Nghiên cứu chế tạo globulin miễn dịch từ trứng gà igy kháng trực khuẩn mủ xanh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y TIM SUNNARY NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO GLOBULIN MIỄN DỊCH TỪ TRỨNG GÀ (IgY) KHÁNG TRỰC KHUẨN MỦ XANH LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y TIM SUNNARY NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO GLOBULIN MIỄN DỊCH TỪ TRỨNG GÀ (IgY) KHÁNG TRỰC KHUẨN MỦ XANH Chuyên ngành: Dị ứng Miễn dịch Mã số: 62.72.01.09 LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC Cán hướng dẫn: PGS.TS LÊ VĂN ĐÔNG TS LÊ THU HỒNG HÀ NỘI NĂM 2013 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thầy cô Bộ môn Miễn dịch, Trung tâm nghiên cứu ứng dụng sinh y dược học, Bộ môn – Khoa Vi sinh y học, Bộ môn – Khoa Giải phẫu bệnh, Học viện Quân y Các số liệu luận án trung thực chưa công bố luận án, luận văn khác TÁC GIẢ LUẬN ÁN Tim Sunnary LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy cô: TS Lê Văn Đông, TS Lê Thu Hồng, TS Nguyễn Đặng Dũng hết lịng động viên, tận tình giúp đỡ, trực tiếp hướng dẫn tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn: Ban giám đốc Học Viện Quân Y, Ban giám đốc Bệnh viện 103, Phòng đào tạo Sau đại học, Phòng quản lý nghiên cứu khoa học Học viện Quân y; Đại Sự Quán đặc mệnh toàn quyền Tuỳ Viên Quân Sự Vương quốc Căm-Pu-Chia Việt Nam tạo điều kiện cho thực đề tài nghiên cứu luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán nhân viên đơn vị: Hệ Quốc Tế, Bộ mơn Miễn Dịch, Phịng Protein-Độc chất-Tế bào, Trung tâm nghiên cứu ứng dụng sinh y dược học, Bộ môn – Khoa Vi sinh y học, Bộ môn – Khoa Giải phẫu bệnh, Học viện Quân y tận tình hướng dẫn hỗ trợ kỹ thuật cho tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành đề tài nghiên cứu luận án Cảm ơn anh chị bạn đồng nghiệp thân giúp đỡ động viên suốt trình nghiên cứu, học tập; Cảm ơn người thân gia đình hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án NGHIÊN CỨU SINH Tim Sunnary DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT SỬ DỤNG TRONG LUẬN ÁN BCTT Bạch cầu trung tính ĐVDT Đơn vị diện tích ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay (thử nghiệm miễn dịch hấp phụ gắn enzym) HGKT Hiệu giá kháng thể HT Huyết HTKTKMX Huyết kháng trực khuẩn mủ xanh IgY Yolk Immunoglobin (globulin miễn dịch IgY hay kháng thể IgY) KDa Kilo Dalton NKBV Nhiễm khuẩn bệnh viện NKH Nhiễm khuẩn huyết NMSL Nước muối sinh lý SLVK Số lượng vi khuẩn TKMX Trực khuẩn mủ xanh TN Thí nghiệm WB Western blot MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục từ viết tắt sử dụng luận án Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TRỰC KHUẨN MỦ XANH 1.1.1 Đặc điểm hình thể 1.1.2 Đặc điểm nuôi cấy 1.1.3 Khả gây bệnh 1.1.4 Sức đề kháng khả kháng kháng sinh 1.1.5 Phân loại trực khuẩn mủ xanh theo type huyết 1.2 NHIỄM KHUẨN VẾT BỎNG DO TRỰC KHUẨN MỦ XANH 1.2.1 Tình hình nhiễm khuẩn vết bỏng trực khuẩn mủ xanh 1.2.2 Điều kiện thuận lợi cho phát triển trực khuẩn mủ xanh bệnh nhân bỏng 1.2.3 Một số đặc điểm nhiễm khuẩn vết bỏng 1.3 CÁC BIỆN PHÁP MIỄN DỊCH TRONG PHÒNG VÀ ĐIỀU TRỊ NHIỄM TRỰC KHUẨN MỦ XANH 10 1.3.1 Vắc-xin trực khuẩn mủ xanh 10 1.3.2 Huyết kháng trực khuẩn mủ xanh 12 1.3.3 Kết hợp vắc-xin, huyết kháng sinh phòng điều trị nhiễm khuẩn trực khuẩn mủ xanh 15 1.4 CÔNG NGHỆ CHẾ TẠO KHÁNG THỂ LÒNG ĐỎ TRỨNG (IgY) BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY MIỄN DỊCH CHO GÀ MÁI THU KHÁNG THỂ ĐẶC HIỆU TỪ TRỨNG GÀ 16 1.4.1 Hệ thống miễn dịch gà 16 1.4.2 Kháng thể IgY 18 1.4.3 Tính ưu việt cơng nghệ sản xuất IgY 19 1.5 ỨNG DỤNG CỦA IgY 22 1.5.1 Ứng dụng IgY chẩn đoán 22 1.5.2 Ứng dụng IgY dự phòng điều trị bệnh 22 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 25 2.1.2 Động vật để gây bỏng thực nghiệm lây nhiễm trực khuẩn mủ xanh 26 2.2 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 26 2.2.1 Trực khuẩn mủ xanh 26 2.2.2 Hoá chất sinh phẩm 26 2.2.3 Thiết bị máy móc 27 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.3.2 Gây miễn dịch 28 2.3.3 Tách chiết, tinh IgY từ trứng gà 29 2.3.4.