Nghiên cứu quy trình tổng hợp apogossypol từ hạt bông việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN VĂN TUYÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TỔNG HỢP APOGOSSYPOL TỪ HẠT BÔNG VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC KỸ THUẬT HÓA HỌC HÀ NỘI – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI -NGUYỄN VĂN TUYÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TỔNG HỢP APOGOSSYPOL TỪ HẠT BƠNG VIỆT NAM Chun ngành : Kỹ thuật hóa học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS VŨ ĐÌNH TIẾN HÀ NỘI - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu đưa luận văn hoàn toàn trung thực, dựa kết thu trình nghiên cứu riêng tôi, không chép kết nghiên cứu tác giả khác Tơi xin chịu hồn toàn trách nhiệm nội dung khoa học đề tài Hà Nội, ngày 04 tháng 12 năm 2018 NGƯỜI THỰC HIỆN Nguyễn Văn Tuyên i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập, giảng dạy nhiệt tình thầy cô trường Đại học Bách khoa Hà Nội, tơi học xong chương trình khóa học thạc sĩ Để có thành cơng này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc giảng viên trường Đại học Bách khoa Hà Nội, đặc biệt thầy giáo TS Vũ Đình Tiến người hướng dẫn khoa học Thầy giúp đỡ tận tình suốt q trình nghiên cứu hồn thiện luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy anh chị phịng thí nghiệm mơn Máy Thiết bị hóa chất – dầu khí, Viện Kỹ thuật Hóa học, Đại học Bách khoa Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình Cũng này, xin chân thành cảm ơn Viện sau Đại học - Đại học Bách Khoa Hà Nội, quan tâm tạo điều kiện cho thời gian học tập nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 04 tháng 12 năm 2018 Học viên thực Nguyễn Văn Tuyên ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii MỤC LỤC HÌNH vi MỤC LỤC BẢNG viii LỜI MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ GOSSYPOL 1.1 Tổng quan Gossypol 1.1.1 Đặc tính lý hóa học Gossypol 1.1.2 Ứng dụng Gossypol 1.1.2.1 Tác dụng chống thai nam 1.1.2.2 Tác dụng chống oxy hóa 1.1.2.3 Tác dụng chống virus, vi sinh vật động vật nguyên sinh 1.1.2.4 Đặc tính giảm cholesterol huyết tương 10 1.1.2.5 Tác dụng chống ung thư 10 1.2 Nguyên liệu chứa Gossypol 13 1.3 Kỹ thuật chiết Gossypol 15 1.3.1 Chiết Gossypol phương pháp chiết Carruth 15 1.3.2 Chiết Gossypol phương pháp chiết Shoxlet 16 1.3.3 Phương pháp tinh chế Gossypol 18 1.4 Kết chiết Gossypol 19 1.4.1 Kết chiết Gossypol phương pháp Carruth .19 iii 1.4.2 Kết chiết Gossypol phương pháp chiết Shoxlet 19 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN VỀ APOGOSSYPOL 22 2.1 Tổng quan Apogossypol 22 2.1.1 Cấu tạo Apogossypol .22 2.1.2 Đặc tính hóa lý Apogossypol 23 2.1.3 Một số dẫn xuất Apogossypol 23 2.3 2.1.3.1 Apogossypol hexaacetate .23 2.1.3.2 Apogossypol hexamethyl ether .24 2.1.3.3 Desapogossypolone tetramethyl ether 24 2.1.3.4 Axit Apogossypolic 24 2.2.3.5 Desapogossypol .25 So sánh hoạt tính Apogossypol Gossypol 26 2.3.3 So sánh q trình động dược học chuyển hóa 26 2.3.4 So sánh hoạt tính gây độc tế bào 28 2.3.5 So sánh hoạt tính kháng virus .30 CHƯƠNG 3: KỸ THUẬT TỔNG HỢP APOGOSSYPOL 42 3.1 Tổng quan phương pháp tổng hợp, phân tích 42 3.1.1 Một số phương pháp tổng hợp Apogossypol 42 3.1.1.1 Tổng hợp