Thử nghiệm quy trình sản xuất chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học cải tiến và thử nghiệm hiệu lực trên sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TNTN BỘ MÔN KHOA HỌC CÂY TRỒNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG THỬ NGHIỆM QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM THUỐC TRỪ SÂU SINH HỌC CẢI TIẾN VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC TRÊN SÂU ĂN TẠP (Spodoptera litura Fabricius), SÂU ĂN ĐỌT CẢI (Hellula undalis Fabricius) TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ LƯỚI VÀ NGOÀI ĐỒNG TỪ HAI LOÀI NẤM KÝ SINH CÔN TRÙNG Metarhizium anisopliae Beauveria bassina Chủ nhiệm đề tài: LÊ HỮU PHƯỚC Năm 2011 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TNTN BỘ MÔN KHOA HỌC CÂY TRỒNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG THỬ NGHIỆM QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM THUỐC TRỪ SÂU SINH HỌC CẢI TIẾN VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC TRÊN SÂU ĂN TẠP (Spodoptera litura Fabricius), SÂU ĂN ĐỌT CẢI (Hellula undalis Fabricius) TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ LƯỚI VÀ NGỒI ĐỒNG TỪ HAI LỒI NẤM KÝ SINH CƠN TRÙNG Metarhizium anisopliae Beauveria bassina BAN GIÁM HIỆU KHOA NN- TNTN CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI Lê Hữu Phước THÍ NGHIỆM BỔ SUNG DINH DƯỠNG TRONG QUÁ TRÌNH LÊN MEN CHẾ PHẨM VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC CỦA HAI CHẾ PHẨM TỪ HAI LỒI NẤM KÝ SINH CƠN TRÙNG Metarhizium anisopliae, Beauveria bassina ĐỐI VỚI SÂU ĂN TẠP (Spodoptera litura Fabricius) VÀ SÂU ĂN ĐỌT CẢI (Hellula undalis Fabricius) ThS Lê Hữu Phước TĨM LƯỢC Nhằm mục đích thử nghiệm mơi trường nhân ni sinh khối cấp có hiệu cao, giá thành thấp để áp dụng vào quy trình sản xuất chế phẩm sinh học từ nấm Metarhizium anisopliae nấm Beauveria bassiana thí nghiệm hiệu hai lồi nấm nhà lưới Thí nghiệm phịng bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên, bốn lặp lại để chọn môi trường nhân sinh khối cấp (môi trường xốp) từ chất gạo, bổ sung thêm pepton, yeast extract đường destrose Kết nấm Metarhizium anisopliae không cần thêm chất cho sinh khối tốt (đạt 26,97 x108 bào tử/gam sau chủng nấm 12 ngày) Trong đó, nấm Beauveria bassina cần bổ sung thêm 0,25 g pepton cho lượng bào tử tối ưu (20,23 x108 bào tử/gam) Thí nghiệm nhà lưới sâu ăn tạp cải tùa xại chọn nồng độ thích hợp 15 g.l-1 cho hai loại nấm Cụ thể, hai nồng độ phun chế phẩm nấm Metarhizium anisopilae 15 g.l-1 20 g.l-1 đạt hiệu tốt (từ 70%-82%) sau NSKP Nghiệm thức (nồng độ 15 g.l-1) có hiệu khơng khác biệt nghiệm thức (nồng độ 20 g.l-1) Nghiệm thức phun nấm Beauveria bassiana nồng độ 15 g.l-1 (có độ hữu hiệu đạt 70,34 %) cho hiệu tốt kinh tế ĐẶT VẤN ĐỀ Phòng trừ sâu hại khó khăn lớn nghề trồng rau mối quan tâm lo lắng hàng đầu nông dân Biện pháp phịng trừ nơng dân chủ yếu dựa vào việc phun thuốc hóa học mà biết đến biện pháp khác Sự phát triển tính kháng thuốc sâu hại ảnh hưởng thuốc hóa học lên sức khỏe người môi trường tạo áp lực mạnh mẽ cho phát triển tác nhân sinh học phịng trừ tổng hợp trùng gây hại Trong năm gần đây, nhiều nghiên cứu nước giới Úc, Brazil, Mỹ, Pháp, Colombia, Venezuela