Tách dòng và biểu hiện lignin peroxidase isozyme h8 của phanerochaete chrysosporium trong nấm men pichia pastoris

VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ****************** VŨ VĂN LỢI TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN LIGNIN PEROXIDASE ISOZYME H8 CỦA PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM TRONG NẤM MEN PICHIA PASTORIS LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội - 2012 1Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT **************** VŨ VĂN LỢI TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN LIGNIN PEROXIDASE ISOZYME H8 CỦA PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM TRONG NẤM MEN PICHIA PASTORIS Chuyên ngành: Vi sinh vật Mã số: 62 42 40 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS PHÍ QUYẾT TIẾN Hà Nội – 2012 2Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Trước hết xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới TS Phí Quyết Tiến TS Phạm Thị Bích Hợp, Phịng Cơng nghệ lên men, Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu Tơi xin cảm ơn thầy, cô thuộc Viện Công nghệ Sinh học – Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật giúp đỡ bảo tơi q trình học tập nghiên cứu khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn TS Phan Thị Hồng Thảo cán Phịng Cơng nghệ lên men, Viện Cơng nghệ sinh học động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài Tôi xin cảm ơn Lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học - Viện Khoa Học Cơng nghệ Việt Nam, Phịng Thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ gen Quốc gia, nơi làm việc, tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện luận văn Tơi xin cảm ơn hỗ trợ kinh phí Đề tài: CNHD.ĐT.004/08-1 ĐT.07.08/CNSHCB thuộc Đề án phát triển ứng dụng công nghệ sinh học lĩnh vực công nghiệp chế biến đến năm 2020 Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng biết ơn đến gia đình bè bạn, người ln động viên tạo điều kiện cho suốt thời học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2012 Vũ Văn Lợi i 3Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết thí nghiệm trình bày luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Một số số liệu đăng tạp chí khoa học chuyên ngành trong: “Danh mục cơng trình khoa học cơng bố có liên quan đến luận án”, đồng ý cho phép sử dụng số liệu đồng tác giả phần lại kết luận án Hà nội, ngày tháng năm 2012 Học viên Vũ Văn Lợi ii 4Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Tên đầy đủ 10 11 12 13 14 15 16 17 bp cDNA DEPC his DNA dNTP EDTA EtBr kb kDa LiP LiP H8 rLiP H8 mRNA OD ORF PCR 18 19 20 21 pI RNA rRNA RT-PCR 22 23 SDS SDS-PAGE 24 25 26 TAE TEMED tRNA Cặp bazơ (base pair) DNA bổ trợ (Complementary DNA) Diethyl pyrocarbonate Histidine dehydrogenase Deoxyribonucleic acid Deoxynucleotide Ethylene diamine tetra-acetic acid Ethidium bromide Kilo bazơ Kilo Dalton Lignin peroxidase Lignin peroxidase isozyme H8 Lignin peroxidase isozyme H8 tái tổ hợp ARN thông tin (messenger RNA) Mật độ quang (Optical Density) Khung đọc mở (Open Reading Frame) Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase chain reaction) Điểm đẳng điện (isoelectric point) Ribonucleic acid ARN ribosom Phản ứng phiên mã ngược chuỗi polymerase (Reverse transcription polymerase chain reaction) Sodium dodecyl sulfate Điện di gel polyacrylamide có chứa sodium doecyl sulfate Tris-acetat EDTA N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine ARN vận chuyển iii 5Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng 2.1 Thành phần gel chạy SDS-PAGE 29 3.1 So sánh độ tương đồng trình tự amino acid LiP 38 Trang H8 từ P chrysosporium 3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới hoạt tính rLiP H8 44 chủng P pastoris C132 3.3 Ảnh hưởng nồng độ methanol cảm ứng đến khả 47 phát triển sinh tổng hợp rLiP H8 chủng P pastoris C132 3.4 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men môi trường đến 48 khả sinh tổng hợp rLiP H8 chủng P pastoris C132 3.5 Ảnh hưởng nồng độ peptone môi trường đến khả 49 sinh tổng hợp rLiP H8 chủng P pastoris C132 3.6 Ảnh hưởng thành phần YNB ammonium sulfate đến 50 hoạt tính rLiP H8 iv 6Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Các tiểu phần cấu tạo nên phân tử lignin 1.2 Cấu trúc hoá học