Điện di SDS-PAGE phân tích thành phần protein kháng nguyên trực khuẩn mủ xanh độ tinh chế phẩm IgY 31 2.3.5 Xét nghiệm ELISA phát kháng thể IgY đặc hiệu với trực khuẩn mủ xanh máu gà sản phẩm tách chiết từ trứng gà 32 2.3.6 Phân tích kháng thể IgY đặc hiệu với trực khuẩn mủ xanh kỹ thuật Western blot 33 2.3.7 Thử nghiệm ngưng kết vi khuẩn 33 2.3.8 Thử nghiệm tạo vòng kháng khuẩn in vitro môi trường đặc 34 2.3.9 Đánh giá độ ổn định kháng thể IgY trình bảo quản 34 2.3.10 Gây bỏng thỏ thực nghiệm 35 2.3.11 Gây nhiễm khuẩn vết bỏng 36 2.3.12 Điều trị vết bỏng nhiễm trực khuẩn mủ xanh 37 2.3.13 Xác định số lượng vi khuẩn vết thương 37 2.3.14 Xét nghiệm mô bệnh học 39 2.3.15 Phương pháp xử lý số liệu 41 2.4 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 41 2.5 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 41 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 42 3.1 CHẾ TẠO GLOBULIN MIỄN DỊCH TỪ LÒNG ĐỎ TRỨNG GÀ KHÁNG TRỰC KHUẨN MỦ XANH 42 3.1.1 Kết gây miễn dịch tạo kháng thể IgY đặc hiệu với trực khuẩn mủ xanh 42 3.1.2 Tách chiết, tinh IgY từ lòng đỏ trứng gà 48 3.1.3 Độ ổn định chế phẩm kháng thể IgY điều kiện bảo quản khác 56 3.2 HIỆU QUẢ ỨC CHẾ TRỰC KHUẨN MỦ XANH TRÊN IN VITRO VÀ TRÊN VẾT THƯƠNG NHIỄM TRỰC KHUẨN MỦ XANH THỰC NGHIỆM CỦA KHÁNG THỂ THU ĐƯỢC 58 3.2.1 Hiệu ức chế trực khuẩn mủ xanh in vitro 58 3.2.2 Kết điều trị vết bỏng thực nghiệm thỏ nhiễm chế trực khuẩn mủ xanh phẩm IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 61 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 69 4.1 CHẾ TẠO GLOBULIN MIỄN DỊCH TỪ LÒNG ĐỎ TRỨNG GÀ KHÁNG TRỰC KHUẨN MỦ XANH 69 4.1.1 Về gây miễn dịch tạo kháng thể IgY đặc hiệu gà mái đẻ trứng 69 4.1.2 Về tách chiết, tinh kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà 74 4.1.3 Về độ ổn định chế phẩm kháng thể IgY 75 4.2 HIỆU QUẢ ỨC CHẾ TRỰC KHUẨN MỦ XANH TRÊN IN VITRO VÀ TRÊN VẾT THƯƠNG NHIỄM TRỰC KHUẨN MỦ XANH THỰC NGHIỆM CỦA KHÁNG THỂ THU ĐƯỢC 77 4.2.1 Về hoạt tính in vitro chế phẩm kháng thể IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 77 4.2.2 Về kết điều trị vết bỏng nhiễm trực khuẩn mủ xanh chế phẩm kháng thể IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 79 KẾT LUẬN 83 KIẾN NGHỊ 84 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Một số kết lâm sàng huyết kháng trực khuẩn mủ xanh 14 1.2 Tính ưu việt IgY so với IgG 20 3.1 Hiệu suất tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng 55 3.2 Hoạt tính ngưng kết chủng trực khuẩn mủ xanh IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 59 3.3 Tỷ lệ % loài vi khuẩn phân lập vết bỏng thỏ nhiễm trực khuẩn mủ xanh chủng 6P11 64 3.4 Tổn thương mô học vết thương bỏng thực nghiệm gây nhiễm trực khuẩn mủ xanh sau 10 ngày điều trị 66 4.1 Khuyến cáo cách gây miễn dịch 71 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn Miễn dịch, Học viện Quân y (2011), Miễn dịch học, Nhà xuất Quân đội Nhân dân, Hà Nội, tr 13-151 Bộ môn Vi sinh vật, Học viện Quân y (2011), Vi sinh vật, Nhà xuất Quân đội Nhân dân, Hà Nội Dược điển Việt Nam III (2002), Nxb Y học, Hà Nội, Tr 221 – 240 Vũ Triệu An, Đỗ Trung Phấn (1981), Những kỹ thuật dùng miễn dịch học, NXB Y học, Hà Nội, tr 62-65 