Xây dựng quy trình tái sinh giống sa nhân tím amomun longiligulare t l wu bằng phương pháp nuôi cấy mô

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ĐÀO DUY HƢNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH TÁI SINH GIỐNG SA NHÂN TÍM (Amomum Longiligulare T.L.Wu) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên - 2013 Số hóa trung tâm học liu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ đại học thái nguyên TRNG I HC KHOA HỌC ĐÀO DUY HƢNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH TÁI SINH GIỐNG SA NHÂN TÍM (Amomum Longiligulare T.L.Wu) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MƠ Chun ngành : Cơng nghệ sinh học Mã số : 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học PGS TS Ngô Xn Bình Thái Ngun - 2013 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thực Các số liệu kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực, chƣa đƣợc cơng bố cơng trình hay tạp chí khác nƣớc nhƣ nƣớc Thái Nguyên, ngày 19 tháng năm 2013 Học viên Đào Duy Hƣng Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ii Tơi xin trân trọng bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Ngơ Xn Bình thầy trực tiếp hƣớng dẫn, tận tình bảo tơi suốt q trình nghiên cứu, học tập hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cám ơn: - Tập thể anh chị đồng nghiệp Bộ môn Công nghệ tế bào - Viện Khoa học Sự sống tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành cơng việc nghiên cứu - Tập thể thầy cô giáo Bộ môn Khoa học sống, trƣờng Đại học khoa học - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian sinh hoạt học tập Bộ môn Cuối muốn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ngƣời thân gia đình ln khuyến khích, động viên nhƣ chia sẻ khó khăn với tơi suốt q trình học tập hồn thành nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Học viên Đào Duy Hƣng Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iii MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung sa nhân 1.1.1 Nguồn gốc phân loại sa nhân 1.1.1.1 Nguồn gốc phân bố sa nhân 1.1.1.2 Phân loại sa nhân tím 1.1.2 Đặc điểm thực vật học 1.1.2.1 Đặc điểm hình thái 1.1.2.2 Đặc điểm sinh thái 1.1.2.3 Đặc điểm sinh lý .7 1.1.3 Tiêu chuẩn chất lượng giá trị 1.1.3.1.Tiêu chuẩn chất lƣợng 1.1.3.2 Giá trị .9 1.2 Tình hình nghiên cứu sa nhân 11 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nhân giống sa nhân nuôi cấy mô giới .11 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nhân giống sa nhân nuôi cấy mô Việt Nam 11 1.3 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 1.3.1 Tầm quan trọng nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 1.3.2 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 14 1.3.3 Các công đoạn nuôi mô tế bào .15 1.3.4 Một số cơng trình nhân giống dược liệu phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật nước 17 CHƢƠNG II NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 20 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 20 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iv 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .20 2.2 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 20 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.2.1 Giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu 21 2.2.2.2 Giai đoạn tái sinh chồi .23 2.2.2.3 Giai đoạn nhân nhanh cụm chồi 25 2.2.2.4 Giai đoạn tạo hoàn chỉnh 27 2.2.2.5 Giai đoạn vƣờn ƣơm 29 2.2.3 Xử lý số liệu 30 2.2.4 Điều kiện thí nghiệm 30 2.2.4.1 Thí nghiệm in vitro 30 2.2.4.2 Thí nghiệm thích ứng in vitro ngồi điều kiện tự nhiên 30 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng hóa chất đến khả vơ trùng mẫu sa nhân tím làm vật liệu khởi đầu 31 3.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng H202 20% đến khả vô trùng mẫu 31 3.