tiêu biểu lignin 1.3 Sự phân cắt liên kết Cα-Cβ β-O-4 tiểu phần polymer lignin, tạo thành oligomer 1.4 Cơ chế phân cắt mối liên kết C-C tạo thành gốc aryl 1.5 Cơ chế xúc tác laccase 1.6 Nguyên lý q trình tích hợp gen ngoại lai vào locus 14 his4 3.1 Điện di đồ sản phẩm RNA tổng số sản phẩm cDNA 33 nấm đảm P chrysosporium 36210 3.2 Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại gen lipH8 plasmid 35 pCR2.1::lipH8 gel agarose 1,0% 3.3 So sánh trình tự amino acid suy diễn gen lipH8 từ 36 chủng P chrysosporium 36210 với trình tự amino acid protein tương ứng từ chủng P chrysosporium khác đăng ký GenBank 3.4 Cây phân loại thể tương đồng trình tự amino acid 38 suy diễn LiP H8 từ chủng P chrysosporium 36210 trình tự LiP H8 tương ứng chủng P chrysosporium khác 3.5 Điện di đồ sản phẩm cắt plasmid pPIC9::lipH8 hai 39 enzyme giới hạn 3.6 Điện di đồ kiểm tra có mặt gen lipH8 với khn 40 v 7Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DNA gen P pastoris tái tổ hợp 3.7 Điện di đồ protein dịch nuôi cấy năm dòng P pastoris 42 tái tổ hợp SDS-PAGE gel 3.8 Hoạt tính rLiP H8 dịng P pastoris tái tổ hợp sau 43 84 nuôi cấy 3.9 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả biểu rLiP H8 45 chủng P pastoris C132 3.10 Động thái trình lên men sinh tổng hợp rLiP H8 51 chủng P pastoris C132 bình lên men tự động Bioflo 110 dung tích 7,5 lít 3.11 Hoạt tính rLiP H8 từ chủng P pastoris C132 trước sau 52 trình tối ưu 3.12 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ xúc tác rLiP H8 53 sinh tổng hợp P pastoris C132 3.13 Ảnh hưởng pH đến hoạt độ xúc tác rLiP H8 sinh 54 tổng hợp P pastoris C132 3.14 Độ bền rLiP H8 chủng P pastoris C132 ủ 55 nhiệt độ khác theo thời gian 3.15 Độ bền rLiP H8 pH khác theo thời gian 55 vi 8Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Lời cam đoan ii an m c c c i c i iii an m c c c ản an m c c c n vi đ v M cl c vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU c ức năn 1.2 H enzyme p ân ủy li nin 1.2.1 Lignin peroxidase 1.2.2 Mangan peroxidase 1.2.3 Laccase 1.3 Vi sin 1.1 Lignin-cấ rúc ậ p ân ủy li nin 1.3.1 Khả phân giải lignin nấm mục trắng (white-rot fungi) 1.3.2 Khả phân giải lignin vi khuẩn 1.4 Ứn d n li nin peroxidase 1.5 T n n n iên iể 10 i n lignin peroxidase rên iới 11 ại Vi Nam 1.6 Vec or iể i n pPIC9 iể i n nấm men 12 1.6.1 Vector biểu pPIC9 12 1.6.2 Chuyển gen ngoại lai vào hệ gen nấm men 13 1.6.3 Chủng biểu nấm men P pastoris GS115 14 1.7 Mộ số y 16 ố ản ưởn ới q rn iể i n enzyme i ổ ợp ron P pastoris 1.7.1 Ảnh hưởng methanol 16 vii 9Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.7.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 17 1.7.3 Ảnh hưởng điều kiện lên men 18 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vậ li 20 2.1.1 Các chủng sinh vật plasmid 20 2.1.2 Hóa chất, enzyme, thiết bị nghiên cứu 20 2.1.3 Các dung dịch sử dụng môi trường nuôi cấy 21 2.2 P ươn p p n iên 22 2.2.1 Xác định hoạt tính enzyme lignin peroxidase 22 2.2.2 Điện di DNA/RNA gel agarose 22 2.2.3 Tách chiết RNA tổng số từ P chrysosporium 36210 23 2.2.4 Tổng hợp cDNA 24 2.2.5 Khuếch đại gen mã hóa LiP H8 từ cDNA 24 2.2.6 Tách dịng phân tích trình tự gen lipH8 25 2.2.7 Đăng ký trình tự lipH8 GenBank 25 2.2.8 Xử lý DNA enzyme giới hạn 25 2.2.9 Phản ứng ghép nối gen 26 2.2.10 Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E coli P pastoris 26 2.2.11 Phương pháp tách chiết DNA hệ gen từ tế bào nấm men P 28 pastoris 2.2.12 Tạo chủng P pastoris tái tổ hợp 28 2.2.13 Sàng lọc dòng P pastoris biểu LiP H8 tái tổ hợp hoạt 29 tính cao 2.2.14 Xác định hàm lượng protein 29 2.2.15 Phương pháp điện di protein gel polyacrylamide - SDS 30 2.2.16 Nghiên cứu môi trường điều kiện lên men biểu rLiP 30 H8 chủng P pastoris C132 2.2.17 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới hoạt tính độ bền 31 viii 10Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 20.Highley T., Dashek W (1998) Biotechnology in the study of Brown and White-rot decay 21.Hong Y., Xiao Y., Zhou H., Fang W., Zhang M., Zhu J., Wang J., Wu L., Yu Z (2006) Expression of a laccase cDNA from Trametes sp AH28–2 in Pichia pastoris and mutagenesis of transformants by nitrogen ion implantation FEMS Microbiol Lett, 258:96-101 22.Invitrogen, (2005) Pichia Expression