Apogossypol theo phương pháp Clark 42 3.1.1.2 Tổng hợp Apogossypol theo phương pháp Preston Larry 43 3.1.2 Phương pháp sắc ký mỏng phân tích Apogossypol .43 3.2 Đề xuất phương pháp cải tiến tổng hợp Apogossypol 46 3.3 Hóa chất thiết bị thực nghiệm 47 3.3.1 Nguyên liệu hóa chất nghiên cứu .47 iv 3.3.2 3.4 Dụng cụ thí nghiệm .47 Quy trình thực nghiệm 48 3.4.1 Quy trình tổng hợp Apogossypol 48 3.4.2 Kiểm tra cấu trúc xác định hàm lượng sản phẩm Apogossypol 52 3.5 Kết thực nghiệm 53 3.6 Nhận xét thảo luận 54 KẾT LUẬN .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 v MỤC LỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Cấu tạo Gossypol Hình 1.2: Các dạng đồng phân quang học Gossypol Hình 1.3: Các dạng đồng phân Gossypol .5 Hình 1.4: Lát cắt ngang hạt bơng với tuyến chất mầu 14 Hình 1.5: Sơ đồ quy trình chiết Gossypol phương pháp Carruth .15 Hình 1.6: Dịch chiết sau chiết lần…………………………………….…… 16 Hình 1.7: Sau quay .16 Hình 1.8: Sơ đồ quy trình chiết Gossypol phương pháp Shoxlet .17 Hình 1.9: Chiết Shoxlet…………… 18 Hình 1.10: Sau chiết n-hexan .17 Hình 1.11: Sau chiết axeton …………………… 19 Hình 1.12: Sau quay .18 Hình 1.13: G-AA kết tinh lần đầu…………………… .19 Hình 1.14: G-AA kết tinh lại 18 Hình 2.1: Cấu tạo Gossypol 22 Hình 2.2: Cấu tạo Apogossypol 22 Hình 2.3: Các dạng đồng phân quang học Apogossypol 22 Hình 2.4: Cấu trúc Apogossypol hexaacetate 23 Hình 2.5: Apogossypol hexamethyl ether 24 Hình 2.6: Desapogossypolone tetramethyl ether 24 Hình 2.7: Axit Apogossypolic 25 vi Hình 2.8: Phản ứng tổng hợp Desapogossypol 25 Hình 2.9: Nghiên cứu mơ hình phân tử khả liên kết với Bcl-xL .33 Hình 2.10: Phân tích cạnh tranhliên kết đồng phân Apogossypol dựa phân cực huỳnh quang .34 Hình 2.11: Các thử nghiệm tế bào .35 Hình 2.12: Đồng phân Apogossypol thay vị trí 5, 5’ BI79D10 .36 Hình 2.13:Tổng hợp dẫn xuất Apogossypol thay vị trí 5, 5’ 36 Hình 2.14: Quan điểm Stereo khả liên kết Apogossypol (A) BI79D10 ( B) vào ràng buộc rãnh Bcl-X peptide BH3 .37 Hình 3.1: Hình ảnh chất mỏng TLC điển hình,cách xác định giá trị Rf 45 Hình 3.2: Q trình hịa tan NaOH 48 Hình 3.3: Làm lạnh dung dịch NaOH .48 Hình 3.4: Cân Gossypol acetic 48 Hình 3.5: Hịa tan Gossypol NaOH 49 Hình 3.6: Làm lạnh axit 49 Hình 3.7: Làm nguội dung dịch sau hòa tan .50 Hình 3.8: Q trình trung hịa axit H2SO4 50 Hình 3.9: Dung dịch thu 50 Hình 3.10: Quá trình lọc Apogossypol .51 Hình 3.11: Apogossypol thu 51 Hình 3.12: Một số kết kiểm tra sắc ký mỏng 52 vii MỤC LỤC BẢNG Trang Bảng 1.1: Kết thu từ phương pháp Carruth .19 Bảng 1.2: Kết chiết thu từ quy trình Shoxlet 19 Bảng 2.1: Độ ổn định plasma, độ ổn định microsome, tính thấm tế bào dẫn xuất apogossypol thay vị trí 5, 39 Bảng 3.1: Số liệu khối lượng Apogossypol thu .53 Bảng 3.2: Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tổng hợp Apogossypol 53 viii 3.3 Hóa chất thiết bị thực nghiệm 3.3.1 Nguyên liệu hóa chất nghiên cứu Hóa chất sử dụng q trình tổng hợp: - Natri hydroxit khan tinh khiết (>96%) từ XiLong Scientific Co China - Axit sulfuric (98%) từ XiLong Scientific Co China - Nước cất - Khí N2 Dung môi mỏng: - Methanol Nguyên liệu để tổng hợp apogossypol gossypol acetic chiết tách từ hạt Việt Nam 3.3.2 Dụng cụ thí nghiệm Dụng cụ thí nghiệm gồm