cho thấy việc sử dụng loại nấm ký sinh trùng phịng trừ tổng hợp lồi sâu gây hại cách hợp lý mang lại hiệu cao (Butt, T M Copping, L., 2000) Biện pháp phòng trừ sâu hại biện pháp sinh học khuyến khích nghiên cứu, thử nghiệm để áp dụng, nhóm rau ăn Tuy nhiên, việc sử dụng dòng nấm trình quản lý phịng trừ cịn hạn chế Việc thu thập, phân lập thử nghiệm dòng nấm có khả diệt sâu cao yêu cầu thường xuyên cấp thiết Từ đó, đưa đến yêu cầu cần phải tiến hành nghiên cứu bổ sung thêm chất khống dinh dưỡng mơi trường nhân sinh khối cấp để tăng cường khả tạo mật số bào tử (sống) mơi trường nhằm tạo nên tính dễ áp dụng điều kiện nông hộ việc thử nghiệm hiệu trừ sâu rau điều kiện nhà lưới nhằm bước đầu nghiên cứu thử nghiệm hiệu sinh học diệt sâu hai chế phẩm vi sinh PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thí nghiệm bổ sung dinh dưỡng cho mơi trường xốp để nhân sinh khối loài nấm Metarhizium anisopilae (Metsch.) Sorok Beauveria bassiana (Bals.) Vuill Chuẩn bị bào tử nấm: Tiến hành cấy trữ nguồn nấm vào đĩa Petri chứa môi trường dinh dưỡng cho nấm phát triển Khoảng 7-10 ngày sau sợi nấm hình thành sinh số lượng bào tử định Tiến hành cạo nấm, lọc lấy dung dịch nấm, đếm mật số bào tử tạo huyền phù bào tử (HPBT) có mật số có từ 108 bào tử/ml Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với nghiệm thức tương đương với bốn loại mơi trường (MT1, MT2, MT3, MT4) có thành phần chất khác lần lặp lại, lần lặp lại ứng với bình tam giác chứa 100g gạo loại dinh dưỡng bổ sung (pepton, Yeast extract, Destrose) Chỉ tiêu đánh giá: Số lượng bào tử tổng số / 1g chế phẩm CFU/g 2.2 Khảo sát hiệu chế phẩm sâu ăn tạp (Spodoptera litura) cải tùa xại điều kiện nhà lưới Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo thể thức hình vuông latin (Latin Squares Design), nghiệm thức x lặp lại Mỗi đơn vị thí nghiệm chậu cải Ngẫu nhiên hóa sơ đồ bố trí thí nghiệm phần mềm IRRITAT 4.0 for Window (hình 3) Thí nghiệm chia thành hai thí nghiệm nhỏ cho loại nấm Bảng Nồng độ nghiệm thức hai thí nghiệm Nghiệm thức Metarhizium anisopilae (g.l-1) Beauveria bassiana (g.l-1) 10 10 15 15 20 20 Nước Nước Lấy tiêu: Đếm tổng số sâu sống trước phun thuốc 3, 6, ngày sau phun thuốc chậu Mỗi lần lấy tiêu ghi nhận nhiệt độ ẩm độ Tính độ hữu hiệu cơng thức HendersonTilton KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu tìm mơi trường sản xuất chế phẩm nấm Metarhizium anisopilae Kết đếm bào tử tổng số bào tử sống (CFU) thể bảng Bảng 2: Mật số bào tử nấm Metarhizium anisopilae môi trường xốp sau chủng nấm 12 ngày Nghiệm thức Mật số bào tử tổng số Tỷ lệ sống (%) CFU (x108 bào (x10 bào tử/gam) tử/gam) MT1 28,68 22,98 80,13 MT2 30,61 25,12 82,06 32,12 26,97 83,97 MT3 MT4 31,25 25,48 81,54 Mức ý nghĩa ns ns ns CV (%) 8,47 10,13 9,31 Ghi chú: ns: khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN Mật số bào tử tổng số nấm Metarhizium anisopilae 12 ngày sau chủng môi trường xốp cho lượng bào tử cao (từ 28,68 x108 bào tử/gam MT1 đến 32,12 x108 bào tử/gam MT3); nhiên, bốn môi trường khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê mức độ 5% Tương tự, mật số bào tử sống CFU (x108 bào tử/gam) tỷ lệ sống mơi trường khơng