Nguyễn Đình Bảng (1988), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng lâm sàng vi khuẩn mủ xanh phân lập Hà Nội, Luận án tiến sĩ Y học, Hà Nội Nguyễn Đình Bảng (1991), “Phịng chống nhiễm khuẩn sở chữa bỏng”, Ngoại khoa, Tổng hội Y- Dược học Việt Nam, 5, tr 27- 31 Nguyễn Quốc Định, Lê Huy Chính CS (1998), “Nghiên cứu bệnh nguyên yếu tố liên quan gây nhiễm khuẩn huyết bỏng viện Bỏng Quốc gia”, Tạp chí Y học thực hành, 10 (356) tr 9-11 Nguyễn Quốc Định (2000), Nghiên cứu nguyên gây nhiễm khuẩn bỏng số yếu tố liên quan viện Bỏng Quốc gia từ 1996-1999 , Luận án tiến sĩ Y học, Hà nội Lê Văn Đông, Dương Hương Giang (2011), “Nghiên cứu chế tạo kháng thể từ lòng đỏ trứng gà (IgY) kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây bệnh mủ gan cá tra”, Tạp chí y dược học quân 1(36), tr 58-64 87 10.Hoàng Ngọc Hiển, Nguyễn Văn Việt CS (1998), Nghiên cứu quy trình chế tạo huyết kháng trực khuẩn mủ xanh dạng tẩm đắp để điều trị nhiễm khuẩn ngoại khoa bỏng, Mã số khoa học 11.01 B, Hà Nội 11.Lê Thu Hồng (2004), Nghiên cứu chế tạo huyết kháng trực khuẩn mủ xanh đa giá, tinh chế đánh giá hiệu điều trị chế phẩm động vật bệnh nhân bỏng ,Luận án tiến sĩ khoa học Y Dược, Hà Nội 12.Hoàng Trung Kiên, Đỗ Khắc Đại CS (2010), “Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng Edwardsiella ictaluri gây bệnh mủ gan cá tra công nghệ tạo kháng thể IgY gà” Tạp chí thơng tin y dược, Số đặc biệt Miễn dịch học năm 2010, tr 71-76 13.Trương Quý Kiên, Đỗ Minh Trung, Lê Văn Đông (2010), “Nghiên cứu chế tạo kháng thể kháng trực khuẩn mủ xanh công nghệ chế tạo IgY gà” Tạp chí thơng tin y dược, Số đặc biệt Miễn dịch học năm 2010: tr 66-70 14.Đỗ Lâm (1991), “Nhận xét 184 trường hợp nhiễm khuẩn huyết bỏng (1975-1989)”, Ngoại khoa,Tổng hội Y Dược học Việt Nam, 5, tr 11-16 15.Nguyễn Duy Long (1997), Tìm hiểu diện tụ cầu vàng trực khuẩn mủ xanh phòng mổ phòng hậu phẫu bệnh viện Saint Paul , Luận văn thạc sĩ Y học, Hà Nội 16.Vũ Chiến Thắng (1996), Bước đầu điều chế vắc-xin tế bào vi khuẩn mủ xanh đánh giá hiệu lực bảo vệ vắc-xin động vật thực nghiệm, Luận án tiến sĩ Y học , Hà Nội 17.Lưu Thị Kim Thanh (1997), Nghiên cứu nguyên vi khuẩn số yếu tố liên quan nhiễm trùng bệnh viện vết mổ số bệnh viện, Luận án tiến sĩ Y học, Hà Nội 88 18.Nguyễn Gia Tiến (2002), Nhận xét độ nhạy cảm kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập vết bỏng khoa điều trị tích cực – Viện bỏng quốc gia, Báo cáo hội thảo khoa học “nhiễm trùng nặng kháng sinh”, Hà Nội 19.Đỗ Minh Trung, Hoàng Trung Kiên, Lê Văn Đông (2010), Nghiên cứu tách chiết, tinh kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng g, Tạp chí thơng tin y dược, Số đặc biệt Miễn dịch học năm 2010, tr 77-81 20.Lê Thế Trung, Hoàng Ngọc Hiển cộng (1999), Nghiên cứu type huyết thanh, yếu tố dịch tế học gây nhiễm khuẩn bỏng trực khuẩn mủ xanh đề xuất type vi khuẩn dự tuyển để chế tạo vắcxin, Đề tài nghiên cứu cấp Bộ Y tế, Hà Nội 21.Lưu Đắc Trung (1990), “ Nhiễm khuẩn bỏng ”, Y học thực hành Bộ Y tế, 2, tr - 22.Lê Thế Trung (1976), “ Nhiễm trùng mủ xanh bỏng ”, Cục Quân y 23.Lê Thế Trung (1997), “ Bỏng kiến thức chuyên ngành ”, Nxb Y học Hà Nội TIẾNG ANH 24.Adukauskiene D., Vitkauskaite A., Skrodeniene E., Dambrauskiene A., Vitkauskienė A (2011), “Changes in antibiotic resistance level of nosocomial Pseudomonas aeruginosa isolates in the Largest University Hospital of Lithuania”, Medicina (Kaunas) 47(5), pp 278-283 25.Akiyama M., Oish K., Tao M et al (2000), “Antibacterial properties of Pseudomonas aeruginosa immunotype I lipopolysaccharide specific monoclonal antibody (MAb) in a murinethigh infection model: combines