có: - Ống phản ứng cổ (Đức), septum, bóng chứa khí N2, cốc có mỏ, phễu, xilanh, bình lọc, phễu lọc, giấy lọc - Cân phân tích - Bếp điện, khuấy từ - Bơm chân không - Tủ lạnh chứa sản phẩm - Giấy sắc kí mỏng - Đèn chiếu tia UV 47 3.4 Quy trình thực nghiệm 3.4.1 Quy trình tổng hợp apogossypol Lựa chọn quy trình cải tiến để tổng hợp apogossypol Cân lượng NaOH khan cân phân tích, hịa tan nước cất Dung dịch natri hydroxit thu có nồng độ khoảng 14 M, đổ vào ống phản ứng cổ Cả hệ khuấy từ với tốc độ 450 vòng/ phút làm lạnh hỗn hợp đá + muối để hạ nhiệt độ Dẫn khí N2 vào để đuổi hết khơng khí ngồi, sau thay bóng bay chứa khí N2 Hình 3.2: Q trình hịa tan NaOH Hình 3.3: Làm lạnh dung dịch NaOH Cân lượng xác định gossypol acetic đổ cẩn thận vào ống phản ứng: Hình 3.4: Cân gossypol acetic 48 Septum nút kín vào, mở van nối với bóng N2 Duy trì nhiệt độ làm lạnh (khoảng -200C) Thay nước làm lạnh bên dung dịch dầu tải nhiệt Đun nóng đến 900C trì nhiệt độ, tiếp tục khuấy với tốc độ 450 vòng/ phút Thời gian phản ứng khoảng 60 phút (kể từ nhiệt độ dầu đạt 900C) Hình 3.5: Hòa tan gossypol NaOH Trong thời phản ứng, pha loãng dung dịch acid sulfuric 98%, làm lạnh nước Hình 3.6: Làm lạnh axit 49 Khi phản ứng hoàn thành, tiến hành làm nguội dung dịch chuyển từ dầu tải nhiệt sang nước đá + muối Hình 3.7: Làm nguội dung dịch sau hịa tan Dung dịch acid sulfuric hút xilanh nhỏ chậm qua septum Vào cuối bước này, lượng kết tủa trắng xuất quan sát Hình 3.8: Quá trình trung hịa H2SO4 50 Hình 3.9: Dung dịch thu Chuẩn bị giấy phếu lọc, dùng bơm hút chân không để thu hồi kết tủa Dùng nước cất để rửa toàn lượng muối tạp chất cịn lại Hình 3.10: Q trình lọc Apogossypol Giữ ngun áp suất chân khơng sấy khơ apogossypol Hình 3.11: Apogossypol thu Dựa quy trình cải tiến, tiếp tục tiến hành tổng hợp apogosspypol ta thay đổi số điều kiện khác dung môi, nhiệt độ tiến hành thí nghiệm, tốc độ nhỏ axit Từ đó, đánh giá lựa chọn điều kiện tối ưu cho trình tổng hợp 51 - Đối với dung môi: tiến hành thay đổi nồng độ NaOH ( lớn 14 M, nhỏ 14 M), thay đổi lượng axit H2SO4 cho vào - Nhiệt độ tiến hành thí nghiệm: tiến hành nhiệt độ 90oC, nhiệt độ thấp 90oC, cao 90oC - Tốc độ nhỏ axit H2SO4: nhanh, chậm 3.4.2 Kiểm tra cấu trúc xác định hàm lượng sản phẩm apogossypol Sử dụng phương pháp sắc ký mỏng kiểm tra phản ứng xảy hoàn toàn hay chưa xác định định tính tạp chất có apogossypol Hịa tan lượng nhỏ gossypol tinh khiết axeton để làm mẫu so sánh Hòa tan lượng nhỏ apogossypol thu sau tổng hợp cần phân tích axetol Chấm dung dịch mẫu dung dịch so sánh lên mỏng Đặt mỏng vào cốc chứa dung dich rửa giải methanol vết chấm mẫu bờ cạnh phía đáy bình Sau thời gian, bỏ mỏng sấy khô chiếu tia có bước sóng thích hợp để nhìn thấy vết chất Hình 3.12: Một số kết kiểm tra sắc ký mỏng sau thu sản phẩm Gossypol Apogossypol 52 3.5 Kết thực nghiệm Bảng 3.1: Số liệu khối lượng apogossypol thu STT Khối lượng gossypol (mg) Khối lượng apogossypol (mg) 800,1 600 799,8 567,2 801,2 530,4 800 585 800,07 550 Trung bình 800,234 566,52 Khi thay đổi điều kiện tiến hành ta thu số kết bảng 3.2 Bảng 3.2: Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tổng hợp Apogossypol Yếu tố ảnh hưởng CNaOH = 12 M Kết quan sát Gossypol hòa tan NaOH NaOH (CNaOH ) CNaOH = 14 M CNaOH = 15 M Gossypol hịa tan tốt khơng xuất vết đen Xuất vết đen gossypol bị chuyển hóa 53 V= ml V=9,8 ml H2SO4 ( CH2SO4= 11 M) V= 12 ml Nhiệt độ ( oC) Tốc độ nhỏ Không tạo kết tủa apogossypol Xuất tinh thể apogossypol nhiên không lọc Xuất tinh thể apogossypol, trình lọc tinh thể dễ dàng V= 14 ml Gây hỏng apogossypol T= 800C Thời gian hòa tan gossypol lâu T= 90oC Gossypol tan tốt T=950C Gossypol bị phân hủy giọt/giây Hình thành tinh thể nhỏ không lọc H2SO4 giọt/giây Tinh thể bị vón cục 3.6 Nhận xét thảo luận Lượng apogossyol thu hồi theo công thức: H m 100% M (3.2) Trong đó: m: lượng apogossypol thu hồi M: lượng gossypol thu hồi theo lý thuyết Thay số vào công thưc (3.2): H 566,52 100%  88,56% 800, 234  462,542 578, 6064 54 Tổng hợp apogossypol theo phương pháp cải tiến thu kết tốt Lượng apogossypol thu hồi lớn (gần 90%) so với phương pháp tổng hợp khác tương đối tiến hành kiểm tra sắc kí mỏng Việc thay đổi điều kiện tổng hợp apogossypol cho ta thấy yếu tố ảnh hưởng trực tiếp đến trình tổng hợp apogossypol cần quan tâm đến tiến hành tổng hợp Từ xác định điều kiện tối ưu cho trình tổng hợp 55 KẾT LUẬN Gossypol hợp chất polyphenol tự nhiên có nhiều hoạt tính sinh dược học giá trị tác dụng tránh thai cho nam, chống virus, chống vi sinh vật động vật nguyên sinh, chống oxi hóa chống ung thư Gossypol tồn hai dạng đồng phân (-)-gossypol (+)-gossypol Trong đó, (-)-gossypol cho thấy có nhiều hoạt tính sinh học mạnh hẳn (+)-gossypol hoạt tính tránh thai, chống HIV chống ung thư Gossypol tồn chủ yếu tuyến chất mầu bên nhân hạt bông, nguyên liệu phổ biến Với tác dụng dược học nguồn nguyên liệu phổ biến Hiện nghiên cứu chiết tách gossypol từ nhân hạt quan tâm nhiều giới nước ta Tiến hành nghiên cứu thực nghiệm chiết gossypol từ hạt Việt Nam theo hai phương pháp: phương pháp chiết Shoxlet, phương pháp chiết Carruth Qua thực nghiệm chiết theo hai phương pháp này, ta rút kết luận: Với quy trình chiết Shoxlet, dầu hạt bơng loại bỏ gần hồn tồn Tuy nhiên, trình làm thực nghiệm, lượng sản phẩm thu tương đối ít, khó ứng dụng quy mơ lớn Với quy trình chiết Carruth đơn giản hơn, tốn dung mơi, lẫn tạp chất, tiết kiệm thời gian so với quy trình chiết Shoxlet cho sản phẩm có hàm lượng gossypol cao hiệu suất cao so với quy trình chiết Shoxlet Vì vậy, quy trình chiết Carruth nghiên cứu để phát triển tiếp, đưa quy mô công nghiệp Qua việc nghiên cứu thực nghiệm gossypol, ta thấy tác dụng gossypol đặc biệt y học Gossypol có tiềm lớn việc chữa trị ung thư Quy trình tách chiết gossypol nghiên cứu Tuy nhiên, gossypol có hai nhóm aldehyde phản ứng, aldehyde gossypol làm cho hợp chất hoạt động trở lại, làm giảm hiệu nồng độ thuốc hoạt tính gây độc tính lên tế bào Vì vậy, nghiên cứu tổng hợp chất khác hai nhóm andehit mà giữ nguyên đặc tính tốt gossypol tiến hành Chất tạo 56 định apogossypol, hợp chất thiếu aldehyde, giữ nguyên tác dụng gossypol, trì hoạt động chống lại protein họ Bcl-2 chống apoptotic in vitro tế bào mà không gây độc lên tế bào Thực nghiên cứu thực nghiệm phương pháp tổng hợp apogossypol theo hai phương pháp Clark Preston Larry Kết không thu kết tinh apogossypol Vì vậy, tiến hành nghiên cứu tìm điều kiện tiến hành thí nghiệm, quy trình tiến hành