Kit, Instruction Manual Catalog no K1710-01 23.Johansson T., Nyman P (1993) Isozymes of lignin peroxidase and manganese (II) peroxidase from the white-rot basidiomycete Trametes versicolor II Isolation of enzyme forms and characterization of physical and catalytic properties Arch Biochem Biophys, 300(1):49-56 24.Joseph M., Fernandez H., James P Hoeffler K (1999), Gene expression System, Acedamic Press, Inc., USA 25.Kirk T K., Croan S., Tien M (1996) Production of multiple ligninases by Phanerochaete chrysosporium: Effect of selected growth conditions and use of a mutant strain Enzyme Microb Technol, 8:27-32 26.Laemmli U (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 Nat, 227:680–685 27.Laubarre C., Van T., Blondeau K (2007) Pichia pastoris is a valuable host for the expression of genes encoding membrane proteins from the hyperthermophilic archeon pyrococcus abyssi Extremophiles, 11:403-413 28.Leisola, M., Kozulic B., Meussdoerffer F., Fiechter A (1987) Homology among multiple extracellular peroxidases from Phanerochaete chrysosporium J Biol Chem, 262:419-424 29.Martinez A (2002) Molecular biology and structure-function of lignindegrading heme peroxidases Enz Microb Technol, 30:425-444 60 71Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 30.Nguyễn Thị Thanh Kiều, Phạm Thành Hổ (2002) Nghiên cứu phân hủy lignin cellulose ba chủng Phanerochaete chrysosporium nhập nội Tạp chí Phát triểu Khoa học Cơng nghệ, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, tập 31.Niladevi K., Prema P (2005) Mangrove actinomycetes as the source of ligninolytic enzymes Actinomycetologica, 19:40-47 32.Ollikka P., Alhonmäki K., Leppänen V., Glumoff T., Raijola T., Suominen I (1993) Decolorization of azo, triphenyl methane, heterocyclic, and polymeric dyes by lignin peroxidase isoenzymes from Phanerochaete chrysosporium Appl Environ Microbiol, 59:4010-4016 33.Sambrook J., Russell D (2001) Molecular cloning: A laboratory manual, 3rd edition Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 34.Schalch H., Gaskell J., Smith T., Cullen D (1989) Molecular cloning and sequences of lignin peroxidase genes of Phanerochaete chysosporium, Molecular Cellular Biology, 9(6): 2743-2747 35.Schoemaker H., Piontek K (1996) On the interaction of lignin peroxidase with lignin Pure Appl Chem, 68(11):2089-2096 36 Tien M., Kirk T (1983) Lignin-degradation enzyme from the hymenomycete Phanerochaete chrysosporium Burxs Science, 221:661-663 37.Wang H., Lu F., Sun Y., Du L (2004) Heterologous expression of lignin peroxidase of Phanerochaete chrysosporium in Pichia methanolica Biotechnol Lett, 26:1569–1573 38.Williams S., Goodfellow M., Alderson G., Wellington E., Sneath P., Sackin M (1983) Numerical classification of Streptomyces and related genera J Gen Microbiol, 129:1743-1813 61 72Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ Phạm Thị Bích Hợp, Vũ Văn Lợi, Lương Thị Hồng, Phạm Đức Thắng, Phan Thị Hồng Thảo, Phí Quyết Tiến (2010) Nghiên cứu ứng dụng enzym phân huỷ lignin xử lý nước thải sản xuất bột giấy Tạp chí Hố học, ISSN 0866-7144 T.48 (4A): 709-714 Phí Quyết Tiến, Vũ Văn Lợi, Phan Thị Hồng Thảo, Phạm Thị Bích Hợp (2011) Tách dịng biểu lignin peroxidase H8 Phanerochaete chrysosporium Pichia pastoris Tạp chí Công nghệ Sinh học, ISSN 1811-4989 T 9(2): 223-231 Phạm Thị Bích Hợp, Cao Văn Sơn, Vũ Văn Lợi, Phan Thị Hồng Thảo, Lương Thị Hồng, Phí Quyết Tiến (2011) Khả ứng dụng hệ enzym phân huỷ lignin cơng nghiệp giấy nhằm giảm sử dụng hố chất Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, ISSN 1811-4989 T 9(4): 503-510 Vũ Văn Lợi, Phan Thị Hồng Thảo, Đỗ Tất Thịnh, Phạm Thanh Huyền, Hồ Tuyên, Phạm Thị Bích Hợp (2012) Tối ưu hố thành phần mơi trường lên men sản xuất enzyme lignin peroxidase từ Streptomyces HX10.7 Tạp chí Cơng nghệ Sinh học ISSN 1811-4989 T 10 (1):105-113 Vũ Văn Lợi, Phan Thị Hồng Thảo, Phạm Thị Bích Hợp, Phí Quyết Tiến (2012) Nghiên cứu tối ưu điều kiện sinh tổng hợp lignin peroxidase xạ khuẩn Streptomyces chromofuscus HX10.7 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, T 50 (3B):232-240 Vũ Văn Lợi, Phan Thị Hồng Thảo, Hồ Tuyên, Phạm Thị Bích Hợp, Phí Quyết Tiến (2012) Nâng cao khả biểu isozyme tái tổ hợp lignin peroxidase H8 Pichia pastoris Tạp chí Khoa học