tổng hợp (2rs) 1 ethylpyrrolidin 2 ylmethanamin (tạp a), methyl 2 methoxy 5 sulfamoylbenzoat (tạp b) và acid 2 methoxy 5 sulfamoylbenzoic (tạp d) của sulpirid

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - CÙ QUANG PHÚ TỔNG HỢP [(2RS)-1-ETHYLPYRROLIDIN-2-YL]METHANAMIN (TẠP A), METHYL 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOAT (TẠP B) VÀ ACID 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOIC (TẠP D) CỦA SULPIRID LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - CÙ QUANG PHÚ TỔNG HỢP [(2RS)-1-ETHYLPYRROLIDIN-2-YL]METHANAMIN (TẠP A), METHYL 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOAT (TẠP B) VÀ ACID 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOIC (TẠP D) CỦA SULPIRID Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS VÕ THỊ CẨM VÂN PGS.TS TRẦN THÀNH ĐẠO Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết số liệu luận văn trung thực chưa có cơng trình cơng bố Tp Hồ Chí Minh, ngày … tháng … năm 2019 Cù Quang Phú TÓM TẮT Luận văn thạc sĩ – Khóa 2017 – 2019 Ngành: Kiệm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 TỔNG HỢP [(2RS)-1-ETHYLPYRROLIDIN-2-YL]METHANAMIN (TẠP A), METHYL 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOAT (TẠP B) VÀ ACID 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOIC (TẠP D) CỦA SULPIRID Cù Quang Phú Người hướng dẫn: TS Võ Thị Cẩm Vân PGS TS Trần Thành Đạo Mở đầu đặt vấn đề Sulpirid thuốc thuộc nhóm benzamid dùng để điều trị chứng bệnh tâm thần phân liệt Việc xuất nhiều dạng chế phẩm thuốc đặt vấn đề phải kiểm nghiệm thuốc nguyên liệu làm thuốc Nhằm hướng đến việc cung cấp tạp chuẩn đối chiếu sulpirid cho kiểm nghiệm thuốc, mục tiêu đề tài tổng hợp tạp A, B D sulpirid Đối tượng Khảo sát tìm điều kiện thuận lợi cho trình tổng hợp tạp A, B D từ sulpirid Xây dựng thẩm định quy trình định lượng tạp B HPLC Phương pháp nghiên cứu Thực phản ứng thủy phân amid ester hóa để tổng hợp tạp chuẩn Các điều kiện nồng độ NaOH, thời gian phản ứng, dung môi tách chiết tạp A khảo sát Sau đó, kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm phương pháp sắc ký lớp mỏng, xác định nhiệt độ nóng chảy DSC Các sản phẩm xác định cấu trúc phương pháp quang phổ (IR, MS, NMR) Cuối cùng, quy trình định lượng tạp B HPLC xây dựng thẩm định dựa quy trình chuẩn điển Kết bàn luận Quy trình thủy phân sulpirid với dung dịch NaOH mol/L dùng để điều chế tạp A B Tạp A tách chiết diethyl ether cho hiệu suất 77,9% Tạp B tạp D đạt hiệu suất tổng hợp 97,86% 96,41% Các phương pháp kiểm tra sơ độ tinh khiết tạp cho kết tinh khiết Kết phương pháp quang phổ cho thấy cấu trúc tạp xác Quy trình định lượng tạp B xây dựng cho thấy kết tốt tính hệ thống, độ đặc hiệu, tính tuyến tính độ đính xác Kết luận Tìm điều kiện thuận lợi cho tổng hợp tinh chế tạp A, B D sulpirid Kết HPLC tạp B cho thấy độ tinh khiết cao đạt 99,63% ABSTRACT Master’s thesis – Academic course 2017 – 2019 Speciality: Drug quality control and toxicology – Code: 8720210 SYNTHESIS [(2RS)-1-ETHYLPYRROLIDINE-2-YL]METHANAMINE (IMPURITY A), METHYL 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOATE (IMPURITY B) VÀ ACID 2-METHOXY-5-SULFAMOYLBENZOIC (IMPURITY D) OF SULPIRID Cù Quang Phú Supervisor: Dr Võ Thị Cẩm Vân Assoc Prof Trần Thành Đạo Introduction Sulpirid is a benzamide drug used to treat schizophrenia The emergence of many types of drug preparations raises the question of drug and medicinal ingredient testing To provide sulpirid reference standards for drug testing, the objective of the project is to synthesize A, B and D impurities of sulpirid Subjects Examine and find favorable conditions for the synthesis of A, B and D impurities from sulpirid Develop and validate the impurity B