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến khả vô trùng mẫu .33 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng chất kích thích sinh trƣởng đến khả tái sinh chồi sa nhân tím (Sau 45 ngày ni cấy) 35 3.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi 35 3.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi 37 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng chất kích thích sinh trƣởng đến hiệu nhân chồi sa nhân tím 38 3.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến hiệu nhân chồi 39 3.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến hiệu nhân chồi 41 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ v 3.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân chồi 43 3.3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân chồi 45 3.3.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP NAA đến hiệu nhân chồi 47 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng chất kích thích sinh trƣởng đến khả rễ chồi sa nhân tím 49 3.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi sa nhân tím 49 3.4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ chồi sa nhân tím 51 3.5 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng giá thể đến thích ứng sa nhân tím in vitro ngồi điều kiện tự nhiên 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .55 TÀI LIỆU THAM KHẢO .56 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vi BAP 6-benzylaminopurine CT Công thức ĐC Đối chứng Kinetin furfurylaminopurine MS Murashinge and Skoog, 1962 NAA α-Naphlene acetic acid TN Thí nghiệm IBA Indole – – butyric acid IAA Indole-3-acetic acid ND Nƣớc dừa GA3 Gibberellin KC Knudson C, 1965 RE Robert Ernst, 1979 VW Vacin & Went, 1949 SH Schenk, Hidebrandt, 1972 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vii Bảng Bảng 3.1 Trang Ảnh hƣởng H202 20% đến khả vô trùng mẫu 31 Ảnh hƣởng HgCl2 0.1% đến khả vô trùng Bảng 3.2 mẫu 33 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi 35 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng Kinetin đến khả tái sinh chồi 37 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng BAP đến hiệu nhân chồi 39 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng Kinetin đến hiệu nhân chồi 41 Ảnh hƣởng kết hợp BAP IBA đến hiệu Bảng 3.7 43 nhân chồi Ảnh hƣởng kết hợp BAP IAA đến hiệu Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 45 nhân chồi Ảnh hƣởng kết hợp BAP NAA đến hiệu nhân chồi Ảnh hƣởng NAA đến hiệu rễ chồi sa nhân 47 49 tím Ảnh hƣởng IBA đến hiệu rễ chồi sa nhân Bảng 3.11 51 tím Ảnh hƣởng giá thể đến thích ứng sa nhân Bảng 3.12 tím in vitro ngồi điều kiện tự nhiên Số hóa trung tâm học liệu 53 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ viii HÌNH Hình Hình Trang Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 21 Hình 3.1 Ảnh hƣởng H202 20% đến khả vơ trùng mẫu 32 Hình 3.2 Ảnh hƣởng HgCl2 0.1% đến khả vơ trùng mẫu 33 Hình 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi 35 Ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi; A: Hình 3.4 Cơng thức đối chứng; B: Cơng thức 36 Hình 3.5 Ảnh hƣởng Kinetin đến khả tái sinh chồi 37 Ảnh hƣởng Kinetinđến khả tái sinh chồi Hình 3.6 sa nhân tím; A: Công thức đối chứng ; B: Công thức 38 Hình 3.7 Ảnh hƣởng BAP đến hiệu nhân chồi 39 Ảnh hƣởng BAP đến hiệu nhân chồi; A: cơng Hình 3.8 thức đối chứng; B: Cơng thức 40 Hình 3.9 Ảnh hƣởng Kinetin đến hiệu nhân chồi 41 Ảnh hƣởng Kinetin đến hiệu nhân chồi; A: Hình 3.10 cơng thức đối chứng; B: Cơng thức Hình 3.11 42 Ảnh hƣởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân chồi Ảnh hƣởng kết hợp BAP IBA đến hiệu 44 Hình 3.12 nhân chồi; A: Cơng thức đối chứng; B: Công thức 45 Ảnh hƣởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân chồi 46 Hình 3.13 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 61 PHỤ LỤC MÔI TRƢỜNG MS Thành phần Nhóm I II III IV Hàm lƣợng (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 H2O 22,3 ZnSO4 7H2O 10,6 CuSO4 H2O 0,025 CaCl2 2H2O 440 KI 0,83 