Cơng nghệ (đã gửi bài) 62 73Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn PHỤ LỤC Phụ luc Bản đồ vị trí giới hạn gen lipH8 từ nấm đảm P chrysosporium (Acc No M27884) AarI AatII Acc65I AccI AciI AluI 19 Alw44I AlwNI ApaI ApoI AvaI AvaII BanI BanII BbsI BbvCI BbvI BccI BceAI BglI BlpI Bme1580I BmrI BpmI Bpu10I BsaHI BsaI BsaJI 1 1 5 1 11 BseMII BseYI BsiEI BsiHKAI BslI BsmAI BsmBI BsmFI Bsp1286I BspCNI BspHI BspMI BsrBI BsrI BssHII BssKI 3 6 1 12 BssSI BstF5I BstKTI BstUI BtgI BtgZI Cac8I 6 Csp6I CviAII CviJI 21 482 139, 718 535, 61, 454, 810, 14, 905 479 160, 1071 779 517, 915 448, 520, 217 190 12, 230, 98, 179, 432 449, 689 361 190 139, 340, 171, 747, 191, 491, 641 120, 331, 212, 211, 514 120, 191, 296 483 497, 180, 81 144, 912, 123, 147, 300, 60, 171, 113, 81, 1026 719 249, 3, 359, 710, 631, 1080 634 67, 497, 952, 24, 176, 605, 998, 359, 435, 649 583, 1068, 718 580, 1071 22, 293, 173, 247 185, 622, 1036, 581, 1071 631, 1039 248, 771, 433, 902 1080 396, 969, 707 272, 740, 275 766 710, 863 672, 729 1075 52, 505, 287, 479, 245, 722, 1102 587, 64, 965, 823 619 1010 444, 1068 648, 766, 703, 964, 1039, 1102 1078 1071 479, 730, 316, 1078 580 747, 341, 449, 433, 479, 707 520, 580, 766 472, 690, 789, 855 445, 1068, 648, 1069, 673, 1108 786, 942, 966, 1095 429, 606, 811, 924 408, 243, 925 495, 565, 808, 1000 24, 494, 863, 51, 508, 905, 63, 521, 910, 178, 581, 962, 289 587 1072 397, 970, 199 596, 351 82, 248 231, 118, 297 14, 368, 733, 74Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 730, 772 http://www.lrc-tnu.edu.vn DdeI DpnI DraIII DrdI EaeI EarI EciI Eco57MI EcoICRI EcoO109I EcoRII EcoRV FatI FauI Fnu4HI 2 1 1 2 11 FokI HaeII HaeIII HgaI HhaI HincII HinfI 10 HinP1I HphI Hpy188I Hpy188III Hpy8I Hpy99I 10 HpyCH4III HpyCH4IV HpyCH4V KpnI MaeIII MboII MlyI 1 MmeI MnlI MspA1I MspI MvaI MwoI 14 NciI NcoI NlaIII NlaIV PfoI PleI PpuMI PshAI PspOMI PspXI RsaI SacI SalI SapI Sau3AI Sau96I ScrFI 1 1 1 2 12 SfaNI SmaI SmlI StyI TaiI TaqI 1 15 191, 300, 822 346, 177, 16 1101 361 580 914, 144, 151, 249, 244, 12, 272, 147, 187 3, 562 81, 1092 535, 202, 760, 81, 1092 392, 378, 74, 701, 479, 108, 633, 106, 140, 480 718 391, 17, 202, 1053 94, 193, 1105 620, 674, 144, 52, 360, 673, 248 249, 289, 143 202, 1053 914 1080 1071 582 719 580 535, 15 300, 915, 144, 912, 115, 1068 583 248, 140, 74, 575, 869 433, 351 707, 1115 637 909 1071 397, 310 297 453, 22, 619, 596, 445, 648, 772, 912, 970 496, 52, 740, 786, 809, 61, 765 942, 951, 64, 997 176, 185 178, 508, 910, 83, 128, 188, 196, 430, 607 556, 207, 814, 83, 634, 226, 1053 128, 847 664, 677, 685, 705 188, 196, 430, 607 400, 793, 296, 1049 535, 138, 699, 386, 632, 624, 940 314, 899, 556, 306, 867 532, 1019, 401 218, 226, 966, 1095 1072 1058 342, 362, 501, 593 625, 345, 634, 561, 847 615, 630 551, 1081 643 302, 664, 467, 685, 680, 705, 695, 760, 992 814 793 253, 754, 891, 897, 978, 1099 998 731, 397, 55, 600, 730, 1069, 445, 113, 734, 1068, 1108 648, 176, 743, 1069, 772, 179, 776, 1108 912, 247, 812, 970 263 954 297 448, 718, 915, 1071, 226, 664, 685, 705, 760, 814 351 1071, 397, 970, 597, 1072 445, 1068, 785, 648, 1069, 1094 673, 1108 730, 772 747 632, 137, 584, 1019, 205, 635, 1081 305, 667, 314, 683, 344, 701, 536 758 1072 634 75Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn TaqII TauI TfiI TseI Tsp45I Tsp509I TspDTI TspGWI TspRI XhoI XmaI XmnI ZraI 3 1 3 338, 61, 207, 12, 391, 237, 406, 613, 181, 583 1068 162, 139, 900, 176, 677 22, 401 780, 460, 1084 471, 366, 631, 930 185, 272, 52, 64, 740, 765 619 881 883 531 462 1080 76Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục So sánh trình tự gen lipH8 từ chủng P chrysosporium 36210 (GU119913) với trình tự lipH8 tương ứng từ chủng P chrysosporium khác đăng ký GenBank M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GGCCCAAATGTGAGACGAGTCGGTGATGGTTGCCGGCACCGCACCAACTCGCTCACAGGC - M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TGCGTTTTGGCAGCGTCCTCATTGGCTGGCGCAG TGTCGTGCATGTCCGCCGCACCGC -TGCGACACTCTCATTCGCTGGCTCAGGGTATTGTGCCTGTTTGCTGAGGCAC M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 -TACGGCGAACAATATCAGGA-CGTCGACTACGCCT C-GTC-ATTCGACACTGCTTCTACGGCGAACAATATCAGGAACGTCGACCACGCCT GTCAC-GTCGATTCGACACTG-TTCTACGGCGAACAATACCAGGA-CGTCGACCACGCCT -AGTGCAGTCAATACACACTTGTCTCGTCAGGACGCGGTTTGACATTCCGTGGTGCGTCAA M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 AGGGTATAAAAGGGCGACAGGACC-ACCGCAGTCCCTCAG-ACATCCAGTCTCTTCAGTC AGGGTATAAAAGGGCGACAGGACC-ACCGCAGTCCCTCAG-ACATCCAGTCTCTTCAGTC AGGGTATAAAAGGGCGACAGGACC-ACCGCAGTCCCTCAG-ACATCCAGTCTCTTCAGTC -ACGGTATAAAAGGGATACGCGATTTGCAGCATATCCTCAGGACATTCGTCTTCTACAGCC M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CCACTCAGCACCAGCAACACAGCGGACATGGCCTTCAAGCAGCTCTTCGCAGCTATCTCT CCACTCAGCACCAGCAACACAGCGGACATGGCCTTCAAGCAGCTCTTCGCAGCTATCTCT CCACTCAGCACCAGCAACACAGCGGACATGGCCTTCAAGCAGCTCTTCGCAGCTATCTCT -C AAGTTCCA AGTCAAACGGTCATGGCCTTCAAGCAGCTCGTCGCAGCGATTTCC M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CTCGCTCTCTCGCTCTCGGCTGCGAACGGTACGCCCATCGCAGTTATCGTTGACCAGTGG CTCGCTCTCTCGCTCTCGGCTGCGAACGGTACGCCCATCGCAGTTATCGTTGACCAGTGG CTCGCTCTCTTGCTCTCGGCTGCGAACGGTATGCCCATCGCAGTTAGCGTTGACCAGTGG -CTCGCACTCTCGCTCACCACTGCCAATGGTACG CACCGCTTCTG-CATGCTGTGATAA M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 ACTGCATGCTGAAAGTCGTCTTGTGCAGCGGCTGCGGTTATCGAGAAGCGCGCCACCTGT ACTGCATGCTGAAAGTCGTCTTGTGCAGCGGCTGCGGTTATCGAGAAGCGCGCCACCTGT ACTGCATGCTGAACGTCGTCTTGTGCAGCGGCTGCGGTGATCGAGAAGCGCGCCACCTGT -GCCACCTGT CGCCCCCGACTAAGGCC-TCCGCTGCAGCGGCCGTGGTCAAGGAGAAGCGCGCCACCTGT ********* M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TCCAACGGCAAGACCGTCGGCGATGCGTGCTCGTGCGCTTGGTTCGACGTCCTGGATGAT TCCAACGGCAAGACCGTCGGCGATGCGTCGTCGTGCGCTTGGTTCGACGTCCTGGATGAT TCCAACGGCAAGACCGTCGGCGATGCGTCGTGCTGCGCTTGGTTCGACGTCCTGGATGAT TCCAACGGCAAGACCGTCGGCGATGCGTCGTGCTGCGCTTGGTTCGACGTCCTGGATGAT TCCAACGGCGCCACCGTTGGCGACGCGTCCTGCTGTGCTTGGTTCGATGTCCTCGACGAC ********* ***** ***** **** * ** *********** ***** ** ** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 ATCCAGCAGAACCTGTTCCACGGCGGCCAGTGCGGCGCTGAGGCGCACGAGTCGATTCGT ATCCAGCAGAACCTGTTCCACGGCGGCCAGTGCGGCGCTGAGGCGCACGAGTCGATTCGT ATCCAGCAGAACCTGTTCCACGGCGGCCAGTGCGGCGCTGAGGCGCACGAGTCGATTCGT ATCCAGCAGAACCTGTTCCACGGCGGCCAGTGCGGCGCTGAGGCGCACGAGTCGATTCGT ATCCAGCAGAACCTGTTCCAAGGAGGCCAGTGCGGCGCTGAGGCCCACGAGTCTATCCGT ******************** ** ******************** ******** ** *** M27884 CTGTGAGTGATCCCGTCGCGACCTCCTGCTATGCATGTTTGAACAT-CCCGCCCAGCGTC 77Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn X51590 M27401 GU119913 X54257 CTGTGAGTGATCCCGTCGCGACCTCCTGCTATGCATGTTTGAACGCGCCCGCCCAGCGTC CTGTGAGTGATCCCGTCGCGATCTCCTGCTATGCATGTTTGAACAC-CCCGCCCAGCGTC CT CGTC CTGTAAGTCAATACGCTC GTGTTGCGCTAAGGTCATAGATTTACTTTGCTGCAGCGTC ** **** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TTCCACGACTCCATCGCAATTTCGCCCGCCATGGAGGCACAGGGCAAGTTCGGGTAAGTT TTCCACGACTCCATCGCAATTTCGCCCGCCATGGAGGCACAGGGCAAGTTCGGGTAAGTT TTCCACGACTCCATCGCAATTTCGCCCGCCATGGAGGCACAGGGCAAGTTCGGGTAAGTT TTCCACGACTCCATCGCAATTTCGCCCGCCATGGAAGCACAGGGCAAGTTCGG TTCCACGATGCTATTGCCATCTCTCCTGCTATGGAGGCCCAGGGCAAGTTCGGGTACGTC ******** * ** ** ** ** ** ** ***** ** ************** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GCCACCCGCGTTGCGCCACCTAGTCGTT TGCTGATCCCTCCTTGCAGCGGCGGTGGTG GCCACC-GCGTTGCGCCACCTAGTCGTT TGCTGATCCCTCCTTGCAGCGGCGGTGGTG GCCACCCGCGTTGCGCCACCTAGTCGTT TGCTGATCCCTCCTTGCAGCGGCGGTGGTG -CGGTGGTGGTG TTTCTCGGCATGACAATACTATACCGCAGATACTGAGATATTGC-GCAGCGGTGGTGGTG *** ******* M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CTGACGGCTCCATCATGATCTTCGACGATATCGAGACTGCGTTCCACCCTAACATCGGTC CTGACGGCTCCATCATGATCTTCGACGATATCGAGACTGCGTTCCACCCTAACATCGGTC CTGACGGCTCCATCATGATCTTCGACGATATCGAGACTGCGTTCCACCCTAACATCGGTC CTGACGGCTCCATCATGATCTTCGA CTGACGGCTCCATCATGATCTTCGACGACATCGAGCCCAACTTCCACCCTAACATTGGCC ************************* M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TCGACGAGATCGTCAAGCTCCAGAAGCCATTCGTTCAGAAGCACGGTGTCACCCCTGGTG TCGACGAGATCGTCAAGCTCCAGAAGCCATTCGTTCAGAAGCACGGTTGCACCCCTGGTG TCGACGAGATCGTCAAGCTCCAGAAGCCATTCGTTCAGAAGCACGGTGTCACCCCTGGTG -GATCGTCAAGCTCCAGAAGCCATTCGTTCAGAAGCACGGTGTCACCCCTGGTG TCGACGAGATTATCAACCTCCAGAAGCCGTTCGTTCAGAAGCACGGTGTCACCCCTGGTG *** **** *********** ****************** *********** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 ACTTCATCGCCTTCGCTGGTGCTGTCGCGCTCAGCAACTGCCCTGGTGCCCCGCAGATGA ACTTCATCGCCTTCGCTGGTGCTGTCGCGCTCAGCAACTGCCCTGGTGCCCCGCAGATGA ACTTCATCGCCTTCGCTGGTGCTGTCGCGCTCAGCAACTGCCCTGGTGCCCCGCAGATGA ACTTCATCGCCTTCGCTGGTGCTGTCGCGCTCAGCAACTGCCCTGGTGCCCCGCAGATGA