Ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm ái tính kháng nguyên giới hạn LAG avidity và hệ số phân loại sai để ước tính tỷ lệ mới nhiễm HIV

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRẦN HỒNG TRÂM ỨNG DỤNG KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM ÁI TÍNH KHÁNG NGUYÊN GIỚI HẠN (LAG – AVIDITY) VÀ HỆ SỐ PHÂN LOẠI SAI ĐỂ ƢỚC TÍNH TỶ LỆ MỚI NHIỄM HIV TRÊN MỘT SỐ NHÓM CÓ NGUY CƠ CAO LÂY NHIỄM HIV Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC HÀ NỘI – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRẦN HỒNG TRÂM ỨNG DỤNG KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM ÁI TÍNH KHÁNG NGUYÊN GIỚI HẠN (LAG – AVIDITY) VÀ HỆ SỐ PHÂN LOẠI SAI ĐỂ ƢỚC TÍNH TỶ LỆ MỚI NHIỄM HIV TRÊN MỘT SỐ NHÓM CÓ NGUY CƠ CAO LÂY NHIỄM HIV Ở VIỆT NAM Chuyên ngành : Vi sinh vật học Mã số : 62 42 01 07 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Anh Tuấn PGS.TS Nguyễn Quang Huy HÀ NỘI – 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi Trần Hồng Trâm, nghiên cứu sinh Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội, xin cam đoan: Kết đề tài thành nghiên cứu t i với hướng dẫn v gi p đ nhi t t nh tập thể c c chuy n gia cao cấp v ngo i nước T i Lãnh đạo Vi n, chủ nhi m đề tài thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng kết nghiên cứu đề tài với mục đích phân tích so sánh Toàn số li u, kết nêu luận án trung thực v chưa công bố cơng trình khác Nghiên cứu sinh Trần Hồn Tr m Trần Hồng Trâm 15,16,22,23,25-28,36,38,40-42,56,57,59,60,73,74,77,78,81,82,84,94,103,104,108,109,112,113 1-14,17-21,24,29-35,37,39,43-55,58,61-72,75,76,79,80,83,85-93,95-102,105-107,110,111,114- LỜI CẢM ƠN Tơi xin trân trọng bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc cảm ơn chân th nh tới PGS.TS Nguyễn Anh Tuấn PGS.TS Nguyễn Quang Huy, người Thày có nhiều kinh nghi m kiến thức tận tình giảng dạy, hướng dẫn tơi suốt trình học tập, thực hi n đề t i ho n th nh luận án Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến anh ch bạn đồng nghi p Khoa HIV/AIDS, ban Lãnh đạo Vi n V sinh D ch tễ Trung ương; Thày, Cô Bộ môn Vi sinh vật học, Trường Đại học Khoa học Tự nhi n, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều ki n v gi p đ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận án T i xin chân th nh cảm ơn TS Dương Th Yến – chuyên gia cao cấp xét nghi m sớm HIV Trung tâm kiểm sốt phịng ngừa b nh tật (CDC) Atlanta cung cấp tài li u v hướng dẫn cách làm xét nghi m phân tích kết xét nghi m; TS Neha S.Shah – chuyên gia cao cấp d ch tễ học CDC Atlanta hỗ trợ phân tích số li n quan đến d ch tễ học; ThS BS Patrick Nadol– Trưởng nhóm d ch tễ học CDC Vi t Nam, ThS Lê Vi Linh chuyên gia cao cấp d ch tễ học CDC Vi t Nam cung cấp số li u kết xét nghi m cuối cùng; toàn thể c c đồng nghi p lĩnh vực HIV, HBV CDC Atlanta CDC Vi t Nam hỗ trợ thực hi n hoàn thành luận án Luận n thực hi n khuôn khổ hợp tác nghiên cứu CDC Vi t Nam Vi n V sinh D ch tễ Trung ương “Dự án nâng cao chất lượng giám sát xét nghi m HIV Vi t Nam, giai đoạn 2006- 2010, 2011 -2016” Trung tâm kiểm sốt phịng ngừa b nh tật Hoa Kỳ tài trợ Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến bố mẹ, chồng con, anh ch em người thân gia đ nh, bạn bè hết lịng ủng hộ, động viên tơi suốt trình học tập v l động lực to lớn gi p t i vượt qua