Xác định kháng nguyên phản ứng miễn dịch của bệnh nhân ung thư gan

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -o0o - ĐẶNG NGỌC BÁCH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI CẦU GAI DIADEMA SAVIGNYI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÀ NỘI – 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐẶNG NGỌC BÁCH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC LỒI CẦU GAI DIADEMA SAVIGNYI Chun ngành : Hóa hữu Mã số : 60440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Hoài Nam PGS.TS Phan Minh Giang HÀ NỘI – 2014 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phòng Dược liệu biển, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, khuôn khổ Đề tài nghiên cứu định hướng ứng dụng: “Nghiên cứu quy trình phân lập hoạt chất có tác dụng diệt tế bào ung thư, kháng viêm kháng khuẩn từ số loài thuộc lớp Sao biển (Asteroidea), Hải sâm (Holothuroidea), Cầu gai (Echinoidea) thuộc ngành Da gai (Echinodermata) biển Việt Nam” Trước tiên, với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Hồi Nam, Viện Hóa Sinh Biển PGS TS Phan Minh Giang, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội, tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực luận văn tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Hóa sinh biển đặc biệt tập thể cán phòng Dược liệu biển tạo điều kiện, nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Hóa hoc - Trường ĐHKHTN, ĐHQGHN tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập trường Xin cảm ơn tất bạn bè động viên giúp đỡ em trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp Trong q trình làm luận văn tốt nghiệp cố gắng chắn tránh thiếu sót Vì kính mong nhận ý kiến đóng góp, bảo q thầy Hà Nội, tháng 10 năm 2014 Học viên Đặng Ngọc Bách LỜI CAM ĐOAN Luận văn “Nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học lồi cầu gai Diadema savignyi” cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn trực tiếp TS Nguyễn Hồi Nam PGS TS Phan Minh Giang Tơi xin cam đoan Các số liệu, kết luận văn trung thực, không trùng lặp chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Hà Nội, tháng 10 năm 2014 Học viên Đặng Ngọc Bách MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Những nghiên cứu tổng quát cầu gai 1.1.1 Động vật học 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Các loài cầu gai dùng làm thực phẩm 1.1.4 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học cầu gai 1.2 Steroit từ số loài sinh vật biển Việt Nam CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng nghiên cứu 12 2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 13 2.2.1 Sắc kí lớp mỏng (TLC) 13 2.2.2 Sắc kí lớp mỏng điều chế 13 2.2.3 Sắc kí cột (CC) 13 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 13 2.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học 14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 3.1 Kết 16 3.1.1 Xử lý mẫu tạo dich chiết tổng 16 3.1.2 Phân lập hợp chất 17 3.2 Thảo luận 20 3.2.