khác biệt có ý nghĩa, MT2, MT3 MT4 có bổ sung thêm dinh dưỡng pepton, yeast extract đường destrose Tỷ lệ sống 12 NSKC loại môi trường cao (từ 80,13 % MT1 đến 83,97 % MT3), nhiên, chúng khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (bảng 2) Như vậy, tiêu mật số bào tử tổng số CFU, môi trường xốp tạo sinh khối tỷ lệ sống cao mà khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê Điều gạo có đủ thành phần dinh dưỡng đáp ứng nhu cầu cho nấm phát triển suốt thời gian nhân ni sinh khối Do vậy, q trình sản xuất chế phẩm, sử dụng môi trường (chỉ sử dụng gạo trùng không bổ sung thêm dưỡng chất) vừa đơn giản, nhanh vừa giảm chi phí sản xuất so với mơi trường cịn lại 3.2 Nghiên cứu tìm mơi trường xốp để sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana Kết đếm bào tử tổng số bào tử sống (CFU) thể bảng Bảng 3: Mật số bào tử nấm Beauveria bassiana bốn loại môi trường xốp sau chủng 12 ngày CFU (x108 bào tử/gam) Tỷ lệ sống (%) Nghiệm thức Mật số bào tử tổng số (x10 bào tử/gam) MT1 16,14 d 11,21 c 69,45 c MT2 24,16 ab 20,23 ab 83,73 ab MT3 25,12 a 22,30 a 88,77 a MT4 20,14 c 13,26 c 65,84 cd Mức ý nghĩa * * * CV (%) 9,67 7,44 8,55 Ghi chú: Trong cột, số có chữ theo sau giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Kết thí nghiệm bảng cho thấy mật số bào tử tổng số nấm B bassiana bốn loại mơi trường xốp có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, cao MT2 (gạo, nước, pepton) MT3 (gạo, nước, pepton, yeast extract), đạt 24,16 x 108 bào tử/gam chế phẩm 25,12 x 108 bào tử/gam chế phẩm, thấp MT1 (chỉ có gạo nước), đạt 16,14 x 108 bào tử/gam chế phẩm Tuy nhiên, hai môi trường thử nghiệm MT2 MT3 lại không khác biệt có ý nghĩa (bảng 3) Ở tiêu mật số bào tử sống CFU (colony forming unit, x108 bào tử/gam) cho kết tương tự hai môi trường MT2 MT3, mật số bào tử sống cao hai mơi trường cịn lại MT1 lại MT4 chúng lại khơng có khác biệt qua phép thử Duncan mức ý nghĩa 5% Sau 12 ngày sau khi chủng, MT2 MT3 đạt 20,23 x108 bào tử/gam 22,30 x108 bào tử/gam; hai MT1 MT4 có 11,21 x108 bào tử/gam 13,26 x108 bào tử/gam Do đó, tỷ lệ sống ghi nhận cao hai môi trường MT3 MT2 (88,77 % 83,73 %) so với hai môi trường (bảng 3) Như vậy, môi trường MT2 chọn sản xuất chế phẩm mật số bào tử sống CFU tỷ lệ sống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê với MT3 chi phí thấp khơng có Yeast extract 3.3 Hiệu hai chế phẩm sinh học sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới 3.3.1 Đối với nấm Metarhizium anisopilae Kết thí nghiệm bảng cho thấy, nghiệm thức bắt đầu có hiệu vào thời điểm NSKP Nghiệm thức (phun nồng độ 10 g.l-1) có hiệu thấp hai NT2 (phun nồng độ 15 g.l-1) NT3 (phun nồng độ 20 g.l-1) có ý nghĩa thống kê mức 5%, nhiên, hai nghiệm thức lại không khác biệt Ở NSKP, nồng độ nghiệm thức phun nấm có hiệu tăng cao, khác biệt so với đối chứng Hai nghiệm thức phun nồng độ 15 g.l-1 20 g.l-1 đạt hiệu cao (lần lượt 64,61% 67,56%), chúng khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê cao nghiệm thức phun nồng độ 10 g.l-1 (chỉ đạt 52,48%) Bảng 4: Hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopilae sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới, môn Bảo vệ thực