CoCl2 6H2O 0,025 KH2PO4 170 H3BO3 6,2 Na2M0O4 2H2O 0,25 FeSO4 7H2O 27,85 Na2EDTA 2H2O 37,25 Nicotinic acid 0,5 Glycine Thiamine HCl 0,1 Pyridoxine HCl 0,5 Saccarose 30000 V Vitamins Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 62 Agar 6800 Inositol 100 PHỤ LỤC QUY TRÌNH TĨM TẮT NHÂN GIỐNG CÂY SA NHÂN TÍM BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Giai đoạn 1: Thu thập vật liệu Chọn sa nhân tím đời bố mẹ có suất cao, chất lƣợng tốt bệnh Chọn có chiều cao khoảng 0,5 cm chƣa to Giai đoạn 2: Khử trùng nuôi cấy khởi động (i) Cây sa nhân non đƣợc rửa xà phòng dƣới vòi nƣớc chảy, cắt bỏ ngọn, gọt phần rễ vỏ phần củ; (ii) xịt cồn đƣa mẫu vào tủ cấy vô trùng, tiếp tục tách bẹ để lấy phần đỉnh sinh trƣởng bên trong; (iii) Phần đỉnh sinh trƣởng đƣợc lắc qua cồn 700 vòng 30 giây đến phút; (iv) Tráng mẫu (đỉnh sinh trƣởng)1-2 lần nƣớc cất vô trùng; (v) Lắc mẫu nuôi (đỉnh sinh trƣởng) HgCl2 0,1% 15 phút; (vi) Tráng mẫu – lần nƣớc cất vô trùng; (vii) Cấy mẫu khử trùng vào môi trƣờng nuôi cấy (Các thao tác từ bƣớc ii đến bƣớc vii đƣợc thực điều kiện vô trùng) MS + BAP 2mg/l + đƣờng saccarose 30g/l + inositol 100 mg/l + agar 6,8 g/l Giai đoạn 3: Nhân nhanh cụm chồi ống nghiệm Ta tiến hành tách chồi tạo từ giai đoạn để cấy chuyển sang môi trƣờng nhân nhanh cụm chồi Môi trƣờng nhân nhanh sử dụng là: MS + saccarose 30g/l + inositol 100 mg/l + agar 6,8 g/l + BAP 1,5 mg/l + IAA 0,1 mg/l Giai đoạn 4: Ra rễ ống nghiệm Trong bƣớc này, chọn chồi đủ tiêu chuẩn cao từ 2,5 – cm, có từ – cặp thân mập để cấy chuyển sang môi trƣờng rễ Môi trƣờng rễ sa nhân tím có cơng thức nhƣ sau: 1/2MS+ saccarose 30g/l + inositol 100 mg/l + agar 6,8 g/l + NAA 0,6 mg/l Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 63 Giai đoạn 5: Ra vƣờn ƣơm Chọn chồi có chiều cao – cm, xanh, thân mập có nhiều rễ đem huấn luyện vƣờn ƣơm có mái che cản quang Cây sa nhân tím đƣợc trồng vào cát – tuần đem trồng vào bầu đất chứa giá thể: đất phù sa + trấu hun (4:1) Sau trồng khoảng khoảng – tháng sinh trƣởng tốt có từ 4-7 lá, cao 15-20 cm xuất trồng ngồi sản xuất PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU BẰNG IRRISTAR Nghiên cứu ảnh hưởng H2O2 20% đến hiệu vơ trùng mẫu sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE H202 17/ 5/** 10:37 PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 4170.21 834.041 320.83 0.000 R 3.70741 1.85371 0.71 0.517 * RESIDUAL 10 25.9964 2.59964 * TOTAL (CORRECTED) 17 4199.91 247.054 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H202 17/ 5/** 10:37 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 DF TLMS 0.000000 10.0000 24.4433 35.5567 44.4433 32.2200 SE(N= 3) 0.930885 5%LSD 10DF 2.93325 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 TLMS 23.8883 24.4433 25.0000 SE(N= 6) 0.658235 5%LSD 10DF 2.07412 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H202 17/ 5/** 10:37 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 18) STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | Số hóa trung tâm học liệu |R | | | http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 64 TLMS NO OBS 18 24.444 BASED ON TOTAL SS 15.718 BASED ON RESID SS 1.6123 % | | 6.6 0.0000 | | | | 0.5171 Nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng mẫu sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE HG 17/ 5/** 11:35 PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 12381.6 2476.32 323.51 0.000 R 4.92840 2.46420 0.32 0.735 * RESIDUAL 10 76.5450 7.65450 * TOTAL (CORRECTED) 17 12463.1 733.121 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HG 17/ 5/** 11:35 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 DF TLMS 0.000000 20.0000 50.0000 74.4467 67.7800 53.3333 SE(N= 3) 1.59734 5%LSD 10DF 5.03328 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 TLMS 45.0000 43.8900 43.8900 SE(N= 6) 1.12949 5%LSD 10DF 3.55907 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HG 