ĐÊ TÀI : ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ HEO

Dịch tả heo là bệnh truyền nhiễm nguy hiểm do vi rút Pestivirut gây ra, bệnh xảy ra trên heo ở mọi lứa tuổi nhưng nặng nhất là heo con theo mẹ và heo sau cai sữa. Bệnh tập trung nhiều vào thời điểm chuyển mùa, tỷ lệ bệnh và chết rất cao. Vì vậy, bà con chăn nuôi cần nhận biết chính xác và đầy đủ về bệnh để có biện pháp phòng ngừa hiệu quả.

ĐÊ TÀI 09 ĐÊ TÀI 09 : : ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ HEO HEO Giáo viên hướng dẫn : Giáo viên hướng dẫn : Sinh viên thực hiện: Sinh viên thực hiện: TS.NGUYỄN NGỌC HẢI NGUYỄN XUÂN KHÁNH TS.NGUYỄN NGỌC HẢI NGUYỄN XUÂN KHÁNH Lớp: DH06SH Lớp: DH06SH MSSV: 06126055 MSSV: 06126055 I. I. Đặt vấn đề Đặt vấn đề  Nghành chăn nuôi hiện nay đóng vai trò rất Nghành chăn nuôi hiện nay đóng vai trò rất quan trọng trong việc cung cấp thực phẩm quan trọng trong việc cung cấp thực phẩm cho nhu cầu trong nước và xuất khẩu. cho nhu cầu trong nước và xuất khẩu.  Xuất phát từ tình hình trên, nên việc nghiên Xuất phát từ tình hình trên, nên việc nghiên cứu các phương pháp phát hiện bệnh là cứu các phương pháp phát hiện bệnh là yêu cầu cấp thiết để phòng chống bệnh, yêu cầu cấp thiết để phòng chống bệnh, giảm tổn thất trong chăn nuôi, giữ cho đàn giảm tổn thất trong chăn nuôi, giữ cho đàn heo mắc bệnh ở tỷ lệ thấp nhất. heo mắc bệnh ở tỷ lệ thấp nhất. II. II. Giới thiệu về dịch tả heo Giới thiệu về dịch tả heo a. a. Phân lo iạ Phân lo iạ  H ọ H ọ Flavividae Flavividae  Gi ng ố Gi ng ố Pestivirus Pestivirus  Virus d ch ị Virus d ch ị tả tả heo r t g n v m t c u ấ ầ ề ặ ấ heo r t g n v m t c u ấ ầ ề ặ ấ trúc gen và c u trúc kháng nguyên ấ trúc gen và c u trúc kháng nguyên ấ v i các loài nh sau:ơ ư v i các loài nh sau:ơ ư  Bovine diarrhea Bovine diarrhea virus virus  Equine arteritis Equine arteritis virus virus  Border diesease Border diesease virus virus b.Hình thái, cấu tạo b.Hình thái, cấu tạo : :  Kích thước nhỏ 40-50 nm Kích thước nhỏ 40-50 nm  Có dạng hình cầu với cấu trúc Có dạng hình cầu với cấu trúc nucleocapsid đối xứng 20 mặt nucleocapsid đối xứng 20 mặt  Bộ gen virus là một chuỗi RNA, độ dài Bộ gen virus là một chuỗi RNA, độ dài khoảng 12.5kb, một khung đọc mở (ORF) khoảng 12.5kb, một khung đọc mở (ORF) c. c. Tính chất lý hóa Tính chất lý hóa  Virus dịch tả heo được coi là virus có sức Virus dịch tả heo được coi là virus có sức đề kháng yếu. đề kháng yếu.  Ổn định ở PH 5-10, ngoài khoảng PH này Ổn định ở PH 5-10, ngoài khoảng PH này thì virus bị phá hủy nhanh. thì virus bị phá hủy nhanh.  Những chất tan lipid như ether, chloroform Những chất tan lipid như ether, chloroform và deoxycholate làm bất hoạt virus nhanh. và deoxycholate làm bất hoạt virus nhanh. d.Tính chất kháng nguyên d.Tính chất kháng nguyên  Chỉ có một typ kháng nguyên dịch tả heo, Chỉ có một typ kháng nguyên dịch tả heo, tuy nhiên có hai nhóm phụ tuy nhiên có hai nhóm phụ  Nhóm phụ A: bao gồm những chủng Nhóm phụ A: bao gồm những chủng cường độ chủng độc lực thấp, chủng biến cường độ chủng độc lực thấp, chủng biến đổi. đổi.  Nhóm phụ B: chủng độc lực thấp gây xáo Nhóm phụ B: chủng độc lực thấp gây xáo trộn sinh sản. trộn sinh sản. III.Nguyên lý sử dụng bộ Kit III.Nguyên lý sử dụng bộ Kit Elisa: Elisa: Gồm 4 bước: Gồm 4 bước: 1. 1. Các đối chứng và mẫu được cho vào Các đối chứng và mẫu được cho vào những giếng có kháng thể đơn dòng kháng những giếng có kháng thể đơn dòng kháng HCV (p125). HCV (p125). 2. 2. rửa để loại bỏ những đoạn không liên kết, rửa để loại bỏ những đoạn không liên kết, thêm vào kháng huyết thanh thỏ kháng thêm vào kháng huyết thanh thỏ kháng HCV. HCV. 3.Tiến hành rửa lần hai, sau đó cho kháng thể 3.Tiến hành rửa lần hai, sau đó cho kháng thể dê kháng kháng thể thỏ có gắn enzyme dê kháng kháng thể thỏ có gắn enzyme peroxidase cho phép phát hiện dạng kháng peroxidase cho phép phát hiện dạng kháng huyết thanh thỏ kháng HCV theo phức hợp: huyết thanh thỏ kháng HCV theo phức hợp: (Mab) - (Ag HCV [p125]) - (Rabbit Ig anti-HCV (Mab) - (Ag HCV [p125]) - (Rabbit Ig anti-HCV [p125]) - (Goat Ab anti-rabbit Ig /peroxidase). [p125]) - (Goat Ab anti-rabbit Ig /peroxidase). 4.Sau bước rửa thứ 3, enzyme gắn với lại 4.Sau bước rửa thứ 3, enzyme gắn với lại conjugate được phát hiện bởi việc thêm vào conjugate được phát hiện bởi việc thêm vào cơ chất nó làm biến đổi thành sản phẩm có cơ chất nó làm biến đổi thành sản phẩm có màu màu IV.Phương pháp tiến hành IV.Phương pháp tiến hành : : 1.Phân phối đối chứng và mẫu 1.Phân phối đối chứng và mẫu 2.Thêm kháng huyết thanh 2.Thêm kháng huyết thanh 3.Thêm conjugate 3.Thêm conjugate 4.Phát hiện 4.Phát hiện 5.Xử lý số liệu 5.Xử lý số liệu 1.Phân phối đối chứng và mẫu 1.Phân phối đối chứng và mẫu a, a, Phân phối đối chứng Phân phối đối chứng : :  Đối chứng được sẵn sàng sử dụng. Đối chứng được sẵn sàng sử dụng.  Lắc ống đựng đối chứng, cho 100µ đối Lắc ống đựng đối chứng, cho 100µ đối chứng âm vào giếng A1, A2, cho 100µl đối chứng âm vào giếng A1, A2, cho 100µl đối chứng dương vào giếng B1, B2. chứng dương vào giếng B1, B2. . ĐÊ TÀI 09 ĐÊ TÀI 09 : : ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ HEO HEO Giáo viên hướng dẫn : Giáo. nuôi, giữ cho đàn heo mắc bệnh ở tỷ lệ thấp nhất. heo mắc bệnh ở tỷ lệ thấp nhất. II. II. Giới thiệu về dịch tả heo Giới thiệu về dịch tả heo a. a. Phân