Nghiên cứu một số phương pháp nhân tạo để lây nhiễm virus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN VĂN QUANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP NHÂN TẠO ĐỂ LÂY NHIỄM VIRUS GÂY BỆNH XOĂN VÀNG LÁ CÀ CHUA Chuyên nghành : Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Hải Yến Thái nguyên tháng 10 - 2014 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên i http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung trình bày luận văn tơi nghiên cứu, dƣới hƣớng dẫn TS Nguyễn Thị Hải Yến giúp đỡ cộng nhóm nghiên cứu Các số liệu kết trình bày luận văn đƣợc đồng ý cán hƣớng dẫn nhóm nghiên cứu, tài liệu trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Nguyễn Văn Quang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên ii http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới TS Nguyễn Thị Hải Yến, giảng viên Khoa Khoa học Sự sống - Trƣờng Đại học Khoa học tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo cán phịng thí nghiệm Sinh học – Khoa Khoa học Sự sống – Trƣờng Đại học Khoa học, Phịng Cơng nghệ Tế bào thực vật - Viện Cơng nghệ Sinh học truyền đạt kiến thức, tạo điều kiện tận tình giúp đỡ tơi hồn thành thí nghiệm luận văn Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln động viên, khuyến khích giúp đỡ tơi suốt thời gian qua Thái nguyên, ngày10 tháng năm 2014 Học viên Nguyễn Văn Quang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên iii http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC Trang MỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………… 1 Đặt vấn đề………………………………………………………… Mục tiêu nghiên cứu……………………………………………… Nội dung nghiên cứu ……………………………………………… Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………… 1.1 Giới thiệu cà chua số bệnh hại cà chua………… 1.1.1 Nguồn gốc Phân loại……………………………………… 1.1.2 Đặc điểm sinh học…………………………………………… 1.1.3 Một số bệnh hại cà chua……………………………………… 1.2 Virus gây bệnh xoăn vàng cà chua……………………… 1.2.1 Triệu chứng biểu bệnh…………………………………… 1.2.2 Phân loại virus gây bệnh xoăn vàng cà chua…………… 1.2.3 Đặc điểm hình thái cấu tạo………………………………… 1.2.4 Đặc điểm lây lan môi giới truyền bệnh…………………… 10 1.2.5 Một số biện pháp phòng bệnh xoăn vàng cho cà chua……… 13 1.3 Các phƣơng pháp lây nhiễm TYLCV thực nghiệm……… 16 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Vật liệu………………………………………………………… 19 2.1.1 Vật liệu thực vật……………………………………………… 19 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên iv http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 2.1.2 Chủng vi khuẩn ……………………………………………… 20 2.1.3 Hố chất, thiết bị máy móc…………………………………… 20 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu………………………………………… 21 2.2.1 Phƣơng pháp lây nhiễm bọ phấn ……………………… 21 2.2.2 Phƣơng pháp lây nhiễm ghép áp………………………… 22 2.2.3 Phƣơng pháp lây nhiễm Agro - inoculation …………… 22 2.2.4 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ (đo quang phổ - đo OD)…… 23 2.2.5 Các tiêu đánh giá mức độ biểu bệnh………………… 23 2.2.6 Phƣơng pháp phân tích có mặt virus TYLCV………… 24 2.2.6.1 Thu thập mẫu tách chiết DNA tổng số…………………… 24 2.2.6.2 Phƣơng pháp điện di gel agarose……………………… 25 2.2.6.3 Phƣơng pháp PCR nhân gen TYLCV ………………… 26 Chƣơng : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN………… 27 3.1 Kết tạo nguồn bệnh……………………………………… 27 3.1.1 Kết lây nhiễm virus vƣờn có nguồn bệnh………… 27 3.1.2 