effects of Mab and ceftazidime” Microbiol Immunol, 44 (8), pp 629-635 89 26.Aloush V., Navon-Venezia S., Seigman-Igra Y., Cabili S., Carmeli Y (2006), “Multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa: risk factors and clinical impact”, Antimicrob Agents Chemother 50(1), pp 43-8 27.Amaral J.A., et al (2002), “Anti-enteropathogenic Escherichia coli immunoglobulin Y isolated from eggs laid by immunised Leghorn chickens”, Res Vet Sci 72(3), pp 229-34 28.Arẳjo A.S., Lobato Z.I., Chávez-Olórtegui C., Velarde D.T (2010), “Brazilian IgY-Bothrops antivenom: Studies on the development of a process in chicken egg yolk ”, Toxicon 55(4), pp 739-44 29.Carmeli J., Troillet N., Eliopoulos G et al (1999), “Emergence of antibiotic resistant P aeruginosa comparison of risks”, Agents Chemother, 43 (6), pp 1379-1382 30 Casadevall A., Dadachova E., Pirofski L.A (2004), “ Passive antibody therapy for infectious diseases”,Nat Rev Microbiol 2(9), pp 695-703 31.Chalghoumi R., Marcq C., Théwis A., Portetelle D., Beckers Y (2009), “ Effects of feed supplementation with specific hen egg yolk antibody (immunoglobin Y)on Salmonella species cecal colonization and growth performances of challenged broiler chickens ”, Poult Sci 88(10), pp 2081-92 32.Church D., Elsayed S., Reid O et al (2006), “Burn wound infections”, Clin Microbiol Rev, 19, pp 403-434 33.de Almeida C.M., da Silva C.L., Couto H.P., Escocard Rde C., da Rocha D.G., Sentinelli Lde P., Kipnis T.L., da Silva W.D (2008), “Development of process to produce polyvalent IgY antibodies antiAfrican snake venom”, Toxicon 52(2), pp 293-301 90 34.Dias da Silva W., Tambourgi D.V (2010), “IgY: a promising antibody for use in immunodiagnostic and in immunotherapy ”, Vet Immunol Immunopathol 135(3-4), pp 173-80 35.Donati F., Scamazzo M., Gervasoi et al (1993), “Infection and antibiotic therapy in 4000 burned patients treated in Milan, Italy, between 1976 and 1988”, Burn, 19 (4), pp 345-349 36.Estahbanati., Hamid-Karimi., Kashani., Pamian-Pou., Ghanaatpisheh., Fahimeh (2002) “Frequency of Pseudomonas aeruginosa serotypes in burn wound infectino and their resistance to antibiotics ”, Bunrs, 28 (4), pp 340-348 37.Ferreira J.A., Santiago FM et al (2012), “Production, Characterization and Applications for Toxoplasma gondii-Specific Polyclonal Chicken Egg Yolk Immunoglobulins”, PLoS One 2012;7(7) 38.Fujibayashi T., Nakamura M., Tominaga A., Satoh N., Kawarai T., Narisawa N., Shinozuka O., Watanabe H., Yamazaki T., Senpuku H (2009), “Effects of IgY against Candida albicans and Candida spp Adherence and Biofilm Formation”, Jpn J Infect Dis 62(5), pp 337-42 39.Geo F., Brooks., Jenet S., Butel., Stephen A., Morse (1998), “Medical Microbiology”, Connecticut, USA, 11th Edit, pp 231 - 233 40.Gerlach H (1994), “Defence mechanisms of the avian host In: The vian Medicince: Principles and Application ”, Wingers Publishing Inc., 109-120 41.Giantsou E., Manolas K (2011), “Superinfections in Pseudomonas aeruginosa ventilator-associated 77(10), pp 964-70 pneumonia”, Minerva Anestesiol 91 42.Hamal KR., Burgess SC., Pevzner IY., Erf GF (2006), “Maternal antibody transfer from dams to their egg yolks, egg whites, and chicks in meat lines of chickens ”,Poult Sci 85(8), pp 1364- 72 43.Hoiby N (2011), “Recent advances in the treatment of Pseudomonas aeruginosa infections in cystic fibrosis ”, BMC Med (9), pp 32 44.Holder T.A., Neely A.N (1991), “The role of proteases in Pseudomonas infections in burns: a current hypothesis”, Antibiot Chemother 44, pp 99-105 45.Horie K et al (2004), “Suppressive effect of functional drinking yogurt containing