khó khăn để đạt kết học tập hoàn thành luận án Nghiên cứu sinh Trần Hồn Tr m MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT .4 DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU 10 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 1.1 Tình hình nhiễm HIV giới Vi t Nam .12 1.2 Đặc điểm virut HIV .12 1.2.1 Cấu trúc HIV 13 1.2.2 Diễn biến trình nhiễm HIV .15 1.2.3 C c giai đoạn lâm sàng b nh nhiễm trùng hội .18 1.3 Một số thuật ngữ xét nghi m nhiễm HIV 20 1.4 C c phương ph p v kỹ thuật xét nghi m giám sát d ch tễ chẩn đo n HIV Vi t Nam 21 1.4.1 Phương ph p x t nghi m chẩn đo n gi n tiếp HIV 24 1.4.2 Phương ph p x t nghi m chẩn đo n trực tiếp 28 1.5 Các kỹ thuật xét nghi m x c đ nh tỷ l nhiễm HIV 30 1.5.1 Kỹ thuật miễn d ch gắn enzym nhạy 33 1.5.2 Các kỹ thuật x c đ nh tỷ l kháng thể IgG 33 1.5.3 Các kỹ thuật lực 33 1.5.4 Kỹ thuật IDE-V3 34 1.5.5 Kỹ thuật phát hi n kháng nguyên p24 34 1.5.6 Kỹ thuật phát hi n ARN HIV 34 1.5.7 Kỹ thuật phát hi n kháng thể IgG kháng p24 .35 1.5.8 Kỹ thuật miễn d ch dòng 35 1.6 Ước tính tỷ l nhiễm HIV giới 38 1.6.1 Các ứng dụng ước tính tỷ l nhiễm HIV 39 1.6.2 C c phương ph p ước tính tỷ l nhiễm 39 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.1 X c đ nh so sánh tỷ l phân loại sai ước tính tỷ l nhiễm HIV hai kỹ thuật BED –CEIA LAg- Avidity b nh nhân bắt đầu đăng ký điều tr ARV phòng khám ngoại trú bốn tỉnh năm 2010 -2011 .45 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .45 2.1.2 Đ a điểm thời gian nghiên cứu 45 2.1.3 C mẫu cách chọn mẫu 45 2.1.4 Thiết b sinh phẩm, hóa chất sử dụng nghiên cứu 46 2.1.5 Phương ph p nghi n cứu 47 2.1.6 Quy trình thu thập mẫu phòng khám ngoại trú 49 2.1.7 Các yếu tố cần đ nh gi nghi n cứu .50 2.2 Ứng dụng kỹ thuật LAg Avidity để ước tính tỷ l nhiễm HIV-1 số nhóm đối tượng có nguy cao lây nhiễm HIV Vi t Nam năm 2006 2009 51 2.2.1 Các thông tin nghiên cứu IBBS thực hi n năm 2006, 2009 51 2.2.2 Phương ph p nghi n cứu tính tỷ l nhiễm HIV sinh phẩm LAg-Avidity, sử dụng thông tin mẫu IBBS 2006, 2009 53 2.3 Các kỹ thuật xét nghi m sử dụng hai nghiên cứu 56 2.3.1 Xét nghi m BED-CEIA 56 2.3.2 Quy trình kỹ thuật xét nghi m LAg-Avidity EIA 59 2.3.3 Xét nghi m Western Blot .61 2.3.4 Xét nghi m kiểu gen HIV 62 2.3.5 Xét nghi m đo tải lượng HIV 63 2.3.6 Xét nghi m thành phần thuốc ARV .63 2.4 Cơng thức tính tốn phần mềm nhập li u hai nghiên cứu 63 2.4.1 Cơng thức tính tỷ l phân loại sai tỷ l nhiễm 63 2.4.2 Phần mềm phân tích kết 64 2.5 Đạo đức nghiên cứu .65 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 66 3.1 X c đ nh so sánh tỷ l phân loại sai ước tính tỷ l nhiễm HIV hai kỹ thuật BED–CEIA LAg-Avidity b nh nhân bắt đầu đăng ký điều tr ARV phòng khám ngoại trú bốn tỉnh năm 2010 -2011 .66 3.1.1 Đ nh gi đặc điểm chung người tham gia nghiên cứu .67 3.1.2 X c đ nh tỷ l phân loại sai nhiễm sinh phẩm BED - CEIA, LAg-Avidity 71 3.2 Ứng dụng kỹ thuật LAg Avidity để ước tính tỷ l nhiễm HIV-1 số nhóm đối tượng có nguy cao lây nhiễm HIV Vi t Nam năm 2006 2009 95 3.2.1 Đ nh gi kết ban đầu xét nghi m nhiễm sinh phẩm LAgAvidity tr n ba nhóm nguy cao c c điều tra IBBS 97 3.2.2 Tỷ l nhiễm hi u chỉnh theo năm 2006, 2009 sử dụng tỷ l phân loại sai cho miền 101 3.2.3 Đ nh gi kỹ thuật LAg-Avidity tr n sở xét nghi m 108 3.3 Hạn chế nghiên cứu 113 KẾT LUẬN 114 KIẾN NGHỊ 115 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN .116 TÀI LIỆU THAM KHẢO 117 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT T v ết tắt cADN AEM AIDS ARN ART ARV BED-CEIA BYT CDC CEPHIA CI DBS EIA ELISA EPP FHI FRR GAP HIV HTLV IBBS LAg Avidity LAV T ố T ến An Complementary Deoxyribonucleic Acid Asian Epidemic Model Aquired immune deficiency syndrome Acid ribonucleic Antioretroviral therapy Antiretroviral Capture Enzyme ImmunoAssay B, E, D subtype N T ến V ệt ADN bổ sung Mơ hình d ch tễ Châu Á Hội chứng suy giảm miễn d ch mắc phải Thuốc kháng virut Retro Li u pháp chống virut Retro Thuốc kháng virut Kỹ thuật miễn d ch gắn enzym tóm bắt phân nhóm B, E, D Bộ Y tế U.S Centers for Disease Control Trung tâm iểm so t v ph ng and Prevention D ch b nh Hoa ỳ Consortium for the Evaluation Nhóm ủy vi n ban đ nh gi v and Performance of HIV thực hi n xét nghi m Incidence Assays nhiễm Confidence interval Khoảng tin cậy Dried Blood Spot Giọt máu khô Enzyme Immuno Assay Xét nghi m miễn d ch gắn enzym Enzyme Linked Immuno Sorbert Xét nghi m miễn d ch hấp phụ gắn Assay enzym Epidemic Projection Package Phần mềm dự báo d ch Family Health International Tổ chức sức khỏe gia đ nh Quốc tế False Recent Rate Tỷ l phân loại sai Global AIDS program Chương tr nh AIDS to n cầu Human immunodeficiency virus Virut gây suy giảm miễn d ch người III Human T- cell Leukaemia Virut gây ung thư tế bào T người Virus Integrated Biological and Giám sát lồng ghép hành vi Behavioral Surveillance số sinh học Limmiting Antigen Avidity Thử nghi m miễn d ch gắn enzym lực kháng nguyên giới hạn Lymphadenopathy Associated Virus Virut gây tăng sinh bạch cầu hạt LTR MSM NCMT NMR OD PCR PEPFAR PKNT PLS PNBD PrEP PTN rIDR-M RITA RT Realtime PCR SPECTRUM TPHCM TRI UNAIDS UNGA VSDTTƢ WHO XN Đoạn lặp lại hai đầu mút Nam qua h tình dục đồng giới Nghi n chích ma túy Nuclear Magnestic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân Optical Density Mật độ quang Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp President's Emergency Plan for Kế hoạch cứu trợ khẩn cấp AIDS Relief Tổng thống Hoa Kỳ phòng, chống AIDS Phòng khám ngoại trú Phân loại sai Phụ nữ bán dâm Pre-exposure prophylaxis Dự ph ng trước phơi nhiễm Phịng thí nghi m Recombinant Immunodominant Sự liên kết khu vực đ nh Region– M kháng nguyên nhóm M Recent Infection Testing Phương ph p x t nghi m Algorithm nhiễm Reverse Transcriptase Enzym phi n mã ngược Realtime Polymerase chain Phản ứng tổng hợp chuỗi thời gian reaction thực Phân tích phổ Thành phố Hồ Chí Minh Test of Recent Infection Kỹ thuật xét nghi m phát hi n nhiễm Joint United Nations Programme Chương tr nh phối hợp Liên on HIV/AIDS Hợp quốc HIV/AIDS United Nations General Assembly Đại hội đồng liên hợp quốc Vi n V sinh D ch tễ Trung ương World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới Xét nghi m Long Terminal Repeats Men Sex with Men DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu tạo virut HIV .15 Hình 1.2 Cấu trúc gen HIV .15 Hình 1.3 Chu kỳ nhân lên virut HIV 16 Hình 1.4 Sự biến đổi thơng số sinh học b nh nhân nhiễm HIV 16 Hình 1.5 Quy trình xét nghi m an tồn truyền máu 22 Hình 1.6 Quy trình xét nghi m HIV giám sát d ch tễ học .22 Hình 1.7 Quy trình chẩn đo n nhiễm HIV người lớn trẻ em ≥ 18 th ng tuổi 23 Hình 1.8 Kỹ thuật xét nghi m miễn d ch đ nh dấu màng lọc 25 Hình 1.9 Nguyên lý kỹ thuật xét nghi m miễn d ch sắc ký .25 Hình 1.10 Nguy n lý kỹ thuật ngưng kết hạt 26 Hình 1.11 Nguyên lý kỹ thuật ELISA Sandwich 27 Hình 1.12 Hình ảnh kết Western blot HIV-1 .28 Hình 1.13 Nguyên lý sinh phẩm BED-CEIA .36 Hình 1.14 Nguyên lý sinh phẩm LAg – Avidity 38 Hình 1.15 Sơ đồ xét nghi m nhiễm HIV sử dụng kỹ thuật 40 Hình 1.16 Sơ đồ ước tính tỷ l nhiễm sử dụng kết hợp hai nhiều kỹ thuật xét nghi m nhiễm .41 Hình 1.17 Sơ đồ ước tính tỷ l nhiễm sử dụng xét nghi m nhiễm kết hợp với xét nghi m khác thông tin b nh án 42 Hình 2.1 Sơ đồ phương ph p nghi n cứu tìm tỷ l phân loại sai nhiễm HIV 48 Hình 2.2 Quy trình thu thập mẫu 49 Hình 2.3 Sơ đồ phương ph p nghi n cứu tìm tỷ l nhiễm HIV sinh phẩm LAg-Avidity 55 Hình 2.4 Sơ đồ xét nghi m BED-CEIA nghiên cứu .56 Hình 2.5 C c bước thực hi n xét nghi m BED-CEIA 57 Hình 2.6 Quy trình xét nghi m LAg-Avidity 59 Hình 2.7 C c bước thực hi n xét nghi m LAg-Avidity 60 Hình 3.1 Kết chạy thạch mẫu nghi ngờ mẫu nhiễm HIV 81 Seroconversion Using a Multi-subtype gp41 Recombinant Protein", AIDS Research & Human Retroviruses 26(1), pp 61-71 118 Welte A., McWalter T and Bärnighausen T (2009), "A Simplified Formula for Inferring HIV Incidence from Cross-Sectional Surveys Using a Test for Recent Infection", AIDS Research & Human Retroviruses 25(1), pp 125–126 119 WHO (2007), WHO recommendations on pediatric diagnosis and initiation of ART, Geneva, Switzerland 120 WHO (2010), Who recommendations on the diagnosis of HIV infection in infants and children, Geneva, Switzerland 121 WHO (2011), WHO Working Group on HIV Incidence Assays- Annual Meeting 18 - 24 August 2011, Atlanta, Georgia, USA 122 WHO (2015), Consolidated guidelines on HIV testing services, WHO Press, Geneva, Switzerland 123 WHO/UNAIDS (2013), WHO/UNAIDS Technical Update on HIV incidence assays for surveillance and epidemic monitoring, Geneva, Switzerland 124 WHO/UNAIDS (2014), WHO/UNAIDS annual meeting of the technical Working Group on HIV Incidence Assays, Barcelona, Spain 125 Wilson K., Johnson E., Croom H., Richards K., Doughty L., Cunningham P., Kemp B., Branson B., Dax E (2004), "Incidence immunoassay for distinguishing recent from established HIV-1 infection in therapy-naive populations", AIDS 18(17), pp 2253 - 2259 126 Woods C., Brumme C., Liu T., Chui C., Chu A., Wynhoven B., Hall T., Trevino C., Shafer R., Harrigan P (2012), "AutomatingHIVdrug resistance genotyping with RECall, a freely accessible sequence analysis tool", Journal Clinical Microbiology 50(6), pp.1936 - 1942 127 Worobey M., Gemmel M., Teuwen D., Haselkorn T., Kunstman K., Bunce M., Muyembe J., Kabongo J., Kalengayi 129 R., Van Marck E., Gilbert M., Wolinsky S (2008), "Direct evidence of extensive diversity of HIV-1 in Kinshasa by 1960", Nature 455(7213), pp 661-664 128 Xiao Y., Jiang Y., Feng J., Xu W., Wang M., Funkhouser E., Vermund S., Jia Y (2007), "Seroincidence of recent human immunodeficiency virus type infections in China", Clinical Vaccine Immunology 14(10), pp 1384-1386 129 Yang C., Dash B., Simon F., van der Groen G., Pieniazek D., Gao F., Hahn B., Lal R (2000), "Detection of diverse variants of human immunodeficiency virus-1 groups M, N, and O and simian immunodeficiency viruses from chimpanzees by using generic pol and env primer pairs", Journal Infection Diseases 181(5), pp 1791 - 1795 130 Yang C., Pieniazek D., Owen S., Fridlund C., Nkengasong J., Mastro T., Rayfield M., Downing R., Biryawaho B., Tanuri A., Zekeng L., van der Groen G., Gao F., Lal R (1999), "Detection of phylogenetically diverse human immunodeficiency virus type groups M and O from plasma by using highly sensitive and specificgenericprimers", Journal Clinical Microbiology 37(8), pp 2581–2586 131 Le Vu S., Pillonel J., Semaille C., Bernillon P., Le Strat Y., Meyer L., Desenclos J (2008), "Principles and uses of HIV incidence estimation from recent infection testing", Euro Surveilance 13(36), pii 18969 130 PHỤ LỤC DANH SÁCH TỈNH VÀ CÁN BỘ ĐẦU MỐI NGHIÊN CỨU IBBS Tỉn Hà Nộ Hả P òn Quản Ninh N ệ An Tỉn Đ ện B n Yên Bái An Giang Cần T Họ t n L Nhân Tuấn Nguyễn Phương Hoa Vũ Thanh Huyền Nguyễn Thu Hương Nguyễn Th Nga L Vi t C ng Ng Văn h nh Vũ Th Hoa Bùi Kim Chung Nguyễn Văn Đ nh Nguyễn Song H Nguyễn Văn Trung Họ t n Đặng Th Thanh Ph n Th Thủy H Th Th y Vân Tri u Bích An Phan Duy Tiêu ĐỖ Thanh Hi u Đỗ Xuân Nguy n L Quang Nhường Huỳnh Minh Trí Lại Th im Anh Nguyễn Danh Lam Đinh C ng Thức Hồ C í M nh Trần Th Bích Li n Nguyễn Th Hu Nguyễn Văn Tâm Đơn vị Côn tá TTPC HIV/AIDS Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Ph ng kế hoạch TC Phòng giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Đơn vị Côn tá hoa điều tr Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát Khoa giám sát C ứ vụ Gi m đốc Trưởng khoa Nhân viên Phó gi m đốc Phó Phịng Nhân viên Gi m đốc Trưởng khoa Nhân viên C ứ vụ Gi m đốc Phó gi m đốc Phụ Tr ch khoa Trưởng khoa Nhân viên Nhân viên Gi m đốc Phó gi m đốc Vị trí t m n Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li Điều phối vi n Giám sát viên C n quản lý số li Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li Vị trí t m n Điều phối vi n Giám sát viên C n quản lý số li Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li Điều phối vi n Đầu mối li n lạc giám sát viên C n quản lý số li Giám sát viên Điều phối vi n C n quản lý số li u u u u u u u u u Đ ện t oạ d độn 0913.228.966 0989.058.858 0988.919.708 0936.835.143 0963.001.104 0167.848.4810 0974.545.888 0915.636.126 0977.499.559 0912.242.397 0984.905.304 0975.887.565 Đ ện t oạ d độn 0988.405.565 0916.157.203 0979.622.169 0912.356.776 0983.283.559 0976.911.370 0905.764.908 0907.220.128 0978.334.479 0918.181.998 Đị ỉ em l lenhantuan@gmail.com phuonghoatt@yahoo.com Thanhhuyen_hmu@yhaoo.com.vn nguyenhuong1186@gmail.com ngaltmc@gmail.com vietcong89hp@gmail.com khanh.gs007@gmail.com vuhoa2002@gmail.com chungbuiytcc@gmail.com dinhpcaidsna@yahoo.com ngsgha@gmail.com trungds87@gmail.com Đị ỉ em l thanhdangdb@gmail.com pthy@ymail.com vanhathithuyvan@yahoo.com.vn bichanyb@yahoo.com phantieuyb288@gmail.com noen761311@yahoo.com do.xuannguyen@yahoo.com.vn lequangnhuong128@yahoo.com.vn huynhminhtri79@gmail.com kimanh_kimanh@yahoo.com.vn 0918.296.185 lamndct@yahaoo.com.vn 0919.464.139 986009769 903787908 982353740 dinhcongthuc@gmail.com bichlienpac@gmail.com> thaytam@yahoo.com> PHỤ LỤC QUY TRÌNH TƢ VẤN BỆNH NHÂN TẠI ĐIỂM NGHIÊN CỨU Tại phòng tƣ vấn - Tiếp đón người tham gia nghiên cứu, - Xác nhận đồng ý tham gia: b nh nhân tự nguy n đồng ý tham gia nghiên cứu ký ghi rõ họ tên ngày tham gia vào mẫu đơn; b nh nhân không muốn tham gia, cán lâm sàng đ nh dấu vào phần b nh nhân từ chối mẫu đơn, - Thu thập số li u nhân khẩu: sau có giấy đồng ý tham gia nghiên cứu, người vấn lấy thông tin vào phiếu thu thập số li u có mã số nghiên cứu (ID) in sẵn Người vấn ghi lại số PKNT b nh nhân vào v trí đ nh sẵn phiếu thu thập số li u - Thu thập số li u xét nghi m, kiểm tra lại thông tin:  Đảm bảo tất người tham gia đạt đ ng ti u chuẩn lựa chọn,  Đảm bảo tất số li u phần (số li u nhân khẩu) điền đầy đủ thơng tin xác,  Điền vào mẫu ghi số li u phần (số li u xét nghi m) sử dụng số li u xét nghi m gần số li u có sẵn  Sau hoàn thành phiếu thu thập số li u, PKNT xé phần lưu PKNT bên phiếu thu thập số li u v lưu phần vào tủ khóa an toàn Hàng tuần, đại di n PKNT TP Hồ Chí Minh gửi phiếu thu thập số li u PKNT cho Vi n Pasteur Tp HCM Đại di n PKNT Hà Nội, Hải Phòng Quảng Ninh gửi phiếu thu thập số li u PKNT cho Khoa HIV/AIDS – Vi n VTDTTƯ h ng th ng Tại phòng xét nghiệm Nguyên tắc chung: Mẫu máu thu thập vào thời gian thuận ti n cho người tham gia - H t đủ ml m u v o bơm kim ti m thường, khoảng 1-2 ml máu giữ lại làm xét nghi m thường quy PKNT cơng thức máu, sinh hóa, huyết học… Lượng máu cịn lại bơm v o ống có áp lực chân kh ng EDTA d n mã nghiên cứu - Ly tâm mẫu 2000 vòng/phút 10 phút hay tự lắng vòng Hút 0,5 ml huyết tương v o ống thứ nhất, phần huyết tương c n lại cho vào ống thứ hai, ống nghi m ml đựng huyết tương dán mã nghiên cứu Mẫu huyết tương lưu giữ vào tủ lạnh 40C v chuyển tới phịng thí nghi m HIV Vi n VSDTTƯ (một tuần lần) Vi n Pasteur Hồ Chí Minh (khi đủ 10 mẫu hai lần tuần) theo quy đ nh Bộ Y tế [6] - Mẫu sau chuyển Vi n lưu giữ tủ âm sâu (-20ᵒC) làm xét nghi m Các mẫu huyết tương làm tan xét nghi m BED, LAg- Avidity th ng đầu làm lại kết thúc nghiên cứu Đối với mẫu huyết tương c n dư sau x t nghi m xong, cất giữ vào tủ lạnh -800C VSDTTƯ v Vi n Pasteur TP HCM để làm xét nghi m kh c tương lai - Ống mẫu lưu 0,5 ml chuyển nitơ lỏng đ kh đến Atlanta hai thời điểm: th ng đầu kết thúc nghiên cứu để kiểm tra chất lượng xét nghi m sau nghiên cứu làm thêm XN kh c mẫu nghi ngờ PHỤ LỤC Bảng thông tin thỏa thuận tham gia nghiên cứu Giới thi u Anh (ch ) mời để tham gia vào nghiên cứu tỉ l HIV Xin anh (ch ) vui l ng đọc th ng tin v hỏi chúng tơi có thơng tin n o chưa rõ anh (ch ) muốn có thêm thơng tin Anh (ch ) có thời gian để đ nh anh (ch ) muốn tham gia vào nghiên cứu Tất thông anh (chị) cung cấp r n tƣ K ôn ỏi họ tên anh (chị), tên k ôn đƣợc ghi đ u tr n p ếu thu thập số liệu Mục đích nghiên cứu gì? Chúng tơi mong muốn phát hi n nhiều người nhiễm HIV Hi n có xét nghi m giúp chúng tơi thực hi n vi c n y Th ng tin thu từ nghiên cứu giúp chúng tơi tìm cách tốt để phòng nhiễm HIV nâng cao sức khỏe cho người dân Vi t Nam Vi n V sinh D ch tễ Trung ương, Vi n Pasteur Tp HCM, Trung tâm kiểm soát b nh tật Hoa Kỳ phối hợp thực hi n dự án Tại t i đề ngh tham gia? Anh (ch ) lựa chọn anh (ch ) nhiễm HIV năm v chưa dùng thuốc n o để điều tr HIV Tơi tham gia? Anh (ch ) đ nh anh (ch ) muốn tham gia không Nếu anh (ch ) đ nh tham gia, anh (ch ) ngừng khơng tham gia vào thời điểm mà không cần đưa lý Sẽ có vấn đề xẩy tham gia? Nếu anh (ch ) tham gia, cán tập huấn thu thập thông tin từ b nh án anh (ch ) Anh (ch ) không b hỏi thông tin Anh (ch ) không b lấy thêm máu xét nghi m cho nghiên cứu Một phần mẫu máu lấy ngày hôm cho xét nghi m th ng thường anh (ch ) xét nghi m để phát hi n thời gian anh (ch ) nhiễm HIV Phần máu xét nghi m cho nghiên cứu khơng ghi tên anh (ch ) không trả lời kết xét nghi m lại cho anh (ch ) Vi c tham gia vào nghiên cứu giữ kín? Tên anh (ch ) không kh ng ghi lại mẫu thu thập thông tin ống máu Tất th ng tin lưu trữ tủ khóa an tồn mà cán y tế đ nh phòng khám míi mở T i tham gia nghiên cứu n y v có nguy n o tham gia nghiên cứu này? Nghiên cứu khơng mang lợi ích cho ri ng c nhân người tham gia nghiên cứu n y, gi p ch ng t i biết thêm HIV Vi t Nam Thông tin giúp tạo nghiên cứu tương lai v nâng cao chương tr nh ph ng nhiễm HIV Vi t Nam Khơng có nguy n o ph t sinh th m từ nghiên cứu anh (ch ) sẵn sàng lấy máu làm xét nghi m thường quy Không biết kết xét nghi m anh (ch ) ống máu xét nghi m ghi mã số nghiên cứu Vấn đề xẩy từ kết nghiên cứu này? Tất kết ghi vào báo cáo mà hi n tên cá nhân n o B o c o n y Bộ Y tế nhà tài trợ sử dụng để cải tiến d ch vụ HIV Vi t Nam Tơi nhận kết quả? Anh (ch ) kh ng trả kết anh (ch ) v tr n kh ng ghi t n anh (ch ) khơng có c ch n o t m để đưa lại cho anh ch Thông tin liên lạc: Anh (ch ) hỏi cán dự án liên h với cán để đề cập nghiên cứu điều tra quyền anh (ch ) điều tra này: Sự gi p đ anh (ch ) có giá tr to lớn chúng tơi Nếu anh (ch ) muốn, anh (ch ) giữ phô tô PHỤ LỤC Thỏa thuận tham gia nghiên cứu Sau tư vấn, t i đồng ý tham gia: Có _ _ Người đồng ý tham gia ký tên Không Số hồ sơ PKNT Ngày -Thỏa thuận tham gia nghiên cứu Sau tư vấn, t i đồng ý tham gia: Có _ _ Người đồng ý tham gia ký tên Không Số hồ sơ PKNT Ngày -Thỏa thuận tham gia nghiên cứu Sau tư vấn, t i đồng ý tham gia: Có _ _ Người đồng ý tham gia ký tên Không Số hồ sơ PKNT Ngày -Thỏa thuận tham gia nghiên cứu Sau tư vấn, t i đồng ý tham gia: Có _ _ Người đồng ý tham gia ký tên Ngày Không Số hồ sơ PKNT PHỤ LỤC Phiếu thu thập số liệu (FRR) Phần l u PKNT Mã số nghiên cứu ID _ (dán mã số vào _ Số hồ sơ PKNT Hôm ngày (ng y th ng năm) _ _ _09 Phần gửi đến Viện SDTTƯ/ iện Pasteur TP HCM Mã số nghiên cứu ID _ (dán mã số vào _ Hôm ngày _/ _/ 09 Phần 1: Thông tin chung Số C1 C2 C3 Câu hỏi Trả lời Ngày b nh nhân chẩn đo n lần đầu _/ _/ _ nhiễm virus HIV? (Ng y th ng năm) B nh nhân tuổi? _ tuổi Tây Giới? Nam Nữ Hi n b nh nhân có mắc b nh sau Lao không? PCP Nấm Candida C4 (Ch n hay nhiều lựa ch n) Virus Herpes Zoster Tiêu chảy mạn tính Khác (ghi rõ): Không C5 B nh nhân b lây nhiễm HIV đường Quan h khác giới nào? Tình dục đồng giới nam Tiêm chích ma túy (Ch n hay nhiều lựa ch n) Mại dâm Lây truyền mẹ sang Khác / Không biết Phần 2: Số liệu phịng thí nghiệm (Do cán thu th p số liệu PKNT điền) Số C6 C7 C8 C9 Câu hỏi Trả lời B nh nhân làm xét nghi m tế bào CD4 / / lần cuối nào? (Ng y, th ng, năm) Kết đếm tế bào CD4? tế bào/ml B nh nhân hướng dẫn làm xét nghi m / / tải lượng virus HIV lần cuối nào? (Ng y, th ng, năm) Kết tải lượng virus HIV? sao/ml PHỤ LỤC Bản chuyển huyết tƣơn Ngày chuyển mẫu máu đ VSDTTƢ/ Pasteurr / / 09 Số lƣợng Số mã nghiên cứu Ngày, lấy máu máu lấy ống ( gắn mã vạch) Ngày, đ ểm tách huyết tƣơn vacutainer ( / /09) Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào Dán mã số vào 10 Dán mã số vào (giờ: phút) (ml) Tên nhân