Kết PCR kiểm tra có mặt virus bệnh…… 28 3.2 Kết lây nhiễm TYLCV cho cà chua bọ phấn ………… 30 3.3 Kết lây nhiễm TYLCV phƣơng pháp ghép lành với bị bệnh…………………………………………………………… 32 3.4 Kết lây nhiễm TYLCV Agro - inoculation ………… 35 3.5 Đánh giá hiệu lây nhiễm TYLCV phƣơng pháp lây nhiễm nhân tạo……………………………………………………… 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ………………………………………… 41 KẾT LUẬN……………………………………………………… 41 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên v http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐỀ NGHỊ……………………………………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên vi http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 41 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU Từ viết tắt Nghĩa tiếng Việt Nghĩa tiếng Anh Bp Cặp base base pair CTAB CTAB Cetyltrimethylammonium Bromid CP protein vỏ Coat protein DNA Axit Deoxyribonucleic Deoxyribonucleic Acid dNTP dNTP Deoxynucleoside triphosphate EDTA EDTA Ethylene Acid EtBr EtBr Ethidium Bromide GB GB Gel binding buffe Kb Kb kilobyte ORF trình tự đọc mở Open reading frame PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction Primer F Mồi xuôi Primer Forward Primer R Mồi ngƣợc Primer Reverse Diamine Tetraacetic Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus IR Vùng liên gen Intergenic region Rep Tái Replication SCR vùng vệ tinh Satelite Conserved Region TYLCV Virus gây bệnh xoăn vàng Tomato Yellow Leaf Curl Virus cà chua TB Trung bình RAPD nhân ngẫu nhiên Random Amplified Polymorphic đoạn DNA DNA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên vii http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Nồng độ hoá chất dung dịch đệm tách DNA tổng số 24 2.2 Thành phần phản ứng PCR nhân gen từ mẫu DNA tổng số 26 3.1 27 3.2 Kết theo dõi mức độ biểu bệnh giống cà chua 31 sau lây nhiễm qua bọ phấn 3.3 Kết theo dõi mức độ biểu bệnh giống cà chua 33 sau lây nhiễm ghép áp 3.4 Kết giá trị OD bƣớc sóng 660 nm chủng khuẩn sau 35 nuôi lắc phục vụ thí nghiệm lây nhiễm 3.5 Kết theo dõi biểu bệnh sau lây nhiễm TYLCV 36 Agro- inoculation vào giống cà chua 3.6 Tổng hợp kết theo dõi biểu bệnh trung bình thí nghiệm lây nhiễm TYLCV vào cà chua phƣơng pháp Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên viii http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Sơ đồ cấu trúc genome TYLCV 1.2 Chu kỳ sinh trƣởng bọ phấn (Bemisia tabaci) 11 2.1 Sơ đồ quy trình nghiên cứu 21 2.2 Các mức độ biểu bệnh xoăn vàng cà chua 24 3.1 Hình ảnh cà chua bị bệnh xoăn vàng virus TYLCV trồng 27 vƣờn có nguồn bệnh sau 50 ngày 3.2 Kết điện di sản phẩm tách DNA tổng số số dòng cà 28 chua nhiễm bệnh 3.3 Kết PCR kiểm tra gen CP TYLCV mẫu cà chua 29 nhiễm bệnh 3.4 Kết PCR nhân gen CP TYLCV kiểm tra có mặt 32 virus dịng thí nghiệm sau lây nhiễm bọ phấn 3.5 Kết PCR nhân gen CP TYLCV kiểm tra có mặt 34 virus dịng thí nghiệm sau lây nhiễm phƣơng pháp ghép 3.6 Ảnh điện di sản phẩm PCR kiểm tra TYLCV sau 10 ngày lây 37 nhiễm Agro- inoculation 3.7 Ảnh điện di sản phẩm PCR kiểm tra TYLCV sau 50 ngày lây nhiễm Agro- inoculation Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên ix http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 37 TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Tên đề tài: “Nghiên cứu số phƣơng pháp nhân tạo để lây nhiễm virus gây bệnh xoăn vàng cà chua” Ngƣời hƣớng dẫn: TS Nguyễn