Nghiên cứu khả năng tạo rễ bất định từ cây đảng sâm nam codonopsis javanica blume hook f

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - HOÀNG NGỌC HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TẠO RỄ BẤT ĐỊNH TỪ CÂY ĐẢNG SÂM NAM (CODONOPSIS JAVANICA (BLUME) HOOK.F.,) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Thái Nguyên – 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - HOÀNG NGỌC HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TẠO RỄ BẤT ĐỊNH TỪ CÂY ĐẢNG SÂM NAM (CODONOPSIS JAVANICA (BLUME) HOOK.F.,) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Vũ Thị Lan Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Thái Nguyên - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tơi thực hướng dẫn TS.Vũ Thị Lan Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Thái Nguyên, tháng Tác giả Hoàng Ngọc Hà năm 2017 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Lan giảng viên Khoa Công nghệ sinh học, Trường Đại học Khoa học- Đại học Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt thời gian thực hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Khoa ho ̣c - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học thầ y cô giáo, cán Khoa, đặc biệt quan tâm, giúp đỡ các anh chi ̣ kỹ th ̣t viên phịng thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học Tôi xin cảm ơn thầy cô giáo anh chi ̣ kỹ thuật viên phịng thí nghiệm ni cấy mơ tế bào thực vật, Viện nghiên cứu phát triển Lâm nghiệp, Trường đại học Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình làm luận văn thạc sĩ Tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên cạnh ủng hộ, khuyến khích, động viên tạo động lực để tơi hồn thành luận văn Trong q trình làm luận văn khơng tránh khỏi sai sót, tơi mong nhận đóng góp q báu từ phía thầy bạn bè Xin trân trọng cảm ơn! Thái Nguyên, tháng Tác giả Hoàng Ngọc Hà năm 2017 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Nội dung nghiên cứu TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Đảng Sâm 1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh thái Đảng Sâm 1.1.3 Giá trị dược liệu Đảng Sâm 1.1.4 Thành phần công dụng Đảng sâm 1.2 Một số yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 1.2.2 Điều kiện nuôi cấy 1.2.3 Môi trường dinh dưỡng 1.2.4 Sự phát sinh hình thái 12 1.3 Tình hình nghiên cứu nhân sinh khối rễ dược liệu phương pháp nuôi cấy mô giới Việt Nam 14 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Vật liệu nghiên cứu 18 2.1.1 Vật liệu thực vật 18 2.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 18 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3 Chỉ tiêu theo dõi đánh giá 21 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm 23 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo mô sẹo rễ bất định Đảng sâm 25 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4D lên tạo mô sẹo từ Đảng sâm 25 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm 28 3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm 29 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên, đường đến tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 32 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 32 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 34 3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ peptone đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 36 3.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đường đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 38 3.4 Nghiên cứu tăng trưởng rễ bất định nuôi cấy mơi trường lỏng (bình bioreactor) 40 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thể tích môi trường đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm bình bioreactor sục khí liên tục 40 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ sục khí đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường lỏng 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 Kết luận 43 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4 D : 2,4 – Dichlophenoxy acetic acid B5 : Gamborg’s Cs : Cs CT : Công thức ĐC : Đối chứng IBA : Indole butyric acid MS : Murashige & Skoog (1962) NAA :  - Naphlene axetic acid TB : Trung bình KL : Khối lượng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.2 Các nguyên tố đa lượng dạng sử dụng .9 Bảng 2.1 Danh mục thiết bị sử dụng đề tài 18 Bảng 3.1 Ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm sau tuần nuôi cấy 24 Bảng 3.2 Ảnh hưởng 2,4 D đến hình thành mơ sẹo từ mẫu Đảng sâm 26 Bảng 3.3 Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến hình thành rễ bất định in vitro Đảng sâm sau 40 ngày 28 Bảng 3.4 Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến hình thành rễ bất định in vitro Đảng sâm sau 40 ngày 29 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nước dừa đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm .32 Bảng 3.