nghiên cứu tiêu chuẩn hóa hợp chất kháng acetylcholinesterase của một số loài trong họ thạch tùng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN NGỌC CHƯƠNG NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA HỢP CHẤT KHÁNG ACETYLCHOLINESTERASE CỦA MỘT SỐ LOÀI TRONG HỌ THẠCH TÙNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH, năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN NGỌC CHƯƠNG NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA HỢP CHẤT KHÁNG ACETYLCHOLINESTERASE CỦA MỘT SỐ LOÀI TRONG HỌ THẠCH TÙNG Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 62720410 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS TRẦN CÔNG LUẬN TS TRẦN MẠNH HÙNG TP HỒ CHÍ MINH, năm 2020 LỜI CÁM ƠN Luận án được hình thành với mong muốn tìm dược liệu hợp chất tự nhiên mới họ Thạch tùng có khả dùng làm thuốc cải thiện trí nhớ cho bệnh nhân Alzheimer Luận án được công nhận NCS tháng 14-11-2012 bảo vệ luận án cấp trường vào ngày 28-8-2020 Luận án được tiến hành ở Khoa duợc, ĐHYD TpHCM, Trung âm Sâm và Dược liệu TP HCM, Viện kiểm nghiệm thuốc TP HCM, Trung tâm kiểm nghiệm Dược phẩm Vĩnh Long và ở Khoa Dược trường ĐH Catholic of Daegu (Hàn Quốc) Quá trình thực hiện luận án có giúp đỡ, chia sẻ, động viên từ người thân, thầy cô, bạn bè, đồng nghiệp, quan liên quan và các em sinh viên Trước hết xin trân trọng gởi lời cám ơn sâu sắc tới Cha Nguyễn Văn Tân (Đã năm 2006), Mẹ Lê Thị Lan, Cha Mẹ suốt đời hy sinh cho con, chịu nhiều khổ cực vẫn quyết tâm cho ăn học thành người Cù lao chín chữ ghi nhớ tâm trí, khơng quên ơn sinh thành dưỡng dục Em xin gởi lời cám ơn sâu sắc đến Anh, Chị em gia đình dành hết công việc khó nhọc, hết lịng quan tâm giúp đỡ hồn cảnh khó khăn để em (anh) được học hành Em xin chân thành cám ơn Thầy PGS TS Trần Công Luận, TS Trần Mạnh Hùng hướng dẫn, giúp đỡ quá trình thực hiện luận án, Thầy dành nhiều thời gian sửa bài thật cẩn thận Em xin tỏ lòng tri ân sâu sắc đến quý Thầy Cô Anh Chị Em ở Bợ Mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm, Bợ mơn Dược Liệu, Bợ mơn Dược lý, Bợ mơn Sinh hóa, BM Hóa hữu – Khoa Dược, ĐHYD TP HCM, Viện Kiểm nghiệm thuốc TP.HCM, Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm Vĩnh Long Em tỏ lòng biết ơn đến Cô PGS TS Trương Thị Đẹp, Cô PGS TS Nguyễn Thị Thu Hương, Cô PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi, Cô PGS.TS Huỳnh Ngọc Trinh, Cô PGS TS Hà Diệu Ly, Thầy TS Võ Văn Chi, GS Nguyễn Minh Đức, PGS TS Vĩnh Định, PGS TS Nguyễn Ngọc Vinh, PGS TS Nguyễn Đức Tuấn, PGS TS Phan Thanh Dũng, PGS TS Trương Ngọc tuyền, PGS TS Trần Mạnh Hùng, PGS TS Bùi Mỹ Linh, PGS TS Võ Thị Bạch Huệ, TS Nguyễn Viết Kình, PGS TS Trần Hữu Dũng, TS Ngơ Thanh Diệp, TS Phan Văn Hồ nam góp ý nhiều về thực vật học, hóa học, kiểm nghiệm thử nghiệm sinh học luận án được hoàn thiện có giá trị khoa học Em xin chân thành cảm ơn đến Thầy Cô anh chị em PGS TS Nguyễn Phương Dung, ThS Phạm Thị Hóa, PGS TS Trịnh Thị Diệu Thường, PGS TS Thái Khắc Minh, TS Ngô Kiến Đức, TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, ThS