Thị Hải Yến Ngƣời thực hiện: Nguyễn Văn Quang Mục tiêu nghiên cứu Tìm đƣợc phƣơng pháp lây nhiễm virus TYLCV phù hợp để lây bệnh cho cà chua nhằm tạo phƣơng pháp chuẩn để đánh giá khả kháng virus cho cà chua điều kiện nhà lƣới vƣờn thí nghiệm Nội dung nghiên cứu Thu thập giống cà chua mẫn cảm với virus, kháng tự nhiên với virus Tiến hành thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo cho cà chua Theo dõi phân tích kết quả, đánh giá mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm Đƣa quy trình lây nhiễm nhân tạo virus TYLCV cho cà chua Kết nghiên cứu (1) Thu thập giống cà chua phục vụ thí nghiệm: + Giống PT 18 viện rau Việt Nam cung cấp Cà chua PT18 có chiều cao trung bình 80 – 100 cm, dạng gọn, màu xanh nhạt, phân cành ít, sinh trƣởng hữu hạn PT18 giống mẫn cảm với bệnh xoăn vàng TYLCV + Giống F1 GM - 2008, giống nhập nội có nguồn gốc từ Pháp Quả F1 GM - 2008 có dạng trịn dẹt, chín có màu đỏ tƣơi, thịt dày, rắn F1 GM 2008 sinh trƣởng hữu hạn, chịu lạnh nóng tốt, giống F1 GM2008 đƣợc lai tạo theo hƣớng kháng bệnh xoăn vàng virus TYLCV Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên x http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Cxosnek H, Ber R, Antignus Y, Cohen S, Navot N, Zamir D Isolation of the Tomato yellow leaf curl virus – a geminivirus Phytophalogy 1988; 78: 508-512 Doi: 10.1094/Phyto-78-508 [Cross ref] // báo tiếng anh đánh số 10 Changjun Huang, Yan Xie, Liling Zhao, He Ren, and Zhenghe Li* (2013), “A Naturally Occurring Defective DNA Satellite Associated with a Monopartite Begomovirus: Evidence for Recombination between Alphasatellite and Betasatellite” Viruses, 5(9), pp: 2116–2128 11 Cohen, S.; Duffus, J E.; Liu, H Y (1989), “Acquisition, interference, and retenton of cucurbit leaf curl virus in whitefly Phytopathology, 79(1): 109 – 113 12 Collin & Symons, 1992 Extraction of nuclear DNA from grape vine leaves by a modified procedure Plant Mol Biol Rept 10 : 233-235 13 Cxosnek H, Ber R, Antignus Y, Cohen S, Navot N, Zamir D (1988), “Isolation of the Tomato yellow leaf curl virus – a geminivirus” Phytopathology, 78: 508-512 Doi: 10.1094/Phyto-78-508 14 Colliver S, Bovy A, Colin G, Muir S, Robinson S, de Vos CHR, Verhoeyen ME (2002) Improving the nutrional content ò tomatoes through reprogramming their flavonoid biosynthetic pathway Phy Reviews 15 Elvira Fiallo-Olivé, Yamila Martínez-Zubiaur, Enrique Moriones, Jesús Navas-Castillo (2012), “A novel class of DNA satellites associated with New World begomoviruses” Virology, 425(1), pp: - 16 Fuentes A, Ramos PL, Piallo E, Callard D, sanchez Y, Peral R, Rodringuez R, Pujol M (2006) Ỉnton- hairpin RNA derived from replication Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 48 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ associated protein C1 gene confers immunity to tomato yellow leaf curl virus infection in transgennic tomato plants Transgenic Res 15 : 291-304 Grafni Y (2003), “Tomato yellow leaf curl virus, the intracellular 17 dynemics of a phant DNA virus” Mol Plant Patho 4(1), pp: 9-15 18 Ha Viet Cuong, Le Van Hai, Tran Ngoc Tiep, Ngo Bich Hao (2011), “Molecular characterization of Tomato leaf curl HAINAN virus and Tomato leaf curl virus HANOI virus in VIETNAM” ISSAAS Journal, 17(2), pp: 70 – 82 Harlan JK (1960), “Agricultural Origins: Centers and Noncentes” 19 Science, 174, pp: 