Nghiên cứu phân lập và định lượng catechin từ búp chè xanh tại một số địa bàn tỉnh thái nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM BÙI THỊ SÂM NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH LƯỢNG CATECHIN TỪ BÚP CHÈ XANH TẠI MỘT SỐ ĐỊA BÀN TỈNH THÁI NGUYÊN Ngành: Hóa Hữu Mã số: 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Cán hướng dẫn khoa học: TS Mai Thanh Nga THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn “Nghiên cứu phân lập định lượng catechin từ búp chè xanh số địa bàn tỉnh Thái Nguyên” thân thực Các số liệu, kết luận văn hồn tồn trung thực Nếu điều tơi cam đoan sai thật tơi hồn tồn chịu trách nhiệm Thái nguyên, tháng 05 năm 2019 Tác giả đề tài Bùi Thị Sâm Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Luận văn thực Phịng Thí nghiệm Hóa hữu Khoa Hóa học - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên Lời đầu tiên, em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô TS Mai Thanh Nga tận tình hướng dẫn giúp đỡ em thời gian thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban chủ nhiệm Khoa Hóa học thầy, làm việc phịng thí nghiệm Khoa Hóa học -Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện, giúp đỡ cho em q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện luận văn Do thời gian nghiên cứu luận văn chưa nhiều nên khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp quý thầy cô bạn để luận văn hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2019 Học viên thực Bùi Thị Sâm Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục đề tài Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chè (Trà) 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật học 1.1.3 Nguồn gốc tình hình trồng chè ngồi nước 1.1.4 Công dụng chè xanh 1.1.5 Thành phần hóa học 1.2 Tình hình nghiên cứu nước Thế Giới 10 1.3 Hoạt tính sinh học catechin chè xanh 12 1.3.1 Hoạt tính chống oxy hóa 13 1.3.2 Hoạt tính kháng khuẩn, kháng viêm, kháng virus 15 1.3.3 Phòng trị ung thư 16 1.3.4 Bảo vệ tim mạch 19 1.3.5 Chống béo phì 20 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 1.3.6 Hoạt động chống tiểu cầu tác dụng chống huyết khối EGCG catechin chè xanh 20 1.4 Tổng quan phương pháp HPLC 21 1.4.1 Khái niệm 21 1.4.2 Hệ thống HPLC 22 1.4.3 Pha tĩnh 24 1.4.4 Pha động 24 1.4.5 Đánh giá peak 25 1.4.6 Đánh giá kết 25 1.5 Một số đại lượng phân tích sắc ký 26 1.5.1 Hệ số phân bố 26 1.5.2 Thời gian lưu, thể tích lưu 26 1.5.3 Hệ số dung lượng 27 1.5.4 Hệ số đối xứng 27 1.5.6 Độ phân giải 28 1.5.7 Phương trình Van - Deemter 28 Chương 2: THỰC NGHIỆM 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 30 2.2.1 Hóa chất 30 2.2.2 Thiết bị 31 2.3 Sơ đồ chiết phân lập hợp chất hữu 31 2.4 Chiết hợp chất hữu 32 2.5 Quá trình phân lập chất từ cao ethyl acetate 32 2.6 Phương pháp khảo sát cấu trúc hóa học chất 34 2.7 Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) 34 2.7.1 Chuẩn bị dung dịch phân tích xác định đường chuẩn EGCG 34 2.7.2 Chuẩn bị dung dịch cần khảo sát hàm lượng EGCG 34 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 2.7.3 Phương pháp xử lí số liệu 35 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Kết chiết phân lập hợp chất chè xanh 37 3.1.1 Kết chiết phân lập EGCG 37 3.1.2 Xác định độ tinh khiết hợp chất ST4 37 3.1.3 Phân lập xác định cấu trúc 38 3.2 Xác định hàm lượng EGCG chè xanh trồng số địa bàn Thái Nguyên 45 3.2.1 Xây dựng điều kiện sắc kí 45 3.2.2 Kiểm tra tính thích hợp hệ thống 54 3.2.3 Kết khảo sát độ tuyến tính phương pháp 55 3.2.4 Xác định độ lặp lại phương pháp 56 3.2.5 Hàm lượng EGCG chè 58 3.2.6 Khảo sát độ phép xác định EGCG theo phương pháp thêm chuẩn 