Lê Tuấn Vũ, ThS Lê Ngọc Tú, TS Trương Công Trị, TS Nguyễn Thị Minh Thuận, PGS TS Trần Văn Thành, PGS TS Mai Đình Trị, TS Nguyễn Phi Hùng (Viện Hóa), TS Tơ Đạo Cường (ĐH Phenikaa), TS Phùng Chất, TS Nguyễn Hữu Lạc Thủy, TS Võ Văn Lẹo, Mã Chí Thành TS Lê Thị Hồng Vân, NCS Đỗ Văn Mãi, TS Nguyễn Minh Cường, DS CK I Lê Thị Cẩm Thúy, TS Nguyễn Văn Minh, TS Võ Quang Trung hỗ trợ hỗ trợ đợng viên tích cực thời gian hồn thành nhận xét góp ý chuẩn bị báo cáo cấp trường Em xin gởi lời cám ơn chân thành đến quý lãnh đạo Khoa Dược: Thầy GS TS Lê Quan Nghiệm, PGS TS Trần Hùng, PGS TS Lê Minh Trí, PGS TS Trần Thành Đạo, PGS TS Nguyễn Thiện Hải, PGS TS Nguyễn Ngọc Khôi Em xin gởi lời cám ơn sâu sắc đến CN Trương Quang Lực, TS Bùi Thế Vinh và các anh em đoàn điều tra th́c giúp liên lạc với qùn địa phương tỉnh Lâm Đồng Kon Tum thực hiện công việc ngày đầu sưu tra, thu thập mẫu loài Thạch tùng đầy gian nan, khó khăn hiểm trở khu rừng bạt ngàn ở Tây Nguyên Em xin gởi lời cám ơn đến Thầy Cô Trường ĐH Catholic of Daegu : GS Byung Sun Min anh chị em phòng Lab Anh xin chân thành cảm ơn TS Tô Đạo Cường giúp đỡ anh về chổ ở thời gian tu nghiệp Hàn Quốc Em xin gởi lời cám ơn chân thành đến quý Thầy Cô thuộc Phòng, Ban Sai Đại Học – ĐHYD TpHCM: Thầy TS Hoàng Tiến Mỹ, Thầy TS Hà Mạnh Tuấn, Cô PGS TS Mai Phương Thảo, Chị Bùi Thị Vân Anh, Chị Thủy, Chị Hương, Chị Yến, Anh Thọ, Anh Quý Em xin gởi lời cám đến các Thầy Cô, Anh Chị Em: TS Nguyễn Thị Vân Anh, TS Nguyễn Thụy Việt Phương, Cô ThS Dương Mộng Ngọc, em ThS Trần Minh Thảo, em ThS Nguyễn Ngọc Đan ThS Nguyễn Duy Tài (Trung tâm Sâm) anh chị em Bộ môn DHCT chia sẻ, giúp đỡ nhiều về vật chất, tinh thần Cuối cùng, Thầy xin gởi lời cám ơn chân thành đến các em sinh viên đồng cam cộng khổ quá trình làm luận án: Các em DS Võ Văn Hữu Nghĩa, DS Lê Ngô Duy Tuấn, DS Nguyễn Thị Thảo, DS Phan Thị Thanh Nhàn, DS Nguyễn Phươn Trang, DS Trần Thị Ngọc Thương, DS Cao Hữu Thịnh, DS Nguyễn Thị Hồng, ThS Nguyễn Cao Lê Hiền, CN Nguyễn Ngọc Chi, CN Huỳnh Thị Ngọc Tú, CN, Nguyễn Thị Hằng, CN Nguyễn Văn Chinh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan là công trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu được trình bày luận án trung thực, khách quan và chưa từng được công bố ở nơi Tác giả luận án i MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH VIỆT iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC SƠ ĐỒ ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.2 TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.3 CÁC PHƯƠNG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ PHÁP PHÂN TÍCH HUPERZIN A 18 1.4 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 20 1.5 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ACETYLCHOLINESTERASE 22 1.6 CÁC PHƯƠNG PHÁP THỬ NGHIỆM VỀ TRÍ NHỚ 24 1.7 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ HỌ THẠCH TÙNG 26 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 28 2.2 QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU 28 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 29 2.3 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 30 2.4 DUNG MƠI - HĨA CHẤT - TRANG THIẾT BỊ 30 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 52 3.