468 – 473 Ian B Dry*, Leslie R Krake, Justin E Rigden†, M Ali Rezaian 20 (1997), “A novel subviral agent associated with a geminivirus: The first report of a DNA satellite” Plant Biology, 94, pp: 7088–7093 21 Inoue-Nagata A, Nagata T, de BGordano L (2007) A reliable egomovirus inoculation method for screening Lycopersicon éculentum line Hort Bras 25 447 – 450 22 Yong Fang, Xiaoguo Jiao, Wen Xie, Shaoli Wang, Qingjun Wu, Xiaobin Shi, Gong Chen, Qi Su, Xin Yang, Huipeng Pan, Youjun Zhang (2013 ), “Tomato yellow leaf curl virus alters the host preferences of its vector Bemisia tabaci” Scientific, 3, pp: 2876 Yan Xie,#1 Peijun Wu,#1 Pei Liu,1 Huanran Gong,1 and Xueping 23 Zhou (2010), “Characterization of alpha satellites associated with monopartite begomovirus/betasatellite complexes in Yunnan, China” Virol J, 7, pp: 178 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 49 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 24 Johansen, L.K and Carrington, J.C 2001 Silencing on the spot Induction and suppression of RNA silencing in the Agrobacterium-mediated transient expression system Plant Physiol.126: 930-938 25 Lazarowitz SG, Wu LC, Rogers SG, Elmer JS (1992), “Sequence – specific interraction with the viral AL1 protein identifies a gemminivirus DNA replication origin” Plant cell 4(7), pp: 799 – 809 26 Lapidot M, Friedmann M Breeding for resistance to whitefly – transmitted geminiviruses Ann Appl Biol 2002; 140: 109-127 Doi: 10.1111/j 1744-7348 2002 Tb 00163.x [Cross Ref] 27 Navas-Castillo J, E Noris, Moriones E, Louro D 2000 Tạp chí Châu Âu bệnh 106,179-86 28 Miwa Uchibori, Aiko Hirata, Masashi Suzuki, Masashi Ugaki (2013), “Tomato yellow leaf curl virus accumulates in vesicle-like structures in descending and ascending midgut epithelial cells of the vector whitefly, Bemisia tabaci, but not in those of nonvector whitefly Trialeurodes vaporariorum” Journal of General Plant Pathology, 79(2), pp: 115 – 122 29 Murphy FS, Fauquet CM, Bishop DHL, Ghabrial SA, Jarvis AW, Martelli GP, Mayo MA, Summers MD (1994), “Virus Taxonomy, 6th Report of the Internatonal Committee on Taxonomy of virus Springer Varlag Wien New York USA, pp: 158 – 163 30 Mohammad Reza Hosseinzadeh, Masoud Shams-Bakhsh, Shahrokh Kazempour Osaloo, Judith K Brown (2014), “Phylogenetic relationships, recombination analysis, and genetic variability among diverse variants of tomato yellow leaf curl virus in Iran and the Arabian Peninsula: further Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 50 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ support for a TYLCV center of diversity” Archives of Virology, 159(3), pp: 485-497 31 http://www.agroatlas.ru/en/content/cultural/Lycopersicon_lycopersicu m_K/ 32 TYLCV after the host preference of its vector B tabaci Tạ Thị Cúc (2002), Kỹ thuật trồng cà chua, NXB Nông nghiệp 33 Rick CM, Yoder JI (1998), “Classical and molecular genetics of tomato: highlights ang perspectives” Annu Rev Genet, 22, pp: 281 – 300 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 34 Đƣờng Hồng Dật (2002), Sổ tay trồng rau, NXB Nông nghiệp Hà Nội 35 Hoàng minh (2005), Kỹ thuật trồng chăm sóc dưa hấu, bí ngơ, cà chua, ngơ, NXB Lao động Xã hội 36 Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam, NXB Nơng nghiệp 37 Lê Trần Bình & cộng sƣ, 2007 Báo cáo tổng kết đề tài “ Thu thập phân