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 PHỤ LỤC Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT APP Protein tiền chất amyloid 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon Độ chuyển dịch hóa học Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hidro Catechin Catechin gallate Axetonnitrin Doublet Doublet of doublet Phổ DEPT ( Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) 5-cytosine ADN methyltransferase Đơn vị cacbon Epicatechin Epicatechin digallate Epicatechin gallate Epigallocatechin Epigallocatechin digallate Epigallocatechin gallate Gallocatechin Gallo catechin gallate Virus gây suy giảm miễn dịch người Heteronuclear multiple-bond correlation Sắc ký lỏng hiệu cao Heteronuclear single quantum correlation Nồng độ ức chế 90% đối tượng thử Hằng số tương tác spin-spin (trong phổ 1H NMR) Lipoprotein tỉ trọng thấp Staphylococcus aureus Yếu tố Nhân kappa B Reactive oxygen spcecies (gốc tự oxi hóa) Singlet Sắc ký lớp mỏng Triplet Thể tích C-NMR  H-NMR C CG CH3CN d dd DEPT DNMT đvC EC ECDG ECG EGC EGCDG EGCG GC GCG HIV HMBC HPLC HSQC IC90 J LDL MRSA NF-KB ROS s SKLM t v Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Ứng dụng chế phẩm polyphenol chè xanh chế biến thực phẩm Bảng 1.2 Các catechin có chè xanh Bảng 1.3 Hàm lượng catechin phận riêng biệt búp chè Bảng 1.4 Hàm lượng catechin chè xanh 12 Bảng 2.1 Kết sắc ký cột silica gel cao chiết Ethyl acetate 33 Bảng 2.2 Kết sắc ký cột silica gel phân đoạn ET3 33 Bảng 2.3 Kết sắc ký cột silica gel phân đoạn ET4 33 Bảng 3.1 Độ dịch chuyển hóa học proton Phổ 1H-NMR chất ST4 epi -gallocatechin gallat .38 Bảng 3.2 Độ dịch chuyển hóa học cacbon phổ 13C-NMR chất ST4 epi -gallocatechin gallat .41 Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hưởng EGCG vào nhiệt độ 53 Bảng 3.4 Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí 54 Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính EGCG chuẩn phương pháp HPLC 55 Bảng 3.6 Kết đo mẫu chè PX .57 Bảng 3.7 Bảng xác định hàm lượng EGCG mẫu chè Tân cươngThái Nguyên 58 Bảng 3.8 Bảng so sánh hàm lượng EGCG mẫu chè xanh số địa bàn tỉnh Thái Nguyên .59 Bảng 3.9 Bảng xác định hàm lượng EGCG mẫu chè trồng Ba Vì, Phú Thọ 59 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ 60 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Chè xanh Hình 1.2 Cơng thức tổng quát catechin Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo catechin có chè xanh Hình 1.4 Sơ đồ hệ thống máy HPLC 22 Hình 1.5 Hình ảnh máy HPLC phịng thí nghiệm 23 Hình 1.6 Thời gian lưu cấu tử phân tích 27 Hình 2.1 Chè nguyên liệu 30 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình chiết phân lập hợp chất từ chè xanh 31 Hình 3.1 Sắc kí đồ hợp chất ST4 37 Hình 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất ST4 39 Hình 3.3 Phổ 13C-NMR hợp chất ST4 40 Hình 3.4 Cơng thức cấu tạo flavan .42 Hình 3.5 Cơng thức cấu tạo epi -gallocatechin gallat (EGCG) 42 Hình 3.6 Phổ HSQC hợp chất ST4 43 Hình 3.7 Phổ HMBC hợp chất ST4 .44 Hình 3.8 Sắc kí đồ 3D khảo sát bước sóng dung dịch EGCG chuẩn 45 Hình 3.9 Sắc kí đồ khảo sát bước sóng dung dịch EGCG chuẩn .46 Hình 3.10 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tốc độ dịng 0,8 ml/phút 47 Hình 3.11 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tốc độ dòng ml/phút .48 Hình 3.12 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tốc độ dòng 1,2 ml/phút 48 Hình 3.13 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tốc độ dịng 1,4 ml/phút 49 Hình 3.14 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tỉ lệ pha động CH3CN: KH2PO4 = 17:83 49 Hình 3.15 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tỉ lệ pha động CH3CN : KH2PO4 = 15:85 50 Hình 3.16 Sắc kí đồ dung dịch EGCG tỉ lệ pha động CH3CN: KH2PO4 = 13:87 50 Hình 3.17 Sắc kí đồ dung dịch EGCG nhiệt độ 20oC .51 Hình 3.18 Sắc kí đồ dung dịch EGCG nhiệt độ 25oC .51 Hình 3.19 Sắc kí đồ dung dịch EGCG nhiệt độ 30oC .52 Hình 3.20 Sắc kí đồ dung dịch EGCG nhiệt độ 35oC .52 Hình 3.21 Sắc kí đồ dung dịch EGCG nhiệt độ 40oC .53 Hình 3.22 Sắc kí đồ EGCG (600 𝜇g/ml) chuẩn 54 Hình 3.23 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích peak mẫu EGCG chuẩn 56 Hình 3.24 Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Phúc Xuân 57 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Chè vốn loại thức uống tiếng giới Cây chè xuất lâu đời trước Cơng Ngun tập trung chủ yếu vùng gió mùa Đông Nam Á Ở Việt Nam, từ xa xưa nhân dân có tập quán uống chè, có hương vị đặc biệt có nhiều tác dụng người như: khả chống lão hóa, giảm cholestrorol, chống đột biến, phòng chống hạn chế khả phát triển ung thư… Chè xanh (Trà) có tên khoa học Camellia sinensis (L.) O Kuntze, thuộc họ chè Theaceae Dược tính chè có chủ yếu chè có chứa hợp chất catechin Các nghiên cứu khảo sát mơ hình thực nghiệm oxy hóa lipit cho thấy catechin có khả chống lại q trình oxy hóa lipit lớn so với chất chống oxy hóa khác vitamin C vitamin E [9] Các catechin chè chất quét gốc tự hiệu vượt trội so với catechin chiết xuất từ loại khác nho, đay [37] Ngày với khả chống oxy hóa mạnh, hợp chất catechin sử dụng nhiều mỹ phẩm, đồ uống thực phẩm chức Trong y học, catechin có tác dụng kìm hãm phát triển khối u làm chậm giai đoạn phát sinh ung thư mô hình động vật gây u thực nghiệm [49] Qua nghiên cứu invitro thử nghiệm hệ vi khuẩn, hệ thống tế bào động vật có vú cho thấy polyphenol chè có tác dụng kháng khuẩn, chống viêm loét, chống đột biến [20] Thái Nguyên tỉnh trung du miền núi phía Bắc, khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, độ ẩm cao thích hợp cho chè sinh trưởng phát triển Vì vậy, chè Thái Nguyên mang hương vị đặc trưng riêng mà khơng nơi có Vì Thái Nguyên mệnh danh “Đệ danh trà” Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp đánh giá chất lượng sản phẩm cách nhanh chóng, xác, an tồn hiệu Do đó, chúng tơi lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu phân lập định lượng catechin từ búp chè xanh số địa bàn tỉnh Thái Ngun” Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu thu số kết sau: - Đã phân lập 01 chất cao ethyl acetate - Sử dụng phương pháp phổ đại 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC HMBC so sánh với phổ chuẩn xác định cấu trúc hợp chất ST4 epi gallocatechin gallat (viết tắt EGCG) - Đã xây dựng điều kiện tối ưu cho phép xác định nhanh, xác hàm lượng EGCG mẫu nghiên cứu theo phương pháp HPLC - Định lượng hàm lượng EGCG môt số loại chè trồng địa bàn khác Thái Nguyên Trong hàm lượng EGCG cao loại chè cành lai trồng xã Phúc Xuân (5,02%) Để từ có định hướng sử dụng phát triển trồng chè cách có hiệu Kiến nghị Trong chè xanh chứa nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học sử dụng sống Vì chúng tơi mong có nghiên cứu hợp chất catechin khác có mặt chè xanh để sử dụng chè xanh cách có hiệu phục vụ cho Y học nói riêng đời sống người nói chung Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Đặng Ngọc Dung, Phạm Thiện Ngọc (2002), “Chiết xuất đánh giá sơ thành phần polyphenol chè xanh Việt Nam”, Tạp chí nghiên cứu y học, Số 2(18), tr 35-39 Nguyễn Minh Đức (2006), “Sắc lỏng kí hiệu cao số ứng dụng nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất tự nhiên”, NXB Y học Thành phố Hồ Chí Minh, Tr.138, 148-149 Đỗ Thanh Hà (2017), “Nghiên cứu công nghệ tách catechin từ chè xanh (Camellia