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 52 3.2 TÁC DỤNG ỨC CHẾ ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO CỦA CÁC LOÀI THẠCH TÙNG 59 3.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC 61 3.4.THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 81 3.5 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HUPERZIN A TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP CZE VÀ HPLC 89 ii 3.6 NGHIÊN CỨU IN VIVO TÁC DỤNG CẢI THIỆN TRÍ NHỚ CỦA THẠCH TÙNG NGHIÊN 104 Chương BÀN LUẬN 107 4.1 VỀ MẶT THỰC VẬT HỌC 107 4.2 VỀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO CỦA CÁC LOÀI THẠCH TÙNG 112 4.3 VỀ MẶT HÓA HỌC 115 4.4 VỀ MẶT THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 122 4.5 VỀ MẶT XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HUPERZIN A TRONG DƯỢC LIỆU 123 4.6 VỀ MẶT THỬ TÁC DỤNG SINH HỌC 127 KẾT LUẬN 132 KIẾN NGHỊ 135 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH VIỆT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt AChE Acetylcholinesterase AD Alzheimer's Disease BuChE Butyrylcholinesterase CC Column Chromatography Sắc ký cột CE Capillary electrophoresis Điện di mao quản Corr Area Corrected Area Diện tích pic được chuẩn hóa COSY Correlation Spectroscopy CZE Capillary Zone Electrophoresis DCM Dicloromethan Bệnh Alzheimer's Điện di mao quản vùng DĐVN Dược điển Việt Nam DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO Dimethylsulfoxide DSC Differential Scanning Calorimetry Quét nhiệt vi sai DTNB 5,5ʹ-dithio-bis-nitro benzoic EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat FDA Food and Drug Administration GLP Good Laboratory Practices Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm thuốc HMBC Heteronuclear Correlation HPLC High Pressure Chromatography HRMS High Spectrometry HSQC Heteronuclear Multiple Quantum Correlation IC Inhibitory Concentration ICH International Conference Harmonization Multiple Bond Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Resolution Mass Khối phổ phân giải cao Nồng độ ức chế on iv IR Infrared Hồng ngoại LOD Limit of detection Giới hạn phát hiện LOQ Limit of quantitation Giới hạn định lượng MS Mass Spectrometry Khối phổ NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOESY Nuclear Overhauser Spectroscopy PCRS Primary Chemical Standard Photo Diode array PDA Reference Chất đối chiếu gốc Dãy diod quang PTN Phòng thí nghiệm RSD Relative Standard Deviation SCRS Secondary Chemical Reference Chất đối chiếu hóa học thứ cấp Standard Độ lệch chuẩn tương đối SKLM Sắc ký lớp mỏng TB Trung bình TGA Thermogravimetric Analysis Phân tích nhiệt trọng lượng UV -Vis Ultraviolet - Visible Tử ngoại khả kiến VS Vaniline - sulfuric acid Vanilin acid sulfuric v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 30 Bảng 2.2 Thành phần một mẫu