lập gen virus gây bệnh ba trồng thuộc họ Cà (Solanaceae) thuốc lá, khoai tây cà chua nhằm xây dựng phương pháp chẩn đoán bệnh virus tạo vật liệu di truyền cho tạo giống kháng bệnh virus” Đề tài cấp viện Khoa học Công nghệ sinh học giai đoạn 2005-2006 38 Nguyễn Thị Hải Yến (2012), Nghiên cứu tạo cà chua kháng bệnh xoăn vàng virus kĩ thuật chuyển gen Luận án tiến sĩ sinh học Viên công nghệ sinh học – VAST 39 Xác định nguyên nhân gây bệnh xoăn vàng cà chua begomovirus số tỉnh miền bắc việt nam Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 51 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 40 Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam tập 1, Nxb Y học Hà Nội 41 Vũ Triệu Mân, Lê Hƣơng Tề (2001), Bệnh vi khuẩn virus hại trồng NXB Giáo Dục Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 52 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết thí nghiệm lây nhiễm bọ phấn giống PT18 vườn thí nghiệm Lơ thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm(Ngày theo dõi) 20 25 30 35 40 45 50 PT1.1 0 1 2 PT1.2 0 1 2 PT1.3 0 0 1 PT1.4 0 1 PT1.5 1 2 PT2.1 1 2 PT2.2 0 0 0 PT2.3 1 2 PT2.4 0 1 2 PT2.5 0 1 2 PT3.1 1 2 PT3.2 0 0 0 PT3.3 1 2 3 PT3.4 0 0 0 PT3.5 0 1 0.33 0.66 0.80 1.20 1.60 1.93 ± 0.12 ± 0.12 ± 0.14 ± 0.20 ± 0.20 ± 0.28 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 53 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục 2: Kết thí nghiệm lây nhiễm bọ phấn giống GM 2008 Lơ thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm(Ngày theo dõi) 10 15 20 25 30 35 40 45 50 GM1.1 0 0 1 1 GM1.2 0 0 1 1 GM1.3 0 0 0 0 0 GM1.4 0 0 1 2 GM1.5 0 0 1 1 GM2.1 0 0 0 0 0 GM2.2 0 0 1 2 GM2.3 0 0 1 2 GM2.4 0 0 0 0 0 GM2.5 0 0 1 2 GM3.1 0 0 0 1 GM3.2 0 0 1 2 GM3.3 0 0 0 1 GM3.4 0 0 0 1 GM3.5 0 0 0 0 0 0 0 0.5 ± 0.14 0.5 ± 0.14 0.9 ±0.17 1.1 ± 0.22 1.4 ± 0.27 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 54 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục : Kết thí nghiệm lây nhiễm bọ phấn giống DV2962 vườn thí nghiệm Lơ thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm (Ngày theo dõi) 10 15 20 25 30 35 40 45 50 DV1.1 0 0 1 2 DV1.2 0 0 1 2 DV1.3 0 0 1 1 DV1.4 0 0 0 0 DV1.5 0 0 0 0 0 DV2.1 0 0 0 0 0 DV2.2 0 0 0 1 DV2.3 0 0 1 1 DV2.4 0 0 0 0 0 DV2.5 0 0 0 1 DV3.1 0 0 0 1 DV3.2 0 0 0 0 0 DV3.3 0 0 0 0 0 DV3.4 0 0 1 2 DV3.5 0 0 1 2 0 0 0.1 ± 0.09 0.4 ± 0.13 0.5 ± 0.14 0.7 ± 0.17 0.9 ± 0.2 1.2 ± 0.2 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 55 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục 4: Kết thí nghiệm lây nhiễm ghép lành với bệnh giống PT18 Mức độ biểu bệnh sau ghép(Ngày theo dõi) Lơ thí nghiệm Cây ghép 10 15 20 25 30 35 40 45 50 PT1.1 0 1 2 3 PT1.2 1 2 3 PT1.3 0 1 2 3 PT1.4 2 3 4 PT1.5 0 1 1 3 PT2.1 1 2 3 4 PT2.2 0 1 3 PT2.3 0 1 2 3 PT2.4 0 1 2 3 PT2.5 1 2 3 PT3.1 0 1 2 3 PT3.2 1 2 3 PT3.3 0 1 2 PT3.4 0 0 2 3 PT3.5 0 1 2 0.33 ± 0.12 0.73 ± 0.15 1.13 ± 0.13 1.60 ± 0.13 2.13 ± 0.13 2.60 ± 0.13 3.00 ± 0.13 3.53 ± 0.13 TB Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 56 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục : Kết thí nghiệm lây nhiễm ghép lành với bệnh giống GM 2008, trung bình (TB) Mức độ biểu bệnh sau ghép(Ngày theo dõi) Lơ thí nghiệm Cây ghép 15 20 25 30 35 40 45 50 GM1.1 0 1 2 GM1.2 1 2 3 GM1.3 0 2 3 GM1.4 0 2 GM1.5 0 1 2 GM2.1 0 0 0 1 GM2.2 1 2 GM2.3 0 1 2 3 GM2.4 0 0 0 0 GM2.5 0 1 2 GM3.1 