nghiên cứu sản xuất bộ mẫu ngoại kiểm xét nghiệm huyết thanh học hbsag

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  PHÙNG THỊ HOÀNG NHI NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BỘ MẪU NGOẠI KIỂM XÉT NGHIỆM HUYẾT THANH HỌC HBsAg LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  PHÙNG THỊ HOÀNG NHI NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BỘ MẪU NGOẠI KIỂM XÉT NGHIỆM HUYẾT THANH HỌC HBsAg Ngành : Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất Mã số : 8720210 GVHD : TS Nguyễn Thị Minh Thuận TS Trần Tôn Thành phố Hồ Chí Minh – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tác giả luận văn Phùng Thị Hoàng Nhi NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BỘ MẪU NGOẠI KIỂM XÉT NGHIỆM HUYẾT THANH HỌC HBsAg TĨM TẮT Đặt vấn đề: Chương trình ngoại kiểm cơng cụ góp phần đảm bảo chất lượng xét nghiệm liên thông kết xét nghiệm (XN), nâng cao chất lượng XN Mục tiêu: Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm cho chương trình thử nghiệm thành thạo XN huyết học HBsAg Đối tượng Phương pháp nghiên cứu: Bộ panel mẫu thiết kế bao gồm mẫu: âm tính, dương tính yếu dương tính; kiểm tra đảm bảo độ đồng nhất; độ ổn định độ vô khuẩn Sử dụng mẫu để thử nghiệm triển khai chương trình ngoại kiểm XN huyết học HBsAg cho số phịng XN khu vực phía Nam Tây Ngun Kết quả: Xây dựng thành công mẫu ngoại kiểm tối ưu mẫu, bao gồm mẫu âm tính, mẫu dương tính yếu mẫu dương tính mạnh đạt tiêu chí độ ổn định, độ đồng độ vơ khuẩn 104 phịng XN tham gia đánh giá chất lượng XN huyết học HBsAg chương trình ngoại kiểm thử nghiệm sử dụng mẫu chuẩn Kết luận: Bộ mẫu ngoại kiểm cho XN huyết học HBsAg xây dựng sử dụng rộng rãi chương trình thử nghiệm thành thạo cho phịng XN Từ khóa: Bộ mẫu, ngoại kiểm, HBsAg, phòng xét nghiệm ABSTRACT STUDY TO PRODUCE THE EXTERNAL QUALITY ASESSMENT SAMPLES FOR HBsAg SEROLOGICAL TESTING Introduction: External quality assessment is one of the tools that contribute to ensure testing quality in linking test results and improve testing quality Objectives: The aim of this study was to produce the standard samples used in Proficiency Testing Programs for HBsAg serological tests Materials and Methods: The characteristics of sample panels included negative, weak positive and positive; homogeneity; stability and sterility were evaluated Finally, sample panels were implemented in External quality assessment for HBsAg serological tests for laboratories in the Southern and Central Highlands regions Results: The optimal panel of external samples has samples, including negative, weak positive and strong positive samples and has criteria for stability, homogeneity and sterility The quality of HBsAg serology testing from 104 laboratories was assessed by External quality assessment using standard samples of this study Conclusion: We developed the external sample panels for HBsAg serology testing that can be widely used for laboratories in External quality assessment Keywords: Sample panel, External quality assessment, HBsAg, laboratories i MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC SƠ ĐỒ DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan virus viêm gan B (HBV) 1.1.1 Sơ lược HBV 1.1.2 Đặc điểm dịch tễ học 1.1.3 Các dấu ấn miễn dịch HBV 1.2 Các phương pháp xét nghiệm phát HBV 1.2.1 Kỹ thuật miễn dịch sắc ký 1.2.2 Kỹ thuật ELISA (phương pháp miễn dịch gắn men) 1.2.3 Kỹ thuật miễn dịch điện hóa phát quang (ECLIA) 1.2.4 Kỹ thuật miễn dịch hóa phát quang (CLIA) 10 1.3 Tổng quan chất lượng xét nghiệm 11 1.3.1 Vai trò xét nghiệm 11 1.3.2 Sơ đồ hoạt động PXN 12 1.3.3 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm (EQA) 13 1.4 Đánh giá PT xét nghiệm