phản ứng thay đổi nhiệt độ, nồng độ dung môi, tốc độ khuấy, nhỏ axit, từ tìm điều kiện thích hợp Kết nghiên cứu đề xuất phương pháp cải tiến tổng hợp apogossypol: -Nhiệt độ phản ứng: 900C -Điều kiện PH= 14 -Thời gian phản ứng: 60 phút -Tốc độ khuấy: 450 vịng/phút Thay chiết Apogossypol dung môi hữu phương pháp Clark Preston – Larry, nhóm sử dụng phương pháp lọc rửa kết tủa apogossypol nước lạnh sấy khô sản phẩm sấy chân không Thu hồi lượng apogossypol lớn, với hiệu suất thu hồi gần 90% Sản phẩm thu đem kiểm tra phương pháp sắc kí mỏng, cho thấy thực nghiệm theo phương pháp apogossypol thu tương đối Có thể làm sở đưa vào nghiên cứu sản xuất đáp ứng thị trường 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Thị Xoan, Nghiên cứu phân lập tác dụng gây độc gossypol từ hạt số dòng tế bào ung thư Luận văn Thạc sĩ khoa học, Trường Đại học khoa học tự nhiên, 2010 Hồng Ngun Thùy, Nghiên cứu quy trình chiết tách Gossypol từ hạt Luận văn tốt nghiệp thạc sỹ, Trường Đaị học Dược Hà Nội, 2011 TS Đồn Duy Tiên, Xây dựng quy trình chiết xuất tách đồng phân quang học gossypol từ lồi bơng vải thuộc chi Gossypium trồng Việt Nam, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Hà Nội,2014 Larry J Powers; Preston H Dorsett (1979), Synthesis of deuterated and tritiated apogossypol,Vol 2: 309 – 313 Adams, Roger; Butterbaugh, D J (1938), Structure of Gossypol X Apogossypol and its Degradation Products, Chem Soc, Vol 6: 2174 – 2180 Jun Wei, Shinichi Kitada, Michele F Rega, Aras Emdadi, Hongbin Yuan, Jason Cellitti, John L Stebbins, Dayong Zhai, Jiazhi Sun, Li Yang, Russell Dahl (2010), Apogossypol Derivatives as Antagonists of Anti-apoptotic Bcl-2 Family Proteins, Mol Cancer Ther, (4): 904 – 913 Jia L1, Coward LC, Kerstner-Wood CD, Cork RL, Gorman GS, Noker PE, Kitada S, Pellecchia M, Reed JC (2007), Comparison of pharmacokinetic and metabolic profiling among gossypol, apogossypol and apogossypol hexaacetate, 61 (1): pp 63 – 73 E.P Clark (1928), Studies on gossypol IV Apogossypol,Journal of the Franklin Institute, Vol.206: pp.395 – 396 58 Preston H Dorsett; Edwin E Kerstine; Larry J Powers (1975), Antiviral activity of gossypol and apogossypol, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.64: pp.1973 – 1975 10 David a Shirley and Peggy w Lley (1960), Some New Reactions and Reaction Products of Apogossypol and Desapogossypol, J Org Chem, 28(5), pp 1391 – 1394 11 Jun Wei, Michele F Rega, Shinichi Kitada,1 Hongbin Yuan, Dayong Zhai, Prabhakar Risbood, Herbert H Seltzman, Charles E Twine, John C Reed,1 and Maurizio Pellecchia1, Synthesis and evaluation of Apogossypol Atropisomers as Potential Bcl-xL Antagonists, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 273: pp 107- 113 12 Kenar A J (2006), Reaction Chemistry of Gossypol and Its Derivatives, JAOCS, 83 (4), pp 269-302 13 Kenar A J (2006), Reaction Chemistry of Gossypol and Its Derivatives, JAOCS, 83 (4), pp 269-302 14 Jaroszewski J W., Strom-Hansen T., Hansen L L (1992), Optical Stability of Gossypol, Chirality, 4, pp 216-221 15 Scudiero D A., Shoemaker R H., Kenneth D P., Monks A., Tierney S., Nofziger T H., Currens M J., Seniff D., Boyd M R (1988), Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines, Cancer