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất 20 3.2.1.1 Hợp chất DS1: 5α,8α-epiđioxi-cholest-6-en-3β-ol 20 3.2.1.2 Hợp chất DS2: Cholest-5-en-3β,7α-điol 25 3.2.1.3 Hợp chất DS3: Cholest-5-en-3β,7β-điol 28 3.2.1.4 Hợp chất DS4: 7β-metoxicholest-5-en-3β-ol 32 3.2.1.5 Hợp chất DS5: cholest-5-en-3β-ol 36 3.2.1.6 Hợp chất DS6: Natri cholest-5-en-3β-sunfat 40 3.2.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất 45 KẾT LUẬN 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Tên đầy đủ CC Column Chromatography COSY Correlation Spectroscopy DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer SKLM Sắc kí lớp mỏng TLC Thin Layer Chromatography NMR Nuclear Magnetic Resonance 13 Cacbon-13-Nuclear Magnetic Resonance C-NMR Spectroscopy H-NMR H-1H COSY Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy 10 HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence 11 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ Hình 1.1 Cầu gai S droebachiensis Hình 1.2 Cầu gai D setosum Hình 2.1 Cầu gai Diadema savignyi 12 Sơ đồ 3.1 Sơ đồ phân lập hợp chất từ loài Cầu gai Diadema savignyi 19 Hình 3.1.a Phổ 1H-NMR DS1 20 Hình 3.1.b Cấu trúc hóa học DS1 20 13 Hình 3.1.c Phổ C-NMR DS1 21 Hình 3.1.d Phổ HMQC DS1 21 Bảng 3.1 Các số liệu phổ NMR DS1 22 Hình 3.1.e Phổ HMBC DS1 23 Hình 3.1.f Phổ COSY DS1 24 Hình 3.1.g Các tương tác COSY (▬) HMBC () DS1 24 Hình 3.2.a Phổ 1H-NMR DS2 25 Hình 3.2.b Cấu trúc hóa học DS2 25 Hình 3.2.c Phổ 13C-NMR DS2 26 Hình 3.2.d Phổ HMQC DS2 26 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR DS2 27 Hình 3.2.e Phổ HMBC DS2 28 Hình 3.2.f Các tương tác HMBC DS2 28 Hình 3.3.a Phổ 1H-NMR DS3 29 Hình 3.3.b Cấu trúc hóa học DS3 29 13 Hình 3.3.c Phổ C-NMR DS3 30 Hình 3.3.d Phổ HMQC DS3 30 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR DS3 31 Hình 3.3.e Phổ HMBC DS3 32 Hình 3.3.f Các tương tác HMBC DS3 32 Hình 3.4.a Phổ 1H-NMR DS4 33 Hình 3.4.b Cấu trúc hóa học DS4 33 13 Hình 3.4.c Phổ C-NMR DS4 34 Hình 3.4.d Phổ HMQC DS4 34 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR DS4 35 Hình 3.4.e Phổ HMBC DS4 36 Hình 3.4.f Các tương tác HMBC DS4 36 Hình 3.5.a Phổ 1H-NMR DS5 37 Hình 3.5.b Cấu trúc hóa học DS5 37 Hình 3.5.c Phổ 13C-NMR DS5 38 Hình 3.5.d Phổ HMQC DS5 38 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR DS5 39 Hình 3.5.e Phổ HMBC DS5 40 Hình 3.5.f Các tương tác HMBC DS5 40 Hình 3.6.a Phổ 1H-NMR DS6 41 Hình 3.6.b Cấu trúc hóa học DS6 41 Hình 3.6.c Phổ 13C-NMR DS6 42 Hình 3.6.d Phổ HMQC DS6 42 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR DS6 43 Hình 3.6.e Phổ HMBC DS6 44 Hình 3.6.f Các tương tác HMBC DS6 44 Bảng 3.7 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào 46 Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ LỜI MỞ ĐẦU Diện tích bề mặt trái đất vào khoảng 510.072.000 km2 đại dương bao phủ 3/4 tổng diện tích bề mặt Đại dương không nơi sinh sống hàng ngàn lồi động vật biển khác mà cịn ẩn chứa vơ vàn điều bí ẩn chờ đợi người tìm hiểu khám phá Việc nghiên cứu khai thác sử dụng nguồn lợi từ biển ln chủ đề nóng bỏng nhà khoa học khắp giới Trong năm gần đầy Việt Nam có cơng trình khoa học nghiên cứu sinh vật biển, xu hướng mở tìm kiếm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao từ sinh vật biển Từ nghiên cứu thành phần, cấu trúc tổng hợp nên hợp chất có giá trị y học cao