CATTCATCGCCTTCGCCGGTGCTGTCGCGCTCAGCAACTGCCCGGGTGCTCCCCAGATGA ************** ************************** ***** ** ******* M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 ACTTCTTCACTGGTCGTGCACCTGGTATGCCTGCAAAACT CGCTTTGCGGATGGTACG ACTTCTTCACTGGTCGCGCGCCTGGTATGCCTGCAAAACT CGCTTTGCGGATGATACG ACTTCTTCACTGGTCGTGCACCTGGTATACCTGCAAAACT CGCTTTGCGGATGGTACG ACTTCTTCACTGGTCGTGCACCTG -ACTTCTTCACTGGTCGTGCCCCTGGTACGTCTCCTCTACGAATGTATTCTGCACACATCA **************** ** **** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 AACTAACTGTCTGCTTTAGCTACCCAGCCCGCTCCTGATGGCCTTGTCCCCGAGCCCTTC GACTAATTGTCTGCTTCAGCTACCCAGGCCGCTCCTGATGGCCTTGTCCCCGAGCCCTTC AACTAACTGTCTGCTTTAGCTACCCAGCCCGCTCCTGATGGCCTTGTCCCCGAGCCCTTC -CTACCCAGCCCGCTCCTGATGGCCTTGTCCCCGAGCCCTTC TTCATATCGCCT TACAGCTACCCAGCCCGCACCCGATGGTCTCGTCCCCGAGCCTTTC ******** **** ** ***** ** *********** *** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CGTAAGTGGTCTTATCCAAGCAGTTAGGTGCGGTCTATACTGACTAGCATGCAGACACTG CGTAAGTGGTCTTATTCAAGCAGTTAGGTGCGGTCTATACTGACTAGCATGCAGACACTG CGTAAGTGGTCTTATCCAAGCAGTTAGGTGCGGTCTATACTGACTAGCATGCAGACACTG C -ACACTG CGTGAGTTTGAAGACCACTTTCATCGCATA-GTTCTTAGCTGACCTCAGCACAGACACCG * **** * M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TCGACCAAATCATCAACCGTGTCAACGACGCAGGCGAGTTCGATGAGCTCGAGCTTGTCT TCGACCAAATCATCAACCGTGTCAACGACGCAGGCGAGTTCGATGAGCTCGAGCTTGTCT TCGACCAAATCATCAACCGTGTCAACGACGCAGGCGAGTTCGATGAGCTCGAGCTTGTCT TCGACCAAATCATCAACCGTGTCAACGACGCAGGCGAGTTCGATGAGCTCGAGCTTGTCT TCGACCAGATCATCGCTCGTGTTAACGATGCCGGCGAGTTCGACGAGCTCGAGCTTGTCT ******* ****** ***** ***** ** *********** **************** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GGATGCTCTCCGCGTAAGTCACTCACTGTTGACTTCGACACTCCCTTCCTGAGACCTCGA GGATGCTCTCCGCGTAAGTCACTCACTGTTGACTTCGACACTCCCTTCCTGAGACCTCGA GGATGCTCTCCGCGTAAGTCACTCACTGTTGACTTCGACACTCCCTTCCTGAGACCTCGA GGATGCTCTCCGC GGATGCTTTCCGCGTAAGTGACTGCCGCCT CGAAGGTTCATCCCGACTTACGCCCCGA ******* ***** M27884 CAGGCACTCCGTCGCAGCGGTGAACGACGTCGACCCGACCGTCCAGGGTCTGCCCTTT 78Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn X51590 M27401 GU119913 X54257 CAGGCACTCCGTCGCAGCGGTGAACGACGTCGACCCGACCGTCCAGGGTCTGCCCTTT CAGGCACTCCGTCGCAGCGGTGAACGACGTCGACCCGACCGTCCAGGGTCTGCCCTTT -GCACTCCGTCGCAGCGGTGAACGACGTCGACCCGACCGTCCAGGGCCTGCCCTTC TTCAGCCACTCCGTTGCTGCAGTCAACGACGTGGACCCGACCGTCCAGGGCCTGCCCTTC ******** ** ** ** ******** ***************** ******** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GACTCGACCCCCGGAATCTTCGACTCCCAGTTCTTCGTCGAGACTCAGCTTCGTGGTACC GACTCGACCCCCGGAATCTTCGACTCCCAGTTCTTCGTCGAGACTCAGCTTCGTGGTACC GACTCGACCCCCGGAATCTTCGACTCCCAGTTCTTCGTCGAGACTCAGCTTCGTGGTACC GACTCCACCCCCGGAATCTTCGACTCGCAGTTCTTCGTCGAGACTCAGCTTCGCGGTACC GACTCCACCCCCGGAATCTTCGACTCCCAGTTCTTCGTCGAGACTCAATTCCGTGGAATC ***** ******************** ******************** * ** ** * * M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GCCTTCCCCGGCTCTGGCGGCAACCAAGGCGAGGTCGAGTCGCCGCTCCCTGGCGAAATT GCCTTCCCCGGCTCTGGTGGCAACCAAGGCGAGGTCGAGTCGCCGCTCCCTGGCGAAATT GCCTTCCCCGGCTCTGGTGGCAACCAAGGCGAGGTCGAGTCGCCGCTCCCTGGCGAAATT GCCTTCCCCGGCTCTGGTGGCAACCAAGGCGAGGTCGAGTCGCCGCTCCCTGGCGAAATT CTCTTCCCCGGCTCCGGTGGCAACCAGGGTGAGGTCGAGTCCGGTATGGCCGGCGAGATC ************ ** ******** ** *********** * * ***** ** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CGCATCCAGTCCGACCACACTATCGCCCGCGACTCACGCACGGCGTGTGAATGGCAGTCC CGCATCCAGTCCGACCACACTATCGCCCGCGACTCACGCACGGCGTGTGAATGGCAGTCC CGCATCCAGTCCGACCACACTATCGCCCGCGACTCGCGCACGGCGTGTGAATGGCAGTCC CGCATCCAGTCCGACCACACTATCGCCCGCGACTCACGCACGGCGTGTGAATGGCGGTCC CGCATCCAGACCGACCACACTCTCGCCCGCGACTCCCGCACCGCTTGCGAGTGGCAGTCG ********* *********** ************* ***** ** ** ** **** *** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TTCGTCAACAACCAGTCCAAGCTCGTCGATGACTTCCAATTCATTTTCCTCGCCCTCACC TTCGTCAACAACCAGTCCAAGCTCGTCGATGACTTCCAGTTCATCTTCCTCGCCCTCACC TTCGTCAACAACCAGTCCAAGCTCGTCGATGACTTCCAGTTCATCTTCCTCGCCCTCACC TTCGTCAACAACCAGTCCAAGCTCGTCGATGACTTCCAATTCATTTTCCTCGCCCTCACC TTCGTCAACAACCAGTCCAAGCTCGTCTCCGACTTCCAGTTCATCTTCCTCGCCCTCACC *************************** ******** ***** *************** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CAGCTCGGCCAGGACCCGAACGCGATGACCGACTGCTCGGATGTTATCCCGCAGTCCAAG CAGCTCGGCCAGGACCCGAACGCGATGACCGACTGCTCGGATGTTATCCCGCAGTCCAAG CAGCTCGGCCAGGACCCGAACGCGATGACCGACTGCTCGGATGTTATCCCGCAGTCCAAG