Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng trong thực phẩm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI BÁO CÁO TỔNG KẾT KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI KH&CN CẤP ĐẠI HỌC QUỐC GIA Tên đề tài : Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dƣợc phẩm Mã số đề tài : QG.14.58 Chủ nhiệm đề tài : Nguyễn Thị Thanh Bình Hà Nội, 2016 PHẦN I THÔNG TIN CHUNG 1.1 Tên đề tài: Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dƣợc phẩm 1.2 Mã số: QG.14.58 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Chức danh, học vị, họ tên Đơn vị cơng tác Vai trị thực đề tài TS Nguyễn Thị Thanh Bình Khoa Y Dược, ĐHQGHN Chủ nhiệm đề tài ThS Vũ Đức Lợi Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thư kí đề tài PGS TS Nguyễn Thanh Hải Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thành viên PGS TS Vũ Mạnh Hùng Học Viện Quân Y Thành viên TS Trần Thị Tơn Hồi Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thành viên TS Vũ Thị Thơm Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thành viên TS Hoàng Thị Mỹ Nhung Khoa sinh, ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN Thành viên ThS Nguyễn Thị Hoàng Anh Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thành viên ThS Chử Thị Thu Huyền Khoa Y Dược, ĐHQGHN Thành viên 1.4 Đơn vị chủ trì: Khoa Y Dược - ĐHQGHN 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 04 năm 2014 đến tháng 04 năm 2016 1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng… năm… 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 04 năm 2014 đến tháng 04 năm 2016 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): (Về mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết nghiên cứu tổ chức thực hiện; Nguyên nhân; Ý kiến Cơ quan quản lý) 1.7 Tổng kinh phí đƣợc phê duyệt đề tài: 400 triệu đồng PHẦN II TỔNG QUAN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Viết theo cấu trúc báo khoa học tổng quan từ 6-15 trang (báo cáo đăng tạp chí khoa học ĐHQGHN sau đề tài nghiệm thu), nội dung gồm phần: Đặt vấn đề Bạc ngun tố có tính kháng khuẩn mạnh tự nhiên Đặc tính kháng khuẩn bạc bắt nguồn từ tính chất hóa học ion Ag+.1 Ion có khả liên kết mạnh với peptidoglican vách tế bào vi khuẩn gây phân giải màng tế bào Ag+ vào bên tế bào phản ứng với nhóm mercapto –SH phân tử enzyme chuyển hóa oxy, vơ hiệu hóa men dẫn đến ức chế q trình hơ hấp tế bào, làm cho vi khuẩn bị tê liệt Ag+ có khả liên kết với base DNA trung hịa điện tích gốc phosphate ngăn chặn q trình chép DNA Ngồi Ag+ cịn tương tác với nhóm mercapto bề mặt bên vi khuẩn làm bất hoạt enzyme phosphomannose isomerase gây biến tính ribosome dẫn đến ức chế tổng hợp protein.2,3,4 Do tác dụng theo nhiều chế khác mà tỉ lệ đề kháng vi khuẩn bạc thấp Trong lịch sử, bạc sử dụng làm thuốc nhiều dạng khác nhau,5 loại có ưu nhược điểm riêng Bạc nitrat cho nồng độ ion Ag+ cao dung dịch không ổn định Ở nồng độ cao 1%, dung dịch bạc nitrat có khả gây độc với tế bào mô; nitrat làm giảm khả liền vết thương bị khử thành nitrit tạo chất oxi hóa gây độc tế bào, giảm khả tái tạo tế bào biểu mơ Bạc protacgon có màu không ưa chuộng, độ ổn định thấp Bạc sulfadiazin sử dụng dạng kem khó vệ sinh vết thương, thời gian tác dụng ngắn Sản phẩm làm giảm khả tái tạo biểu mơ cịn độc tính tủy xương chủ yếu propylene glycol có dạng thuốc gây nên Nhờ ứng dụng cơng nghệ nano, tiểu phân nano bạc tổng hợp ứng dụng nhiều lĩnh vực y tế, môi trường, điện tử, 6,7,8 Các hạt nano bạc với lượng bề mặt lớn có khả giải phóng từ từ ion bạc vào dung dịch, nhờ nano bạc có hiệu lực khử khuẩn kéo dài so với keo bạc Tuy nhiên dạng tiểu phân nano bạc nguyên tố có nhược điểm khả giải phóng ion bạc thấp Gần nhà khoa học phát triển thành công thuốc sử dụng muối tan bạc dạng vi mạng kim loại cho mục đích chống nhiễm khuẩn Các thuốc có ưu điểm kiểm sốt tốc độ giải phóng ion bạc mức tối ưu, thời gian dài Các nghiên cứu theo hướng chưa triển khai nước Nhằm tạo tiền đề cho việc phát triển thuốc kháng khuẩn từ muối tan bạc, chúng tơi tiến hành đề tài “Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dược phẩm” Trong đó, hợp chất tập trung phát triển muối bạc clorid (AgCl) có độ tan và/hoặc độ ổn định cao so với nhiều hợp chất khác bạc AgI, AgBr, Ag2S, Ag2SO3, Ag2C2O4, AgN3, đồng thời, anion Cl- thành phần tự nhiên phổ biến thể nên tính tương hợp sinh học cao Mục tiêu Đề tài đặt mục tiêu tổng hợp tiểu phân nano AgCl dạng hỗn dịch dạng bột đông khơ, xác định số đặc tính lý hóa đánh giá độ ổn định hệ Dạng bào chế có độ ổn định cao khảo sát khả giải phóng ion Ag+ in vitro tác dụng kháng khuẩn số chủng vi sinh vật Từ xây dựng tiêu chuẩn sở sản phẩm điều chế được, làm tiền đề cho việc phát triển thuốc kháng khuẩn da Chaloupka K et al 2010 Trends Biotechnol 28 (11): 580 Ratte H T 1999 Environmental Toxicology and Chemistry 18: 89 Sambhy V et al 2006 Journal of the American Chemical Society 128: 9798 Castellano J J et al 2007 International Wound Journal 4: 114 Atiyeh B S et al 2007 Burns J Int Soc Burn Inj 33 (2): 139 Bai J et al 2008 Applied Surface Science 254: 