specific egg yolk immunoglobulin on Helicobacter pylori in humans ”, J Dairy Sci 87, pp 4073–4079 46.Igumbor E., Gwanzura L., Chihara M., Obi C., Mura D (2000), “Antibiotic sensitivity and plasmid profiles profiles of Pseudomonas aeruginosa ”, Cent-Apr-J-Med, 46 (11), pp 296-300 47.Ismaeel N.,A (1993), “Colonization of Intensive care unit patients by P aeruginosa ”, J-Hosp-Infect, 25 (4), pp 279-286 48.Jones R.J., Roe E.A (1980), “Controlled trial of Pseudomonas immunoglobulin and vaccine in burn patients”, The Lancer, 8207, pp 1263-1265 49.Jonnes E.,B (1995), “Prophylactic anti lipopolycaccharide freeze dried plasma in major burns: a double blind controlled trial”, Burns, 21(4), pp 276-27 50.Joseph S., Lam., Véronique L., Taylor., Salim T., Islam et al (2011), “Genetic and functional diversity of Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide” Front Microbiol , pp 118 92 51.Karyoute S., M., Badran D., H (1989), “Analysis of 100 patients with thermal injury treated in a new burn unit in Amman, Jordan”, Burn, 15 (1), pp 23-26 52.Ko K., Y., and Ahn D., U (2006), “ Preparation of Immunoglobulin Y from Egg Yolk Using Ammonium Sulfate Precipitation and Ion Exchange Chromatography”, Department of Animal Science, Iowa State University, Ames 50011 53.Kovacs-Nolan., J., Mine., Y (2004), “ Passive immunization through avian egg antibodies ”, Food Biotechnol, 18, pp 39-62 54.Kowalczyk K et al (1985), “Quantitation of maternal-fetal IgG transport in the chicken”, Immunology 54(4), pp 755-762 55.Krieg N., R., Holt J., G (1984), “Bergey's manual of systematic bacteriology”, Williams and Wilkins (USA), (1), pp 141-167 56.Kronborg G., Pressle T., Hoiby N (1993), “Specific IgG2 antibodies to P aeruginosa lipid A and LPS aer early markers of chronic infection in patients with cystic fibrosis”, Infection, 21 (5), pp 297-302 57.Kuroki M et al (1997) “ Field evaluation of chicken egg yolk immunoglobulins specific for bovine rotavirus in neonatal calves”,Arch Virol 142, pp 843-851 58.Kholodkova E.V., Krylov V.M., Badikov V.D (1991), “The serological characteristics of the O-antigen of P aeruginosa isolated from patients with a Pseudomonas infection during immunotherapy”, Zh Microbiol Epidemiol Immunol, (8), pp 59-61 59.Lang A.B., Schaad U.B., Rüdeberg A et al (1995), “Effect of highaffinity anti-Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide antibodies induced by immunization on the rate of Pseudomonas aeruginosa infection in patients with cystic fibrosis” J Pediatr.;127(5), pp 711-7 93 60.Lari A.R., Alaghehbandan R (2012), “Nosocomial infection among bunr patients in Teheran, Iran”, Annals of Burns and Fire Disasters vol XXV - n 1, pp 3-7 61.Liou J.F., Chang C.W., Tailiu J.J., Yu C.K., Lei H.Y., Chen L.R., Tai C (2010) “Passive protection effect of chicken egg yolk immunoglobulins on enterovirus 71 infected mice”, Vaccine 28(51), pp 8189-96 62.Liu P., V (1996), “The role of various fractions of Pseudomonas aeruginosa in its pathogenesis III Indensity of the lethal toxins produced invivo and invitro”, J- Infect- Dis, 116 (4) , pp 481-489 63.Liu S., Dong W., Kong T (2010), “Preparation and characterization of immunoglobulin yolk against the venom of Naja naja atra”, Indian J Exp Biol 48(8), pp 778-85 64.Loureiro M.M., De-Moraes B.A., Mendona V.L.F., Quandra M.R.R et al (2002), “Pseudomonas aeruginosa: study of antibiotic resistance and moleculav typing in hospital infection cases in a neonatal intensive care unit from Rio de Janeiro City, Brazil”, MemInst-Oswaldo-Cruz, 97 (3), pp 387-394 65.Lutz J.K., Lee J (2011), “Prevalence and antimicrobial-resistance