Res., 48, pp 4827-4833 16 Chang J S., Hsu Y L., Kuo P L., Chiang L C., and Lin C C (2004) “Upregulation of Fas/Fas ligand-mediated apoptosis by gossypol in an immortalized human alveolar lung cancer cell line”, Clin Exp Pharmacol Physiol., 31, 716–722 17 Ligueros M., Jeoung D., Tang B., Hochhauser D., Reidenberg M M., Sonenberg, M (1997), Gossypol inhibition of mitosis, cyclin D1 and Rb protein 59 in human mammary ancer cells and cyclin-D1 transfected human fibrosarcoma cells, Br J Cancer, 76, pp 21-28 18 Van Poznak C., Seidman A D., Reidenberg M M., Moasser M M., Sklarin N., Van Zee K., Borgen P., Gollub M., Bacotti D., Yao T J., Bloch R., Ligueros M., et al (2001), Oral gossypol in the treatment of patients with refractory metastatic breast cancer: A phase I/II clinical trial, Breast Cancer Res Treat., 66, pp 239-248 19 Ueno H., Sahni M K., Segal S J., Koide S S (1988), Interaction of gossypol with sperm acromolecules and enzymes, Contraception, 37, pp.333341 20 Pitot H, Saleh M., Holmlund J., Maleski J., Forero A (2007), Extended phase I trial of the oral pan-Bcl-2 inhibitor AT-101 by multiple dosing scheldules in patients with advanced cancer, Proc Am Sco Clin Oncol., 25 (18S), pp 35-83 21 Ergun A M., Konac E., Erbas D., Ekmekci A (2004), Apoptosis and nitric oxide release induced by thalidomide, gossypol and dexamethasone in cultured human chronic myelogenous leukemic K-562 cell, Cell Biol Internat., 28, pp 237-242 22 Hron R J., Koltun P S., Pominski J., Abraham G (1987), The Potential Commercial Aspects of Gossypol, JAOCS, 64 (9), pp 1315-1319 23 Stipanovic D R., Puckhaber S L., Bell A A., Percival E A., Jacobs J (2005), Occurrance of (+) and (-) gossypol in wild species of cotton and in Gossypium hirsutum Var marie-galante (Watt) Hutchinson, J Agric Food Chem., 53 (16), pp 6266-6271 24 Le Blanc M., Russo J., Kudelka A P., Smith, J A (2002), An in vitro study of inhibitory activity of gossypol, a cottonseed extract, in human carcinoma cell lines, Pharmacol Res, 46, 551-555 60 25 Hron R J.,Kim L H., Calhoun C M., Fisher S G (1999), Determination of (+)- (-)- and Total Gossypol in Cottonseed by High-Performance Liquid Chromatography, JAOCS, 76 (11), pp 1351-1355 26 Cass B Q., Bassi L A., Matlin A S (1999), First direct resolution of gossypol enantiomers on a chiral high-performance liquid chromatography phase, Chirality, 11, pp 46-49 27 H D Royce, J R Harrison and E R Hann, Cotton-Root Bark as a Source of Gossypol, Oil & Soap, Vol 18 (1941), pp.27-29 61 ... 1.4.3 Nhận xét thảo luận Nghiên cứu quy trình chiết xuất gossypol từ nhân hạt luồi G hirsutum Đã sử dụng quy trình: quy trình 1- chiết Soxhlet, quy trình 2– chiết lạnh Cả quy trình cho gosspol dạng... NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TỔNG HỢP APOGOSSYPOL TỪ HẠT BƠNG VIỆT NAM Chun ngành : Kỹ thuật hóa học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS VŨ ĐÌNH TIẾN HÀ NỘI - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu. .. pháp nghiên cứu chiết tách gossypol, tổng hợp apogossypol Kế thừa phát huy cơng trình nghiên cứu ngồi nước, hướng dẫn, giúp đỡ tận tình TS VŨ ĐÌNH TIẾN, tơi xin thực đề tài: “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH