Phản ứng kháng nguyên, kháng thể và ngưng kết trên kính, ống nghiệm (THỰC HÀNH VI SINH)

Buổi KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Mục tiêu chung: 1.Biết số phản ứng KN– KT →vi sinh, chẩn đoán lâm sàng, miễn dịch 2.Mỗi phản ứng huyết học (KN – KT) phải giải thích: oNguyên lý oCách làm oCách đọc kết oỨng dụng KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Vi khuẩn Virus Kháng thể Ký sinh trùng Vật lạ (kim loại, ) Cơ thể người KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Kháng nguyên+kháng thể Ngưng kết Kết hợp bổ thể Phản ứng kết tủa Ngăn ngưng kết HC Trung hòa PP Miễn dịch gắn men (ELISA) Rickettsia orientalis (sốt mò): sốt kéo dài 2-3 tuần Weil-Felix (khơng đặc hiệu):  Có biểu lâm sàng đầy đủ, phản ứng Weil – Felix (-)  Hiệu giá ngưng kết không cao Kháng nguyên OX19, OXK, OX2 KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Cách pha loãng huyết thanh: nhiều cách Theo hệ số 2/dung dịch NaCl 0.9% 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32… Tử: mẫu=huyết thanh: tổng lượng dịch Tổng lượng dịch= huyết thanh+nước muối 1:2 = huyết + nước muối sinh lý KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Kỹ thuật pha loãng: Tùy phản ứng → độ loãng Phản ứng Độ pha loãng Widal 1:50 Weil – Felix 1:10 ∆ bệnh virus 1:10 PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Nguyên lý: KN hữu hình: hồng cầu, tế bào vi sinh vật Bước 1: Cho mẫu bệnh phẩm Bước 2: Cho dung dịch tạo ngưng kết Bước 3: Lắc miếng p/ư Quan sát ngưng kết kết PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Ứng dụng: phản ứng ngưng kết ống nghiệm  Bệnh thương hàn (phản ứng Widal)  Bệnh số loài Rickettsia ( phản ứng Weil – Felix),… Salmonella (Thương hàn) Đặc điểm sinh học: - Hình thể, ni cấy: tương tự E coli - Độc tố: nội đtố, tác động lên hệ thần kinh - Sức đề kháng: cao - Kh/nguyên: thân (O); lông (H); bề mặt (Vi) Salmonella (Thương hàn) Đặc điểm sinh học: Kháng Đặc tính nguyên MD Thời gian Thời gian Công dụng xuất biến KT KT KN O Sớm, đặc hiệu cao >07 ngày > 03 tháng Chẩn đoán bệnh KN H Muộn, tồn lâu >12 ngày > 01 năm Dịch tể Salmonella (Thương hàn) Salmonella (Thương hàn) Thể bệnh: Lồi Salmonella Kí chủ S typhi Người S paratyphi A Người Dịch tể VN VN S paratyphi B Người (súc vật) Châu Âu S paratyphi C Người Đông Nam Á Thể bệnh Thương hàn Phó thương hàn Phó thương hàn TH, viêm ddruột, NKH S.typhimurium Người, súc vật S enteritidis NK, NĐộc thức ăn S.choleraesuis NKH Người VN PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Yêu cầu viết xét nghiệm để chẩn đoán: TH1: Nguyễn Văn A sốt 04 ngày ∆: Nghi thương hàn Xét nghiệm: Cấy máu PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Yêu cầu viết xét nghiệm để chẩn đoán: TH2: Lê Văn H, sốt 09 ngày ∆: Nghi thương hàn Xét nghiệm: Huyết chẩn đoán-widal PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Yêu cầu viết xét nghiệm để chẩn đoán: TH3: Phạm Thị K, sốt 18 ngày ∆: Nghi thương hàn Xét nghiệm: Cấy máu Xét nghiệm Phân PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Yêu cầu viết xét nghiệm để chẩn đốn: TH4: Hồng Xn H, sốt cách 01 tháng ∆: Bệnh thương hàn S paratyphi B, tìm thấy VK thương hàn máu Theo dõi đtrị: Xét nghiệm: Huyết ∆ (HGKT 2lần) Cấy phân PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Biện luận phản ứng Widal: TH1: Nguyễn Văn R, chưa tiêm phòng T.A.B Sốt 14 ngày ∆: Nghi thương hàn Lấy máu làm p/ứ Widal TO = 1/100 AO = (-) BO = (-) TH = 1/200 AH = (-) BH = (-) Nhiễm S typhi với KN O, H PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Biện luận phản ứng Widal: TH2: Phạm Xuân H, tiêm phòng T.A.B tháng Sốt 16 ngày ∆: Nghi thương hàn Lấy máu làm p/ứ Widal TO = (-) AO = 1/200 BO = (-) TH = 1/100 AH = 1/400 BH = 1/100 Nhiễm S paratyphi A với KN O, H PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Biện luận phản ứng Widal: TH3: Lê Văn Y, tiêm phòng T.A.B tháng Sốt 15 ngày ∆: Nghi thương hàn Lấy máu làm p/ứ Widal TO = (-) AO = (-) BO = 1/200 TH = 1/100 AH = 1/100 BH = 1/400 Nhiễm S paratyphi B với KN O, H PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Biện luận phản ứng Widal: TH4: Hồng Xn Nh, tiêm phịng T.A.B 01 năm ∆: Nghi thương hàn Lấy máu làm p/ứ Widal TO = (-) AO = (-) BO = (-) TH = 1/100 AH = 1/100 BH = 1/100 Không mắc bệnh thương hàn Chúc em học tốt ... Virus Kháng thể Ký sinh trùng Vật lạ (kim loại, ) Cơ thể người KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ KHÁNG NGUYÊN-KHÁNG THỂ Kháng nguyên +kháng thể Ngưng kết Kết hợp bổ thể Phản ứng kết tủa Ngăn ngưng kết HC... định kháng thể kháng nguyên biết ( hơn) PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT ? ?Phản ứng ngưng kết ống nghiệm: Dụng cụ: Kỹ thuật: Phản ứng định tính: o Ống làm chứng: nước muối : KN o Ống làm phản ứng: KHT : KN PHẢN... monocytogenes PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Phản ứng định lượng: độ pha loãng KN biết→KT? Hiệu giá KT (titer) độ pha loãng cao mà xảy ngưng kết kết PHẢN ỨNG NGƯNG KẾT Ứng dụng: phản ứng ngưng kết ống nghiệm 