4520 Vasilev K et al 2009 Expert Review of Medical Devices 6: 553 Alexander J W 2009 Surgical infections 10: 289 2 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.1 Tổng hợp tiểu phân nano AgCl Hỗn dịch AgCl tổng hợp từ phản ứng tạo kết tủa bạc nitrat (AgNO3; Tianjin Yinlida Chemicals Co Ltd) natri clorid (NaCl; Xilong Chemical Co Ltd) dung dịch nước chứa chất ổn định Phản ứng thực điều kiện tránh ánh sáng theo quy trình sau: hịa tan AgNO3 vào dung dịch nước chất ổn định khảo sát Nhỏ từ từ dung dịch NaCl 0,1 M vào, tốc độ nhỏ 0,5 ml/phút, vừa nhỏ vừa khuấy trộn tốc độ 500 vòng/phút Tiếp tục khuấy trì Bột đơng khơ thu từ hỗn dịch cách sử dụng máy Alpha Christ 1-2 LD Plus theo chương trình: đơng lạnh ở -80°C 12 giờ, sau đó đưa nhiệt độ -45°C, áp suất 0,01 mbar giữ 24 3.2 Xác định số đặc tính lý hóa hệ Đường kính tiểu phân, số đa phân tán (PDI) Zeta đo máy Zetasizer Nano ZS 90 Malvern, số khúc xạ 1,34, độ hấp thụ 0,001 Hình dạng tiểu phân xác định kí nh hiển vi điện tử quét (SEM) S4800-NIHE, điện thế gia tốc 5,0 kV Phổ hấp thụ UV-VIS đo máy Cary UV-60 với cuvet thạch anh cm vùng bước sóng từ 200 đến 800 nm Các mẫu pha loãng 10 lần nước cất So sánh phổ hấp thu UV-VIS mẫu trước sau chiếu sáng cho phép đánh giá độ bền mẫu ánh sáng Phổ nhiễu xạ tia X tủa thu ly tâm hỗn dịch nhiệt đợ phòng với tớc đợ 5.000 vịng/phút 20 phút bột đông khô xác định máy D8 Advanced Bruker Phổ thu giúp xác định chất hóa học tiểu phân Phổ hồng ngoại đo máy Shimadzu IRAffinity-1S FTIR, sử dụng phương pháp dập viên với KBr mẫu rắn đo trực tiếp mẫu lỏng So sánh phổ hồng ngoại sản phẩm thu với phổ hồng ngoại chất ổn định cho phép dự đoán tương tác tiểu phân AgCl chất ổn định Bạc toàn phần mẫu định lượng cách đo phổ hấp thụ nguyên tử với máy Shimadzu AA-6800, bước sóng 320,10 nm, dịng qua đèn 5,0 mA, lửa khơng khí/acetylen, tốc độ dịng khí 3.50 l/phút, tốc độ dòng acetylen 1.5 l/phút 3.3 Đánh giá khả giải phóng ion Ag+ Khả giải phóng ion Ag+ từ bột đông khô nano AgCl đánh giá in vitro vịng ngày, sử dụng màng thẩm tích dạng ống Spectral/Por® MWCO 12000-14000 daltons, bề rộng 25 mm Bột đông khô phân tán lại nước cất, hút lượng hỗn dịch cho vào túi tạo thành cách kẹp chặt hai đầu màng thẩm tích Phần chứa hỗn dịch ngập hoàn toàn dung dịch nhận Tại thời điểm xác định, lấy mẫu để định lượng bạc toàn phần đồng thời bổ sung vào dung dịch nhận lượng nước cất tương đương Khuấy trộn mạnh tránh ánh sáng suốt thời gian khảo sát Lượng ion bạc Qn (mg) giải phóng thời điểm tn tính cơng thức: Trong đó: V (ml): thể tích dung dịch nhận v (ml): thể tích lấy mẫu Cn (mg/ml): nồng độ dung dịch nhận thời điểm tn Ci (mg/ml): nồng độ dung dịch nhận thời điểm lấy mẫu ti 3.4 Bào chế thuốc mỡ thân nƣớc AgCl Thuốc mỡ không chứa hoạt chất: polyethylene glycol 4000 polyethylene glycol 600 (PEG 4000 PEG 600; Lotte Chemicals) với tỷ lệ khác đun nóng đến 55-60oC, khuấy trộn nhẹ PEG 4000 tan chảy hoàn toàn, tạo hỗn hợp suốt đồng Cho hỗn hợp ngưng tiếp xúc với nguồn nhiệt, tiếp tục khuấy trộn nhẹ đến hỗn hợp đạt nhiệt độ phòng Thuốc mỡ AgCl: Tiến hành tương tự quy trình mơ tả trên; bột đông khô nano AgCl phân tán đồng vào hỗn hợp PEG 4000 PEG 600 đun chảy trước cách ly khỏi nguồn nhiệt 3.5 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn Trong thử nghiệm đánh giá hoạt tính kháng khuẩn, mơi trường canh thang ni cấy vi khuẩn kiểm định có thành phần NaCl 0,5%, Pepton 0,5%, cao thịt 0,3%, nước cất vđ 100 ml Môi trường thạch thường chứa NaCl 0,5%, Pepton 0,5%, cao thịt 0,3%, thạch 1,6%, nước cất vđ 100ml 3.5.1 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn tiểu phân nano AgCl Tác dụng kháng khuẩn tiểu phân nano AgCl đánh giá phương pháp khuếch tán thạch chủng vi khuẩn Gram dương Staphylococcus aureus ATCC 1128 (S aureus) chủng vi khuẩn Gram âm Escherichia coli ATCC 25922 (E coli); nồng độ thử 460; 230; 115; 57,5 28,75 ppm Kháng sinh chứng chuẩn sử dụng benzathin penicillin (BZP, 20 IU/ml) vi khuẩn Gram dương streptomycin (STM, 20 IU/ml) vi khuẩn Gram âm pha nước cất Mẫu trắng dung dịch NaCl, NaNO3, PVA nước cất với tỉ lệ mẫu thử Mẫu so sánh bạc sulfadiazin (Macsen Laboratories) nồng độ 1000; 500; 250; 125 62.5 ppm pha cồn Vi khuẩn kiểm định cấy vào môi trường canh thang, ủ tủ ấm 37oC 18 đến nồng độ 108 tế bào/ml (kiểm tra pha lỗng dẫy dịch chuẩn) Mơi trường thạch thường vô trùng (tiệt trùng 120oC/20 phút) để nguội kết hợp làm lạnh 45-500C cấy giống vi khuẩn kiểm định với tỷ lệ 2,5 ml/100 ml Lắc tròn để vi khuẩn kiểm định phân tán đều, đổ vào đĩa Petri vơ trùng với thể tích 20 ml/đĩa đông lại Các khoanh giấy lọc (6,0-6,5 mm) vô trùng sấy khô tẩm lần với mẫu, sau lần tẩm sấy < 60oC đến khô hết dung môi, đặt lên bề mặt môi trường thạch chứa vi khuẩn kiểm định theo sơ đồ định sẵn Ủ đĩa Petri có mẫu tủ ấm 37oC 18-24 lấy đọc kết Đo đường kính vịng vơ khuẩn có thước kẹp Panmer độ xác 0,02 mm Số thí nghiệm làm song song Kết đánh giá dựa đường kính vịng vơ khuẩn độ lệch thực nghiệm 3.5.2 Xác định nồng độ kìm khuẩn/diệt khuẩn tối thiểu tiểu phân nano AgCl Nồng độ kìm khuẩn tối thiểu (MIC) nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) tiểu phân nano AgCl S aureus E coli xác định phương pháp pha loãng, dãy nồng độ khảo sát: 46; 23; 15,3; 11,5; 9,2 ppm Tiến hành sau: Chuẩn bị vào bình nón 100 ml 18 ml mơi trường thạch thường (khối lượng thành phần tính cho 20 ml), tiệt trùng 120oC 20 phút, để nhiệt độ giảm xuống 45-50oC cho thêm ml hỗn dịch nano AgCl gốc, lắc đổ đĩa Petri thu hộp Petri có hoạt chất độ pha loãng 1/10 Thêm ml hỗn dịch thử có độ pha lỗng 1/3 ta hộp Petri có nồng độ hoạt chất độ pha loãng 1/30 Cứ tiếp tục ta hộp có độ pha lỗng 1/40, 1/50, cịn bình cho 2,0 ml nước vơ trùng làm chứng âm Sấy 20 phút tủ ấm 37oC để làm khô bề mặt môi trường Làm thành dãy hộp Petri giống để thử cho S aureus E coli Môi trường canh thang chuẩn bị vào ống nghiệm ml, khử trùng 120 oC 20 phút Để nguội nhiệt độ phòng, cấy vòng que cấy S aureus, E coli vào ống ủ 18 37oC để thu hỗn dịch vi khuẩn có nồng độ 108 tb/ml (đánh giá pha loãng xác định CFU so với độ đục chuẩn BaCl2 1%) Dùng nước muối NaCl 0,9% vơ trùng pha lỗng để ống vi khuẩn có nồng độ 107 tb/ml, 106 tb/ml, 105 tb/ml Từ ống vi khuẩn có nồng độ thích hợp, dùng loop định lượng lấy 0,2 μL hỗn dịch tế bào vi khuẩn nồng độ khác (108, 107, 106, 105 tb/ml) cấy vào hộp Petri không chứa hoạt chất theo sơ đồ định sẵn (108, 107, 106, 106, 106, 105tb/ml) tạo thành vết bơi có đường kính khoảng cm, cấy vào hộp Petri chứa hoạt chất theo sơ đồ định sẵn (108, 106, 106, 106 tb/ml) Để khô 20 phút, lật úp hộp Petri lại để vào tủ ấm ủ 37oC 18 giờ, lấy đọc kết Nếu từ hộp Petri khơng có hoạt chất sau 18 ủ thấy vết cấy vi khuẩn phát triển bình thường, chứng tỏ vi khuẩn không bị chết nên tiếp tục đọc kết hộp mẫu thử Ở nồng độ hoạt chất mà 1-3 khuẩn lạc mọc xác định MIC, nồng độ hoạt chất thấp mà khơng có khuẩn lạc mọc nồng độ MBC 3.5.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn thuốc mỡ thân nước AgCl: Tác dụng kháng khuẩn thuốc mỡ AgCl đánh giá phương pháp khuếch tán thạch chủng vi khuẩn Gram dương Bacillus cereus ATCC 9946 (B cereus), Bacillus pumilus ATCC 6633 (B pumillus), Bacillus subtilis ATCC 10241 (B subtilis), Sarcina lutea ATCC 9341 (S lutea), Staphylococcus aureus ATCC 6538 (S aureus) chủng vi khuẩn Gram âm Escherichia coli ATCC 8739 (E coli), Salmonella typhimurium ATCC 13311 (S typ), Shigella flexneri DT 112 (S flexneri), Proteus mirabilis BV 108 (P mirabilis) Kháng sinh chứng chuẩn sử dụng benzathin penicillin (BZP, 20 IU/ml) vi khuẩn Gram dương streptomycin (STM, 20 IU/ml) vi khuẩn Gram âm Mẫu trắng thuốc mỡ không chứa hoạt chất với thành phần PEG 4000 PGE 600 mẫu thử, mẫu so sánh kem bạc sulfadiazin 1% (MediPharco TenaMyd Br s.r.l., lot 270515) Cách tiến hành, đọc đánh giá kết tương tự mục 3.5.1 Trong đó, nồng độ vi khuẩn kiểm định môi trường canh thang 107 tế bào/ml Môi trường thạch thường tiệt trùng 118 oC 30 phút Đối với mẫu thử, mẫu trắng mẫu so sánh, khoanh giấy lọc tẩm hai mặt với chế phẩm cho mặt khoanh giấy dính thuốc Tổng kết kết nghiên cứu 4.1 Khảo sát số yếu tố ảnh hƣởng đến trình tổng hợp tiểu phân nano AgCl 4.1.1 Ảnh hưởng của loại chất ổn định đến sự hì nh thành tiểu phân AgCl Trong thử nghiệm đầu tiên, tác nhân ổn định Beta-cyclodextrin (β-CD), Polyvinyl alcohol 5,56,2 cps (PVA), Polyethylene glycol 400 (PEG 400), Methocel E6, Carbomer 934 Polyvinylpyrrolidon K30 (PVP K30) sử dụng để điều chế hỗn dịch AgCl Lượng AgNO3 sử dụng 0,0204g (0,12 mmol) Số mol NaCl gấp đôi AgNO3 để đảm bảo chuyển toàn AgNO3 thành AgCl Tỉ lệ mol β-CD : AgNO3 : Khối lượng chất ổn định khác lấy β-CD (0,5448 g), chất tạo dung dịch có nồng độ khoảng 1,4% (kl/kl) Lượng nước cất sử dụng 35 ml để đảm bảo hịa tan hồn tồn chất có độ tan β-CD Đường kính, số đa phân tán Zeta hỗn dịch AgCl điều chế với chất ổn định khác thể bảng Bảng Đường kính, PDI thế Zeta của tiểu phân AgCl bào chế với số chất ổn đị nh Mẫu Chất ổn định M1 M2 M3 M4 M5 M6 β-CD PVA PEG 400 Methocel E6 Carbomer 934 PVP K30 Đƣờng kính (nm) 324,4 85,7 274,2 201,4 82,3 Peak (nm) 322,5 83,11 321,8 237,8 94,3 Peak (nm) 5062 5208 0 % Peak 95 96,9 100 100 100 % Peak 3,1 0 PDI 0,229 0,238 0,209 0,148 0,131 Thế Zeta (mV) -20,8 -13,2 -9,4 -14.7 -17,1 “-“: Không xác định tạo tủa to Kết quả cho thấy tiểu phân AgCl được bào chế với PVA (M2) PVP K30 (M6) có đường kính trung bì nh nhỏ đáng kể so với các chất ổn định còn lại Giá trị PDI mẫu nhỏ 0,5 cho thấy phân bố kích thước tương đối PDI của M M2 cao mẫu khác xuất hiện peak phụ khoảng 5000 5200 nm Thế Zeta âm hỗn dịch có thể là lớp ion âm Cl hấp phụ lên bề mặt tiểu phân Từ kết quả này, PVA PVP K30 chọn để khảo sát tiếp ảnh hưởng nồng độ chất ổn định đến đặc tí nh tiểu phân 4.1.2 Ảnh hưởng của nồng độ PVA đến sự hình thành tiểu phân AgCl Trong thử nghiệm , hỗn dịch AgCl được bào chế với lượng PVA tăng dần từ 0,0340 g đến 1,0897 g, thành phần khác giữ nguyên Đường kính tiểu phân , số đa phân tán , Zeta mẫu thể hiện bảng Bảng 2: Đường kính, PDI thế Zeta của tiểu phân AgCl nồng độ PVA khác Mẫu M7 M8 M9 M10 M11 M12 Lƣợng PVA (g) 0,0340 0,0681 0,1362 0,2724 0,5448 1,0896 Đƣờng kính (nm) 116,5 98,9 