vật, Đại học Cần Thơ, tháng 04-05/2009 Độ hữu hiệu (%) vào ngày sau phun Nghiệm thức NT1: M anisopilae 10 g.l-1 34,57 b 52,48 c 70,13 c NT2: M anisopilae 15 g.l-1 39,87 a 64,61 ab 80,27 ab NT3: M anisopilae 20 g.l-1 41,55 a 67,56 a 82,54 a ĐC 0 CV% 12,46 11,54 18,67 Mức ý nghĩa * * * Ghi chú: Trong cột số có chữ theo sau giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN; *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Đến NSKP, hiệu tất nghiệm thức tốt (đạt từ 70,13% đến 82,54%) Hai NT2 (80,27%) NT3 (82,54%) có hiệu cao NT1 (70,13%) sâu ăn tạp có ý nghĩa thống kê chúng khơng khác biệt có ý nghĩa (bảng 4) 3.3.2 Đối với nấm Beauveria bassiana Kết thí nghiệm bảng cho thấy, tất nghiệm thức có hiệu cao nghiệm thức đối chứng vào NSKP, NSKP NSKP có ý nghĩa thống kê mức độ 5% (bảng 5) Bảng 5: Hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới, môn Bảo vệ thực vật, Đại học Cần Thơ, tháng 04-5/2009 Độ hữu hiệu (%) vào ngày sau phun Nghiệm thức NT1: B bassiana 10 g.l-1 20,51 b 39,46 c 66,35 c -1 NT2: B bassiana 15 g.l 32,27 a 47,56 ab 70,34ab 35,55 a 57,46 a 78,04 a NT3: B bassiana 20 g.l-1 Đối chứng 0 CV% 14,46 33,63 29,67 Mức ý nghĩa * * * Ghi chú: Trong cột số có chữ theo sau giống khơng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Ở NSKP, hiệu lực chế phẩm nấm B bassiana sâu ăn tạp đạt thấp, từ 20,51% (NT1) đến 35,55% (NT3) Hai nghiệm thức NT2 (15 g.l-1) NT3 (20 g.l-1) có hiệu cao nghiệm thức NT1 (10 g.l-1), nhiên chúng không khác biệt có ý nghĩa thống kê Đến NSKP, nghiệm thức cho kết cao (đạt 57,46%), nhiên không khác biệt so với NT2 (47,56%) thấp nghiệm thức NT1 (chỉ đạt 39,46%) Tương tự, NSKP, nấm B bassiana có hiệu cao nghiệm thức NT3 (đạt 78,04%), NT2 (70,34%), NT1 (66,35%) cho hiệu thấp Như vậy, nghiệm thức phun B bassiana nồng độ 15 g.l-1 cho kết không thấp so nồng độ 20 g.l-1 (bảng 5) KẾT LUẬN 4.1 Thí nghiệm phịng Mật số bào tử tổng số, bào tử sống nấm Metarhizium anisopilae môi trường xốp sau chủng nấm 12 ngày khơng có khác loại mơi trường dinh dưỡng có bổ sung khống chất khác Mật số bào tử tổng số MT1 từ 22,98 x108 bào tử/gam đến 26,97 x108 bào tử/gam MT1 (gạo + nước cất, trùng) chọn làm môi trường nhân sinh khối cấp tốt nhất, vừa đơn giản cho nơng dân vừa giảm chi phí Mật số bào tử nấm Beauveria bassiana bốn loại mơi trường xốp sau chủng 12 ngày có mật số bào tử sống CFU / g chế phẩm đạt cao nghiệm thức MT3 (22,30 x108 bào tử/gam) MT2 (20,23 x108 bào tử/gam), nhiên khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê với MT3 MT2 (100g gạo + 120 ml nước + 0,25 g pepton) chọn làm môi trường xốp nhân khối nấm Beauveria bassiana 4.2 Thí nghiệm nhà lưới - Cả ba nồng độ phun chế phẩm nấm Metarhizium anisopilae (10 g.l-1, 15 g.l-1 20 g.l-1) đạt hiệu tốt sâu ăn tạp Spodoptera litura Fabricius cải tùa xại điều kiện nhà lưới (từ 70%-82%) sau NSKP Nghiệm thức (nồng độ 15 g.l-1) có hiệu khơng khác biệt nghiệm thức (nồng độ 20 g.l-1) - Nghiệm thức phun nấm Beauveria bassiana nồng độ 15 g.l-1 (có độ hữu hiệu đạt 70,34%) cho hiệu cao kinh tế TÀI LIỆU THAM KHẢO Butt, T M and Copping, L 2000 Fungal biological control agents Pesticide Outlook 11: 186-191 CHƯƠNG MỞ ĐẦU Phòng trừ sâu hại