of Pseudomonas aeruginosa in swimming pools and hot tubs ”, Int J Environ Res Public Health 8(2), pp 554-64 66.Mahar P., Padiglione A.A., Cleland H et al (2010), “Pseudomonas aeruginosa bacteraemia in burn patients: risk factors and outcomes”, Burns, 36(8), pp 1228-33 67.Marquardt R R et al (1999), “Passive protective effect of egg-yolk antibodies against enterotoxigenic Escherichia coli K88 infection in neonatal and early-weaned piglets”, FEMS Immunol Med Microbiol 23, pp 283-288 94 68.Mogoba B et al (2008), “Acetic acid to treat Pseudomonal wound infection”, Eur J Gen Med 5(2), pp 104-106 69.Mokaddas E.M., Sanyal S.C (1999), “Resistance patterns of Pseudomonas aeruginosa to carbapenems and piperacillin/tazobactam”, J Chemother, 11(2), pp 93 - 96 70.Moss R.B (1993), “Passive immunotherapy for treatment of endobronchitis in cystic fibrosis”, Infusions Transfusion Med, 20, pp 42-46 71.Nilsson E., Amini A., Wretlind B., Larsson A (2007), “Pseudomonas aeruginosa infections are prevented in cystic fibrosis patients by avian antibodies binding Pseudomonas aeruginosa flagellin”, J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 856(1-2), pp 75-80 72.Nilsson E., Larsson A., Olesen H.V., Wejåker P.E., Kollberg H (2008), infections “Good effect of IgY against Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis patients”, Pediatr Pulmonol 43(9), pp 892-9 73.Ning F.G., Zhao X.Z., Bian J., Zhang G.A (2011), “Large-area burns with pandrug resistant Pseudomonas aeruginosa infection and respiratory failure”, Chin Med J (Engl) 2011 Feb;124(3), pp 359-63 74.Nomura S et al (2005), “Effect of dietary anti-urease immunoglobulin Y on Helicobacter pylori infection in Mongolian gerbils”, Blackwell Publishing Ltd, Helicobacter 10, pp 43–52 75.Nguyen H.H., Tumpey T.M., Park H.J., Byun Y.H., Tran L.D., Nguyen V.D., Kilgore P.E., Czerkinsky C., Katz J.M., Seong BL., Song J.M., Kim Y.B., Do H.T., Nguyen T., Nguyen C.V (2010), “Prophylactic and therapeutic efficacy of avian antibodies against influenza virus H5N1 and H1N1 in mice”, PLoS One 5(4), pp 10152.1-11 95 76.Olga V., Alaksander S., Kocharova et al (2002), “Structural studies on the core and the O- polysaccharide repeating unit of Pseudomonas aeruginosa immunotype lipopolysaccharide”, Eur J Biochem, 269 (8), pp 2103-2194 77.Pandit D.V., Gore M.A., Saileshwwar N., Dedhar L.D (1993), “Laboratory data from surveillance of burn ward for the detection of hospital infection”, Burns, 19 (1), pp 52-55 78.Parma Y.R., Chacana P.A et al (2011), “Antibodies anti-Shiga toxin B subunit from chicken egg yolk: isolation, purification and neutralization efficacy”,Toxicon 58(4), pp 380-8 79.Parma Y.R., Chacana P.A et al (2012), “Detection of Shiga toxinproducing Escherichia coli by sandwich enzyme-linked immunosorbent assay using chicken egg yolk IgY antibodies”, Front Cell Infect Microbiol 2012, pp 84-2 80.Pauly D., Dorner M., Zhang X., Hlinak A., Dorner B., Schade R (2009), “Monitoring of laying capacity, immunoglobulin Y concentration, and antibody titer development in chickens immunized with ricin and botulinum toxins over a two-year period”,Poult Sci 88(2), pp 281-290 81.Pitted D., Harbarth S., Ruef., C et al (1999), “Prevalence and risk factor for nosocomial infections in Jour university hospital in Switzerland”, Infect Control Hosp Epidemiol, 20 (1), pp 37-42 82.Pitten F.A., Panzig B., Schroder G., Tietze K., Kramer A (2001), “Transmission of a multiresistant Pseudomonas aeruginosa strain at a German University hospital”, J-Hosp-Infect 47 (2), pp 125-130 83.Rastegar L.A et al (2005), “Burn wound infections