sinensisL.), chuyển hóa tạo dẫn xuất o-acetyl catechin khảo sát hoạt tính dọn gốc tự chúng”, Luận án Tiến sĩ, ĐHSP Hà Nội Phạm Văn Khang, Đỗ Đình Rãng, Lê Xuân Quế (2008), “Chiết xuất nghiên cứu khả oxy hóa điện hóa - (-) epigallocatechin (EGC) chè xanh Thái Nguyên, extraction and electrochemical oxidation study ị EGC from Thainguyen green tea”, Tạp chí Hóa học, T.46( 5A), tr 134-139 GS TS Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học 2003, 187-188 Đỗ Tấn Lợi (2006), “Cậy thuốc vị thuốc Việt Nam”, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Võ Tấn Thanh Mai (2012), “Khảo sát thành phần hóa học cao etyl axetat chùm ngây Moringa Oleifera, họ Moringaceae”, Khóa luận tốt nghiệp, ĐHSP Hồ Chí Minh Đỗ Ngọc Quỹ, Nguyễn Kim Phong (1997), Cây chè Việt Nam, NXB Nơng Nghiệp Mai Tun, Vũ Bích Lan, Ngơ Đại Quang (1991-2000), “Nghiên cứu chiết xuất xác định khả kháng oxi hóa polyphenol từ chè xanh”, Tuyển tập cơng trình nghiên cứu KHCN – VHHCN, tr 36-39 10 KM.Dzemukaze (1987), Cây chè miền Bắc, Nhà xuất Khoa học kĩ thuật 63 II Tài liệu tiếng Anh A Gramza, J Korczak, R Amarowicz (2005), Tea polyphenols – their 11 antioxidant properties and biological activity – a review, Pol J Food Nutr Sci, 1455 pp 219–235 12 Aggarwal BB, Shishodia S (2006), Molecular targets of dietary agents for prevention and therapy of cancer, biochemical pharmacology, 71, pp 1397–421 13 Ahn WS, Yoo J, Huh SW, Kim CK, Lee JM, Namkoong SE, et al.(2003), Protective effects of green tea extracts (polyphenon E and EGCG) on human cervical lesions, Eur J Cancer Prev, 12, pp 383–90 14 Awa Fanny Massounga Bora, Shaojie Ma, Xiaodong Li⁎, Lu Liu (2018), Application of microencapsulation for the safe delivery of green tea polyphenols in food systems: Review and recent advances, Food Research International, pp 241249 15 Babich H, Zuckerbraun HL, Weinerman SM (2007), In vitro cytotoxicity of (-)catechin gallate, a minor polyphenol in green tea, Toxicology letters, 171, pp.171– 80 16 Bruno M Carneiro, Mariana N Batista, Ana Cláudia S Braga, Maurício L Nogueira, Paula Rahal (2016), The green tea molecule EGCG inhibits Zika virus entry, Virology, Vol 496, pp 215-218 17 C.A Rice-Evans et al (1995), Free Radical Research, 22 (4), pp 375 18 Cao Y., Cao R (1999), Angiogenesis inhibited by drinking tea, Nature 398 (6726), pp 381 19 Elena Lecumberria, Yves Marc Dupertuisa, Raymond Miralbellb, laude Picharda (2013), Green tea polyphenol epigallocatechin-3-gallate (EGCG) as adjuvant in cancer therapy, Clinical Nutrition, Vol 32, pp.894-903 20 F Nanjo, K Goto, R Seto, M Suzuki, M Sakai, Y Hara (1996), Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicall, Free Radic Biol Med, Vol.21, pp 895-902 64 21 Fang JY, Tsai TH, Lin YY, Wong WW, Wang MN, Huang JF (2007), Transdermal delivery of tea catechins and theophylline enhanced by terpenes: a mechanistic study, Biological & pharmaceutical bulletin, 30, pp 343–9 22 Fang MZ, Wang Y, Ai N, Hou Z, Sun Y, Lu H, et al (2003) Tea polyphenol (-)epigallocatechin-3-gallate inhibits DNA methyltransferase and reactivates methylation-silenced genes in cancer cell lines, Cancer research, 63, pp 7563–70 23 Hibasami H, Achiwa Y, Fujikawa T, Komiya T (1996), Induction of programmed cell death (apoptosis) in human lymphoid leukemia cells by catechin compounds, Anticancer Res, 16, pp 1943–6 24 Imai K, Suga K, Nakachi K (1997), Cancer-preventive effects of drinking green tea among a Japanese population, Preventive medicine, 26, pp 769–75 25 Islam Rady, Hadir Mohamed, Mohamad Rady, Imtiaz A Siddiqui, Hasan Mukhtar (2018), Cancer preventive and therapeutic effects of EGCG, the major