thử nghiệm theo phương pháp Ellman 33 Bảng 3.1 Kết xác định độ ẩm cao chiết MeOH hiệu suất chiết các dược liệu 59 Bảng 3.2 Kết tác động ức chế AChE mẫu thử nghiệm 60 Bảng 3.3 Kết phân tích sơ bộ thành phần hoá thực vật 61 Bảng 3.4 Kết so sánh quy trình phân lập alcaloid 63 Bảng 3.5 Các phân đoạn cột Diaion HP-20 63 Bảng 3.6 Các phân đoạn cột sắc ký MeOH 100 % 65 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ 1H 13C hợp chất 67 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ 1H, 13C 69 Bảng 3.9 Dữ liệu phổ 1H, 13C DEPT hợp chất 71 Bảng 3.10 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất 73 Bảng 3.11 So sánh kết PP1, PP2, PP3 74 Bảng 3.12 Dữ liệu phổ NMR hợp chất 78 Bảng 3.13 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất 79 Bảng 3.14 Kết tác động ức chế AChE hợp chất phân lập được 81 Bảng 3.15 Các phân đoạn cột R-1 82 Bảng 3.16 Các phân đoạn cột R-2 82 Bảng 3.17 Kết khảo sát hàm ẩm nhiệt đợ nóng chảy, đợ tinh khiết 83 Bảng 3.18 Bảng tóm tắt điều kiện sắc ký thích hợp kiểm tra đợ tinh khiết sắc ký huperzin A 84 Bảng 3.19 Kết xác định độ tinh khiết sắc ký (%) nguyên liệu thiết lập CĐC 85 Bảng 3.20 Kết phân tích phương sai một yếu tố theo ANOVA 87 Bảng 3.21 Kiểm tra tính phù hợp hệ thớng kết xác định hàm lượng huperzin A phịng thí nghiệm (n = 6) 88 Bảng 3.22 Xác định giá trị công bố 88 Bảng 3.23 Kết kiểm tra tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn 93 Bảng 3.24 Kết kiểm tra tính phù hợp hệ thống mẫu thử 93 Bảng 3.25 Kết độ lặp lại phương pháp định lượng huperzin A Thạch tùng 94 PL 82 Phụ lục 82 Phổ HRMS của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 83 Phụ lục 83 Phổ 13C – NMR của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 84 Phụ lục 84 Phổ 1H – NMR của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 85 Phụ lục 85 Phổ DEPT - NMR của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 86 Phụ lục 86 Phổ COSY – NMR của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 87 Phụ lục 87 Phổ HSQC của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 88 Phụ lục 88 Phổ HMBC–NMR của hợp chất M23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 89 UV365 UV254 TT Dragendorff Phụ lục 89.1 Hình SKĐ quá trình phân lập hợp chất từ phân đoạn Phụ lục 89 Hình SKĐ các phân đoạn quá trình sắc ký phân đoạn Phụ lục 89.3 Hình SKĐ các phân đoạn sắc ký phân lập hợp chất từ phân đoạn 8.8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 90 Phụ lục 90 Bảng số liệu khảo sát độ lặp lại của phương pháp HPLC chất đối chiếu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 91 \ Phụ lục 91 Hình SKĐ khảo sát độ lặp lại của phương pháp HPLC chất đối chiếu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 92 Huperzin A 230 nm Imidazol 310 nm Phụ lục 92 Điện di đồ mẫu Thạch tùng bước sóng 230 nm 310 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 93 huperzin A (Hợp chất 1) Lycosquarosin A (Hợp chất 2) 16 15 14 H 10 H H N H 13 11 N 16 H N O 12 H N O Huperzinin (Hợp chất 4) Acetylaposerratinin (Hợp chất 