khó khăn lớn nghề trồng rau mối quan tâm lo lắng hàng đầu nơng dân Biện pháp phịng trừ nơng dân chủ yếu dựa vào việc phun thuốc hóa học mà biết đến biện pháp khác Nông dân sử dụng tới 30 loại thuốc trừ sâu rau, có nhiều loại bị cấm sử dụng (Nguyễn Quí Hùng ctv., 1999) Sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabricius), sâu ăn đọt cải (Hellula undalis Fabricius Crocidolomia binotalis Zeller), sâu tơ (Plutella xylostella), rầy phấn trắng (Bemiscia tabaci), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua) bọ nhảy (Phyllostreta striolata) đối tượng gây hại quan trọng phổ biến nhóm rau ăn Đồng sơng Cửu Long (Trần Thị Ba, 1999) Sự phát triển tính kháng thuốc sâu hại ảnh hưởng thuốc hóa học lên sức khỏe người mơi trường tạo áp lực mạnh cho phát triển tác nhân sinh học phòng trừ tổng hợp côn trùng gây hại Trong năm gần đây, nhiều nghiên cứu nước giới Úc, Brazil, Mỹ, Pháp, Colombia, Venezuela cho thấy việc sử dụng loại nấm ký sinh trùng phịng trừ tổng hợp loài sâu gây hại cách hợp lý mang lại hiệu cao (Burges, 1998; Butt Copping, 1999) Ở Châu Á, Malaysia, nghiên cứu nấm Metarhizium anisopliae để phòng trừ mối đất đạt hiệu 64,57% sau 14 ngày Tại Philippines, nghiên cứu sử dụng nấm Metarhizium anisopliae để diệt rầy nâu hại lúa, hiệu lực đạt 60% sau 10 ngày Tại Úc, năm 1991 Milner nghiên cứu nấm Metarhizium anisopliae để phịng trừ bọ hại mía đạt hiệu 68% Tại Nhật Bản, năm 1988 số nhà khoa học sử dụng nấm Beauveria bassiana để phòng trừ dòi hại rễ củ cải đạt hiệu 70% sau 10 ngày Tại Trung Quốc, Am Wu sử dụng dòng nấm Paecilomyces spp Beauveria bassiana để phịng trừ sâu róm thơng đạt hiệu cao (trích dẫn Phạm Thị Thùy, 2004) Ở nước, có số nghiên cứu Viện Bảo vệ thực vật phân lập dòng nấm ký sinh rầy nâu hại lúa, châu chấu hại bắp, sâu đo xanh hại đay, bọ hại dừa, sùng đất hại đậu phộng sử dụng đạt hiệu cao Viện Lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long sử dụng dòng nấm rầy nâu đạt hiệu tốt, 67% sau 10 ngày Tuy nhiên, việc sử dụng dịng nấm q trình quản lý phòng trừ rau ăn hạn chế Ngoài ra, việc thu thập, phân lập thử nghiệm dịng nấm có khả diệt sâu cao yêu cầu thường xuyên cấp thiết Từ đó, đưa đến yêu cầu cần phải tiến hành nghiên cứu bổ sung thêm chất khống dinh dưỡng mơi trường nhân sinh khối cấp để tăng cường khả tạo mật số bào tử (sống) môi trường nhằm tạo nên tính dễ áp dụng điều kiện nơng hộ việc thử nghiệm hiệu trừ sâu rau điều kiện nhà lưới đồng nhằm bước đầu nghiên cứu hiệu sinh học diệt sâu hai chế phẩm vi sinh Đề tài: “Thử nghiệm quy trình sản xuất chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học cải tiến thử nghiệm hiệu lực sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabricius), sâu ăn đọt cải (Hellula undalis Fabricius) điều kiện nhà lưới ngồi đồng từ hai lồi nấm ký sinh trùng Metarhizium anisopliae Beauveria bassina” thực đáp ứng yêu cầu A MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU I MỤC TIÊU Thử nghiệm sản phẩm trừ sâu sinh học cải tiến có hiệu hai loài sâu hại quan trọng cải tùa xại sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải từ hai loài nấm Metarhizium anisopilae (Metsch.) Sorok Beauveria bassiana (Bals.) Vuill Đánh giá