Nghiên cứu xác định hợp chất phenol từ nhựa và vỏ quả mù u để ứng dụng trong kiểm nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HÀ MINH HIỂN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HỢP CHẤT PHENOL TỪ NHỰA VÀ VỎ QUẢ MÙ U ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP Hồ Chí Minh- Năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HÀ MINH HIỂN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HỢP CHẤT PHENOL TỪ NHỰA VÀ VỎ QUẢ MÙ U ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc Mã số: 62.73.15.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ TS Nguyễn Văn Thị TP Hồ Chí Minh- Năm 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình khác Hà Minh Hiển Hà Minh Hiển MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Lời cam đoan ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt iv Danh mục bảng vii Danh mục hình, biểu đồ, sơ đồ, đồ thị ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược Mù u 1.2 Sơ lược hợp chất phenol 13 1.3 Tình hình nghiên cứu hợp chất phenol từ Mù u 16 1.4 Một số phương pháp phân tích hợp chất phenol từ Mù u 19 1.5 Một số khái niệm chất chuẩn đối chiếu 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng 26 2.2 Nguyên vật liệu 26 2.3 Dung mơi, hóa chất thiết bị thí nghiệm 27 2.4 Phương pháp nghiên cứu 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 41 3.1 Nghiên cứu xác định hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u 41 3.2 Thử tác dụng kháng khuẩn cao chiết từ nhựa vỏ Mù u 44 3.3 Phân lập hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u 45 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất phenol phân lập 48 3.5 Nghiên cứu thiết lập chất chuẩn đối chiếu 61 3.6 Xây dựng thẩm định phương pháp GC-MS xác định calophyllolid cao methanol chiết từ nhựa Mù u (Phương pháp 1) 76 3.7 Xây dựng thẩm định phương pháp GC-MS xác định calophyllolid vỏ Mù u (Phương pháp 2) 83 3.8 Xây dựng thẩm định phương pháp HPLC-DAD định lượng calophyllolid chế phẩm dầu Mù u Inopilo 89 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 96 4.1 Chiết xuất hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u 96 4.2 Thử tác dụng kháng khuẩn cao chiết từ nhựa vỏ Mù u 97 4.3 Phân lập hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u 97 4.4 Xác định cấu trúc hợp chất phenol phân lập phương pháp phổ nghiệm 98 4.5 Xác định thành phần hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u 102 4.6 Thiết lập chất chuẩn đối chiếu 106 4.7 Các phương pháp ghép nối sắc ký-phổ nghiệm xác định hợp chất phenol nhựa, vỏ 108 Mù u thuốc từ Mù u KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 110 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AMDIS Automated Mass spectral Deconvolution and Identification System br Đỉnh giãn rộng (broad) CDCl3 Cloroform deuteri hóa CD3OD Methanol deuteri hóa 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 COSY COrrelation SpectroscopY d Đỉnh đôi (doublet) dd Đỉnh đôi kép (doublet of doublets) DAD Detector dãy diod quang (Diode Array Detector) DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO-d6 Dimethyl sulfoxid deuteri hóa EI-MS Phổ khối lượng-ion hóa bắn phá electron (Electron Impact Mass C-NMR Spectrometry) EMEA European Medicines Agency ESI-MS Phổ khối lượng-ion hóa phun mù electron (Electrospray Ionization-Mass Spectrometry) EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol EU Liên minh châu Âu (European Union) FDA Cơ quan Thực Dược phẩm Hoa kỳ (Food and Drug Administration) FHH Forum for the Harmonization of Herbal Medicine FTIR Hồng ngoại chuyển đổi Fourier (Fourier Transform Infrared) GC-MS Sắc ký khí ghép khối phổ (Gas Chromatography- Mass