quantitative process using HPLC Methods Perform amid and esterification hydrolysis to synthesize impurities Conditions such as NaOH concentration, reaction time, impurity A extract extraction solvent were investigated Then check the purity of the product by thin-layer chromatography, determination of melting point and DSC The products are structured by spectroscopic method (IR, MS, NMR) Finally, HPLC B quantification procedure was developed and validated based on the standard procedure of pharmacopoeia Results and discussion The hydrolysis of sulpirid with mol/L NaOH solution for preparation of impurities A and B Impurity A is extracted with diethyl ether for an efficiency of 77.9% B and D impurities have the combined efficiency of 97.86% and 96.41%, respectively The methods of preliminary examination of purity of all impurities give pure results The spectroscopic method results show that the structure of the inclusions is accurate The B quantative procedure has been developed and shows good results in terms of systematic, specificity, linearity and precision Conclusion Finding favorable conditions for synthesis and purification of A, B and D impurities of sulpirid HPLC results of B shows that 99.63% high purity MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH VẼ vii DANH MỤC SƠ ĐỒ ix ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ SULPIRID 1.1.1 Một số phương pháp định tính định lượng sulpirid .4 1.1.2 Tổng hợp sulpirid 1.2 CÁC TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA SULPIRID 1.2.1 Tạp A 1.2.2 Tạp B .10 1.2.3 Tạp D .10 1.3 MỘT SỐ PHẢN ỨNG TỔNG HỢPLỗi! Thẻ đánh dấu không xác định 1.3.1 Phản ứng tổng hợp tạp A .11 1.3.2 Phản ứng tổng hợp tạp B D 12 1.4 KIỂM NGHIỆM CÁC TẠP SULPIRID NGUYÊN LIỆU 13 1.4.1 Phương pháp kiểm nghiệm tạp A 13 1.4.2 Phương pháp kiểm nghiệm tạp chất liên quan sulpirid 14 1.5 CHẤT ĐỐI CHIẾU 15 1.5.1 Định nghĩa .15 1.5.2 Phân loại chất đối chiếu 16 1.5.3 Đánh giá chất đối chiếu 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU – ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .19 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.2.1 Phương pháp tổng hợp tạp A, B D .21 2.2.2 Đánh giá xác định độ tinh khiết sản phẩm tổng hợp .23 2.2.3 Xác định cấu trúc sản phẩm tinh chế 25 2.2.4 Xây dựng qui trình xác định độ tinh khiết tạp B phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .29 3.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT QUI TRÌNH TỔNG HỢP TẠP A 29 3.1.1 Quy trình tổng hợp tạp A 29 3.1.2 Xác định độ tinh khiết tạp A với phương pháp sắc ký lớp mỏng .31 3.1.3 Xác định cấu trúc tạp A 32 3.1.4 Kết đánh giá tạp A 39 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT QUY TRÌNH TỔNG HỢP TẠP D .40 3.2.1 Quy trình tổng hợp tạp D 40 3.2.2 Xác định độ tinh khiết tạp D 41 3.2.3 Xác định cấu trúc tạp D 42 3.2.4 Kết đánh giá tạp D 47 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT QUY TRÌNH TỔNG HỢP TẠP B 48 3.3.1 Quy trình tổng hợp tạp B 48 3.3.2 Xác định độ tinh khiết tạp B 49 3.3.3 Xác định cấu trúc tạp B 50 3.3.4 Thẩm định quy trình xác định độ tinh khiết tạp B HPLC 55 3.3.5 Kết đánh giá tạp B 61 CHƯƠNG BÀN LUẬN 62 4.1 QUY TRÌNH TỔNG HỢP TẠP A 62 4.2 QUY TRÌNH TỔNG HỢP TẠP D 63 4.3 QUY TRÌNH TỔNG HỢP TẠP B 64 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 65 5.1 KẾT LUẬN 65 5.2 KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC I DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 5-HT 5-hydroxytryptamine 5-hydroxytryptamin carbon-13 nuclear magnetic cộng hưởng từ hạt nhân resonance carbon 13 C13-NMR CĐ chuẩn độ (dung dịch) COSY correlation spectroscopy phổ COSY EtOAc ethylacetate ethylacetat GABA gamma-aminobutyric acid