84,3 80,5 85,7 92,8 Peak (nm) 142,5 110,8 94,6 77,7 83,1 112,5 Peak (nm) 0 4910 5208 % Peak 100 100 98,8 100 96,9 100 % Peak 0 1,2 3,1 PDI 0,19 0,149 0,166 0,251 0,238 0,207 Thế Zeta (mV) -17,9 -17,1 -19,4 -21,7 -13,2 -20,1 Kết thu cho thấy lượng PVA tăng từ 0,0340 g đến 0,2724g, kích thước tiểu phân giảm dần Điều nồng độ PVA thấp , độ nhớt của môi trường nhỏ, khả bao phủ, tạo lớp áo ngăn cản các tiểu phân kết tụ PVA thấp nên kí ch thước tiểu phân tăng Tuy nhiên lượng PVA tăng từ 0,2724g đến 1,0896g, kích thước tiểu phân tăng dần Có thể lượng PVA nhiều làm tăng độ nhớt môi trường , giảm khả phân tán tiểu phân làm tăng kí ch thước tiểu phân PDI của các mẫu dao động từ 0,149 đến 0,251 cho thấy sự phân bố kí ch thước tiểu phân tương đới đờng đều Các hỗn dịch dự đốn có độ ổn định khơng cao (thế Zeta nằm khoảng ± 10 đến ± 30 mV) Tuy nhiên lâu dài, dùng phương pháp đơng khơ để tăng độ bền cho tiểu phân Trong mẫu khảo sát , M10 chứa 0,72% PVA có kí ch thước tiểu phân trung bì nh thấp nhất, giá trị tuyệt đối Zeta lớn nhất, có peak khoảng 80 nm 4.1.3 Ảnh hưởng của nồng độ PVP 3K0 đến hình thành tiểuphân AgCl Hỗn dịch AgCl được bào chế với lượng PVP K30 tăng dần từ 0,0340 g đến 1,0897 g, thành phần khác giữ nguyên Kết trình bày bảng Bảng 3: Đường kính, PDI thế Zeta của tiểu phân AgCl nồng độ PVP K30 khác Mẫu M13 M14 M15 M16 M17 M18 Lƣợng PVP (mg) 0,0340 0,0681 0,1362 0,2724 0,5448 1,0896 Đƣờng kính (nm) Peak (nm) Peak (nm) % Peak % Peak PDI Thế Zeta (mV) 106,7 80,68 75,68 81,11 82,3 87,26 119,7 91,51 85,22 92,87 94,28 104,6 0 0 0 100 100 100 100 100 100 0 0 0 0,152 0,162 0,114 0,145 0,131 0,175 -26 -13,6 -26,6 -7,19 -17,1 -18,9 Cũng PVA, sử dụng PVP làm chất ổn định, ban đầu kích thước tiểu phân giảm dần tăng nồng độ chất ổn định Tuy nhiên nồng độ PVP tăng cao lại làm tăng kích thước tiểu phân Trong mẫu khảo sát, M15 (chứa 0,36% PVP K30) mẫu tốt với kích thước tiểu phân trung bình nhỏ (75,68 nm), PDI nhỏ nhất (0,114) giá trị tuyệt đối Zeta lớn (-26,6 mV) Như ảnh hưởng số chất ổn định đến hình thành tiểu phân AgCl khảo sát Tiểu phân nano AgCl tổng hợp từ phản ứng tạo kết tủa AgNO3 NaCl dung dịch nước PVA (0,72%) PVP K30 (0,36%) có đường kính trung bình khoảng 80 nm, phân bố kích thước tương đối đồng Hai mẫu tiếp tục khảo sát 4.1.4 Lựa chọn chất ổn định công thức bào chế Để tăng lượng mẫu dùng cho thử nghiệm sau, mẫu M10 với chất ổn định PVA (0,72%) M15 với chất ổn định PVP K30 (0,36%) bào chế với lượng mẫu tăng gấp lần (mẫu M19 M20) Kích thước, số đa phân tán Zeta tiểu phân trình bày bảng Bảng 4: Đường kính, PDI thế Zeta của tiểu phân AgCl hỗn dịch sử dụng 0,72% PVA 0,36% PVP K30 với lượng mẫu tăng gấp lần Mẫu M19 M20 Đƣờng Peak Peak kính (nm) (nm) (nm) 88,24 97,96 284,8 296 78,25 Peak (nm) 5560 % peak 100 95,7 % peak 3,3 % peak 1,0 PDI 0,117 0,337 Thế Zeta (mV) -11,3 -38,1 Kết quả cho thấy M19 có kích thước tiểu phân PDI thay đổi khơng đáng kể so với M 10 M20 lại có kích thước tiểu phân PDI tăng cao rõ rệt so với M 15 Trong quá trì nh khuấy có kết tụ tạo tiểu phân kí ch thước lớn M 20 Từ đó, cơng thức M19 được lựa chọn để bào chế hỗn dịch nano AgCl Các đặc tính tiểu phân nano AgCl hỗn dịch bột đông khô thu từ hỗn dịch mô tả 4.2 Một số tí nh chất lý hóa của tiểu phân nano AgCl hỗn dịch 4.2.1 Kích thước, số đa phân tán Zeta Các tiểu phân nano AgCl có đường kính trung bình khoảng 80-100nm, phân bố kích thước tương đối hẹp với giá trị PDI thấp (0,1-0,3) Các tiểu phân Zeta khoảng -10 đến -20 mV 4.2.2 Hình dạng tiểu phân Ảnh chụp SEM hỗn dịch (hình 1) cho thấy các tiểu phân có nhiều hì nh dạng chủ yếu là hình lập phương Các tiểu phân khơng được sắc cạnh chúng được bao bọc bởi PVA Hình 1: Hình dạng tiểu phân AgCl quan sát kính hiển vi điện tử quét 4.2.3 Độ bền với ánh sáng Hỗn dịch AgCl cho tiếp xúc với tia UV 254 nm vịng Hỡn dị ch chuyển dần từ màu trắng ánh xanh sang màu tím than So sánh phổ hấp thụ UV-Vis hỗn dich sau bào chế sau chiếu sáng nhận thấy hỗn dịch nano AgCl bào chế hấp thụ mạnh vùng bước sóng nhỏ 300 nm Sau cho tiếp xúc với tia UV 254 nm, khả hấp thụ hỗn dịch vùng 300-600 nm tăng lên đáng kể AgCl không có khả hấp thụ bước sóng 400 nm vì có lượng vùng cấm (band gap) trực tiếp và gián tiếp lần lượt là 5,15 eV (≈ 240 nm) 3,25 eV (≈ 380 nm) Peak hấp thụ rộng ở vùng 300-600 nm xuất hiện cộng hưởng plasmon bề mặt , một hiện tượng hay gặp ở các tiểu phân nano kim loại có kí ch thước từ đến 100 nm.9 AgCl có thể chuyển thành Ag tiếp xúc với ánh sáng , bám tụ bề mặt tiểu phân gây hiện tượng này.10 Hình 2: Phở hấp thụ UV-VIS của hỗn dich sau bào chế (đường nét liền) sau chiếu UV 254 nm (đường nét đứt) 4.2.4 Bản chất hóa học tiểu phân Faculty thu of Chemistry, HUS, D8 ADVANCE-Bruker Trên phổ X ray tiểu phân có caVNU, ́ c peak xuất hiện ở - Sample AgCl 2θ: say 27,91°; 32,32°; 46,27°; 250 54,85°; 57,49°; 67,42°; 74,53°; 76,84° lần lượt tương ứng với (222), (400), (331) (420) xác nhận diện AgCl 240 230 (111), (200), (220), (311), 220 210 d=2.770 200 190 180 170 160 140 130 d=1.961 d=3.197 Lin (Cps) 150 120 110 100 90 40 d=1.239 50 d=1.271 60 d=1.387 