17/ 5/** 11:35 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMS GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 44.260 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 27.076 2.7667 6.3 0.0000 Số hóa trung tâm học liệu |R | | | 0.7351 | | | | http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 65 Nghiên cứu ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE BAP TS 7/ 5/** 14:22 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 16707.7 3341.54 338.32 0.000 R 19.8025 9.90124 1.00 0.403 * RESIDUAL 10 98.7692 9.87692 * TOTAL (CORRECTED) 17 16826.3 989.780 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE BAP TS 7/ 5/** 14:22 PAGE VARIATE V004 HSBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.26358 652715 385.71 0.000 R 374444E-02 187222E-02 1.11 0.369 * RESIDUAL 10 169225E-01 169225E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 3.28424 193191 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP TS 7/ 5/** 14:22 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 TLBC 11.1133 36.6667 61.1100 71.1100 96.6667 94.4433 HSBC 0.113333 0.533333 0.813333 0.943333 1.41000 1.20000 SE(N= 3) 1.81447 0.237504E-01 5%LSD 10DF 5.71746 0.748384E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 TLBC 61.1100 61.1100 63.3350 Số hóa trung tâm học liệu HSBC 0.816667 0.838333 0.851667 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 66 SE(N= 6) 1.28302 0.167941E-01 5%LSD 10DF 4.04286 0.529187E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP TS 7/ 5/** 14:22 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLBC 18 61.852 31.461 3.1428 5.1 0.0000 0.4030 HSBC 18 0.83556 0.43953 0.41137E-01 4.9 0.0000 0.3695 Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE KITS 7/ 5/** 14:31 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 15271.5 3054.31 854.33 0.000 R 38.2210 19.1105 5.35 0.026 * RESIDUAL 10 35.7509 3.57509 * TOTAL (CORRECTED) 17 15345.5 902.677 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE KITS 7/ 5/** 14:31 PAGE VARIATE V004 HSBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2.42932 485863 852.39 0.000 R 233333E-03 116666E-03 0.20 0.819 * RESIDUAL 10 570000E-02 570000E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.43525 143250 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KITS 7/ 5/** 14:31 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 TLBC 7.78000 32.2200 60.0000 68.8900 90.0000 85.5567 HSBC 0.800000E-01 0.466667 0.680000 0.880000 1.14333 1.08000 SE(N= 3) 1.09165 0.137840E-01 5%LSD 10DF 3.43983 0.434340E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 SE(N= 6) TLBC 59.4433 56.1117 56.6683 0.771912 Số hóa trung tâm học liệu HSBC 0.716667 0.723333 0.725000 0.974679E-02 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 67 5%LSD 10DF 2.43232 0.307125E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KITS 7/ 5/** 14:31 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLBC 18 57.408 30.045 1.8908 3.3 0.0000 0.0262 HSBC 18 0.72167 0.37848 0.23875E-01 3.3 0.0000 0.8194 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến hiệu nhân chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BAP NN 16/ 5/** 14:38 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 19.9752 3.99503 535.85 0.000 R 591111E-02 295555E-02 0.40 0.687 * RESIDUAL 10 745547E-01 745547E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 20.0556 1.17974 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE BAP NN 16/ 5/** 14:38 PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1.28231 256462 53.59 0.000 R 474445E-02 237222E-02 0.50 0.628 * RESIDUAL 10 478556E-01 478556E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.33491 785242E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP NN 16/ 5/** 14:38 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 HSNC 1.00000 2.19000 3.12333 4.28667 3.56667 3.25667 