polyphenol in green tea, Egyptian Journal of Basic and Applied Sciences, pp 1-23 26 J Steinmann, J Buer, T Pietschmann, E Steinmann (2013), Anti- infectiveproperties of epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a component of green tea, Br J Pharmacol, 168, pp 1059-1073 27 Jankun J, Selman SH, Swiercz R, Skrzypczak-Jankun E (1997), Why drinking green tea could prevent cancer, Nature, 387, pp 561 28 Jolanta Wawrzyniak, Antoni Ryniecki, Włodzimierz Zembrzuski (2005) Application of voltammetry to determine axit ascorbic in apple juices, Agricultural University of Pozna, pp.6-10 29 Jun-ichi Oyama MD, PhD, Aya Shiraki MD, PhD, Toshiyuki Nishikido MD, Toyoki Maeda MD, PhD, Hiroshi Komoda PhD, Takahiko Shimizu PhD, Naoki Makino MD, PhD, Koichi Node MD, PhD, FJCC (2017), EGCG, a green tea catechin, attenuates the progression of heart failure induced by the heart/musclespecific deletion of MnSOD in mice, Journal of Cardiology, Vol 69, Issue 2, pp 417-427 30 Kalaiselvi Ignasimuthu, Rajalakshmi Prakash, Pushpa S Murthy, Nagarajan Subban (2019), Enhanced bioaccessibility of green tea polyphenols and 65 lipophilic activity of EGCG octaacetate on gram-negative bacteria, LWT, Vol.105, pp 103-109 31 Khafif A, Schantz SP, Chou TC, Edelstein D, Sacks PG (1998), Quantitation of chemopreventive synergism between (-)-epigallocatechin-3-gallate and curcumin in normal, premalignant and malignant human oral epithelial cells, Carcinogenesis, 19, pp 419–24 32 Khan N, Afaq F, Saleem M, Ahmad N, Mukhtar H (2006), Targeting multiple signaling pathways by green tea polyphenol (-)-epigallocatechin-3-gallate Cancer research, 66, pp 2500–5 33 L Ortiz-López, B Márquez-Valadez, A Gómez-Sánchez, M.D.C Silva-Lucero, M Torres-Pérez, R.I Téllez-Ballesteros, M Ichwan, M.A Meraz-Ríos (2016), Green tea compound epigallo-catechin-3-gallate (EGCG) increases neuronal survival in adult hippocampal neurogenesis in vivoand in vitro, Neuroscience, Vol 322, pp 208-220 34 Lambert JD, Elias RJ (2010), The antioxidant and pro-oxidant activities of green tea polyphenols: a role in cancer prevention, Archives of biochemistry and biophysics, 501, pp 65–72 35 Lee M.J., Maliakal P., Chen L., Meng X., Bondoc F.Y., Prabhu S., Lambert G., Mohr S., Yang C.S (2002), Pharmacokinetics of tea catechins after ingestion of green tea and (-)-epigallocatechin-3-gallate by humans: formation of different metabolites and individual variability, Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention, 11 (10/1), pp 1025-1032 36 Lin YL, Lin JK (1997), (-)-Epigallocatechin-3-gallate blocks the induction of nitric oxide synthase by down-regulating lipopolysaccharide-induced activity of transcription factor nuclear factor-kappaB, Molecular pharmacology, 52, pp 465– 72 37 M Born, P.A Carrupt, R Zini, F Breăe, J.P Tillement, K Hostettmann, B Testa (1996), Electrochemical behavior and antioxidant activity of some natural polyphenols Helv Chim Acta 79, pp 1147-1158 66 38 M Sano, M Tabata, M Suzuki, M Degawa, T Miyase, M Maeda-Yamamoto (2001), Simultaneous determination of twelve tea catechins by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection, Analyst, 126, pp 816-820 39 Mandel S., Weinreb O., Amit T., Youdim M.B (2004), Cell signaling pathways in the neuroprotective actions of the green tea polyphenol (-)-epigallocatechin-3gallate:implications for neurodegenerative diseases, Journal of Neurochemistry, 88 (6), pp 1555-1569 40 Meeran SM, Mantena SK, Elmets CA, Katiyar SK (2006), (-)-Epigallocatechin-3gallate prevents photocarcinogenesis in mice through interleukin-12-dependent DNA repair, Cancer research, 66, pp 