CAGCTCGGCCAGGACCCGAACGCGATGACCGACTGCTCGGACGTTATCCCGCAGTCCAAG CAGCTCGGCCAGGACCCGAACGCGATGACCGACTGCTCGGATGTCATCCCGATCTCGAAG ***************************************** ** ****** ** *** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CCCATCCCTGGCAACCTCCCATTCTCGTTCTTCCCCGCTGGCAAGACCATCAAAGACGTT CCCATCCCTGGCAACCTCCCATTCTCGTTCTTCCCCGCTGGCAAGACCATCAAAGACGTT CCCATCCCTGGCAACCTCCCATTCTCGTTCTTCCCCGCTGGCAAGACCATCAAGGACGTT CCCACCCCTGGCAACCTCCCATTCTCGTTCTTCCCCGCTGGCAAGACCATCAAAGACGTT CCCATCCCCGGCAACCTTCCGTTCTCGTTCTTCCCCCCTGGCAAGAGCATGAAGGATGTC **** *** ******** ** *************** ********* *** ** ** ** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 GAGCAGGCGGTGCGTATTCCACCCCA-CTGTGCAGTAGAGTGGCTGCTGATCGTGGCATG GAGCAGGCGGTGCGTATTTCACCCCA-CCATGCAGTAGAGTGGCTGCTGAACATCGCATG GAGCAGGCGGTGCGTATTTCACCCCA-CCATGCAGTAGAGTGGCTGCTGAACATCGCATG GAGCAGGCG GAGCAGGCTGTACGTATCCGATCCAGTCCTTGTCGCAGAGCTTATGCTGACGGCTTCT-******** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 ACAGTGTGCGGAGACCCCCTTCCCGACTCTCACCACTCTCCCGGGCCCCGAGACGTCCGT ACAGTGTGCGGAGACCCCCTTCCCGACTCTCACCACTCTCCCGGGCCCCGAGACGTCCGT ACAGTGTGCGGAGACCCCCTTCCCGACTCTCACCACTCTCCCGGGCCCCGAGACGTCCGT TGTGCGGAGACCCCCTTCCCGACCCTCACCACTCCCCCGGGCCCCGAGACGTCCGT GCAGTGCGCCGAGACCCCCTTCCCCAGCCTCGTCACTCTCCCCGGCCCCGCGACCTCTGT ** ** ************** * *** ***** *** ******* *** ** ** M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CCAGCGCATGTGAGTACAATCCATGCGATCTTTCAGGAAATGTAATCTGTGCTGATATGC CCAGCGCATGTGAGTACAATCCATGAGATCTTTCA -ATCTGTGCTGACATGC CCAGCGCATGTGAGTACAATCCATGAGATCTTTCAGGAAATGCAATCTGGGCTGACATGC CCAGCGCATCCCTCCGCC-TCCGGGTGCT CGCTCGCATGTGAGTATC-TCCG-ACGGTCTATGAAG -CCCCCAGCTGACATAT * ***** *** * * M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TCCTTCTTCAGCCCTCCGCCTCCGGGTGCTTAGATGATTCCATACAGAATACGCCTCGAA TCCTTCTCCAGCCCTCCGCCTCCGGGTGCTTAAATGATTCCATACAGAATACGCCTCGAA TCCTTCTCCAGCCCTCCGCCTCCGGGTGCTTAAATGATGCCATACAGAATACTCCTCAAA -TCCTCTTCCAGCCCCCCGCCGCCGGGTGCTTAAGTCATTCTATCGGTCATCTTTGGCTGA M27884 CCGACTGTAAC-GGTGGCCGGCTAACTCGTGACGGAACTTCGGCTTTACTAGATTTCAAC 79Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn X51590 M27401 GU119913 X54257 CCGATTGTAAC-GGTGGCCGGCTAACTCGTGACGGAACTTCGGCTTTACTAGATTTCA-CCGACTGTAAC-GGTGGCCGGCTAACTCGTGACGGAACTTCGGCTTTACTAGATTTCA CACGGAGTATTTGGAATACGGCTCACTCGTAACGGTAACTTGCGCGCAAGTGTTTAGAAA M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 TTCGGCTTTACTAGATTTCATCCATTGTATCTCT GCATCTGACTACGAATCTTATT TCCATTGTATCTCT GCATTTGACTACGAATCTTATT TTCATCGTATCTCT GCACCTAACTACGAATCTCATT -TGTCTCCCTTTGTATCTACGCCGATTGGTCCGCTTTTGACGATAGATCGCTTACTGTGTT M27884 X51590 M27401 GU119913 X54257 CGTCTACTCTCTTA-CGATATCCGCCGTGG -GTTTACGA AATATCGGTACACC CGTCTACTCTCTCA-CGATATCCGCCGCGG -GTTTACGA AATATCGGTACACC CGTCTACTCTCTTA-CGATATCTGCCGTGG -GCTTATGA AATATCGGTGCACA -CATCTAAATTCTCGTCCGCGCGCGCCCTGGAGCGCAACCGGTTAGCATTGCCACACGAGA So sánh độ tương đồng trình tự nucleotide gen lipH8 từ P chrysosporium Trình tự M27884 nucleotide so sánh X51590 M27401 GU119913 M27884 100 X51590 98 100 M27401 98 97 100 GU119913 97 97 97 100 X54257 72 68 70 86 X54257 100 Chú thích: Số liệu so sánh độ tương đồng trình tự nucleotide nhận cách sử dụng chức % identical matrix phần mềm phân tích ClustalX (ver 1.83) 80Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục Trình tự nucleotide gen lipH8 có nguồn gốc từ chủng P chrysosporium 36210 đăng ký ngân hàng sở liệu GenBank Phanerochaete chrysosporium strain 36210 lignin peroxidase isozyme H8 (lipH8) gene, partial cds GenBank: GU119913.1 FASTA Graphics Go to: LOCUS GU119913 990 bp DNA linear PLN 18-NOV-2009 DEFINITION Phanerochaete chrysosporium strain 36210 lignin peroxidase isozyme H8 (lipH8) gene, partial cds ACCESSION GU119913 VERSION GU119913.1 GI:267850580 KEYWORDS SOURCE Phanerochaete chrysosporium (anamorph: Sporotrichum pruinosum) ORGANISM Phanerochaete chrysosporium Eukaryota; Fungi; Dikarya; Basidiomycota; Agaricomycotina; Agaricomycetes; Corticiales; Corticiaceae; Phanerochaete REFERENCE (bases to 990) AUTHORS Phi,Q.T., Vu,V.L., Barraud,C and Pham,T.B.H TITLE Heterologous expression of lipH8 gene coding for mature lignin peroxidase H8 with an 14-amino acid deletion from Phanerochaete chrysosporium 36210 JOURNAL Unpublished REFERENCE (bases to 990) AUTHORS Phi,Q.T., Vu,V.L., Barraud,C and Pham,T.B.H TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (19-OCT-2009) Fermentation Technology, Institute of Biotechnology, Vietnam Academy of Science and Technology, 18Hoang Quoc Viet Str., Cau Giay Dist., Hanoi +844, Vietnam FEATURES Location/Qualifiers source 990 /organism="Phanerochaete chrysosporium" /mol_type="genomic DNA" /strain="36210" /db_xref="taxon:5306" gene 990 /gene="lipH8" mRNA 990 /gene="lipH8" /product="lignin peroxidase isozyme H8" CDS 990 /gene="lipH8" /codon_start=1 /product="lignin peroxidase isozyme H8" /protein_id="ACY82388.1" /db_xref="GI:267850581" /translation="ATCSNGKTVGDASCCAWFDVLDDIQQNLFHGGQCGAEAHESIRL VFHDSIAISPAMEAQGKFGGGGADGSIMIFEIVKLQKPFVQKHGVTPGDFIAFAGAVA LSNCPGAPQMNFFTGRAPATQPAPDGLVPEPFHTVDQIINRVNDAGEFDELELVWMLS AHSVAAVNDVDPTVQGLPFDSTPGIFDSQFFVETQLRGTAFPGSGGNQGEVESPLPGE IRIQSDHTIARDSRTACEWRSFVNNQSKLVDDFQFIFLALTQLGQDPNAMTDCSDVIP QSKPTPGNLPFSFFPAGKTIKDVEQACAETPFPTLTTPPGPETSVQRIPPPPGA" ORIGIN 61 121 181 gccacctgtt ctggatgata tcgattcgtc aagttcggcg ccaacggcaa tccagcagaa tcgtcttcca gtggtggtgc gaccgtcggc cctgttccac cgactccatc tgacggctcc 81Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên gatgcgtcgt ggcggccagt gcaatttcgc atcatgatct gctgcgcttg gcggcgctga ccgccatgga tcgagatcgt gttcgacgtc ggcgcacgag agcacagggc caagctccag http://www.lrc-tnu.edu.vn 241 301 361 421 481 541 601 661 721 781 841 901 961 aagccattcg gtcgcgctca gctacccagc atcaaccgtg gcgcactccg tccacccccg ttccccggct atccagtccg gtcaacaacc ctcggccagg acccctggca caggcgtgtg gtccagcgca ttcagaagca gcaactgccc ccgctcctga tcaacgacgc tcgcagcggt gaatcttcga ctggtggcaa accacactat agtccaagct acccgaacgc acctcccatt cggagacccc tccctccgcc cggtgtcacc tggtgccccg tggccttgtc aggcgagttc gaacgacgtc ctcgcagttc ccaaggcgag cgcccgcgac cgtcgatgac gatgaccgac ctcgttcttc cttcccgacc tccgggtgct cctggtgact cagatgaact cccgagccct gatgagctcg gacccgaccg ttcgtcgaga gtcgagtcgc tcacgcacgg ttccaattca tgctcggacg cccgctggca ctcaccactc tcatcgcctt tcttcactgg tccacactgt agcttgtctg tccagggcct ctcagcttcg cgctccctgg cgtgtgaatg ttttcctcgc ttatcccgca agaccatcaa ccccgggccc cgctggtgct tcgtgcacct cgaccaaatc gatgctctcc gcccttcgac cggtaccgcc cgaaattcgc gcggtccttc cctcacccag gtccaagccc agacgttgag cgagacgtcc // 82Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục Trình tự gen lipH8 gốc 83Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục Bản đồ cấu trúc nhận biết vị trí vector pCR2.1 Thành phần vị trí vector tách dịng pCR2.1 Vị trí (bp) Chức Lac Zα - 545 Trình tự gen mã hóa -galactosidase phân giải chất X-gal tạo thành sản phẩm có màu xanh M13 reverse primer 205-221 M13 forward primer 389-404 Trình tự cặp mồi để kiểm tra có mặt đoạn gen ngoại lai có vector phản ứng PCR colony T7 promoter 362-381 T7 RNA polymerase promoter điều khiển trình phiên mã gen ngoại lai f1 ori 546-983 Trình tự đoạn tái cho phép tạo thành DNA sợi đơn có nguồn gốc từ phage f1 KanR 1317-2111 Trình từ gen mã hóa acetylase phân giải kanamycin, sử dụng làm yếu tố chọn tế bào E.coli tái tổ hợp AmpR 2129-2989 Trình tự gen mã hóa  lactamase phân giải ampicillin sử dụng làm yếu tố chọn lọc tế bào E.coli tái tổ hợp pUC ori 3134-3807 Trình tự đoạn tái Thành phần 84Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục Bản đồ cấu trúc nhận biết vị trí vector pPIC9 Thành phần Vị trí (bp) Trình tự đầu 5’ promoter AOX1 - 948 Trình tự primer 5’ AOX1 855 - 875 Trình tự primer nhân tố α 1152 - 1172 Vùng đa nối 1192 - 1241 Trình tự primer 3’ AOX1 1327 - 1347 pUC ori 3134-3807 Trình tự kết thúc phiên mã (TT) 3’ AOX1 1253-1586 Khung đọc mở gen HIS4 4514 - 1980 Một đoạn đầu 3’ gen AOX1 4870 - 5626 Vùng khởi đầu chép pBR322 6708 - 6034 Gen kháng ampicillin 7713 - 6853 85Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT **************** VŨ VĂN LỢI TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN LIGNIN PEROXIDASE ISOZYME H8 CỦA PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM TRONG NẤM MEN PICHIA. .. ngoại lai vào locus his4 1.6.3 Chủng biểu nấm men P pastoris GS115 Trong số hệ biểu gen thường sử dụng E coli, Bacillus sp., nấm men tế bào động vật nấm men xem hệ biểu hiệu đặc biệt biểu protein... biểu lignin peroxidase giới Việt Nam Isozyme lignin peroxidase mã hóa tổ hợp gen biểu sản phẩm trao đổi chất bậc hai q trình ni cấy Ngồi ra, vài hệ biểu đồng hình (homologous expression) hệ biểu