70 d=1.601 d=1.672 80 30 20 10 20 30 40 50 60 70 80 2-Theta - Scale File: Duong BK mau AgCl say.raw - Type: 2Th/Th locked - Start: 20.000 ° - End: 80.000 ° - Step: 0.030 ° - Step time: s - Temp.: 25 °C (Room) - Time Started: s - 2-Theta: 20.000 ° - Theta: 10.000 ° - Chi: 01-085-1355 (C) - Chlorargyrite, syn - AgCl - Y: 82.94 % - d x by: - WL: 1.5406 - Cubic - a 5.54900 - b 5.54900 - c 5.54900 - alpha 90.000 - beta 90.000 - gamma 90.000 - Face-centered - Fm-3m (225) - Hình 3: Phổ X ray tiểu phân nano AgCl 4.2.5 Phổ hồng ngoại Trên phổ hồng ngoại hỗn dịch AgCl dung dịch PVA (hình 4) có đỉnh hấp thụ mạnh 3270-3280, 1630-1640, 680-710 405 cm-1 Tuy nhiên mẫu chứa hàm lượng nước lớn đỉnh hấp thụ không đặc trưng dẫn đến khó khăn cho việc so sánh phổ Mặt khác tiến hành ly tâm rửa để lấy tủa PVA bị rửa trơi với nước Do tương tác tiểu phân chất ổn định xác định dựa vào phổ hồng ngoại bột đông khô (mục 4.3.5) Henglein A 1993 Journal of Physical Chemistry 97(21): 5457 Seungwook K et al 2010 Bull Korean Chem Soc 31 (10): 2918 10 Hình 4: Phổ hồng ngoại hỗn dịch AgCl (a) dung dịch PVA (b) 4.3 Một số tí nh chất lý hóa của tiểu phân nano AgCl bột đơng khơ 4.3.1 Kích thước, Zeta Khi phân tán lại bột đông khô vào nước cất thu hỗn dịch chứa tiểu phân có đường kính trung bình khoảng 90-100 nm, phân bố kích thước tương giá trị PDI khoảng 0,2-0,3 Các tiểu phân Zeta khoảng -10 mV 4.3.2 Hình dạng tiểu phân: So sánh ảnh chụp SEM bột đông khô nano AgCl PVA đơng khơ nhận thấy các tiểu phân AgCl có dạng khối cầu thay dạng lập phương hỗn dịch Đó lớp PVA bao bọc bên tiểu phân AgCl tạo nên a b Hình 5: Hình ảnh chụp SEM bột đông khô nano AgCl (a) PVA đơng khơ (b) 4.3.3 Bản chất hóa học tiểu phân Trên phổ XRD bột đông khô thu có các peak xuất hiện ở 2θ: 27,97°; 32,32°; 46,24°; 54,79°; 57,55°; 67,63°; 74,50°; 76,54° lần lượt tương ứng với (111), (200), (220), (311), (222), (400), (331) (420) xác nhận diện AgCl Như q trình đơng khơ khơng làm thay đổi chất hóa học tiểu phân Bảng 8: Nồng độ kìm khuẩn diệt khuẩn tối thiểu tiểu phân nano AgCl S aureus E coli mật độ tế bào khác Chủng vi sinh vật S aureus E coli Mật độ tế bào (CFU/ml) 106 108 106 108 MIC (ppm) 9.2-11.5 11.5-15.3 9.2-11.5 9.2-11.5 MBC (ppm) 11.5 15.3 11.5 11.5 Tại mật độ 106 CFU/mL, tiểu phân nano AgCl có MIC 9.2-11.5 ppm MBC 11.5 ppm chủng vi khuẩn thử nghiệm Tại mật độ 108 CFU/mL, MIC MBC S aureus tăng lên giá trị E coli không đổi Điều lần chứng tỏ E coli nhạy cảm với tiểu phân nano AgCl S aureus, phù hợp với kết thu thử nghiệm đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 4.7 Tiêu chuẩn sở bột đông khô nano AgCl Từ kết phân tích thu chúng tơi xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm bột đông khô nano bạc clorid poly(vinyl alcohol) (phụ lục 2.5) với tiêu chí đặc trưng như: - Tính chất: xác định cảm quan, đánh giá trực tiếp bột đông khô hỗn dịch thu phân tán lại nước cất - Định tính: sử dụng phương pháp đo phổ hồng ngoại phổ nhiễu xạ tia X - Kích thước tiểu phân: xác định đường kính trung bình số đa phân tán phương pháp tán xạ ánh sáng - Độ hấp thụ ánh sáng: đo phổ hấp thụ UV-Vis hỗn dịch thu phân tán lại bột đông khô nước cất - Định lượng bạc toàn phần: Sử dụng phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử - Bảo quản: quy định bao bì, điều kiện nhiệt độ, ánh sáng - Loại thuốc 4.8 Bào chế thuốc mỡ thân nƣớc AgCl Để xác định công thức bào chế thuốc mỡ, tỷ lệ PEG 4000 : PEG 600 tăng dần từ : 10 đến : 10 Kết khảo sát cho thấy tỷ lệ PEG 4000 : PEG 600 : 10, hỗn hợp chất thích hợp nhất: mềm, mượt, màu trắng đục, bơi lên da tạo lớp mỏng đồng nhất, không màu Công thức lựa chọn để bào chế mẫu thuốc mỡ AgCl có nồng độ 600, 750 1300 ppm, tương đương 450, 560 980 ppm Ag Việc thêm AgCl không làm thay đổi thể chất thuốc mỡ so với ban đầu 4.9 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn thuốc mỡ thân nƣớc AgCl Tác dụng kháng khuẩn thuốc mỡ AgCl 600, 750 1300 ppm (TM 600, TM 750, TM 1300) so với kem bạc sulfadiazin 1% (SS) mẫu trắng (MT) số chủng vi khuẩn Gram dương Gram âm trình bày hình 11 bảng 14 Hình 11: Hoạt tính kháng khuẩn thuốc mỡ AgCl 600, 750, 1300 ppm kem bạc sulfadiazin 1% số chủng vi khuẩn Gram dương: (a) S aureus, (b) B subtilis, (c) B cereus, (d) B pumilus, (e) S lutea Gram âm: (f) E coli, (g) P mirabilis, (h) S flexneri, (i) S typhimurium Bảng 9: Đường kính vịng vơ khuẩn thuốc mỡ AgCl 600, 750, 1300 ppm kem bạc sulfadiazin 1% số chủng vi khuẩn Gram + Mẫu TM 600 TM 750 TM 1300 MT SS BZP Gram Mẫu TM 600 TM 750 TM 1300 MT SS STM S aureus D (mm) s 10,13 0,15 10,44 0,10 10, 80 0,35 0 9,48 0,38 25,64 0,92 E coli D (mm) s 10,17 0,15 9,76 0,36 9,70 0,36 0 8,01 0,01 9,03 0,39 B subtilis D (mm) s 12,30 0,87 10,89 0,35 10,81 0,60 8,33 0,12 9,25 0,06 15,91 0,71 P mirabilis D (mm) s 11,19 0,34 11,57 0,95 11,08 0,39 0 9,05 0,20 16,01 0,67 B cereus B pumilus S lutea D (mm) s D (mm) s D (mm) s 10,67 1,00 10,03 1,00 11,65 1,01 10,37 0,50 10,20 0,60 12,00 0,62 10,96 0,44 10,11 0,89 12,47 0,40 0 0 8,87 0,42 9,51 0,94 10,31 0,10 17,50 0,98 0 0 S flexneri S typhimurium D (mm) s