3) 15 14 13 12 10 11 OH Lycocernuin (Hợp chất 5) Lycocernuasid A (Hợp chất 6) Phụ lục 93 Bảng tổng hợp các hợp chất phân lập Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 94 ΔODTB ΔODTB % ức Độ Trung mẫu mẫu chế lệch IC50 (µg/ml) bình thử trắng AChE chuẩn 0,00519 0,02710 80,85 % 50 82,35 % 2,11 0,00445 0,02752 83,84 % 0,01212 0,02710 55,26 % 25 56,86 % 2,25 0,01143 0,02752 58,46 % Huperzia 0,01609 0,02710 40,62 % squarrosa A1 12,5 41,18 % 0,78 15,61 ± 0,90 (Râu rồng) 0,01604 0,02752 41,73 % 0,01966 0,02710 27,43 % 6,25 28,43 % 1,40 0,01942 0,02752 29,42 % 0,02344 0,02710 13,48 % 3,125 15,20 % 2,42 0,02287 0,02752 16,91 % 0,00492 0,02639 81,33 % 50 80,1 % 1,75 0,00544 0,02575 78,86 % 0,01117 0,02639 57,66 % 25 59,71 % 2,89 0,00985 0,02575 61,75 % Huperzia 0,01509 0,02639 42,81 % phlegmaria A2 12,5 41,75 % 1,49 15,27 ± 1,23 (Thạch tùng 0,01527 0,02575 40,69 % đuôi ngựa) 0,01938 0,02639 26,55 % 6,25 25,73 % 1,16 0,01934 0,02575 24,91 % 0,02193 0,02639 16,89 % 3,125 17,96 % 1,50 0,02085 0,02575 19,02 % 0,00361 0,02511 85,62 % 50 86,93 % 1,86 0,00287 0,02447 88,25 % 0,00935 0,02511 62,75 % 25 63,55 % 1,13 Huperzia 0,00872 0,02447 64,35 % carinata 0,01447 0,02511 42,36 % A3 (Thạch tùng 12,5 42,06 % 0,43 14,39 ± 0,53 0,01425 0,02447 41,75 % sóng) 0,01923 0,02511 23,41 % 6,25 24,77 % 1,93 0,01807 0,02447 26,14 % 0,02119 0,02511 15,63 % 3,125 14,02 % 2,27 0,02143 0,02447 12,41 % 0,00902 0,02383 62,17 % 50 62,62 % 0,64 0,00856 0,02319 63,07 % 0,01224 0,02383 48,65 % 25 48,06 % 0,83 Huperzia 0,01218 0,02319 47,47 % fordii 0,01554 0,02383 34,79 % A4 (Thạch tùng 12,5 35,92 % 1,59 26,62 ± 0,67 0,01460 0,02319 36,51 % Ford) 0,01733 0,02383 27,27 % 6,25 25,73 % 2,17 0,01758 0,02319 24,20 % 0,01986 0,02383 16,67 % 3,125 16,02 % 0,91 0,01962 0,02319 15,38 % Phụ lục 94 Bảng các nồng độ mẫu thử % ức chế enzym của các mẫu thử A1 - A4 Ký hiệu mẫu Tên mẫu thử Nồng độ (µg/ml) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 95 ΔODTB % ức Độ Trung mẫu chế lệch IC50 (µg/ml) bình trắng AChE chuẩn 0,00521 0,02455 78,83 % 50 80,83 % 2,82 0,00411 0,02391 82,82 % 0,01038 0,02455 57,71 % Huperzia 25 56,25 % 2,06 0,01081 0,02391 54,79 % tetrasticha 0,01576 0,02455 35,81 % (Thạch A5 12,5 38,46 % 3,74 16,59 ± 0,43 tùng 0,01408 0,02391 41,11 % vuông) 0,01804 0,02455 26,51 % 6,25 25,96 % 0,77 0,01783 0,02391 25,41 % 0,02028 0,02455 17,39 % 3,125 16,79 % 0,84 0,02004 0,02391 16,20 % 0,00305 0,02527 87,92 % 50 87,44 % 0,68 0,00334 0,02563 86,96 % 0,00884 0,02527 65,01 % 25 63,82 % 1,68 Huperzia 0,00958 0,02563 62,63 % serrata 0,01365 0,02527 45,98 % A6 (Thạch tùng 12,5 47,24 % 1,79 12,11 ± 0,74 0,01320 0,02563 48,50 % răng) 0,01627 0,02527 35,63 % 6,25 33,67 % 2,64 0,01746 0,02563 31,89 % 0,02008 0,02527 20,54 % 3,125 21,61 % 1,52 0,01982 0,02563 22,68 % 0,01045 0,02599 59,79 % 100 57,14 % 3,74 0,01199 0,02635 54,49 % 0,01488 0,02599 42,73 % 25 40,95 % 2,52 Lycopodium 0,01603 0,02635 39,17 % complanatum 0,01893 0,02599 27,16 % A7 (Thạch tùng 12,5 27,59 % 0,60 55,24 ± 2,55 0,01897 