hiệu hai chế phẩm sinh học cải tùa xại điều kiện nhà lưới đồng II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Thí nghiệm bổ sung dinh dưỡng cho môi trường xốp (gạo trùng) để nhân nhanh sinh khối loài nấm Metarhizium anisopilae (Metsch.) Sorok Beauveria bassiana (Bals.) Vuill Khảo sát độ hữu hiệu chế phẩm sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới Khảo sát độ hữu hiệu chế phẩm sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải cải tùa xại điều kiện đồng B ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU I ĐỐI TƯỢNG Hai chế phẩm trừ sâu sinh học từ hai loài nấm ký sinh côn trùng Metarhizium anisopilae (Metsch.) Sorok Beauveria bassiana (Bals.) Vuill ảnh hưởng lên sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải điều kiện nhà lưới đồng II PHẠM VI NGHIÊN CỨU Bổ sung dinh dưỡng cho môi trường xốp nhân nhanh sinh khối để sản xuất chế phẩm loài nấm Metarhizium anisopilae (Metsch.) Sorok Beauveria bassiana (Bals.) Vuill cho mật số bào tử cao Thử nghiệm hiệu lực chế phẩm lên loài sâu hại cải tùa xại sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải C CƠ SỞ LÝ LUẬN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU I CƠ SỞ LÝ LUẬN Sơ lược số đặc điểm hai lồi nấm ký sinh trùng Metarhizium anisopliae nấm Beauveria bassiana 1.1 Phân loại Theo hệ thống phân loại nấm Ainsworth, G C (1996), hai lồi nấm ký sinh trùng Metarhizium anisopliae Beauveria bassiana phân loại sau: Nấm Metarhizium anisopliae thuộc ngành phụ lớp nấm bất toàn, giống Deuteromycetes Một số tác giả khác lại cho nấm Metarhizium anisopliae thuộc ngành phụ lớp nấm túi Asscomycotia, lớp Pletomyces giống Metarhizium Tuy nhiên, phân loại theo Ainsworth nhiều tác giả chấp nhận Nấm Beauveria bassiana thuộc ngành phụ lớp nấm bất toàn Deuteromycetes, giống Beauveria Theo Macleod, H L (1954), loài Beauveria bassiana loài điển hình chi nấm bạch cương Beauveria 1.2 Sự phân bố Nấm Metarhizium anisopliae tìm thấy khắp châu lục với 200 lồi trùng khác rầy lá, rầy mềm, bọ xít đen nhiều loài sâu hại khác Sau xâm nhiễm, chúng hình thành bề mặt trùng lớp phấn màu xanh vàng đến màu xanh đậm, mạng sợi nấm chằng chịt màu trắng (Ferron L K, 1978) Nấm Metarhizium anisopliae nấm hại côn trùng, xuất phổ biến tự nhiên, phân lập từ xác côn trùng chết hay phân lập từ đất Ở nơi khơng có trùng, người ta phân lập Metarhizium anisopliae điều kiện thời tiết khắc nghiệt (như Đức), khu đất rừng sâu bị đốt cháy, chất thải hữu (chuẩn bị ô nhiễm) trầm tích sơng chứa đất đầm lầy trồng loại đước, tổ số loài chim rễ dâu tây phân lập nấm Metarhizium anisopliae (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm Beauveria bassiana phân bố rộng rãi khắp giới, tìm thấy đất ký sinh nhiều lồi trùng hại bơng, khoai tây, lúa mì, đậu ngô Mỹ (Alaoui Abdelaziz Elmeziane Abdellatif, 2008) Nấm Beauveria bassiana (hay gọi nấm bạch cương) loại nấm hại côn trùng phân bố khắp giới, xuất phổ biến tự nhiên, phân lập dễ dàng từ xác côn trùng chết hay phân lập từ đất (James R Fuxa Yoshinori Tanada 1991.) 