gamma-aminobutyric acid GC gas chromatography sắc ký khí GMP good manufacturing practices thực hành sản xuất tốt proton nuclear magnetic cộng hưởng từ hạt nhân resonance proton H1-NMR HPLC HSQC high-performance liquid chromatography heteronuclear single-quantum correlation spectroscopy sắc ký lỏng hiệu cao phổ HSQC IR infrared (spectroscopy) quang phổ hồng ngoại MS mass spectrometry khối phổ NMR nuclear magnetic resonance cộng hưởng từ hạt nhân ultraviolet/visible quang phổ tử ngoại- khả spectroscopy kiến retardation factor hệ số di chuyển UV-Vis Rf SKĐ sắc ký đồ SKLM sắc ký lớp mỏng TT thuốc thử WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC BẢNG Bảng 1.2 Các tạp chất liên quan sulpirid Bảng 1.3 Phương pháp kiểm nghiệm tạp sulpirid nguyên liệu .13 Bảng 1.4 Yêu cầu độ tinh khiết chất đối chiếu theo qui trình phân tích 15 Bảng 2.1 Hóa chất dung môi dùng dùng nghiên cứu 19 Bảng 2.2 Trang thiết bị dùng nghiên cứu 20 Bảng 2.3 Đỉnh IR đặc trưng cho số nhóm chức .25 Bảng 3.1 Kết phản ứng sulpirid với dung dịch NaOH nồng độ .29 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, ppm) tạp A 32 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3, ppm) tạp A 34 Bảng 3.4 Vị trí tương quan hydro carbon tạp A 36 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, ppm) tạp A 37 Bảng 3.6 Kết đánh giá tạp A 39 Bảng 3.7 Khảo sát tượng kết tủa hình thành theo pH 40 Bảng 3.8 Kết xác định nhiệt độ nóng chảy tạp D 41 Bảng 3.9 Các đỉnh đặc trưng phổ IR (KBr – cm-1) tạp D 43 Bảng 3.10 Dữ liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp D 44 Bảng 3.11 Dữ liệu phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, ppm) sản phẩm D 45 Bảng 3.12 Kết đánh giá tạp D 47 Bảng 3.13 Kết xác định nhiệt độ nóng chảy tạp B 49 Bảng 3.14 Các đỉnh đặc trưng phổ IR tạp B 51 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ 1H-NMR (500 Hz, DMSO-d6, ppm) tạp B .52 Bảng 3.16 Dữ liệu phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp B 53 Bảng 3.17 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống (n = 6) 55 Bảng 3.18 Nồng độ diện tích pic tương ứng tạp B 57 Bảng 3.19 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp với mẫu thử tạp B 59 Bảng 3.20 Độ xác trung gian tạp B .60 Bảng 3.21 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp (n=12) 60 Phụ lục Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp D Phụ lục Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp D Phụ lục 10 Phổ IR tạp B Phụ lục 11 Phổ MS tạp B Phụ lục 12 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp B Phụ lục 13 Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, ppm) tạp B Phụ lục 14 Khảo sát tính phù hợp hệ thống tạp B Phụ lục 15 Khảo sát độ lặp lại tạp B Phụ lục 16 Khảo sát độ xác trung gian tạp B Phụ lục 17 Khảo sát tính tuyến tính tạp B Phụ lục 18 Độ tan tạp B D Tạp B D Dung môi Lượng dung mơi hịa tan 1g (mL) Độ tan DMSO 900 Khó tan MeOH 3400 Rất khó tan DMSO 400 Khó tan MeOH 1500 Rất khó tan ... CH3/C1 1, 097 13 ,7 CH3/C1 5b 1, 55 9 -1, 6 25 27 ,9 C5 1, 696 -1, 756 22 ,5 C4 5a 1, 846 -1, 904 28 ,0 C5 3b 2 ,14 3 53 ,6 C3 2b 2, 21 2 48 ,5 C2 2, 288 -2, 338 66,0 CH/C6 7a 2, 668 44,3 C7 7b 2, 730 44,3 C7 2a 2, 818 48 ,5. .. [(2RS)- 1- ethylpyrrolidin- 2yl]methanamin methyl 2- methoxy- 5sulfamoylbenzoat ethyl 2- methoxy- 5sulfamoylbenzoat 2- methoxy- 5- sulfamoylbenzoic acid 2- methoxy- 5sulfamoylbenzamid N-[ [(2RS)- 1- ethyl -1- F C15H23N3O5S oxidopyrrolidin -2- yl ]methyl ]2- methoxy- 5sulfamoylbenzamid... 0 ,1 N [2] 1. 1 .2 Tổng hợp sulpirid 1. 1 .2 .1 Tổng hợp sulpirid từ 5- aminosulfosalicylic Sulpirid tổng hợp từ acid 5- aminosulfosalicylic phản ứng methyl hóa với dimethylsulfat tạo acid 2- methoxy- 5- sulfamoylbenzoic