Spectrometry) HIV Human Immunodeficiency Virus HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H-NMR HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence HRESI-TOFMS Phổ khối lượng thời gian bay-ion hóa phun mù electron phân giải cao (High Resolution Electrospray Ionization-Time Of Flight Mass Spectrometry) ICH Hội nghị quốc tế hòa hợp (International Conference on Harmonization) ICP-MS Khối phổ plasma cảm ứng (Inductively Coupled Plasma- Mass Spectrometry) IR Hồng ngoại (Infrared) LC-MS Sắc ký lỏng ghép khối phổ (Liquid Chromatography- Mass Spectrometry) m Đỉnh đa (multiplet) MDL Giới hạn phát nhỏ (Minimum Detection Limit) MeCN Acetonitril MeOH Methanol MIC Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum Inhibitory Concentration) MRSA Staphylococcus aureus đề kháng methicilin (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) MS Phổ khối lượng (Mass spectrometry) NIST Viện Công nghệ Tiêu chuẩn Quốc gia Hoa kỳ (National Institute of Standards and Technology) NMR Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) Pđ Phân đoạn PLE Chiết lỏng áp suất (Pressurized Liquid Extraction) q Đỉnh bốn (quartet) Rf Hệ số di chuyển (Relative to front) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) s Đỉnh đơn (singlet) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SIM Ion lựa chọn kiểm tra (Selected Ion Monitoring) t Đỉnh ba (triplet) TGA Phân tích nhiệt trọng lượng (Thermogravimetric Analysis) TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TMS Tetramethyl silan TT Thuốc thử tt/tt Thể tích/thể tích USP Dược điển Mỹ (United States Pharmacopoeia) UV-Vis Tử ngoại khả kiến (Ultraviolet-Visible) VLC Sắc ký lỏng chân không (Vacuum Liquid Chromatography) WHO Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) max Bước sóng hấp thu cực đại max Số sóng hấp thu cực đại DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng số Tên bảng Trang 1.1 Phân loại hợp chất phenol theo Harborne 13 2.1 Tiêu chuẩn chất lượng chất chuẩn đối chiếu theo WHO 37 2.2 Các yếu tố mức để chọn điều kiện xử lý mẫu 39 2.3 Thiết kế thí nghiệm chọn điều kiện xử lý mẫu 39 3.1 Kết chiết xuất hợp chất phenol từ vỏ Mù u PLE soxhlet 43 3.2 Kết thử tác dụng kháng khuẩn cao chiết từ nhựa vỏ Mù u 44 3.3 Bảng liệu phổ NMR hợp chất N1 (CD3OD DMSO-d6, máy 500 49 MHz) 3.4 Bảng liệu phổ NMR hợp chất N2 (CD3OD, máy 500 MHz) 51 3.5 Bảng liệu phổ NMR hợp chất N3 (CDCl3, máy 500 MHz) 54 3.6 Dữ liệu độ dài liên kết tiêu biểu hợp chất N3 56 3.7 Dữ liệu độ dài góc liên kết hydrogen hợp chất N3 57 3.8 Bảng so sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR calophyllolid điều chế 64 với tài liệu tham khảo 3.9 Kết khảo sát % diện tích tạp chất hữu số bước sóng 66 3.10 Tính phù hợp hệ thống HPLC -DAD (n=6) 67 3.11 Kết khảo sát khoảng tuyến tính tạp chất (1); calophyllolid (2); tạp 69 chất (3) 3.12 Kết khảo sát độ lặp lại độ xác trung gian phương pháp 70 3.13 Độ tinh khiết calophyllolid q trình đóng l ọ 71 ... nghiên c? ?u xác định hợp chất phenol từ nhựa loại bỏ tinh chế d? ?u Mù u vỏ Mù u Vì vậy, đề tài: ? ?Nghiên c? ?u xác định hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u để ứng dụng kiểm nghiệm? ?? thực với mục ti? ?u nghiên. .. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C? ?U 2.4.1 Nghiên c? ?u xác định hợp chất phenol 2.4.1.1 Nghiên c? ?u chiết xuất hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u Xử lý nhựa Mù u để chiết xuất Đồng hóa nhựa thùng cách gộp nhựa vào thùng... nghiên c? ?u cụ thể sau: - Nghiên c? ?u xác định hợp chất phenol từ nhựa vỏ Mù u mọc Việt Nam số kỹ thuật sắc ký phổ nghiệm để chọn chất điểm dùng kiểm nghiệm nguyên li? ?u chế phẩm từ dược li? ?u Mù u - Nghiên