Việt Nam quốc gia nằm vùng nhiệt đới, có điều kiện thuận lợi cho sinh vật phát triển tạo phong phú nhiều loài động thực vật nhiều hệ sinh thái khác Hơn với bờ biển kéo dài thềm lục địa rộng lớn nơi cất giấu kho nguyên liệu khoáng vật khổng lồ dạng hòa tan, nắng đọng đáy vùi kín đại dương Trong đa dạng sinh vật biển lồi cầu gai loài nhận quan tâm đặc biệt nhà khoa học nước Ở Việt Nam cầu gai khơng có giá trị ẩm thực mà mang giá trị y học Các cơng trình khoa học nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học giới cho thấy hợp chất tách từ cầu gai có hoạt tính sinh học cao kháng khuẩn kháng nấm, kháng viêm đặc biệt khả ức chế tế bào gây ung thư Tuy nhiên nước ta thông tin khoa học lồi cịn nhiều hạn chế, chưa có nghiên cứu cụ thể làm sáng tỏ giá trị dược dụng dược liệu quý Do đó, nội dung nghiên cứu đề tài nhằm phát thành phần hóa học hoạt tính sinh học quý báu góp phần minh chứng giá trị dược dụng loài Kết nghiên cứu làm tăng giá trị khoa học thực tiễn góp phần khai thác bảo tồn cách có hợp lý nguồn tài nguyên cầu gai phong phú đất nước Đặng Ngọc Bách Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.4.e Phổ HMBC DS4 HO OMe Hình 3.4.f Các tương tác HMBC DS4 So sánh số liệu phổ 13C-NMR DS4 (Bảng 3.4) với số liệu tương ứng 7β-metoxicholest-5-en-3β-ol [15] cho phép xác định vị trí nhóm metoxi xuất thêm C-7 Ngồi ra, phân tích chi tiết tương tác HMBC (Hình 3.4.f) cho phép xác định hợp chất DS4 7β-metoxicholest-5-en-3β-ol 3.2.1.5 Hợp chất DS5: cholest-5-en-3β-ol Các phổ 1H-NMR 13 C-NMR có dạng tương tự phổ DS2 DS3 Sự khác biệt dễ nhận thấy tín hiệu nhóm oximetin phổ DS5 Đặng Ngọc Bách 36 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.5.a Phổ 1H-NMR DS5 Hình 3.5.b Cấu trúc hóa học DS5 Đặng Ngọc Bách 37 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.5.c Phổ 13C-NMR DS5 Hình 3.5.d Phổ HMQC DS5 Đặng Ngọc Bách 38 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR DS5 a δHb,d dạng pic (J, Hz) C a δC δCb,c 37,5 37,33 1,05/1,82 m 3, 5, 10, 19 31,6 31,70 1,51/1,81 m 3, 71,3 71,85 3,49 m 42,4 42,38 2,22/2,27 m 141,2 140,82 - 121,3 121,77 5,32 dd (1,5; 3,0) 32,0 31,97 1,41/1,99 m 32,0 31,97 1,47 m 50,5 50,20 0,90 m 10 36,5 36,57 - 11 21,2 21,16 1,42/1,48 m 12 40,0 39,86 1,98 13 42,4 42,38 - 14 56,9 56,23 1,07 m 15 24,3 24,36 1,05/1,54 m 16 28,3 28,31 1,23/1,81 m 17 56,5 56,83 0,98 m 18 12,0 11,94 0,65 s 12, 13, 14, 17 19 19,4 19,47 0,98 s 1, 5, 9, 10 20 35,8 35,86 1,37 m 21 18,8 18,79 0,89 d (6,5) 22 36,4 36,27 0,97/1,30 m 23 24,1 23,91 1,09/1,31 m 24 39,6 39,59 0,98/1,15 m 25 28,0 28,09 1,19 m 26 22,6 22,64 0,84 d (6,5) 24, 25, 27 27 22,9 22,90 0,83 d (6,5) 24, 25, 26 HMBC (H→C) 2, 3, 5, 6, 10 4, 7, 8, 10 17, 20, 22 δC cholest-5-en-3β-ol [16], bđo CDCl3, c150 MHz, d600 MHz Đặng Ngọc Bách 39 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.5.e Phổ HMBC DS5 Hình 3.5.f Các tương tác HMBC DS5 Phân tích chi tiết tương tác HMBC (Hình 3.5.f) kết hợp so sánh số liệu phổ 13 C-NMR DS5 với số liệu công bố tài liệu tham khảo [16] cho phép xác định hợp chất DS5 cholest-5-en-3β-ol 3.2.1.6 Hợp chất DS6: Natri cholest-5-en-3β-sunfat Các phổ 1H-NMR 13C-NMR DS6 gần trùng khớp