5512–20 41 Mukhtar H, Ahmad N (2000), Tea polyphenols: prevention of cancer and optimizing health, the american journal of clinical nutrition, 71, pp 1698S–702S, discussion 703S-4S 42 Nandakumar V, Vaid M, Katiyar SK (2011), (-)-Epigallocatechin-3-gallate reactivates silenced tumor suppressor genes, Cip1/p21 and p16INK4a, by reducing DNA methylation and increasing histones acetylation in human skin cancer cells, Carcinogenesis 43 Nevin Sanlier, Buşra Basar Gokcen, Mehmet Altuğ (2018), Tea consumption and disease correlations, Trends in Food Science & Technology, Vol 78, pp 95-106 44 Nicola C Gordon, David W Wareham (2010), Antimicrobial activity of the green tea polyphenol (−)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) against clinical isolates of Stenotrophomonas maltophilia, International Journal of Antimicrobial Agents 45 Nurulain T Zaveri (2006), Green tea and its polyphenolic catechins: Medicinal uses in cancer and noncancer applications, Life Sciences 78, 2073–2080 46 Pfeffer U., Ferrari N., Morini M., Benelli R., Noonan D.M., Albini A (2003), Antiangiogenic activity of chemopreventive drugs, International Journal of Biological Markers, 18 (1), pp 70-74 47 Pon Velayutham, Anadh Babu and Dongmin Liu (2008), Green Tea Catechins and Cardiovascular Health, Curr Med Chem, 15(18), pp 1840–1850 67 48 Rice-Evans C.A., Miller N.J., Bolwell P.G., Bramley P.M., Pridham J.B.(1995), The relative antioxidant activities of plant-derived polyphenolic flavonoids, Free Radical Research, 22 (4), pp 375-383; 49 S Azam, N Hadi, N.U Khan, S.M Had (2004), Prooxidant property of green tea polyphenols epicatechin and epigallocatechin-3-gallate: implications for anticancer properties Toxicology in Vitro, 18, p 555-561 50 S.A Wiseman, D.A Balentine, B Frei (1997), Antioxidants in tea, Crit Rev Food Sci Nutr, 37, pp 705–718 51 Santos-Buelga C., Williamson G (2003), Method in Polyphenol Analysis, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK 52 Sazuka M, Itoi T, Suzuki Y, Odani S, Koide T, Isemura M (1996), Evidence for the interaction between (-)-epigallocatechin gallate and human plasma proteins fibronectin, fibrinogen, and histidine-rich glycoprotein, Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 60, pp 1317–9 53 “Sensitive Determination of Catechins in Tea by HPLC”, Application Note 275 54 Shankar S, Chen Q, Srivastava RK (2008), Inhibition of PI3K/AKT and MEK/ERK pathways act synergistically to enhance antiangiogenic effects of EGCG through activation of FOXO transcription factor, Journal of molecular signaling, 3, pp 55 Shankar S, Ganapathy S, Hingorani SR, Srivastava RK EGCG inhibits growth, invasion, angiogenesis and metastasis of pancreatic cancer, frontiers in bioscience : a journal and virtual library, 13, pp 440–52 56 Shankar S, Suthakar G, Srivastava RK (2007), Epigallocatechin-3-gallate inhibits cell cycle and induces apoptosis in pancreatic cancer, frontiers in bioscience : a journal and virtual library, 12, pp 5039–51 57 Singh BN, Singh BR, Sarma BK, Singh HB (2009), Potential chemoprevention of N-nitrosodiethylamine-induced hepatocarcinogenesis by polyphenolics from Acacia nilotica bark, Chem Biol Interact, 181, pp 20–8, Vol 36, pp 129-131 58 Wang Z.Y., Cheng S.J., Zhou Z.C., Athar M., Khan W.A., Bickers D.R., Mukhtar H (1989), Antimutagenic activity of green tea polyphenols, Mutation Research, 223 (3), pp 273-285 68 59 Wei-Lun Hunga, SiyuWangb, Shengmin Sangc, Xiaochun Wand,e, Yu Wanga, ChiTangHob,e (2018), Quantification of ascorbyl adducts of epigallocatechin gallate and gallocatechin gallate in bottled tea beverages, Food Chemistry, Vol 