Kỹ thuật định nhóm cầu khuẩn
BÀI 2: Kỹ thuật định danh phẩy khuẩn tả
BÀI 3: Kỹ thuật định danh trực khuẩn mủ xanh
BÀI 4: Kỹ thuật định danh vi khuẩn thương hàn Salmonella typhi
PHẦN 3: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH BỆNH PHẨM BÀI 1: Phương pháp lấy gửi bệnh phẩm
BÀI 2: Phân tích bệnh phẩm: mẩu mủ chất dịch
PHẦN 4: PHẢN ỨNG HUYẾT THANH HỌC
BÀI 1: Phản ứng ngưng kết kháng nguyên - kháng thể
(3)3
(4)4 Bài 1: KHẢO SÁT TRỰC TIẾP
I/ CÁC PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT TRỰC TIẾP
1 Soi tươi
- Qua kính hiển vi thường
+ Soi tươi không cần nền, phương pháp soi tươi qua kính hiển vi đóng bớt tụ quang, với bệnh phẩm đặt giọt nước muối sinh lý lame kính, treo hay ép lamelle Phương pháp nầy dùng để xem di động vi khuẩn
+ Soi tươi cần nền, phương pháp soi tươi qua kính hiển vi đóng bớt tụ quang với bệnh phẩm đặt giọt dung dịch màu làm dung dịch mực tàu; nigrosin; methylene blue, lame kính, ép lamelle Phương pháp nầy dùng xem nang vi khuẩn, hay tìm nấm men có bệnh phẩm Cryptococcus neoformans dịch não tuỷ
- Qua kính hiển vi đen hay đảo phase
+ Qua kính hiển vi đen, mục đích thơng thường xem hình dạng di động vi khuẩn có bệnh phẩm đặt giọt nước muối sinh lý lame kính ép lamelle Phương pháp dùng để tìm xoắn khuẩn giang mai, vi khuẩn leptospira, hay khảo sát di động vi khuẩn
(5)5
tuỷ Nhuộm
- Nhuộm Gram, phương pháp nhuộm thơng thường phịng thí nghiệm vi sinh Phương pháp nhuộm Gram cho phép xác định hình dạng, cách xếp, phân biệt vi khuẩn thuộc loại Gram [+] hay Gram [-]
- Nhuộm đơn Methylene blue kiềm, phương pháp hay dùng để nhuộm khảo sát có diện vi khuẩn Corynebacteria
hay khơng phương pháp nầy cho phép nhuộm vi khuẩn hạt biến sắc có vi khuẩn
- Nhuộm kháng acid, phương pháp hay dùng để nhuộm phát vi khuẩn kháng acid Mycobacteria
- Phương pháp nhuộm huỳnh quang, phương pháp nhuộm vi khuẩn phẩm màu huỳnh uang, áp dụng cho số trường hợp nhuộm huỳnh quang rhodamin phếtđàm tìm vi khuẩn lao
- Phương pháp nhuộm kháng thể đặc hiệu đánh dấu men hay đánh dấu huỳnh quang, phương pháp phát trực tiếp vi sinh vật muốn tìm có bệnh phẩm nhờ kháng thể đặc hiệu kháng nguyên vi sinh vật đánh dấu men (phát qua quan sát kính hiển vi thường) hay huỳnh quang (phát qua quan sát kính hiển vi huỳnh quang)
(6)79
chuẩn độ (n-2)
Trộn đều, để yên từ – 10 phút, để KN kết hợp KT (nếu có) Hồng
cầu gà 1%
ml 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Trộn đều, để yên từ 15 – 20 phút, để KN thừa (sau phản ứng kết hợp KN – KT), ngưng kết HC
Quan sát tượng
Kết
(+) (+) (+) (–) (–) (–) (–) (–) (–) (+)
Hiệu giá kháng thể
(7)80 TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Bộ môn xét nghiệm (2002), Vi sinh y học ĐH Y Dược TPHCM
2 Bộ môn vi sinh (2001), Thực tập vi sinh miễn dịch. ĐH Y Dược TPHCM
3 Bộ môn vi sinh (2002), Vi khuẩn học ĐH Y Dược TPHCM Bộ môn vi sinh (2001), Thực tập vi sinh miễn dịch. ĐH Y
Dược TPHCM
5 Nguyễn Hữu Chí (2001), Các bệnh nhiễm trùng đường tiêu
hóa thường gặp. NXB Y học
6 Phan Hữu Nghĩa, Tô Minh Châu (2000), Thực hành Vi sinh
miễn dịch Trường ĐH Mở Bán Công Tp HCM
7. Lê Đình Tiềm cộng (1972), Kỹ thuật xét nghiệm.NXB Y học
8 Phạm Hùng Vân (2002), Các kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm
sang. ĐH Y Dược TPHCM