viên xét nghiệm ( / /09) (giờ:phút) PHỤ LỤC Bản ghi phòng xét nghiệm Viện VSDTTƢ/P steur Tp.HCM Ngày, Viện VSDTTƢ/P steur nhận mẫu / / giờ:phút Nơ gửi Số lƣợng Chất lƣợng Ngày để máu huyết huyết tƣơn tủ âm sâu tƣơn n ận viện Ghi rõ mã sỗ nghiên cứu [1] Tán huyết [2] vón cục [3] nhờn [1] Tán huyết [2] vón cục [3] nhờn [1] Tán huyết [2] vón cục [3] nhờn [1] Tán huyết [2] vón cục [3] nhờn [1] Tán huyết [2] vón cục [3] nhờn / / Nhân viên xét nghiệm viện VSDTTƢ/ Pasteur PHỤ LỤC Bản kiểm dành cho giám sát đị đ ểm nghiên cứu Tên PKNT: Nhóm giám sát: Ngày: Có Ở P NT có điều phối viên nghiên cứu? Người vấn có sàng lọc tiêu chuẩn tham gia khơng? Có đọc thỏa thuận tham gia nghiên cứu khơng? Phiếu thu thập li u có điền đầy đủ khơng? Có cung cấp tờ thơng tin thỏa thuận cho người tham gia nghiên cứu không? Nhãn phiếu ống m u có tương ứng với khơng? Ống huyết tương có giữ 40C khơng? Mẫu huyết tương v phiếu thu thập số li u có chuyển tới Vi n VSDTTƯ Vi n Pasteur HCM theo quy đ nh khơng? Mẫu có chuyển đến Vi n VSDTTƯ Vi n Pasteur Tp.HCM thùng lạnh thích hợp khơng? Tủ lưu giữ phiếu có khóa bảo v khơng? Tổng số mẫu m u lấy từ bắt đầu nghiên cứu Tổng số phiếu thu thập số li u ngày hôm Tổng số mẫu máu thu thập ngày hôm Tổng số tờ thơng tin thu thập khơng có mã số nghiên cứu ID Tổng số ống máu mã số nghiên cứu ID Khơng Trang b sẵn có? Ống đựng máu Kim chân giữ ống vacutainer Găng tay Thùng chứa đồ sắc nhọn Ống tách huyết tương Máy ly tâm Hộp bảo quản lạnh T iđ Đầu côn Pipette 1000ul Bông tẩm cồn 70 độ Ga rô Băng d n vết thương Gi để mẫu Mẫu có ly tâm khoảng 30 phút tới sau lấy máu khơng? Mẫu huyết tương có t ch đ ng kh ng? Có quan tâm vấn đề từ cán nghiên cứu không? Phiếu thu thập li u có kiểm tra ng y h«m v đảm bảo sè li u thu thập v b o c o đ ng kh ng? Có phiếu b điền sai khơng? Những phát hi n có xem xét PKNT khơng? Những phát hi n có xem xét Vi n VSDTTƯ Pasteur v CDC kh ng? Có khuyến ngh sau đợt kiểm tra không? PHỤ LỤC Bộ câu hỏi sàng lọc tiêu chuẩn Hướng dẫn cho cán lâm sàng: Chỉ sử dụng b nh án, vui lòng sử dụng câu hỏi sàng lọc để xem li u b nh nhân có đủ tiêu chuẩn tham gia vào nghiên cứu hay khơng Tính khoảng thời gian ngày chẩn đo n nhiễm HIV v ng y đến phịng khám Nếu có ô cột “kh ng nằm tiêu chuẩn” đ nh dấu, cảm ơn b nh nhân thời gian họ dành cho tiếp tục với công vi c kh m v điều tr thường quy Nếu b nh nhân đạt tất tiêu chuẩn, chuyển bước l đọc xác nhận đồng ý tham gia Số Câu hỏi TT Từ ng y x c đ nh nhiễm HIV Đạt tiêu chuẩn h ng đạt tiêu chuẩn  ≥ 12 tháng  < 12 tháng  không  có đến ngày hơm tháng? B nh nhân điều tr ART chưa? B nh nhân 18 tuổi trở lên?  có  khơng B nh nhân có khả hiểu  có  khơng thỏa thuận tham gia nghiên cứu? ... HỒNG TRÂM ỨNG DỤNG KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM ÁI TÍNH KHÁNG NGUYÊN GIỚI HẠN (LAG – AVIDITY) VÀ HỆ SỐ PHÂN LOẠI SAI ĐỂ ƢỚC TÍNH TỶ LỆ MỚI NHIỄM HIV TRÊN MỘT SỐ NHÓM CÓ NGUY CƠ CAO LÂY NHIỄM HIV Ở VIỆT... dụng kỹ thuật xét nghi m lực kháng nguyên giới hạn (LAg- Avidity) h số phân loại sai để ước tính tỷ l nhiễm HIV số nhóm có nguy cao lây nhiễm HIV Vi t Nam” để tìm cách tính tốn tỷ l nhiễm HIV phù... c đ nh tỷ l phân loại sai nhiễm sinh phẩm BED - CEIA, LAg- Avidity 71 3.2 Ứng dụng kỹ thuật LAg Avidity để ước tính tỷ l nhiễm HIV- 1 số nhóm đối tượng có nguy cao lây nhiễm HIV Vi t