0 1 2 GM3.2 0 1 2 GM3.3 0 0 1 GM3.4 0 0 2 GM3.5 0 1 2 0.00 0.13 ± 0.09 0.53 ± 0.13 0.87 ± 0.16 1.00 ± 0.19 1.53 ± 0.21 1.93 ± 0.20 2.27 ± 0.24 TB Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 57 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục : Kết thí nghiệm lây nhiễm ghép lành với bệnh giống DV2962 Lô thí nghiệ m Cây ghép TB Mức độ biểu bệnh sau ghép(Ngày theo dõi) 15 20 25 30 35 40 45 50 DV1.1 0 1 2 DV1.2 0 1 DV1.3 1 1 2 DV1.4 0 0 0 0 DV1.5 0 1 3 DV2.1 1 1 2 DV2.2 0 1 1 DV2.3 0 1 1 DV2.4 0 0 0 0 DV2.5 0 0 1 DV3.1 0 1 2 3 DV3.2 1 2 3 DV3.3 0 1 3 DV3.4 0 1 2 DV3.5 0 1 2 0.0 0.20 0.53 0.86 0.93 1.40 1.80 2.13 ±0.10 ± 0.13 ±0.10 ± 0.15 ±0.19 ± 0.26 ±0.27 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 58 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục : Kết thí nghiệm lây nhiễm Agro inoculation giống PT18 Lô thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm(Ngày theo dõi) 20 25 30 35 40 45 50 PT1.1 0 1 1 PT1.2 0 0 0 PT1.3 0 0 1 PT1.4 0 1 PT1.5 0 1 2 PT2.1 0 1 1 PT2.2 0 0 0 PT2.3 0 1 1 PT2.4 0 1 PT2.5 0 1 1 PT3.1 0 1 1 PT3.2 0 0 0 PT3.3 0 1 1 PT3.4 0 0 0 PT3.5 0 0 1 0.00 0.00 0.20 ± 0.11 0.60 ± 0.13 0.73 ± 0.12 0.80 ± 14 1.07 ± 0.21 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 59 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục : Kết thí nghiệm lây nhiễm Agro inoculation giống GM 2008 Lơ thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm(Ngày theo dõi) 20 25 30 35 40 45 50 GM1.1 0 0 1 GM1.2 0 0 0 GM1.3 0 0 1 GM1.4 0 1 1 GM1.5 0 0 0 GM2.1 0 0 1 GM2.2 0 0 0 GM2.3 0 1 1 GM2.4 0 1 GM2.5 0 1 1 GM3.1 0 0 0 GM3.2 0 0 0 GM3.3 0 1 1 GM3.4 0 0 0 GM3.5 0 0 1 0.00 0.00 0.07 ± 0.07 0.33 ± 0.13 0.53 ± 0.13 0.60 ± 0.13 0.73 ± 0.18 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 60 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục 9: Kết thí nghiệm lây nhiễm Agro inoculation giống DV 2962 Lơ thí nghiệm Cây TB Mức độ biểu bệnh sau lây nhiễm(Ngày theo dõi) 10 15 20 25 30 35 40 45 50 DV1.1 0 0 0 0 0 DV1.2 0 0 0 0 0 DV1.3 0 0 1 1 DV1.4 0 0 0 0 1 DV1.5 0 0 0 0 0 DV2.1 0 0 0 1 DV2.2 0 0 0 0 0 DV2.3 0 0 0 0 DV2.4 0 0 0 1 DV2.5 0 0 0 0 1 DV3.1 0 0 0 1 1 DV3.2 0 0 0 0 0 DV3.3 0 0 0 1 1 DV3.4 0 0 0 0 0 DV3.5 0 0 0 1 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 61 0.07 0.20 0.40 0.53 ± 0.07 ± 0.11 ± 0.13 ± 0.13 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 0.67 ± 0.16 CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM – – ĐÃ SỬA CHỮA LUẬN VĂN : Nghiên cứu số phương pháp nhân tạo để lây nhiễm virus gây bệnh xoăn vàng cà chua : Nguyễn Văn Quang 19 10 năm 2014 KHOA KHOA HỌC SỰ SỐNG Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 62 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ... cà chua, nhiên chƣa có cơng trình nghiên cứu cách hệ thống Xuất phát từ thực tiễn sở lý luận thực nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu số phương pháp nhân tạo để lây nhiễm virus gây bệnh xoăn vàng cà. .. học…………………………………………… 1.1.3 Một số bệnh hại cà chua? ??…………………………………… 1.2 Virus gây bệnh xoăn vàng cà chua? ??…………………… 1.2.1 Triệu chứng biểu bệnh? ??………………………………… 1.2.2 Phân loại virus gây bệnh xoăn vàng cà chua? ??…………... thƣờng không cho Bệnh xoăn virus gây nhầm lẫn với số tình trạng bệnh cà chua khác nhƣ: nụ hoa cà chua lớn, cà chua vàng đầu, bệnh xoăn sinh lý bệnh thiếu phosphate magie Bệnh nụ hoa cà chua lớn phân