so với phổ tương ứng DS5 Sự khác biệt dễ nhận thấy dịch chuyển mạnh phía vùng trường thấp tín hiệu proton cacbon C-3 phổ DS6 Khơng có tín hiệu nhóm xuất thêm phổ DS6 cho phép khẳng định nhóm OH vị trí C-3 DS6 bị sunfat hóa, q trình xảy phổ biến hợp chất thiên nhiên biển Giá trị độ dịch Đặng Ngọc Bách 40 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ chuyển 1H-NMR H-3 (H 4.14) hoàn tồn phù hợp với số liệu cơng bố hợp chất cholesterol-3-sunfat H 4.22 [17] Hình 3.6.a Phổ 1H-NMR DS6 Hình 3.6.b Cấu trúc hóa học DS6 Đặng Ngọc Bách 41 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.6.c Phổ 13C-NMR DS6 Hình 3.6.d Phổ HMQC DS6 Đặng Ngọc Bách 42 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR DS6 a δHb,d dạng pic (J, Hz) C a δC δCb,c 37,33 37,16 1,02/1,79 m 3, 31,70 28,85 1,57/1,99 m 3 71,85 79,09 4,14 m 42,38 39,22 2,28/2,45 m 140,82 140,02 - 121,77 122,53 5,30 br s 31,97 31,96 1,46/1,90 m 31,97 31,07 1,36 m 50,20 50,07 0,85 m 10 36,57 36,22 - 11 21,16 21,07 1,43 12 39,86 39,77 1,47/1,90 m 13 42,38 42,35 - 14 56,23 56,19 1,03 m 15 24,36 24,32 1,08/1,27 m 16 28,31 28,26 1,19/1,78 m 17 56,83 56,74 0,92 m 18 11,94 11,88 0,61 s 19 19,47 19.31 0,93 s 20 35,86 35,83 1,33 m 21 18,79 18,73 0,85 d (6,5) 22 36,27 36,51 1,26/0,99 m 23 23,91 23,88 1,19/0,97 m 24 39,59 39,54 1,07/1,38 m 25 28,09 28,03 1,36 m 26 22,64 22,58 0,79 d (6,5) 24, 25, 27 27 22,90 22,84 0,80 d (6,5) 24, 25, 26 HMBC (H→C) 3, 5, 4, 7, 10 5, 6, 8, 14 13 15, 17 17, 20 24 δC DS5, bđo CDCl3, c150 MHz, d600 MHz Đặng Ngọc Bách 43 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Hình 3.6.e Phổ HMBC DS6 Hình 3.f Các tương tác HMBC DS6 Phân tích chi tiết tương tác HMBC (Hình 3.f) cho phép xác định hợp chất DS6 natri cholest-5-en-3β-sunfat [17] Đặng Ngọc Bách 44 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Tập hợp chất phân lập từ loài cầu gai Diadema savignyi DS1: 5α,8α-epiđioxi-cholest-6-en-3β-ol DS2: cholest-5-en-3β,7α-điol DS3: cholest-5-en-3β,7β-điol DS4: 7β-metoxicholest-5-en-3β-ol DS5: cholest-5-en-3β-ol DS6: natri cholest-5-en-3β-sunfat 3.2.2 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất Ung thư bệnh nan y mà việc chữa trị cịn gặp nhiều khó khăn Theo số liệu thống kê gần đây, tỷ lệ người mắc bệnh ung thư ngày gia tăng Chính vậy, bên cạnh việc đầu tư cho chuẩn đốn sớm bệnh ung thư, việc tìm kiếm phương pháp điều trị mới, thuốc vô cần thiết đặc biệt hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên Trong lĩnh vực tìm kiếm chất chống ung thư, việc tìm kiếm, sàng lọc đánh giá chất có khả ức chế tiêu diệt tế bào khối u dựa khả gây độc dòng tế bào khối u thực nghiệm gây ung thư vô quan trọng Trong khuôn khổ luận văn, tiến hành đánh giá khả gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài cầu gai Diadema savignyi với ba Đặng Ngọc Bách 45 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ dòng tế bào HL-60 (ung thư máu), PC-3 (ung thư tuyến tiền liệt) SNU-C5 (ung thư ruột kết) Kết đưa Bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào Giá trị IC50 (M) Hợp chất a HL-60 PC-3 SNU-C5 DS1 4,95±0,07 6,99±0,28 6,14±0,22 DS2 7,89±0,18 29,22±0,17 30,70±0,27 DS3 22,36±0,84 27,94±0,63 