CCTBC 1.74667 1.71333 1.52667 1.24333 1.20667 1.03667 SE(N= 3) 0.498513E-01 0.399398E-01 5%LSD 10DF 0.157083 0.125852 MEANS FOR EFFECT R R SE(N= 5%LSD 6) 10DF NOS 6 HSNC 2.91500 2.91833 2.87833 CCTBC 1.43500 1.40333 1.39833 0.352502E-01 0.282417E-01 0.111075 0.889906E-01 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 68 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP NN 16/ 5/** 14:38 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 18 2.9039 1.0862 0.86345E-01 3.0 0.0000 0.6867 CCTBC 18 1.4122 0.28022 0.69178E-01 4.9 0.0000 0.6276 Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến hiệu nhân chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE KI 16/ 5/** 14:51 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 14.7239 2.94478 300.79 0.000 R 156333E-01 781666E-02 0.80 0.480 * RESIDUAL 10 979001E-01 979001E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 14.8374 872791 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE KI 16/ 5/** 14:51 PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 494317 988633E-01 163.86 0.000 R 900004E-03 450002E-03 0.75 0.502 * RESIDUAL 10 603336E-02 603336E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 501250 294853E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KI 16/ 5/** 14:51 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 HSNC 1.00000 1.59000 2.14333 2.78000 3.67000 3.08667 CCTBC 1.76667 1.73333 1.67667 1.58667 1.45000 1.29667 SE(N= 3) 0.571256E-01 0.141814E-01 5%LSD 10DF 0.180005 0.446861E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 HSNC 2.34500 2.41667 2.37333 CCTBC 1.59000 1.59000 1.57500 SE(N= 6) 0.403939E-01 0.100278E-01 5%LSD 10DF 0.127283 0.315978E-01 - Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 69 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KI 16/ 5/** 14:51 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 18 2.3783 0.93423 0.98944E-01 4.2 0.0000 0.4799 CCTBC 18 1.5850 0.17171 0.24563E-01 1.5 0.0000 0.5024 Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân chồi sa nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BAP-IBA 11/ 8/** 0:20 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | tím SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 8.31038 1.66208 299.29 0.000 R 233334E-01 116667E-01 2.10 0.172 * RESIDUAL 10 555334E-01 555334E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 8.38925 493485 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE BAP-IBA 11/ 8/** 0:20 PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 628228 125646 198.74 0.000 R 107778E-02 538888E-03 0.85 0.458 * RESIDUAL 10 632220E-02 632220E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 635628 373899E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP-IBA 11/ 8/** 0:20 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 HSNC 4.26667 4.24667 3.85333 3.22000 2.83000 2.51333 CCTBC 1.27333 1.38667 1.52333 1.71333 1.73667 1.76333 SE(N= 3) 0.430246E-01 0.145169E-01 5%LSD 10DF 0.135572 0.457432E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 HSNC 3.47167 3.45500 3.53833 CCTBC 1.57667 1.56333 1.55833 SE(N= 6) 0.304230E-01 0.102650E-01 5%LSD 10DF 0.958639E-01 0.323453E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP-IBA 11/ 8/** 0:20 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 70 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 18 3.4883 0.70249 0.74521E-01 2.1 0.0000 0.1721 CCTBC 18 1.5661 0.19336 0.25144E-01 1.6 0.0000 0.4580 Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân chồi sa nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BAP-IAA 11/ 8/** 1:28 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | tím SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2.80609 561219 22.64 0.000 R 907773E-02 453887E-02 0.18 0.836 * RESIDUAL 10 247856 247856E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 3.06303 180178 