and antimicrobial resistance in tehran, iran: an increasing problem”, Annal of Burns and Fire Disaster, 2,pp 68-73 96 84 Richard R., Le-Floch R., Chaumoux., C et al (1994), “Pseudomonas aeruginosa outbreak in a burn unit: rol of antimicrobials in the emergence of multiply resistant strains”, Infect Dis, 170 (2), pp 377- 83 85 Rose M.E et al (1974), “Immunoglobulin classes in the hen's egg their segregation in yolk and white”, Eur J Immunology 4, pp 521-523 86 Rose M.E (1979), “The immune system in birds”, J R Soc Med 72(9), pp 701–705 87 Rudner X., L., Berk R., S., Hazlett L., D (1993) “Immunization with homologous P aeruginosa pili protects againts acular disease”, Reg Immunol, 5(5), pp 245-252 88 Sarker., S A et al (2001) “Randomized, placebo-controlled, clinical trial of hyperimmunized chicken egg yolk immunoglobulin in children with rotavirus diarrhea”, J Pediatr Gastroenterol Nutr 32, pp 19–2 89 Schade R., Calzado E.G., Sarmiento R., Chacana P.A., Porankiewicz-Asplund J., Terzolo H.R (2005) “Chicken egg yolk antibodies (IgY-technology): a review of progress in production and use in research and human and veterinary medicine”, Altern Lab Anim 33(2), pp 129-54 90 Schiller B., Buchowicz I (1985), “Polish preparation for the prophylaxis and treatment of Pseudomonas aeruginosa infection”, Jour Micro- Epider Immuno,( 4), pp 30-32 91 Sedlak-Weinstein E., Cripps A.W., Kyd J.M., Foxwell A.R (2005), “Pseudomonas aeruginosa: the potential to immunise against infection” Expert Opin Biol Ther 5(7), pp 967-82 97 92 Shin J.H., Yang M., Nam S.W., Kim J.T., Myung N.H., Bang W.J., Roe E.H.(2002), “ Use of egg yolk-derived immunoglobin as an alternative to antibiotic treatment for control of Helicobacter pylori infection”, Clin Diag Lab Immunol 9, pp 1061-1066 93.Smiałek M., Tykałowski B., Stenzel T., Koncicki A (2011), “Local immunity of the respiratory mucosal system in chickens and turkeys”, Pol J Vet Sci 14(2), pp 291-7 94.Song W., Lee K.M., Kang H J., Shin D.H., Kim D.K (2001) “Microbiology aspects of predominant bacteria isolated from the burn patients in Korea ”, Burn, 27 (2), pp 136-139 95.Srifuengfung S., Thonagrumetha W (1993), “Eppidermiological study of Pseudomonas aeruginosa isolate from clinical specimens” Southeast-Asian-J Trop-Med Public-Health, 24 (3), pp 444-448 96 Stanislavsky E.S., Lam J.S (1997), “Pseudomonas aeruginosa antigens as potential vaccines”, FEMS Microbiol Rev., 21(3), pp 243-77 97.Stuttmann R., Hartert M (1993), “Serum IgG concentrations and antibody titer of burn patients after preventive intravenous IgG subtitution with a Pseudomonas immunoglobulin” Infusions Tranfusion Med, 20 (suppl 1), pp 48-55 98.Tam V.H., Chang K.T., Abdelraouf K., Brioso C.G., Ameka M., McCaskey L.A., Weston J.S., Caeiro J.P., Garey K.W (2011), “Prevalence, resistance mechanisms, and susceptibility of multidrug- resistant bloodstream isolates of Pseudomonas aeruginosa”, Antimicrob Agents Chemother 54(3), pp 1160-4 99.Tam V.H., Rogers C.A., Chang K.T., Weston J.S., Caeiro J.P., Garey K.W (2010), “Impact of multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa bacteremia on patient outcomes”, Antimicrob Agents Chemother 54(9), pp 3717-22 98 100.Tanweer S., Zaidi., Gregory P., Priebe., Gerald B., Pier (2006), “A live-attenuated Pseudomonas aeruginosa vaccine elicits outer membrane protein-specific active and passive protection against corneal infection” Infection and Immunity, 74 (2) , pp 975–983 101 Tirziu E.M (2010), “Particularities of the avian immune system”, Journal of Veterinary Medicine Timisoara 13(1), pp 269-278 102 The International P