HBsAg giới Việt Nam 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Đối tượng tham gia 20 ii 2.3 Nguyên liệu, hóa chất trang thiết bị 20 2.3.1 Nguyên liệu 20 2.3.2 Hóa chất – Dung mơi 20 2.3.3 Dụng cụ vật tư tiêu hao 20 2.3.4 Trang thiết bị 21 2.4 Tiêu chuẩn chọn mẫu 22 2.5 Phương pháp nghiên cứu 22 2.5.1 Bản chất nghiên cứu 22 2.5.2 Thiết kế nghiên cứu 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 30 3.1 Xây dựng mẫu ngoại kiểm xét nghiệm HBsAg 30 3.1.1 Xác định đặc tính mẫu ban đầu chọn mẫu 30 3.1.2 Xây dựng quy trình chuyển đổi huyết tương thành huyết 31 3.1.3 Kiểm tra lại HBsAg dương tính xét nghiệm khẳng định 33 3.1.4 Phân phối mẫu 34 3.1.5 Đánh giá độ đồng 35 3.1.6 Đánh giá độ vô khuẩn 36 3.2 Thiết kế đánh giá panel thử nghiệm 36 3.2.1 Thiết kế panel thử nghiệm 36 3.2.2 Đánh giá độ ổn định mẫu 38 3.3 Kết triển khai thử nghiệm chương trình ngoại kiểm xét nghiệm huyết học HBsAg khu vực phía Nam Tây Nguyên 41 3.3.1 Số lượng thành phần đơn vị tham gia ngoại kiểm 41 3.3.2 Kỹ thuật sinh phẩm sử dụng 42 3.3.3 Đánh giá kết xét nghiệm mẫu sản xuất từ PXN tham gia ngoại kiểm 43 3.4 Đề xuất tiêu chuẩn sở cho mẫu ngoại kiểm xét nghiệm HBsAg 45 iii 3.4.1 Tối ưu hóa số lượng panel 45 3.4.2 Đề xuất tiêu chuẩn sở cho mẫu ngoại kiểm 47 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 48 4.1 Nguyên liệu sản xuất mẫu ngoại kiểm HBsAg 48 4.2 Chuyển đổi huyết tương thành huyết 48 4.3 Kiểm tra lại đặc tính HBsAg dương tính test khẳng định 49 4.4 Phân phối mẫu 50 4.5 Tối ưu hóa số lượng mẫu panel 50 4.6 Triển khai thí điểm chương trình ngoại kiểm 50 4.7 Tính khả thi chương trình ngoại kiểm sử dụng panel HBsAg sản xuất 51 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 5.1 Kết luận 53 5.2 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ANOVA Analysis of variance Phân tích phương sai Anti-HBs Hepatitis B surface antibody Kháng thể bề mặt virus viêm gan B Anti-HBc Hepatitis B core antibody Kháng thể lõi virus viêm gan B Anti-HBe Hepatitis B e antibody Kháng thể e virus viêm gan B CV Coefficient of variation Hệ số biến thiên CLIA Chemiluminescence Immunoassay Kỹ thuật miễn dịch hóa phát quang DNA Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic ECLIA Electro-chemiluminescence Kỹ thuật miễn dịch điện hóa Immunoassay phát quang EQA External quality assessment Ngoại kiểm tra chất lượng ELISA Enzyme-linked Phương pháp miễn dịch gắn Immunosorbent assay men HBV Hepatitis B virus Virus viêm gan B HBsAg Hepatitis B surface antigen Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B HBcAg Hepatitis B core antigen Kháng nguyên lõi virus viêm gan B HBeAg Hepatitis B envelope antigen Kháng nguyên vỏ virus viêm gan B Huyết tương tươi đông lạnh HTTĐL HTLV Human T-cell lymphotropic virus Virus gây ung thư bạch cầu dòng lympho T v Từ viết tắt Tiếng Anh IVDs In vitro Tiếng Việt diagnostic medical devices ISO IUPAC Trang thiết bị chẩn đoán y khoa International Organization for Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc Standardization tế International Union of Pure and Liên minh quốc tế hóa Applied Chemistry học túy hóa học ứng dụng KN Antigen Kháng nguyên KT Antibody Kháng thể NAT Nucleic acid testing Xét nghiệm acid nucleic NRL National reference laboratory Phịng thí nghiệm tham chiếu quốc gia PT Thử nghiệm thành thạo Proficiency testing Phịng xét nghiệm PXN Quality Control for Molecular Kiểm sốt chất lượng chẩn Diagnostics đoán phân tử RLUs Relative light units Đơn vị ánh sáng tương đối RNA Ribonucleic acid Acid ribonucleic S/CO Signal to cut-off ratios Tỷ lệ tín hiệu/ giá trị ngưỡng SD Standard deviation Độ lệch chuẩn QCMD Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới L-22 P(T