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường đặc sau 40 ngày 34 Bảng 3.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ peptone đến khả sinh trưởng phát triển rễ bất định Đảng sâm môi trường đặc sau 40 ngày 36 Bảng 3.8 Ảnh hưởng hàm lượng đường đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm sau 40 ngày 39 Bảng 3.9 Ảnh hưởng thể tích mơi trường đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm bình bioreactor sục khí liên tục 40 Bảng 3.10 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ sục khí đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường lỏng 41 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Đảng Sâm (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f.,) Hình 3.1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm 24 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ 2,4D đến hình thành mơ sẹo .27 Hình 3.3 Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm 29 Hình 3.4 Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm 30 Hình 3.5: Ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trưởng đặc sau 40 ngày 33 Hình 3.6: Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường đặc sau 40 ngày 35 Hình 3.7 Ảnh hưởng nồng độ peptone đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường đặc sau 40 ngày 37 Hình 3.8 Ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm 38 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trong nguồn tài nguyên lâm sản gỗ phong phú Việt Nam, thuốc mọc tự nhiên giữ vị trí quan trọng số lượng loài, giá trị sử dụng kinh tế cao Theo kết điều tra nghiên cứu ngành Y tế, biết Việt Nam có tới gần 4000 lồi thực vật Nấm có cơng dụng làm thuốc Trong có tới 90% mọc tự nhiên tập trung chủ yếu quần xã rừng [19] Từ nguồn thuốc mọc tự nhiên, hàng năm khai thác khối lượng lớn loại dược liệu, sử dụng cho nhu cầu làm thuốc nước xuất [3] Tuy nhiên, khai thác liên tục nhiều năm, với nhiều nguyên nhân tác động khác làm cho nguồn thuốc mọc tự nhiên Việt Nam bị giảm sút nghiêm trọng; số lồi thuộc diện q lâm vào tình trạng có nguy bị tuyệt chủng cao Bởi vậy, vấn đề bảo tồn thuốc bị đe dọa coi nhóm đối tượng ưu tiên, chiến lược bảo tồn phát triển bền vững nguồn tài nguyên lâm sản sỗ Việt Nam [9] Đảng Sâm (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f.,) lồi dược liệu có giá trị kinh tế cao, loại thuốc quý có tác dụng bồi bổ sức khỏe, nâng cao thể lực, tăng khả miễn dịch cho thể, có tác dụng ích huyết, sinh tân dịch, chống mệt mỏi, giảm stress, dùng làm thuốc bổ trường hợp tỳ vị suy yếu, thiếu máu ốm dậy; chữa đau dày, ho, viêm thận, nước tiểu có albumin rễ củ có chứa nhiều saponins, triterpenes, steroid Ngồi non làm rau ăn [8] Ở Việt Nam, Đảng sâm phân bố tương đối rộng rãi nhiều tỉnh miền núi, có giá trị sử dụng kinh tế cao, thuốc bị khai thác liên tục nhiều năm, chí cịn xuất khơng thức qua biên giới Hơn nữa, nạn phá rừng, mở rộng nương rẫy, làm cho Đảng sâm mọc tự nhiên tất tỉnh trở nên rõ rệt Đảng sâm đưa vào Sách Đỏ Việt Nam (1996) Danh lục Đỏ thuốc Việt Nam (1996, 2001, 2006) Đồng thời có tên Nghị định số 32/2006/NĐ CP Chính phủ (30/3/1006) nhằm tăng cường quản lý bảo vệ [6] Việc ứng dụng công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật làm tăng hệ số nhân giống thực vật thời gian ngắn, đồng thời việc nuôi cấy tế bào, mô quan thực vật giúp nhà nghiên cứu thu nhận sinh khối hay hợp chất thứ cấp có giá trị y dược với hiệu suất cao sản xuất từ tế bào vi sinh vật tổng hợp đường hoá học [4] 46 26 Nguyễn Hoàng Nghĩa (1997), Bảo tồn nguồn gen trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 27 Trương Quỳnh Như, Võ Thanh Phúc, Lê Thị Thủy Tiên (2015), “Khảo sát ảnh hưởng auxin lên hình thành tăng sinh rễ bất định dừa cạn (Catharanthus roseus (L.) G Don)”, Tạp chí phát triển KH&CN, 18(5), tr 75 – 86 28 Nguyễn Thị Quỳnh, Hoàng Ngọc Nhung, Nguyễn Lê Anh Thư (2013) “Nghiên cứu hình thành tăng trưởng rễ bất định từ nuôi cấy in vitro Đương quy Nhật Bản (Angelica acutiloba Kitagawa)”, Tạp chí sinh học, tr35(3se):165-173 29 Hồng Thị Sản (2009), Phân loại thực vật, NXB Giáo dục 30 Bùi Đình Thạch (2016) Nghiên cứu tạo rễ tơ Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L.) khảo sát khả tạo plumbagin nuôi cấy in vitro, Luận án tiến sĩ Viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 31 Nguyễn Quang Thạch (2009), Cơ sở Công nghệ sinh học-tập 3, Nxb Giáo dục 32 Nguyễn Đức Thành (2002), Nuôi cấy mô tế bào thực vật- nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp 33 Nguyễn Trung Thành, Paek Kee (2008), “Nhân nhanh rễ bất định Nhân sâm Panax ginseng C.A Meyer ảnh hưởng số nhân tố lý hóa lên tăng trưởng sinh khối sản phẩm trao đổi chất ginsenosides”, Tạp chí khoa học DHQGHN, Khoa học tự nhiên công nghệ 24, tr 318-323 34 Ninh Thị Thảo , Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Thuỳ Linh, Nguyễn Tuấn Minh, Nguyễn Quỳnh Chi, Trần Thị Anh Đào (2016), “Nghiên cứu cảm ứng nuôi cấy rễ bất định ba kích (Morinda officinalis How)”, Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam 2016, tập 14, số 6: 921-930 35 Ninh Thị Thảo, Lê Tiến Vinh, Lã Hoàng Anh, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Phương Thảo (2015), “Nghiên cứu cảm ứng nuôi cấy rễ tơ Đan sâm (Salvia miltiorrhiza bunge)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, Vol.13, No 2: 251-258 36 Lê Thị Thúy, Trịnh Mộng Nhi, Phạm Văn Lộc (2014), “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật môi trường nuôi cấy đến khả tạo rễ cà rốt ni cấy in vitro”, Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, 5(18): 62-67 37 Đỗ Năng Vịnh (2002), Công nghệ sinh học trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 47 II Tiếng Anh 38 Abdullahil, B (2010), Growth, secondary metabolite production and antioxidant enzyme response of Morinda citrifolia adventitious root as affected by auxin and cytokinin, Plant Biotechnology Reports, 4(2): 109-116 39 Amoo, S O., Aremu, A O., Staden, J (2013), Shoot proliferation and rooting treatments influence secondary metabolite production and antioxidant activity in tissue culture-derived Aloe arborescens grown ex vitro Plant Growth Regulators, 70: 115-122 40 Bui Dinh Thach, Le Nguyen Tu Linh, Nguyen Thi Thuy Van, Trinh Thi Ben, Mai Truong, Nguyen Huu Ho (2014), A study on the formation and development of Panax bipinnatifidus Seem adventitious root, Journal of Developmental Biology and Tissue Engineering 6(1): 1-7 (ISSN: 2141-2251) 41 Demet A., Daradogan T (2010), “The effect of carbon sources on in vitro microtuberization of potato (Solanum tuberosum L.)”, Turkish Journal of Field Crops, 15(1), pp 7-11 42 Escalona M., Lorenzo J.C., Gonzales B.L., Daquinta M., Borroto C.G , Gozales J.I., Desjardine Y (1999), “Pineapple (Ananas comosus L Merr.) micropropagation in temporary immersion system”, Plant Cell Rep, 18, pp 743 – 748 43 Gao X.F., Xu Z.H., Liu J.J., Ma L.P., Yin L.P., Jia W (2006), “Adventitious root induction and in vitro culture of Panax notoginseng”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi., 31(18), pp 1485-8 44 Geert-Jan De Klerk, Wim Van Der Krieken, Joke C De Jong (1999), Review: The formation of adventitious roots: new concepts, new possibilities, In Vitro Cell Dev Bio Plant, 35, 189-199 45 J.J Zhong (1998), Production of ginseng saponin and polysaccharide by cell cultures of P ginseng and P notoginseng Effects of plant growth regulators, Appl Biochem and Biotechnol., 75:261 46 Kim, J S., Hahn, E J., Yeung, E C., Paek, K Y (2003), Lateral root development and saponin accumulation as affected by IBA or NAA in adventitious root cultures of Panax ginseng C A Meyer In Vitro Cellular and Developmental Biology Plant, 39(2): 245-249 48 47 Lee Y., Lee D.E., Lee H.S., Kim S.K, Lee W.S., Kim S.H., M.W (2011), “Influence of auxins, cytokinins, and nitrogen on production of rutin from callus and adventitious roots of the white mulberry tree (Morusalba L.)”, Plant cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 105(1), pp 9-19 48 Reis, R., Borges, A., Chierrito, T., de Souto, E., de Souza, L., Iacomini, M., de Oliveira, A., Goncalves, R (2011), Establishment of adventitious root culture of Stevia rebaudiana Bertoni in a roller bottle system Plant Cell Tissue Organ Culture, 106: 329-335 49 San José, M C., Romero, L., Janeiro, L.V (2012), Effect of indole-3-butyric acid on root formation in Alnus glutinosa microcuttings, Silva Fennica, 46(5): 643-654 50 Soffer H., Burgur D W., 1988, Effects of dissolved oxygen concentrations in aero hydroponics on the formation and growth of adventitious roots, J Am Soc Hort Sci., 113: 218-221 51 Son S.H., Choi S.M., Hyung S.J., Yun S.R., Choi M.S., Shin E.M., Hong Y.P (1999) “Induction and culture of mountain ginseng adventitious roots and AFLP analysis for indentifying mountain ginseng”, Biotechnology and Bioprocess Engineering, 4(2), pp 119-123 52 Verstraeten I., Beeckman T., Geelen D (2013), Adventitious root induction in Arabidopsis thaliana as a model for in vitro root organogenesis, Methods in Molecular Biology, 959: 159-175 53 Xu H., Park J H., Kim Y K., Park N., Lee S Y., Park S U (2009), Optimization of growth and pyranocoumarins production in hairy root culture of Angelica gigas Naka, Journal of Medicinal Plants Research, 3: 978 – 981 54 Yew Lee, Dong-Eun Lee, Hak-Soo Lee, Seong-Ki Kim, Woo Sung Lee, SooHwan Kim, Myoung-Won Kim (2011), Influence of auxins, cytokinins and nitrogen on production of rutin from callus and adventitious roots of the white mulberry tree (Morus alba L.), Plant Cell Tissue Organ Culture, 105, 9-19 55 Yu T A., Yeh S