31,20±1,04 DS4 5,33±0,03 9,22±0,67 23,73±0,75 DS5 - - - DS6 26,41±0,81 68,87±6,08 - Mitoxantronea 0,06±0,02 1,05±0,34 19,00±1,40 Chất chuẩn dương Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào cho thấy, hợp chất DS1 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh ba dòng tế bào ung thư người thử nghiệm HL-60 (ung thư máu), PC-3 (ung thư tuyến tiền liệt) SNU-C5 (ung thư ruột kết) với giá trị IC50 tương ứng 4,95, 6,99 6,14 µM Hợp chất DS4 thể hoạt tính mạnh hai dịng tế bào HL-60 (IC50 = 5,33 µM) PC-3 (IC50 = 9,22 µM) hoạt tính trung bình dịng SNUC-5 (IC50 = 23,73 µM) Hợp chất DS2 thể hoạt tính mạnh dịng HL-60 với giá trị IC50 = 7,89 µM hoạt tính trung bình dịng PC-3 (IC50 = 29,22 µM) SNU-C5 (IC50 = 30,70 µM) Ngồi ra, hợp chất DS3 thể hoạt tính trung bình ba dịng tế bào ung thư người thử nghiệm Hợp chất DS6 thể hoạt tính trung bình dịng HL-60, hoạt tính yếu dịng PC-3 khơng thể hoạt tính dịng SNU-C5 Hợp chất DS5 khơng có biểu hoạt tính ba dòng tế bào ung thư thử nghiệm Đặng Ngọc Bách 46 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ KẾT LUẬN Bằng phương pháp sắc ký kết hợp, 06 hợp chất phân lập từ dịch chiết metanol loài cầu gai Diadema savignyi Cấu trúc 06 hợp chất xác định nhờ vào phương pháp phổ đại là; DS1: 5α,8α-epiđioxi-cholest-6-en-3β-ol; DS2: cholest-5-en-3β,7αđiol; DS3: cholest-5-en-3β,7β-điol; DS4: 7β-metoxicholest-5-en-3β-ol; DS5: cholest-5-en-3β-ol; DS6: natri cholest-5-en-3β-sunfat Đây lần hợp chất phân lập từ loài cầu gai Diadema savignyi Đã tiến hành thử nghiệm hoạt tính gây độc dòng tế bào HL-60 (ung thư máu), PC-3 (ung thư tuyến tiền liệt) SNU-C5 (ung thư ruộ kết) hợp chất phân lập Hợp chất DS1 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh ba dòng tế bào ung thư người, DS4 thể hoạt tính mạnh hai dòng tế bào HL-60 (ung thư máu) PC-3(ung thư tuyến tiền liệt) DS2 thể hoạt tính mạnh dòng HL-60 (ung thư máu), DS3 thể hoạt tính trung bình ba dịng tế bào, DS6 thể hoạt tính trung bình dịng HL-60 (ung thư máu) yếu dòng PC-3 (ung thư tuyến tiền liệt) khơng thể hoạt tính dịng SNU-C5 (ung thư ruộ kết) Hợp chất DS5 khơng có biểu hoạt tính ba dịng tế bào ung thư thử nghiệm Đặng Ngọc Bách 47 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Châu Văn Minh, Nguyên Xuân Cường, Nguyễn Hải Đăng, Nguyễn Phương Thảo, Trần Hồng Quang, Nguyễn Hữu Tùng, Nguyễn Hoài Nam, Nguyễn Văn Hùng, Pham Văn Kiệm (2012), “Điểm lại nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số loài sinh vật biển Việt Nam giai đoạn 20062012”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 50(6), tr 827-829 Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm, Nguyễn Văn Hùng, Nguyễn Hoài Nam, Phạm Văn Cường (2012), Dược liệu biển Việt Nam – Thực trạng hội phát triển, NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ, tr 55-56 Phạm Thị Thùy (2010), Nghiên cứu xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất sản phẩm trứng cầu gai lên men tự nhiên, Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Nha Trang Nguyễn Đình Triệu (2013), Các phương pháp vật lý đại ứng dụng hóa học, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Tiếng Anh