261, 30, pp 246-252 60 Yang C.S., Maliakal P., Meng X (2002), Inhibition of carcinogenesis by tea”, Annual Reviews in Pharmacology and Toxicology, 42, pp 25-54 61 Yang CS, Lambert JD, Ju J, Lu G, Sang S (2007), Tea and cancer prevention: molecular mechanisms and human relevance, toxicology and appliedpharmacology, 224, pp 265–73 62 Young-Hwan Moon, Jin-Ha Lee, Joon-Seob Ahn, Seung-Hee Nam, Deok-Kun Oh, DonHee Park, Hyun-Ju Chung, SeongSooKang, X Donal F.Day, and Doman Kim (2006), Synthesis, Structure Analyses, and Characterization of Novel Epigallocatechin Gallate (EGCG) Glycosides Using the Glucansucrase from Leuconostoc mesenteroides B1299CB, J Agric Food Chem, 54, 1230−123 III Tài liệu webside: 63 http://vufo.org.vn/San-xuat-va-tieu-thu-che-Viet-Nam-40-3558.html?lang=vn 64 http://www.chelangson.com/khai-quat-chung-ve-cay-che-tinh-hinh-san-xuat-tieuthu-che-tren-the-gioi-va-o-viet-nam-18-45-171-CMCDT.htm 65 http://case.vn/vi-VN/34/96/118/details.case 69 PHỤ LỤC Hình 1: Phổ C13CPD DEPT hợp chất ST4 3.00 2.50 EGCG - 9.530 AU 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 2: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Cành Lai-Tân Cương 2.50 EGCG - 9.505 2.00 AU 1.50 1.00 0.50 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 3: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Kim Tuyên-Tân Cương 2.50 EGCG - 9.478 2.00 AU 1.50 1.00 0.50 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 4: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Móc Câu-Tân Cương 2.50 EGCG - 9.423 2.00 AU 1.50 1.00 0.50 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 5: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Tri 777-Tân Cương 2.50 EGCG - 9.433 2.00 AU 1.50 1.00 0.50 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 6: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Phú Lương 2.00 1.60 1.40 EGCG - 9.568 CF - 5.577 1.80 1.00 0.60 0.40 0.20 Peak3 Peak4 7.620 7.946 0.80 Peak2 - 6.026 AU 1.20 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 Hình 7: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Ba Vì 30.00 2.00 1.80 1.60 EGCG - 9.476 1.40 AU 1.20 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 8: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Phú Thọ 1.40 EGCG - 9.613 1.20 1.00 AU 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 9: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Phú Lương thêm dung dịch EGCG chuẩn có nồng độ 100 𝝁g/ml 1.40 EGCG - 9.704 1.20 1.00 AU 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 10: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Phú Lương thêm dung dịch EGCG chuẩn có nồng độ 200 𝝁g/ml 1.40 1.20 EGCG - 10.076 1.00 AU 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 Minutes 20.00 25.00 30.00 Hình 11: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Kim Tuyên-Tân cương thêm dung dịch EGCG chuẩn có nồng độ 100 𝝁g/ml Hình 12: Sắc kí đồ biểu thị hàm lượng EGCG chè Kim Tuyên-Tân cương thêm dung dịch EGCG chuẩn có nồng độ 200 𝝁g/ml ... chất catechin từ búp chè xanh - Định lượng hàm lượng hợp chất phân lập búp chè số địa bàn tỉnh Thái Nguyên Nội dung nghiên cứu - Tổng quan nghiên cứu nước, giới chè xanh - Thu thập mẫu nghiên cứu, ... mẫu nghiên cứu, xác định tên khoa học - Phân lập xác định cấu trúc 01 hợp chất catechin từ búp chè xanh - Xác định hàm lượng hợp chất phân lập búp chè xanh số địa bàn tỉnh Thái Nguyên Ý nghĩa khoa... đánh giá chất lượng sản phẩm cách nhanh chóng, xác, an tồn hiệu Do đó, chúng tơi lựa chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu phân lập định lượng catechin từ búp chè xanh số địa bàn tỉnh Thái Nguyên? ?? Số hóa Trung