D., Cheng Y H., Yang J S., (2000), Efficient rooting for establishment of papaya plantlets by micropropagation, Plant Cell Tiss Org Cult., 61(1): 29-35 PHỤ LỤC 1: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Bảng 1.1: Môi trường MS Murashige and Skoog’s Thể tích cần lấy MS thành phần Thành phần MS Khối lượng (g/l) cho lít mơi trường ni cấy (ml) I II III IV V NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 CaCl2.2H2O 44 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 KH2PO4 17 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 20 10 10 10 10 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 Glycine 100 2,0 Thiamine acid 100 0,1 Pyridocine HCl 100 0,5 Sucrose 30 g Agar 6g pH 5,7-5,8 Bảng 1.2: Mơi trường B5 Thể tích cần lấy B5 thành phần Thành phần Khối lượng cho lít mơi (g/l) trường ni cấy (ml) KNO3 250 20 (NH4)2SO4 13,4 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 MnSO4.H2O 1,0 10 H3BO3 0,3 ZnSO4.7H2O 0,2 KI 0,075 Na2MoO4.2H2O 0,025 CuSO4.5H2O 0,0025 CoCl2.6H2O 0,0025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 CaCl2.2H2O 15,0 10 10 10 10 Inositol mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 Thiamine HCL 100 10 Pyridoxine HCL 100 Sucrose Agar pH 6g 5,6 - 5,8 PHỤ LỤC 02 XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KL FILE ND1 12/09/** 15: PAGE Ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm VARIATE V003 KL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.27629 758764 34.16 0.001 NL 145167E-01 725835E-02 0.33 0.736 * RESIDUAL 133284 222139E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.42409 220372 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE ND1 12/09/** 15: PAGE Ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ 1 NOS KL KL 4 2.53000 2.60500 2.60250 SE(N= 4) 0.745217E-01 5%LSD 6DF 0.257782 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE ND1 12/09/** 15: PAGE Ảnh hưởng môi trường đến khả phát triển hệ rễ bất định Đảng sâm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KL GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 2.5792 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.46944 0.14904 4.8 0.0006 |NL | | | 0.7356 | | | | Bảng 2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng 2,4D lên hình thành mơ sẹo từ mẫu Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE MS 12/ 09/** 15:30 PAGE Anh huong cua 2,4D lens u hinh mo seo tu mau la Dang sam VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.91333 637778 117.20 0.000 * RESIDUAL 435334E-01 544167E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.95687 177897 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MS 12/ 09/** 15:30 PAGE Anh huong cua 2,4D lens u hinh mo seo tu mau la Dang sam MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 KLRT 2.38333 2.55000 3.25333 2.25000 SE(N= 3) 0.425898E-01 5%LSD 8DF 0.138881 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MS 12/ 09/** 15:30 PAGE Anh huong cua 2,4D lens u hinh mo seo tu mau la Dang sam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 2.6167 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.42178 0.73768E-01 2.8 0.0000 | | | | Bảng 3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE NAA 12/ 09/** 15:12 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 711621 355811 7.69 0.023 * RESIDUAL 277667 462778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 989288 123661 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 12/ 09/** 15:12 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS KLRT 15.93000 17.59367 3 20.79000 19.32222 SE(N= 4) 0.124201 5%LSD 6DF 0.429632 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 12/ 09/** 15:12 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 8.1489 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.35165 0.21512 2.6 0.0226 | | | | Bảng 4: Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE IBA 12/ 09/** 5:59 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.79583 1.19896 46.60 0.000 * RESIDUAL 10 257267 257267E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.05309 360935 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IBA 12/ 09/** 5:59 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 KLRT 00.00000 21.44000 24.42222 30.32830 27.89000 SE(N= 3) 0.926043E-01 5%LSD 10DF 0.271799 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IBA 12/ 09/** 5:59 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 6.3693 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.60078 0.16040 4.8 0.0000 | | | | Bảng 5: Ảnh hưởng hàm lượng đường đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE DUONG 12/ 09/** 9:11 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.10444 1.62089 48.32 0.000 * RESIDUAL 12 402534 335445E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 8.50698 