D (mm) s 10,58 0,33 10,13 0,55 10,79 0,53 9,00 0,95 10,52 0,34 9,11 0,55 0 0 8,91 0,25 8,07 0,63 14,58 0,62 13,87 1,00 Có thể nhận thấy thuốc mỡ AgCl nồng độ khảo sát có hoạt tính kháng khuẩn tất chủng vi khuẩn thử nghiệm Đối với vi khuẩn Gram dương, tác dụng phân tán ngẫu nhiên, không biểu theo khuynh hướng rõ ràng vi khuẩn Gram âm, thuốc mỡ AgCl có nồng độ 600 ppm lại cho tác dụng tốt Điều liên quan đến khả phân tán bột đơng khơ nano AgCl, kích thước tiểu phân khả xâm nhập tiểu phân vào tế bào vi khuẩn, khả giải phóng ion Ag+ từ dạng bào chế nồng độ khác Mẫu trắng khơng có tác dụng Thuốc mỡ AgCl 600, 750 1300 ppm có tác dụng tốt hẳn so với kem bạc sulfadiazine 1% Đánh giá kết đạt đƣợc kết luận Như hỗn dịch nano AgCl tổng hợp thành công nhờ phản ứng tạo kết tủa AgNO NaCl tỷ lệ mol : dung dịch nước chứa 0,72% PVA nhiệt độ phòng So với 15 phương pháp sử dụng trước vi nhũ tương, sóng siêu âm, matrix-based,11,12,13 phương pháp phát triển nghiên cứu đơn giản an toàn Các tiểu phân nano AgCl hỗn dịch chủ yếu có dạng lập phương, đường kính trung bình khoảng 80-100 nm, phân bố kích thước tương đối đồng Bột thu đông khô hỗn dịch chứa tiểu phân nano AgCl dạng khối cầu, đường kính trung bình khoảng 90-100 nm, phân bố kích thước tương đối đồng Các đặc tính khác tiểu phân Zeta, hình dạng, độ bền với ánh sáng, chất hóa học, chất tương tác với chất ổn định xác định So với dạng hỗn dịch, bột đơng khơ nano AgCl có độ ổn định cao hơn, kích thước tiểu phân khơng thay đổi nhiều vịng tháng Tác dụng diệt khuẩn bạc hợp chất liên quan trực tiếp đến khả giải phóng ion Ag+ Tiểu phân nano AgCl điều chế có khả giải phóng tốt ion Ag+ in vitro vòng ngày, có tác dụng kháng khuẩn vi khuẩn Gram dương (S aureus) Gram âm (E Coli) với MIC MBC xác định, hứa hẹn tác nhân kháng khuẩn tốt, cho tác dụng kéo dài Thuốc mỡ thân nước AgCl 600, 750 1300 ppm bào chế từ bột đông khô nano AgCl tiêu chuẩn hóa cho tác dụng tốt hẳn kem bạc sulfadiazin 1% tất chủng vi khuẩn Gram dương Gram âm thử nghiệm Đây kết khả quan, cho phép tin tưởng vào đời thuốc kháng khuẩn ngồi da có hiệu lực cao từ AgCl Tóm tắt kết (tiếng Việt tiếng Anh) Trong nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế tiểu phân nano AgCl, xác định số đặc tính lý hóa theo dõi độ ổn định hệ Bột đông khơ nano AgCl, dạng có độ ổn định cao hơn, đánh giá khả giải phóng ion Ag+ in vitro, khảo sát tác dụng kháng khuẩn số chủng vi sinh vật xây dựng tiêu chuẩn sở Từ nguyên liệu thu phát triển thuốc mỡ thân nước AgCl nồng độ khác Thử nghiệm sinh học chứng tỏ chế phẩm có tác dụng kháng khuẩn cao hẳn so với kem bạc sulfadiazin 1% tất chủng vi khuẩn Gram dương Gram âm thử nghiệm In this study, we have developed a simple method for the preparation of AgCl nanoparticles Different characteristics and the stability of AgCl nanograins in suspension and in lyophilizied powder were investigated In vitro Ag+ liberation and antibacterial effects of lyophilizied AgCl nanoparticles, more stable form, against several species were evaluated From this standardized material were developed hydrophilic ointments at different concentration of AgCl These formulations showed antibacterial activities higher than 1% silver sulfadiazine cream against all tested Gram positive and Gram negative bacteria 11 Bagwe R .P and Khilar K C 1997 Langmuir 13: 6432 Reddy V et al 2007 J Mater Chem 17: 3603 13 Kim S et al 2010 Bull Korean Chem Soc 31: 2918 12 16 PHẦN III SẢN PHẨM, CÔNG BỐ VÀ KẾT QUẢ ĐÀO TẠO CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Kết nghiên cứu TT Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Tên sản phẩm Đăng ký Đạt đƣợc Quy trình tổng hợp tiểu phân nano chứa bạc Tạo tiểu phân kích thước nano Như đăng ký Hoạt tính kháng khuẩn tiểu phân nano chứa bạc Đánh giá 1-2 chủng vi sinh vật Như đăng ký Tiêu chuẩn sở hệ tiểu phân nano chứa bạc Các tiêu chí đặc trưng kích thước tiểu phân, định tính, định lượng Như đăng ký Quy trình bào chế thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600, 750, 1300 ppm (Sản phẩm đăng ký) Tạo sản phẩm chất thích hợp Hoạt tính kháng khuẩn (Sản phẩm ngồi đăng ký) thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600, 750, 1300 ppm Đánh giá chủng vi khuẩn Gram dương chủng vi khuẩn Gram âm 3.2 Hình thức, cấp độ công bố kết Ghi địa Đánh giá cảm ơn chung (Đạt, tài trợ Sản phẩm không TT đạt) ĐHQGHN quy định Cơng trình cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI/Scopus 1.1 Ngoc Duong Trinh, Thi Thanh Đã đăng Đúng quy Đạt Binh Nguyen, Thanh Hai Nguyen định Preparation and characterization of silver chloride nanoparticles as an antibacterial agent Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology (2015) 045011 (6pp) doi:10.1088/20436262/6/4/045011 SCOPUS 1.2 Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng xuất 2.1 2.2 Đăng ký sở hữu trí tuệ 3.1 3.1 Bài báo quốc tế không thuộc hệ thống ISI/Scopus 4.1 4.2 Bài báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chun ngành Tình trạng (Đã in/ chấp nhận in/ nộp đơn/ chấp nhận đơn hợp lệ/ cấp giấy xác nhận SHTT/ xác nhận sử