0,02635 28,01 % dẹp) 0,02071 0,02599 20,33 % 6,25 19,21 % 1,58 0,02158 0,02635 18,09 % 0,02315 0,02599 10,93 % 3,125 10,82 % 0,16 0,02353 0,02635 10,71 % 0,00896 0,02471 63,74 % 100 61,94 % 2,55 0,00959 0,02407 60,14 % 0,01494 0,02471 39,55 % 25 39,25 % 0,42 Lycopodium 0,01469 0,02407 38,95 % clavatum 0,01816 0,02471 26,49 % 51,75 ± 1,17 A8 (Thạch tùng 12,5 24,77 % 2,43 0,01852 0,02407 23,05 % dùi) 0,01991 0,02471 19,43 % 6,25 17,29 % 3,03 0,02042 0,02407 15,15 % 0,02216 0,02471 10,32 % 3,125 9,81 % 0,72 0,02183 0,02407 9,30 % Phụ lục 95 Bảng các nồng độ mẫu thử % ức chế en zym của các mẫu thử A5 - A8 Ký hiệu mẫu Tên mẫu thử Nồng độ (µg/ml) ΔODTB mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL 96 Ký hiệu mẫu Tên mẫu thử Nồng độ (µg/ml) 50 A9 Lycopodium casuarinoides (Thạch tùng dương) 25 12,5 6,25 3,125 50 A10 Lycopodiella cernua (Thạch tùng nghiên) 25 12,5 6,25 3,125 50 A11 Phân đoạn alcaloid Thạch tùng nghiên 25 12,5 6,25 3,125 0,2 0,16 AC Berberin 0,032 0,0064 0,00128 ΔODTB mẫu thử 0,00909 0,01027 0,01459 0,01436 0,01631 0,01761 0,01896 0,01956 0,02003 0,02157 0,00883 0,01017 0,01379 0,01425 0,01683 0,01678 0,01874 0,01979 0,02079 0,02160 0,00936 0,00942 0,01300 0,01295 0,01454 0,01520 0,01881 0,01882 0,02105 0,02095 0,00491 0,00560 0,01411 0,01586 0,03423 0,03488 0,03839 0,04012 0,04106 0,04520 ΔODTB mẫu trắng 0,02343 0,02479 0,02343 0,02479 0,02343 0,02479 0,02343 0,02479 0,02343 0,02479 0,02315 0,02351 0,02315 0,02351 0,02315 0,02351 0,02315 0,02351 0,02315 0,02351 0,02371 0,02419 0,02371 0,02419 0,02371 0,02419 0,02371 0,02419 0,02371 0,02419 0,04921 0,05247 0,04921 0,05247 0,04921 0,05247 0,04921 0,05247 0,04921 0,05247 % ức chế AChE 61,22 % 58,58 % 37,72 % 42,48 % 30,40 % 28,98 % 19,52 % 21,10 % 14,50 % 12,58 % 61,84 % 56,74 % 40,43 % 39,39 % 27,32 % 28,65 % 19,03 % 15,83 % 10,21 % 8,13 % 60,51 % 61,07 % 45,17 % 46,47 % 38,70 % 37,15 % 20,66 % 22,20 % 11,21 % 13,38 % 90,02 % 89,32 % 71,33 % 69,78 % 30,45 % 33,53 % 21,99 % 23,54 % 16,57 % 13,85 % Trung bình Độ lệch chuẩn 59,90 % 1,87 40,10 % 3,37 29,69 % 1,00 20,31 % 1,11 13,54 % 1,36 59,29 % 3,61 39,91 % 0,74 27,98 % 0,94 17,43 % 2,26 9,17 % 1,47 60,79 % 0,40 45,82 % 0,92 37,92 % 1,10 21,43 % 1,08 12,29 % 1,53 89,67 % 0,49 70,55 % 1,10 31,99 % 2,18 22,76 % 1,10 15,21 % 1,92 IC50(µg/ml) 36,56 ± 2,29 45,91 ± 2,83 28,22 ± 1,32 0,09 ± 0,01 Phụ lục 96 Bảng các nồng độ mẫu thử % ức chế en zym của các mẫu thử A9 - AC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN NGỌC CHƯƠNG NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA HỢP CHẤT KHÁNG ACETYLCHOLINESTERASE CỦA MỘT SỐ LOÀI TRONG HỌ THẠCH TÙNG Chuyên ngành:... chứa hợp chất tḥc dạng Với lý trên, đề tài: ? ?Nghiên cứu tiêu chuẩn hóa hợp chất kháng acetylcholinesterase của số lồi họ Thạch tùng? ?? được thực hiện với mục tiêu sau: Nghiên cứu so sánh... thấy, kết nghiên cứu luận án mang tính mới về khoa học minh chứng cho không trùng lắp với nghiên cứu khác 1.7.2 Trong nước Các nghiên cứu về họ Thạch tùng được nhóm nghiên cứu nước thực