500410 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DUONG 12/ 09/** 9:11 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 KLRT 5.98000 6.37000 6.36667 7.95000 7.34000 7.02667 SE(N= 3) 0.105743 5%LSD 12DF 0.325829 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DUONG 12/ 09/** 9:11 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 6.8389 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.70740 0.18315 2.7 0.0000 | | | | Bảng 6: Ảnh hưởng nước dừa đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE NUOCDUA 12/ 09/** 17:49 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 16.0424 4.01061 84.89 0.000 * RESIDUAL 10 472468 472468E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.5149 1.17964 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NUOCDUA 12/ 09/** 17:49 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 KLRT 2.55000 4.48333 5.34333 3.58333 2.85333 SE(N= 3) 0.125495 5%LSD 10DF 0.325439 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NUOCDUA 12/ 09/** 17:49 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.7627 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0861 0.21736 3.3 0.0000 | | | | Bảng 7: Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đén khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE NAMMEN1 12/ 09/** 22:31 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.87643 1.21911 60.15 0.000 * RESIDUAL 10 202667 202667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.07909 362792 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAMMEN1 12/ 09/** 22:31 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF KLRT 4.45333 4.98000 5.54000 6.06000 5.73000 SE(N= 3) 0.821922E-01 5%LSD 10DF 0.258991 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAMMEN1 12/ 09/** 22:31 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.3527 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.60232 0.14236 2.7 0.0000 | | | | Bảng 8: Ảnh hưởng nồng độ peptone đến khả tăng sinh khối rễ bất định Đảng sâm BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE PEPTONE 12/ 09/** 5:59 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.79583 1.19896 46.60 0.000 * RESIDUAL 10 257267 257267E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.05309 360935 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PEPTONE 12/ 09/** 5:59 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 KLRT 5.55000 5.98000 6.36667 6.83000 7.12000 SE(N= 3) 0.926043E-01 5%LSD 10DF 0.291799 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PEPTONE 12/ 09/** 5:59 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 6.3693 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.60078 0.16040 2.5 0.0000 | | | | Bảng 9: Ảnh hưởng thể tích mơi trường đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường lỏng ALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE THETICH 12/ 09/** 16:34 PAGE VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.13820 569100 15.76 0.005 * RESIDUAL 216600 361000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 1.35480 169350 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE THETICH 12/ 09/** 16:34 PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS KLRT 143.82000 115.38000 SE(N= 2) 0.109697 5%LSD 6DF 0.379458 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE THETICH 12/ 09/** 16:34 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 6) NO OBS 8.3500 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.41152 0.19000 2.3 0.0046 | | | | Bảng 10: Ảnh hưởng tốc độ sục khí đến khả nhân sinh khối rễ bất định Đảng sâm môi trường lỏng BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLRT FILE SUCKHI2 12/ 09/** 18: PAGE Anh huong cua toc suc VARIATE V003 KLRT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1304.49 1304.49 5.65 0.076 * RESIDUAL 923.720 230.930 * TOTAL (CORRECTED) 2228.21 445.642 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SUCKHI2 12/ 09/** 18: PAGE Anh huong cua toc suc MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 KLRT 111.130 143.800 SE(N= 3) 8.77363 5%LSD 4DF 3.43908 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SUCKHI2 12/ 09/** 18: PAGE Anh huong cua toc suc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KLRT GRAND MEAN (N= 6) NO OBS 285.29 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 21.110 15.196 5.3 0.0760 | | | | ... bất định từ Đảng Sâm nam (Codonopsis javanica (Blume) Hook. f. ,)” Mục tiêu nghiên cứu Xác định môi trường phù hợp để tạo rễ bất định Đảng Sâm in vitro nhân sinh khối rễ bất định Đảng Sâm bình... 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm 28 3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm. .. 28 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả cảm ứng tạo rễ bất định từ mô sẹo Đảng sâm trình