aeruginosa typing study group (1994), “A multicenter comparison of methods for typing strain of P aeruginosa predominamtly from patients with cystic fibrosis”, J Infect Dis, 169 (1), pp 134-142 103 Tredget E.E., Shankowsky H.A., joffe A.M., Inkson T.I., Volpel K (1992), “ Epidemiology of infections with Pseudomonas aeruginosa in burn patients: the role of hydrotherapy”, Clin- Infect-Dis, 15 (6), pp 941-949 104 Tredget E.E., Shankowsky H.A, Rennie R, et al (2004), “Pseudomonas infections in the thermally injured patients”, Burns, 30, pp 3-26 105 Veerasami M., Singanallur N.B., Thirumeni N., Rana S.K., Shanmugham R., Ponsekaran S., Muthukrishnan M., Villuppanoor S.A (2008), “Serotyping of foot-and-mouth disease virus by antigen capture-ELISA using monoclonal antibodies and chicken IgY”, New Microbiol 31(4), pp 549-54 106 Vega C., Bok M et al (2011), “Egg yolk IgY: protection against rotavirus induced diarrhea and modulatory effect on the systemic and mucosal antibody responses in newborn calves”, Vet Immunol Immunopathol 142(3-4), pp 156-69 99 107 Vega C.G., Bok M et al (2012), “IgY Antibodies Protect against Human Rotavirus Induced Diarrhea in the Neonatal Gnotobiotic Piglet Disease Model”, PLoS One 2012;7(8) 108 Victoria L C., Nicolas J Llosa et al (2010), “Evaluation of flagella and flagellin of Pseudomonas aeruginosa as vaccines”, Infection and Immunity, 78 (2), pp 746–755 109 Vojtová V., Kolár M., Hricová K., Uvízl R., Neiser J., Blahut L., Urbánek K (2011), “Antibiotic utilization and Pseudomonas aeruginosa resistance in intensive care units” New Microbiol 34(3), pp 291-298 110 Vrankova J., Adárnková V (2004), “Bacteriological monitoring after Burn injuries” Acta Chir Plast, 46(2), pp 48 –50 111 Woolley J.A., Landon J (1995), “Comparison of antibody production to human interleukin-6 (IL-6) by sheep and chickens” J Immunol Methods 178(2), pp 253-265 112 Xiao Y., Gao X., Taratula O., Treado S., Urbas A., Holbrook R.D., Cavicchi R.E., Avedisian C.T., Mitra S., Savla R., Wagner P.D., Srivastava S., He H (2009), “Anti-HER2 IgY antibodyfunctionalized single-walled carbon nanotubes for detection and selective destruction of breast cancer cells ”, BMC Cancer 9, pp 351 113 Xu Y., Li X., Jin L., Zhen Y., Lu Y., Li S., You J., Wang L.(2011), “Application of chicken egg yolk immunoglobulins in the control of terrestrial and aquatic animal diseases: A review” Biotechnol Adv 29(6), pp 860-8 114 Yang Y.H., Park D et al (2012), “Anti-Helicobacter pylori effects of IgY from egg york of immunized hens ”, Lab Anim Res 28(1), pp 55-60 100 115 Zuercher A.W., Horn M.P., Wu H et al (2006), “Intranasal immunisation with conjugate vaccine protects mice from systemic and respiratory tract infection with Pseudomonas aeruginosa”, Vaccine 24(20), pp 4333-42 116 Zueva L.P., yafaev R (1986), “Characterization of sources and routes for the spread of P.aeruginosa infection in Traumatological department ”, J-Micro-Epider-Immun, Moskva, (2) pp 59-63 ... trực khuẩn mủ xanh điều kiện Việt Nam, tiến hành đề tài ? ?Nghiên cứu chế tạo globulin miễn dịch từ trứng gà (IgY) kháng trực khuẩn mủ xanh? ?? với mục tiêu: Chế tạo globulin miễn dịch từ lòng đỏ trứng. .. nghiệm thỏ nhiễm chế trực khuẩn mủ xanh phẩm IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 61 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 69 4.1 CHẾ TẠO GLOBULIN MIỄN DỊCH TỪ LÒNG ĐỎ TRỨNG GÀ KHÁNG TRỰC KHUẨN MỦ XANH ... trúc phân tử IgY gà so với IgG động vật có vú 19 2.1 Gà mái gây miễn dịch chế tạo IgY kháng trực khuẩn mủ xanh 25 2.2 Gây miễn dịch cho gà mái với kháng nguyên trực khuẩn mủ xanh 29 2.3