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE BAP-IAA 11/ 8/** 1:28 PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 722717 144543 143.11 0.000 R 223333E-02 111667E-02 1.11 0.370 * RESIDUAL 10 101000E-01 101000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 735050 432382E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP-IAA 11/ 8/** 1:28 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 HSNC 4.28000 4.69667 4.68000 4.41000 4.10000 3.53667 CCTBC 1.23333 1.31333 1.53667 1.67333 1.72333 1.75000 SE(N= 3) 0.908947E-01 0.183485E-01 5%LSD 10DF 0.286413 0.578167E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 HSNC 4.28333 4.31167 4.25667 CCTBC 1.55333 1.53500 1.52667 SE(N= 6) 0.642723E-01 0.129743E-01 5%LSD 10DF 0.202524 0.408826E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP-IAA 11/ 8/** 1:28 PAGE Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 71 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 18 4.2839 0.42447 0.15743 3.7 0.0001 0.8361 CCTBC 18 1.5383 0.20794 0.31781E-01 2.1 0.0000 0.3697 Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP NAA đến hiệu nhân chồi sa nhân BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BAP-NAA 14/ 8/** 8:59 PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | tím SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 13.4865 2.69731 114.41 0.000 R 691000E-01 345500E-01 1.47 0.277 * RESIDUAL 10 235765 235765E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 13.7914 811259 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE BAP-NAA 14/ 8/** 8:59 PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 795200 159040 672.00 0.000 R 333337E-04 166668E-04 0.07 0.932 * RESIDUAL 10 236665E-02 236665E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 797600 469176E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP-NAA 14/ 8/** 8:59 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 HSNC 4.28667 3.83667 3.03000 2.39000 2.22333 1.91333 CCTBC 1.24333 1.48667 1.62333 1.74667 1.80333 1.85667 SE(N= 3) 0.886501E-01 0.888191E-02 5%LSD 10DF 0.279340 0.279872E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 HSNC 3.02833 2.93333 2.87833 CCTBC 1.62500 1.62667 1.62833 SE(N= 6) 0.626851E-01 0.628046E-02 5%LSD 10DF 0.197523 0.197900E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP-NAA 14/ 8/** 8:59 PAGE Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 72 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | HSNC 18 2.9467 0.90070 0.15355 5.2 0.0000 CCTBC 18 1.6267 0.21660 0.15384E-01 0.9 0.0000 Nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMRR FILE NAA 14/ 8/** 10: -VARIATE V003 TLMRR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF |R | | | 0.2766 0.9320 | | | | PAGE SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 23603.0 4720.59 ****** 0.000 R 1.23951 619754 0.22 0.809 * RESIDUAL 10 28.3997 2.83997 * TOTAL (CORRECTED) 17 23632.6 1390.15 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TBRC FILE NAA 14/ 8/** 10: PAGE VARIATE V004 TBRC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 105.812 21.1624 ****** 0.000 R 382333E-01 191167E-01 1.76 0.221 * RESIDUAL 10 108832 108832E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 105.959 6.23289 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 14/ 8/** 10: PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 TLMRR 0.000000 67.7800 93.3333 100.000 100.000 100.000 TBRC 0.000000 3.00000 4.95667 7.34333 6.39333 5.44667 SE(N= 3) 0.972962 0.602307E-01 5%LSD 10DF 3.06584 0.189789 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 TLMRR 77.2233 76.6667 76.6667 TBRC 4.56833 4.46000 4.54167 SE(N= 6) 0.687988 0.425895E-01 5%LSD 10DF 2.16788 0.134201 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 14/ 8/** 10: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 73 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | TLMRR 