dụng sản phẩm) 17 quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế 5.1 Trịnh Ngọc Dương, Chử Thị Thu Đã đăng Đúng quy Đạt Huyền, Nguyễn Thị Thanh Bình, định Phạm Thanh Phúc, Vũ Đức Lợi, Nguyễn Thanh Hải Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano bạc clorid Tạp chí Dược học 472 (2015) 60-64 5.2 Trịnh Ngọc Dương, Nguyễn Thị Đã đăng Đúng quy Đạt Thanh Bình, Chengsavang định Siatoutho, Nguyễn Thanh Hải Điều chế, theo dõi độ ổn định đánh giá khả giải phóng ion bạc in vitro bột đông khô nano bạc clorid Tạp chí Dược học 475 (2015) 14-18 Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng 6.1 6.2 Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN 7.1 7.2 Ghi chú: - Cột sản phẩm khoa học công nghệ: Liệt kê thông tin sản phẩm KHCN theo thứ tự - Các ấn phẩm khoa học (bài báo, báo cáo KH, sách chuyên khảo…) chấp nhận có ghi nhận địa cảm ơn tài trợ ĐHQGHN theo quy định - Bản phơ tơ tồn văn ấn phẩm phải đưa vào phụ lục minh chứng báo cáo Riêng sách chuyên khảo cần có phơ tơ bìa, trang đầu trang cuối có ghi thơng tin mã số xuất 3.3 Kết đào tạo TT Họ tên Nghiên cứu sinh Học viên cao học Phạm Thanh Phúc Chengsavang Thời gian kinh phí Cơng trình cơng bố liên quan Đã bảo tham gia đề tài (Sản phẩm KHCN, luận án, luận văn) vệ (số tháng/số tiền) tháng – 20 triệu Phạm Thanh Phúc Nghiên cứu điều chế đánh giá tác dụng kháng khuẩn tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Học viện Quân Y 2015 Chengsavang Siatoutho Nghiên cứu tháng – 20 triệu 18 Đã bảo vệ Sắp Siatoutho Dược sĩ đại học Nguyễn Phương Nam tháng bào chế gel chứa tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Đại học Dược Hà Nội 2016 bảo vệ Nguyễn Phương Nam Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano chứa bạc Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Đại học Dược Hà Nội 2015 Đã bảo vệ Ghi chú: - Gửi kèm photo trang bìa luận án/ luận văn/ khóa luận giấy chứng nhận nghiên cứu sinh/thạc sỹ học viên bảo vệ thành công luận án/ luận văn; - Cột cơng trình cơng bố ghi mục III.1 TT Sản phẩm Số lƣợng Số lƣợng đăng ký hồn thành Bài báo cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống 1 ISI/Scopus Sách chuyên khảo xuất ký hợp đồng xuất Đăng ký sở hữu trí tuệ Bài báo quốc tế khơng thuộc hệ thống ISI/Scopus Số lượng báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, 2 tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế Báo cáo khoa học kiến nghị, tư vấn sách theo đặt hàng đơn vị sử dụng Kết dự kiến ứng dụng quan hoạch định sách sở ứng dụng KH&CN Hỗ trợ đào tạo NCS Hỗ trợ đào tạo thạc sĩ 2 10 Hỗ trợ đào tạo dược sĩ đại học PHẦN V TÌNH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ TT Nội dung chi Kinh phí đƣợc duyệt (triệu đồng) Kinh phí thực (triệu đồng) Ghi Xây dựng đề cƣơng chi tiết 2 Thu thập viết tổng quan tài liệu 10 10 Điều tra, khảo sát, thí nghiệm, thu thập số liệu, nghiên cứu 150 150 30tr/ chuyên đề x chuyên đề Chi phí cho đào tạo 40 40 20tr/luận văn x luận văn Thuê, mua sắm trang thiết bị, nguyên vật liệu 98 98 Hội thảo khoa học, viết báo cáo 46 17,8 19 tổng kết, nghiệm thu Hội thảo 16 Viết báo cáo tổng kết 12 Kiểm tra tiến độ, nghiệm thu cấp sở, nghiệm thu cấp ĐHQGHN 18 1,8 Chi khác 54 54 Quản lý chung đề tài KHCN 30 30 15tr/năm x năm Thù lao trách nhiệm cho chủ trì đề tài 24 24 1tr/tháng x 24 tháng Tổng kinh phí 400 371,8 16 Chưa toán Đã toán báo cáo tiến độ Chưa toán nghiệm thu cấp sở, chưa nghiệm thu cấp ĐHQGHN Còn 28,2 tr PHẦN V KIẾN NGHỊ (về phát triển kết nghiên cứu đề tài; quản lý, tổ chức thực cấp) Từ kết thu được, đề nghị phát triển nghiên cứu theo hướng: - Theo dõi độ ổn định tiểu phân nano bạc clorid thời gian dài - Tăng quy mô tổng hợp tiểu phân nano bạc clorid - Đánh giá tác dụng sinh học khác tiểu phân nano bạc clorid độc tính tế bào lành, ảnh hưởng đến trình lành vết thương, vết bỏng, liền sẹo,… - Tiếp tục phát triển thuốc mỡ bạc clorid: theo dõi độ ổn định, đánh giá tác dụng kháng khuẩn in vivo, đánh giá khả giải phóng ion Ag+, tiến hành sản xuất thử nghiệm 20 PHẦN VI PHỤ LỤC (minh chứng sản phẩm nêu Phần III) Tài liệu thẩm định nghiệm thu cấp sở đề tài KHCN cấp ĐHQGHN mã số QG.14.58 1.1 Quyết định cử cán phụ trách thẩm định đề tài khoa học công nghệ cấp ĐHQGHN năm 2014 1.2 Phiếu thẩm định sở kết đề tài KHCN cấp ĐHQGHN 1.3 Quyết định thành lập Hội đồng nghiệm thu cấp sở đề tài cấp ĐHQGHN năm 2014 1.4 Biên họp hội đồng đánh giá nghiệm thu cấp sở đề tài cấp ĐHQGHN năm 2014 Kết nghiên cứu 2.1 Đường kính tiểu phân zeta mẫu M1-M20 2.2 Đường chuẩn định lượng bạc tồn phần 2.3 Quy trình tổng hợp bột đơng khơ nano bạc clorid 5,6% poly(vinyl alcohol) – mẻ 1,840 g 2.4 Quy trình bào chế thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600 ppm, 750 ppm, 1300 ppm – mẻ 140 g 2.5 Tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm bột đông khô nano bạc clorid poly(vinyl alcohol) 2.6 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn tiểu phân nano bạc clorid 2.7 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600 ppm, 750 ppm, 1300 ppm Hình thức, cấp độ cơng bố kết 3.1 Cơng trình cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI/Scopus Ngoc Duong Trinh, Thi Thanh Binh Nguyen, Thanh Hai Nguyen Preparation and characterization of silver chloride nanoparticles as an antibacterial agent Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology (2015) 045011 (6pp) doi:10.1088/2043-6262/6/4/045011 SCOPUS 3.2 Bài báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế 3.2.1 Trịnh Ngọc Dương, Chử Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Thanh Bình, Phạm Thanh Phúc, Vũ Đức Lợi, Nguyễn Thanh Hải Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano bạc clorid Tạp chí Dược học 472 (2015) 60-64 3.2.2 Trịnh Ngọc Dương, Nguyễn Thị Thanh Bình, Chengsavang Siatoutho, Nguyễn Thanh Hải Điều chế, theo dõi độ ổn định đánh giá khả giải phóng ion bạc in vitro bột đơng khơ nano bạc clorid Tạp chí Dược học 475 (2015) 14-18 21 Kết đào tạo 4.1 Học viên cao học 4.1.1 Phạm Thanh Phúc Nghiên cứu điều chế đánh giá tác dụng kháng khuẩn tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Học viện Quân Y 2015 - Quyết định giao đề tài - Trang bìa luận văn - Chứng nhận tốt nghiệp 4.1.2 Chengsavang Siatoutho Nghiên cứu bào chế gel chứa tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Đại học Dược Hà Nội 2016 - Quyết định giao đề tài - Trang bìa luận văn 4.2 Dƣợc sĩ đại học Nguyễn Phương Nam Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano chứa bạc Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Đại học Dược Hà Nội 2015 - Trang bìa khóa luận Thuyết minh đề cƣơng đề tài nghiên cứu đƣợc phê duyệt 22 PHỤ LỤC: TÀI LIỆU THẨM ĐỊNH VÀ NGHIỆM THU CẤP CƠ SỞ Đề tài KHCN cấp ĐHQGHN mã số QG.14.58 1.1 Quyết định cử cán phụ trách thẩm định đề tài khoa học công nghệ cấp ĐHQGHN năm 2014 1.2 Phiếu thẩm định sở kết đề tài KHCN cấp ĐHQGHN 1.3 Quyết định thành lập Hội đồng nghiệm thu cấp sở đề tài cấp ĐHQGHN năm 2014 1.4 Biên họp hội đồng đánh giá nghiệm thu cấp sở đề tài cấp ĐHQGHN năm 2014 23 PHỤ LỤC: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Đường kính tiểu phân zeta mẫu M1-M20 2.2 Đường chuẩn định lượng bạc tồn phần 2.3 Quy trình tổng hợp bột đơng khơ nano bạc clorid 5,6% poly(vinyl alcohol) – mẻ 1,840 g 2.4 Quy trình bào chế thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600 ppm, 750 ppm, 1300 ppm – mẻ 140 g 2.5 Tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm bột đông khô nano bạc clorid poly(vinyl alcohol) 2.6 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn tiểu phân nano bạc clorid 2.7 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn thuốc mỡ thân nước bạc clorid 600 ppm, 750 ppm, 1300 ppm 24 PHỤ LỤC: HÌNH THỨC, CẤP ĐỘ CƠNG BỐ KẾT QUẢ 3.1 Cơng trình cơng bớ tạp chí khoa học quốc tế theo hệ thống ISI/Scopus Ngoc Duong Trinh, Thi Thanh Binh Nguyen, Thanh Hai Nguyen Preparation and characterization of silver chloride nanoparticles as an antibacterial agent Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology (2015) 045011 (6pp) doi:10.1088/2043- 6262/6/4/045011 SCOPUS 3.2 Bài báo tạp chí khoa học ĐHQGHN, tạp chí khoa học chuyên ngành quốc gia báo cáo khoa học đăng kỷ yếu hội nghị quốc tế 3.2.1 Trịnh Ngọc Dương, Chử Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Thanh Bình, Phạm Thanh Phúc, Vũ Đức Lợi, Nguyễn Thanh Hải Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano bạc clorid Tạp chí Dược học 472 (2015) 60-64 3.2.2 Trịnh Ngọc Dương, Nguyễn Thị Thanh Bình, Chengsavang Siatoutho, Nguyễn Thanh Hải Điều chế, theo dõi độ ổn định đánh giá khả giải phóng ion bạc in vitro bột đông khô nano bạc clorid Tạp chí Dược học 475 (2015) 14-18 25 PHỤ LỤC: KẾT QUẢ ĐÀO TẠO 4.1 Học viên cao học 4.1.1 Phạm Thanh Phúc Nghiên cứu điều chế đánh giá tác dụng kháng khuẩn tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Học viện Quân Y 2015 - Quyết định giao đề tài - Trang bìa luận văn - Chứng nhận tốt nghiệp 4.1.2 Chengsavang Siatoutho Nghiên cứu bào chế gel chứa tiểu phân nano bạc clorid Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học Đại học Dược Hà Nội 2016 - Quyết định giao đề tài - Trang bìa luận văn 4.2 Dƣợc sĩ đại học Nguyễn Phương Nam Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano chứa bạc Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Đại học Dược Hà Nội 2015 - Trang bìa khóa luận 26 PHỤ LỤC: THUYẾT MINH ĐỀ CƢƠNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ĐƢỢC PHÊ DUYỆT 27 Hà Nội, ngày tháng năm Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Đơn vị chủ trì đề tài (Thủ trưởng đơn vị ký tên, đóng dấu) 28 ... kháng khuẩn từ muối tan bạc, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dược phẩm? ?? Trong đó, hợp chất tập trung phát triển muối bạc clorid (AgCl) có độ... THÔNG TIN CHUNG 1.1 Tên đề tài: Nghiên cứu điều chế tiểu phân nano chứa bạc để ứng dụng dƣợc phẩm 1.2 Mã số: QG.14.58 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Chức danh, học vị,... chứa bạc Tạo tiểu phân kích thước nano Như đăng ký Hoạt tính kháng khuẩn tiểu phân nano chứa bạc Đánh giá 1-2 chủng vi sinh vật Như đăng ký Tiêu chuẩn sở hệ tiểu phân nano chứa bạc Các tiêu chí