http://animaldiversity.org/accounts/Diadema_savignyi/ Dictionary of Natural Products on DVD, version 18.1, Copyright® 1982-2009 CRC Press http://gophuquoc.vn/vn/article_detail.aspx?mid=5&aid=294 Kol'tsova EA, Maksimov OB (1981), “Pigments of sea urchins Diadema setosum and Diadema savignije”, Quinoid pigments of echinoderms, Khimiya Prirodnykh Soedinenii, 1, p 115 Minh CV, Kiem PV, Huong le M, Kim YH (2004), “Cytotoxic constituents of Diadema setosum”, Arch Pharm Res, 27(7), pp 734-737 Đặng Ngọc Bách 48 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ 10 Yamada K, Tanabe K, Miyamoto T, Kusumoto T, Inagaki M, Higuchi R (2008), “Isolation and structure of a monomethylated ganglioside possessing neuritogenic activity from the ovary of the sea urchin Diadema setosum”, Chem Pharm Bull (Tokyo), 56(5), pp 734-737 11 Mishchenko NP, Fedoreyev SA, Van TTT, Hieu VMN, Ly BM (2013), Identification of polyhydroxylated naphoquinone pigments from Nha Trang Bay sea urchins, The 2nd international workshop on marine bioresources of Vietnam, Hanoi, pp 18-24 12 Carmichael J, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB (1987), “Evaluation of a Tetrazolium-based Semiautomated Colorimetric Assay: Assessment of Radiosensitivity”, Cancer Research, 47(4), pp 943-946 13 Ioannou E, Abdel-Razik AF, Zervou M, Christofidis D, Alexi X, Vagias C, Alexis MN, Roussis V (2009), “pidioxysterols from the gorgonian Eunicella cavolini and the ascidian Trididemnum inarmatum: isolation and evaluation of their antiproliferative activity”, Steroids, 74(1), pp 73-80 14 Carvalho JF, Cruz Silva MM, Moreira JN, Simoes S, Sa EMML (2009), “Efficient chemoenzymatic synthesis, cytotoxic evaluation, and SAR of epoxysterols”, J Med Chem, 52(13), pp 4007-4019 15 Tian X-R, Tang H-F, Li Y-S, Lin H-W, Chen X-L, Ma N, Yao M-N, Zhang PH(2011), “New cytotoxic oxygenated sterols from the marine bryozoan Cryptosula pallasiana”, Marine Drugs, 9(2), pp 162-183 16 J Buchanan H, J Cox P, M S V Doidge-Harrison S, Alan Howie R, Jaspars M, L Wardell J (1997), “Syntheses and structures of 3-stannylcholest-5-ene species”, Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1, (24), pp 3657-3664 17 D'Auria MV, Finamore E, Minale L, Pizza C, Riccio R, Zollo F, Pusset M, Tirard P (1984), “Steroids from the starfish Euretaster insignis: a novel Đặng Ngọc Bách 49 Hóa hữu Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn thạc sĩ group of sulphated 3β,21- dihydroxysteroids”, Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1, pp 2277-2282 Đặng Ngọc Bách 50 Hóa hữu ... thạc sĩ bào ung thư người dự kiến sử dụng HL-60 (human acute promyeloid leukemia - ung thư máu), PC-3 (human prostate cancer - ung thư tuyến tiền liệt), SNU-C5 (human colon cancer - ung thư ruột... Trong phổ 1H-NMR độ dịch chuyển hóa học (δ) proton xác định thang ppm từ 0-14ppm, tùy thuộc vào mức độ lai hóa nguyên tử đặc trưng độ dịch chuyển hóa học tương tác spin mà ta xác định cấu trúc hóa... hưởng khác hạt nhân từ 1H 13 C tác dụng từ trường Sự cộng hưởng khác biểu diễn độ dịch chuyển hóa học (chemical shift) Ngoài đặc trưng nhân tử xác định dựa vào tương tác spin hạt nhân từ với (spin