Nghiên cứu đặc điểm cấu trúc gen dreb5 phân lập từ hai giống đậu tương địa phương xuân lạng sơn và lơ bắc giang

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM VŨ THỊ HƢỜNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC GEN DREB5 PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐỊA PHƢƠNG XUÂN LẠNG SƠN VÀ LƠ BẮC GIANG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Chu Hoàng Mậu Thái Nguyên, 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa có cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập thực đề tài luận văn thạc sĩ chuyên ngành Di truyền học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm- Đại học Thái Nguyên, nhận đƣợc ủng hộ, giúp đỡ thầy cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trƣớc tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Sinh- KTNN khoa Sau đại học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm- Đại học Thái Nguyên Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Bộ môn Di truyền Sinh học đại giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua Thái Nguyên, ngày 20 tháng năm 2012 Tác giả Vũ Thị Hƣờng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.CÂY ĐẬU TƢƠNG 1.1.1.Đặc điểm sinh học đậu tƣơng 1.1.2 Giá trị kinh tế đậu tƣơng 1.1.3 Tình hình sản xuất đậu tƣơng giới Việt Nam 1.2 GEN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƢƠNG 11 1.2.1 Nhóm gen chức liên quan trực tiếp đến tính chịu hạn đậu tƣơng 12 1.2.2 Nhóm gen điều khiển trình phiên mã nhóm gen chịu hạn 15 1.3 NHÂN TỐ PHIÊN MÃ DREB5 VÀ GEN DREB5 20 1.3.1 Nhân tố phiên mã DREB5 20 1.3.2 Gen DREB5 21 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 27 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 27 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 28 2.2.1 Hóa chất 28 2.2.2 Thiết bị 28 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.3.1 Phƣơng pháp sinh học phân tử 30 2.3.2 Phƣơng pháp phân tích trình tự gen 36 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 KẾT QUẢ NHÂN BẢN GEN DREB5 TỪ HỆ GEN CỦA HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG XLS VÀ LBG 37 3.1.1 Tách chiết DNA từ non hạt đậu tƣơng 37 3.1.2 Kết nhân gen GmDREB5 phản ứng PCR 38 3.2 TÁCH DÒNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ GEN GmDREB5 40 3.3 SO SÁNH TRÌNH GEN GmDREB5 PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG XLS VÀ LBG VỚI CÁC TRÌNH TỰ ĐÃ CÔNG BỐ 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT 2,4 D 2,4- Diclorophenoxyacetic acid ABA Abscisis acid bp Cặp base BAP 6- Bezyl amino purin đtg Cộng DNA Deoxiribonucleic acid DREB Dehydration- Responsive Element Binding EDTA Ethyen Diamin Tetraacetic Acid HSP Heat shock protein kb Kilo base LEA Late Embryogenesis Abundant protein (Protein tích luỹ với số lƣợng lớn giai đoạn cuối q trình hình thành phơi) LTP Lipid Tranfer protein (Protein vận chuyển lipid) LBG Lơ Bắc Giang MGPT Môi giới phân tử MS Murashige- Skoog NAA Naphtyacetic acid PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) P5CS Pyrroline- 5- Carboxylate Synthetase TAE Tris acetat EDTA TBE Tris borat EDTA XLS Xuân Lạng Sơn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Tình hình sản xuất đậu tƣơng Việt Nam từ 2005- 2011 Bảng 2.1 Nguồn gốc giống đậu tƣơng nghiên cứu 27 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng 29 Bảng 2.3 Trình tự cặp mồi nhân gen DREB5 31 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR 32 Bảng 2.5 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 32 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dòng pBT 34 Bảng 3.1 Giá trị mật độ quang phổ hấp thụ DNA bƣớc sóng 38 260nm 280nm giống đậu tƣơng XLS LBG Bảng 3.2 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự gen 46 GmDREB5 giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự gen GmDREB5 giống đậu tƣơng công bố ngân hàng gen quốc tế Bảng 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự amino acid Protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự amino acid Protein DREB5 giống đậu tƣơng công bố ngân hàng gen quốc tế Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vi 52 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Sản xuất đậu tƣơng Việt Nam 10 Hình 1.2 Sơ đồ mơ tả gen vùng mã hóa gen GmDREB5 22 đậu tƣơng Hình 1.3 Sơ đồ mơ tả protein GmDREB5 đậu tƣơng 22 Hình 1.4 Trình tự amino acid vùng AP2 protein 23 DREB5 đậu tƣơng Hình 1.5 Mơ hình cấu trúc miền AP2 protein DREB5 23 Hình 1.6 Điểm liên kết với DNA protein DREB5 (DNA 24 binding site) Hình 1.7 Sơ đồ điểm DNA- Binding protein DREB5 24 đậu tƣơng Hình 1.8 Sự đa dạng mối quan hệ vùng AP2 protein 25 DREB5 đậu tƣơng Hình 2.1 Hình ảnh giống đậu tƣơng nghiên cứu 27 Hình 2.2 Sơ đồ vector pBT 34 Hình 3.1 Hình ảnh điện di DNA tổng số giống XLS 38 LBG Hình 3.2 Hình ảnh điện di sản phẩm nhân gen GmDREB5 39 Hình 3.3 Đĩa ni cấy dịng tế bào khả biến E.coli chủng 40 DH5 chứa vector tái tổ hợp mang gen GmDREB5 Hình 3.4 Plasmid mang gen GmDREB5 41 Hình 3.5 So sánh trình tự nucleotide gen GmDREB5 phân 42 lập từ hai giống đậu tƣơng LBG XLS Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vii Hình 3.6 So sánh trình tự nucleotide gen GmDREB5 phân 45 lập từ hai giống đậu tƣơng LBG XLS với sáu trình tự nucleotide gen GmDREB5 công bố Ngân hàng gen quốc tế Hình 3.7 Biểu đồ hình so sánh mức độ tƣơng đồng gen 47 GmDREB5 giống đậu tƣơng Hình 3.8 So sánh trình tự amino acid mã hố gen DREB5 49 phân lập từ giống đậu tƣơng LBG XLS Hình 3.9 So sánh trình tự amino acid mã hoá gen 50 GmDREB5 phân lập từ giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự amino acid mã hoá gen GmDREB5 giống đậu tƣơng công bố ngân hàng gen quốc tế Hình 3.10 Biểu đồ hình so sánh mức độ tƣơng đồng Protein DREB5 giống đậu tƣơng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn viii 52 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đậu tƣơng (Glycine max (L.) Merrill) cơng nghiệp ngắn ngày có vị trí quan trọng cấu trồng nông nghiệp, loại trồng chiến lƣợc nhiều quốc gia giới có tác dụng nhiều mặt có hiệu kinh tế cao, có thời gian sinh trƣởng ngắn lại dễ trồng Sản phẩm từ đậu tƣơng đƣợc sử dụng cho ngƣời gia súc đáp ứng đƣợc nhu cầu đạm phần ăn ngày ngƣời nhƣ gia súc [1], [3] Hạt đậu tƣơng đƣợc dùng làm thực phẩm cho ngƣời, thức ăn cho gia súc, nguyên liệu cho công nghiệp, mặt hàng xuất Trong hạt đậu tƣơng có hàm lƣợng dinh dƣỡng cao, chứa 35%- 52% protein, 18%- 25% lipit, 20% glucid nhiều loại axit amin cần thiết nhƣ: leucin, isoleucin, lysin, metionin, phenylalanin, tryptophan, valin Ngoài ra, hạt đậu tƣơng chứa nhiều vitamin (B1, B2, A, D, E, K…) thực phẩm có giá trị dinh dƣỡng cao cần thiết cho thể ngƣời động vật Đặc biệt, protein đậu tƣơng đƣợc coi nguồn cung cấp protein hồn chỉnh chứa lƣợng đáng kể amino acid không thay cần thiết cho thể, dễ tiêu hoá khơng có thành phần tạo cholesterol Lipit đậu tƣơng chứa tỉ lệ lớn axit béo chƣa no, có hệ số đồng hố lớn (98%), số iot cao (120-137) Sử dụng protein lipit hạt đậu tƣơng cịn có tác dụng chữa số bệnh nhƣ: đái tháo đƣờng, béo phì, huyết áp cao, chảy máu não… [3] Ngồi ra, rễ đậu tƣơng có nốt sần, kết cộng sinh vi khuẩn Rhizobium japonicum với rễ Vì vậy, đậu tƣơng loại trồng có tác dụng cải tạo đất, làm trồng vụ sau phát triển tốt hơn, góp Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 44 Hình 3.6 So sánh trình tự nucleotide gen GmDREB5 phân lập từ hai giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự nucleotide gen GmDREB5 Ngân hàng gen quốc tế Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 45 Kết so sánh trình tự nucleotide gen GmDREB5 phân lập từ hai giống đậu tƣơng LBG XLS với sáu trình tự nucleotide gen GmDREB5 cơng bố Ngân hàng gen quốc tế cho thấy: Trình tự nucleotide gen GmDREB5 giống LBG XLS có số sai khác với trình tự nucleotide phân lập từ đậu tƣơng đƣợc công bố ngân hàng gen quốc tế với mã số EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 số vị trí nucleotide Kết xác định hệ số tƣơng đồng khoảng cách di truyền gen GmDREB5 giống đậu tƣơng LBG, XLS, EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 đƣợc thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự gen GmDREB5 giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự gen GmDREB5 giống đậu tƣơng ngân hàng gen quốc tế Kết cho thấy, hệ số đồng dạng trình tự gen GmDREB5 giống đậu tƣơng cao, dao động từ 91,6 % đến 99,7 % Độ tƣơng đồng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 trình tự gen GmDREB5 cơng bố ngân hàng gen quốc tế thấp 91,9 % cao 99,7 % Gen GmDREB5 giống đậu tƣơng LBG có độ tƣơng đồng so với giống có mã số EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 lần lƣợt 92,5 %, 98,8 %, 99,7 %, 92,3%, 98,9 %, 92,1 % Gen GmDREB5 giống đậu tƣơng XLS có độ tƣơng đồng so với giống có mã số EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 lần lƣợt 98,9 %; 92,9 %; 92,1 %; 99,4 %; 91,6 %; 99,7 % Mối quan hệ di truyền giống đậu tƣơng sở phân tích gen GmDREB5 đƣợc thể sơ đồ hình hình 3.7 BG.seq HE598783.seq HE647690.seq FR822737.se q LS.s eq HE648568.seq HE648567.seq EF583447.seq 3.7 Nucleotide Substitutions (x100) Hình 3.7 Biểu đồ hình so sánh mức độ tƣơng đồng gen GmDREB5 giống đậu tƣơng Biểu đồ hình thể mối quan hệ di truyền giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự gen GmDREB5, kết phân tích cho thấy giống đậu tƣơng đƣợc phân thành nhóm chính: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 47 Nhóm I gồm giống, phân thành nhóm phụ: Nhóm phụ gồm giống LBG, HE598783 HE647690 Nhóm phụ gồm giống FR822737 Nhóm phụ lại chia thành nhóm nhỏ: Nhóm nhỏ gồm giống LBG HE598783, nhóm nhỏ gồm giống HE647690 Nhóm II gồm giống, phân thành nhóm phụ: Nhóm phụ gồm giống XLS, HE648567 HE648568 Nhóm phụ gồm giống EF583447 Nhóm phụ lại chia thành nhóm nhỏ: Nhóm nhỏ gồm giống XLS, HE648568 nhóm phụ gồm giống HE648567 Nhƣ vậy, giống đậu tƣơng mà nghiên cứu không thuộc nhóm phụ Giống đậu tƣơng LBG nhóm phụ với giống đậu tƣơng có mã số HE598783 HE647690, FR822737 HE647690 Đây giống chịu hạn Giống đậu tƣơng XLS nhóm phụ với giống đậu tƣơng có mã số HE648567, HE648568 EF583447 Đây giống chịu hạn tốt 3.3.2 So sánh trình tự amino acid protein DREB5 hai giống đậu tƣơng XLS trình tự công bố Gen GmDREB5 phân lập từ giống đậu tƣơng LBG XLS có kích thƣớc 924 bp với tất trình tự vùng mã hố Chúng tơi tiến hành so sánh trình tự amino acid chuỗi polypeptide gen GmDREB5 mã hoá giống đậu tƣơng, kết so sánh thể hình 3.8 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 Hình 3.8 So sánh trình tự amino acid mã hoá gen DREB5 phân lập từ giống đậu tƣơng LBG XLS Khi so sánh trình tự amino acid protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG XLS, chúng tơi thấy có sai khác 39 vị trí amino acid (10, 13, 14, 15, 20, 27, 28, 47, 53, 55, 63, 76, 98, 99, 103, 156, 170, 181, 183, 197, 200, 202, 203, 208, 225, 227, 228, 229, 231, 233, 242, 260, 263, 289, 290, 297, 303, 312, 313) Chúng tiến hành so sánh trình tự amino acid chuỗi polypeptide gen GmDREB5 mã hoá giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự amino acid chuỗi polypeptide giống đậu tƣơng công bố Ngân hàng gen quốc tế (có mã số: EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568) Kết so sánh thể hình 3.9 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 49 Hình 3.9 So sánh trình tự amino acid mã hố gen GmDREB5 phân lập từ giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự amino acid mã hố gen GmDREB5 giống đậu tƣơng công bố ngân hàng gen quốc tế So sánh trình tự amino acid giống đậu tƣơng cho thấy có tƣơng đồng cao (86,7 %- 99,0 %) Trong đó, trình tự amino acid giống LBG so với giống EF583447 sai khác 46 vị trí, sai khác so với giống FR822737 vị trí, sai khác so với giống HE598783 vị trí, sai khác so với giống HE648567 49 vị trí, sai khác so với giống HE647690 vị trí sai khác so với giống HE648568 49 vị trí Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 Protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG có độ tƣơng đồng so với giống XLS giống có mã số EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 lần lƣợt 86,7 %; 88,4 %; 97,4 %; 99,0 %; 87,7 %; 97,7 %; 87,7 % Trình tự amino acid giống XLS so với giống EF583447 sai khác vị trí, sai khác so với giống FR822737 45 vị trí, sai khác so với giống HE598783 49 vị trí, sai khác so với giống HE648567 vị trí, sai khác so với giống HE647690 53 vị trí sai khác so với giống HE648568 vị trí Protein DREB5 giống đậu tƣơng XLS có độ tƣơng đồng so với giống có mã số EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 lần lƣợt 98 %; 89,4 %; 87,7 %; 98,7 %; 86,7 %; 99,0 % Kết xác định hệ số tƣơng đồng khoảng cách di truyền Protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG, XLS, EF583447, FR822737, HE598783, HE648567, HE647690, HE648568 đƣợc thể bảng 3.3 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 Bảng 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự amino acid Protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG XLS với trình tự amino acid Protein DREB5 giống đậu tƣơng công bố ngân hàng gen quốc tế Mối quan hệ di truyền giống đậu tƣơng sở phân tích trình tự amino acid protein DREB5 đƣợc thể sơ đồ hình (hình 3.10) BG.aa.p ro HE5987 83.a a.p ro HE6476 90.a a.p ro FR8227 37.aa.p ro LS.aa.pro HE6485 68.a a.p ro HE6485 67.a a.p ro EF583 447.pro 6.1 Nucleotide Su bs titution s (x100 ) Hình 3.10 Biểu đồ hình so sánh mức độ tƣơng đồng Protein DREB5 giống đậu tƣơng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Đã nhân bản, tách dịng thành cơng xác định trình tự gen GmDREB5 phân lập từ hai giống đậu tƣơng Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang Gen GmDREB5 có kích thƣớc 924 bp mã hóa 307 amino acid 1.2 Có sai khác 73 vị trí trình tự nucleotide gen GmDREB5 39 vị trí trình tự amino acid protein DREB5 hai giống đậu tƣơng Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang 1.3 Trình tự nucleotide gen GmDREB5 giống đậu tƣơng XLS, LBG trình tự cơng bố Ngân hàng gen quốc tế (NCBI) có hệ số sai khác từ 0,3% đến 8,4% 1.4 Trình tự amino acid protein DREB5 giống đậu tƣơng LBG, XLS trình tự cơng bố có hệ số sai khác từ 1% đến 13,3% Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu trình tự gen DREB5 làm sở cho việc thiết kế vector chuyển gen mang cấu trúc DREB5 phục vụ chuyển gen để cải thiện khả chịu hạn đậu tƣơng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thi Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Giáo trình cao học Nơng nghiệp, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Lê Trần Bình, Võ Thị Ngọc Diệp, Lê Thị Muội (1995), “Nghiên cứu khả chịu lạnh chịu khơ mơ sẹo lúa giống lúa có nguồn gốc sinh thái khác nhau”, Tạp chí sinh học, 17(1) Ngô Thế Dân cộng (1999), Cây đậu tương, Nxb Nông Nghiệp Trần Thị Phƣơng Liên (1999), Nghiên cứu đặc tính hố sinh sinh học phân tử số giống đậu tương có khả chịu nóng, chịu hạn Việt Nam, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Trần Đình Long (2000), Cây đậu tương, Nxb Nơng nghiệp Hà Nội Chu Hồng Mậu (2008), Phương pháp phân tích di truyền đại chọn giống trồng, Nxb Đại học Thái Nguyên Tài liệu tiếng Anh Abdul B., Frinch R P., Cocking E C (1999), “ Plant regeneration from protoplast of wild rice (Oryza rufipogon Griff)”, Plant cell Rep, 10, pp 200- 203 Adkins S M., Shiraishi T., Kunavuvatchaidach R., Godwin I D (1995), “Somaclonal varition in rice drought- tolerance and other agronomic characters”, Aust J Bot, 4: 201- 209 Alonso JM, Stepanove AN, Leisse TJ, et al 2003 Genome- wide insertional mutagenesis of Arabidopsis thaliana Science 301, 653- 657 10 Barrett AJ, Rawlings ND, Davies ME, Machleidt W, Salvesen G, Turk V (1986), Cysteine proteinase inhibitor of the cystatin superfamily In: A.J Barrett, G Salvesen (Eds.), Proteinase Inhibitors Elsevier, Amsterdam, The Netherlands, 519- 569 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 54 11 Borbani O, Zhu J, Verslues PE, Sunkar R, and Zhu JK (2005), Endogenous siRNAs derived from a pair of natural cis- antisense transcripts regulate salt tolerance in Arabidopsis Cell 123: 1279- 1291 12 Cao Xin-You., You-Zhi M., (2008), Isolation and Identification of a GmGβ1 Interacting Protein with GmDREB5 Protein in Soybean (Glycine max), Acta agronomica sinica, 34 (10), pp 1688−1695 13 Carleton KL and Kocher TD (2001), Cone opsin genes of African cichlid fishes: tuning spectral sensitivity by differential gene expression Mol Bio Evol 18: 1540- 1550 14 Elliott RC, Betzner AS, Huttner E, Oakes MP, Tucker WQ Gerntes D, Perez P, Smyth DR 1996 AINTEGUMENTA, an APETALA2- like gene of Arabidopsis with pleiotropic role in ovule development and floral organ growth P The Plant Cell 8, 155- 168 15 Fujita Y., Fujita M., Satoh R., Maruyama K., Parvez M M., Seki M., Hiratsu K., Ohme-Takagi M., Shinozaki K., Yamaguchi-Shinozaki K., (2005), AREB1 is a transcription activator of novel ABRE-dependent ABA signaling that enhances drought stress tolerance in Arabidopsis, Plant Cel, 17(12), pp 3470-88 16 Gaiyun Zhang, Ming Chen, Xueping Chen, Zhaoshi Xu, Shan Guan, Lian- Cheng Li, Aili Li, Jiaming Guo, Long Mao and Youzhi Ma 2008 Phylogeny, gene structures, and expression patterns of the ERF gene family in soybean (Glycine max L) 17 Gaiyun Zhang, Ming Chen, Liancheng Li, Zhaoshi Xu, Xueping Chen, JiamingGuo and Youzhi Ma, (2009), Overexpression of the soybean GmERF3 gene, an AP2/ERF type transcription factor for increased tolerances to salt, drought, and diseases in transgenic tobacco , Journal of Experimental Botany, 60(13), pp 3781-3796 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 18 Hartl F.U (1996), Moleculer chaperones in cellular protein folding, Nature, 381, pp 571- 580 19 Huang B (2006), Plant- environment interactions, Third edition, Spinger, 15- 40 20 Liao Y., Zou H.F., Wang H.W., Zhang W.K., Ma B., Zhang J.S., Chen S.Y., (2008), Soybean GmMYB76, GmMYB92, and GmMYB177 genes confer stress tolerance in transgenic Arabidopsis plants, Cell Res, 18(10), pp 1047–1060 21 Li X.P., Tian A.G., Luo G.Z., Gong Z.Z., Zhang J.S., Chen S.Y., (2005), Soybean DRE-binding transcription factors that are responsive to abiotic stresses, Theor Appl Genet, 110(8), pp 1355-62 22 Lin R., Zhao W., Meng X., Wang M., Peng Y., (2007), Rice gene OsNAC19 encodes a novel NAC-domain transcription factor and responds to infection by Magnaporthe grisea, Plant Sci, 172 (1), pp 120-130 23 Lei T., Wang Q.Y., Zhai Y., Wang Y., Li J.W., Yan F., Su L.T., (2011), Characterization of a GmHSP70 Gene in Soybean, NCBI, Http://www.ncbi.nlm.nih.gov 24 Liu K.H., Lin T.Y., (2004), Vigna radiata lipid trasfer protein I (ltp 1) mRNA, complete cds, EMBL GenBank, Accession AY300806 25 Liu K.H., Lin T.Y., (2004), Vigna radiata lipid trasfer protein II (ltp 2) mRNA, complete cds, EMBL Gen Bank, Accession AY300807 26 Mukai T., Sakaki T., Akiyama T., 2003, Oryza sativa (japonica cultivar-group) lipid transfer protein-like protein (LTP2) mRNA, complete cds, Accession AY466109 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 27 Nakano T, Suzuki K, Fujimura T, Shinshi H (2006), genome wide analysis of the ERF gene family in Arabidopsis and rice Plant Physiology 140, 411- 432 28 Nguyen H.T.T., Chu M.H., Le S.V., Nguyen C.H., Chu H.H., 2009, Glycine max mRNA for hypothetical protein (P5CS gene), isolate Song Ma-Son La (SL5), Accession FM999729 29 Porcel R., Azcon R., Ruiz-Lozano J.M., (2005), Evaluation of the role of genes encoding for delta1-pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS) during drought stress in arbuscular mycorrhizal Glycine max and Lactuca sativa plants, NCBI, Accession AJ715851 30 Sakuma Y, Liu Q, Dubouzet JG, Abe H, Shinozaki K, YamaguchiShinozaki K (2002), DNA- binding specificity of the ERF/AP2 domain of Arabidopsis DREBs, transcription factiors involved in dehydration- and cold- inducible gene expression Biochemical and Biophycical Research Communications 290, 998- 1009 31 Syed S- H, Mahmood A- K, Muhammad A (2011), “Transcription factor as tool to engineer enhanced dought stress tolerance in plants”, Wileyonlinelibrary.com 32 Sohn KH, Lee SC, Jung HW, Hong JK, Hwang BK 2006 Expression snd functional roles of the pepper pathogen- induced transcription factor RAV1 in bacterial disease resistance, and drought and salt stress tolerance Plant Molecular Biology 61, 897- 915 33 Tran L.S., Nakashima K., Sakuma Y., Osakabe Y., Qin F., Simopson S D., Maruyama K., Fujita Y., Shinozaki K., Yamaguchi – Shinozaki K., (2007), Co-expression of the stress- inducible zinc finger homeodomain ZFHD1 and NAC transcription factors enhances expression of the ERD1 gene in Arabidopsis Plant J, (1), pp 46-63 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 34 Wang P.R., Deng X.J., Gao X.L., Chen J., Wan J., Jiang H., Xu Z.J., (2006), Progress in the study on DREB transcription factor, Yi Chuan, 28(3), pp 369-74 35 Wang J., Wang J., Liu C., Hu G., Chen Q., (2010), Direct Submission NCBI, Accession FJ969431, Http://www.ncbi.nlm.nih.gov 36 Yang K., Moon J.K., Jeong N., Back K., Kim H.M., Jeong S.C., (2008), Genome structure in soybean revealed by a genomewide genetic map constructed from a single population NCBI, Accession EU036414, Http://www.ncbi.nlm.nih.gov 37 Wang C, Wang H, Zhang J, Chen S A seed- specific AP2- domain transcription factor from soybean plays a certain role in regulation of seed germination, Sci China C Life Sci 2008 Apr; 51 (4): 336- 45 Epub 2008 Mar 27 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 ... thuật chuyển gen cần thiết Xuất phát từ lý lựa chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm cấu trúc gen DREB5 phân lập từ hai giống đậu tương địa phương Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang? ?? Mục tiêu nghiên cứu Xác định... tự gen DREB5 hai giống đậu tƣơng địa phƣơng Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang đa dạng cấu trúc gen DREB5 đậu tƣơng sở phân tích trình tự cơng bố Nội dung nghiên cứu - Khuếch đại gen DREB5 hai giống đậu. .. tƣơng Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang kỹ thuật PCR; - Tách dòng xác định trình tự gen DREB5 hai giống đậu tƣơng Xuân Lạng Sơn Lơ Bắc Giang; - So sánh trình tự gen DREB5 hai giống giống đậu tƣơng Xuân Lạng