18 76.852 37.285 1.6852 2.2 0.0000 TBRC 18 4.5233 2.4966 0.10432 2.3 0.0000 Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi sa nhân tím BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE IBA 11/ 8/** 16:21 -VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF |R | | | 0.8091 0.2213 | | | | PAGE SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 22546.0 4509.21 405.66 0.000 R 14.8074 7.40371 0.67 0.539 * RESIDUAL 10 111.157 11.1157 * TOTAL (CORRECTED) 17 22672.0 1333.65 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TBRC FILE IBA 11/ 8/** 16:21 PAGE VARIATE V004 TBRC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 97.1790 19.4358 ****** 0.000 R 763000E-01 381500E-01 3.34 0.077 * RESIDUAL 10 114362 114362E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 97.3696 5.72763 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IBA 11/ 8/** 16:21 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 3 TLCRR 0.000000 55.5567 73.3333 94.4433 100.000 100.000 TBRC 0.000000 2.25667 3.30000 5.25667 6.41333 6.34333 SE(N= 3) 1.92490 0.617420E-01 5%LSD 10DF 6.06542 0.194551 MEANS FOR EFFECT R R NOS 6 TLCRR 69.4450 71.6667 70.5550 TBRC 3.84000 3.95000 3.99500 SE(N= 6) 1.36111 0.436582E-01 5%LSD 10DF 4.28890 0.137569 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IBA 11/ 8/** 16:21 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 74 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | (N= 18) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | TLCRR 18 70.556 36.519 3.3340 4.7 0.0000 0.5389 TBRC 18 3.9283 2.3932 0.10694 2.7 0.0000 0.0768 Nghiên cứu loại giá thể phù hợp cho thích ứng sa nhân tím in vitro điều kiện tự nhiên BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCS FILE RC 11/ 8/** 22:49 PAGE VARIATE V003 TLCS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 179.167 59.7222 4.47 0.057 R 28.1250 14.0625 1.05 0.407 * RESIDUAL 80.2083 13.3681 * TOTAL (CORRECTED) 11 287.500 26.1364 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE RC 11/ 8/** 22:49 PAGE VARIATE V004 CCTBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 8.16909 2.72303 125.50 0.000 R 325500E-01 162750E-01 0.75 0.515 * RESIDUAL 130182 216971E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.33183 757439 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RC 11/ 8/** 22:49 PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TLCS 80.8333 81.6667 90.0000 87.5000 CCTBC 4.27000 6.55000 5.38333 5.80667 SE(N= 3) 2.11093 0.850433E-01 5%LSD 6DF 7.30204 0.294178 MEANS FOR EFFECT R R NOS 4 TLCS 83.1250 85.0000 86.8750 CCTBC 5.56750 5.50000 5.44000 SE(N= 4) 1.82812 0.736496E-01 5%LSD 6DF 6.32375 0.254766 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RC 11/ 8/** 22:49 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 12) STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | Số hóa trung tâm học liệu |R | | | http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 75 TLCS CCTBC NO OBS 12 85.000 12 5.5025 BASED ON TOTAL SS 5.1124 0.87031 Số hóa trung tâm học liệu BASED ON RESID SS 3.6562 0.14730 % | | 4.3 0.0571 2.7 0.0001 | | | | 0.4075 0.5148 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ... phần bảo t? ??n ph? ?t triển nguồn dƣợc liệu Xu? ?t ph? ?t từ yêu cầu thực t? ??, chúng t? ?i tiến hành đề t? ?i: ? ?Xây dựng quy trình t? ?i sinh giống Sa Nhân t? ?m (Amomum Longiligulare T. L. Wu) phương pháp ni cấy mơ”... nhân t? ?m l? ?m v? ?t liệu khởi đầu Công t? ?c vô trùng mẫu l? ?m v? ?t liệu nuôi cấy mô khâu quan trọng định thành cơng quy trình nhân giống vơ t? ?nh đối t? ?ợng thực v? ?t Việc l? ??a chọn loại hóa ch? ?t khử trùng,... phƣơng pháp nuôi cấy mô t? ?? bào thực v? ?t * T? ?nh t? ??n (Totipotence ) t? ?? bào Năm 1902, Nhà Sinh l? ? thực v? ?t học ngƣời Đức Haberlandt, tiến hành nuôi cấy t? ?? bào thực v? ?t để chứng minh t? ?? bào toàn Haberlandt