1.3 Đặc điểm hình thái, sinh học khả gây hại 1.3.1 Nấm Metarhizium anisopliae Nấm Metarhizium anisopliae có dạng sợi phân nhánh, có vách ngăn ngang, đường kính – µm (Trần Thị Thanh, 2000) Sợi nấm phát triển bề mặt côn trùng có màu từ trắng đến hồng, cuống sinh bào tử ngắn mọc tỏa tròn đám sợi nấm dày đặc Bào tử trần hình que có kích thước 3,5 x 6,4 x 7,2 µm, màu từ lục xám đến ôliu - lục, bào tử xếp thành chuỗi chặt chẽ nhìn mắt thường thấy bào tử tạo bề mặt thể côn trùng lớp phấn rõ màu xanh lục Sợi nấm phát triển bên trùng có chiều rộng khoảng - µm, dài khoảng 20 µm, chia thành nhiều tế bào ngắn, tế bào thấy rõ nhiều giọt mỡ (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm Metarhizium anisopliae có bào tử dạng hình trụ, hình hạt đậu, khuẩn lạc có màu xanh, có màu tối màu hồng vỏ quế Loài Metarhizium anisopliae có dạng bào tử nhỏ lớn, dạng bào tử nhỏ Metarhizium anisopliae var có kích thước bào tử 3,5 - 5,0 x 2,5 - 4,5 µm, dạng bào tử lớn Metarhizium anisopliae var major có kích thước bào tử 10,0 - 14,0 µm Để phân biệt loài trên, Tsai K ctv., (2006) nghiên cứu đặc tính huyết khác lồi xác định loài Metarhizium anisopliae chủng gây bệnh mạnh côn trùng thuộc cánh cứng Coleoptera Nhiều nhà khoa học nghiên cứu tìm thấy có khoảng 204 lồi trùng thuộc họ Elaridae Curculionidae dễ bị nhiễm bệnh nấm Metarhizium anisopliae (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm Metarhizium anisopliae loài nấm ký sinh rộng đối tượng gây hại nông lâm nghiệp khắp giới cánh cứng, cánh đều, cánh nửa cứng, cánh vẩy,… Cho đến nhà khoa học giới chưa xác định loại vi nấm có hiệu lực cao phổ tác dụng rộng rãi chủng M anisopliae Tại Úc năm 1995, Richard Miller tách vài trăm dòng nấm Metarhizium anisopliae từ nhóm trùng sống đất gốc mía Trong số 95 chủng thử nghiệm trực tiếp, tác giả chọn hai chủng có khả diệt sâu Lepidota frenchi L consobrina hại rễ mía chủng diệt sâu Antitrogus parvulus với LD50 - x 104 bào tử.g-1 Henel chọn từ 22 chủng vi nấm, có chủng Metarhizium anisopliae phù hợp cho phương pháp phòng trừ sinh học loài mối Masutiesrmes exitiosus (Hill K L, 1999, trích dẫn Phạm Thị Thùy, 2004) Nhiều lồi nấm chi Metarhizium có khả diệt trùng thuộc họ Elalerdae Curculionidae thuộc cánh cứng Coleoptera, ấu trùng muỗi Aedes aegypti, Anopheles setphensi, Clexpipiens thuộc hai cánh Diptera, bọ xít đen hại lúa mì Scotiphora coarctata thuộc cánh nửa cứng Hemiptera, châu chấu sống lưng vàng Patanga sucincta, châu chấu mía Heiroglyphus tonkinensis thuộc cánh thẳng Orthopterra, mối hại đất Masutitermes extiosus thuộc cánh Isoptera 1.3.2 Nấm Beauveria bassiana Nấm có sợi từ màu trắng đến màu kem có pha màu đỏ, da cam, đơi pha màu lục, tiết vào mơi trường sắc tố màu vàng, màu đỏ nhạt màu xanh da trời Sợi nấm phân nhánh, có vách ngăn ngang, có chiều dài khoảng - 5μm phát triển dày đặc môi trường, sau xuất chi chít cuống sinh bào tử Đặc điểm loại nấm có sợi xốp, cuống bào tử trần đứng riêng rẽ hay tụ lại thành đám, không phân nhánh phân nhánh, hình ống hình bình với chiều dài khơng Trên cuống có nhánh nhỏ mang bào tử trần (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm Beauveria bassiana sinh bào tử trần đơn bào (chỉ gồm tế bào) không màu, suốt, không vách ngăn từ hình cầu (đường kính – µm) đến hình trứng (kích thước 1,5 - 5,5 µm) Bào tử trần mọc vòng xoắn, phát sinh từ sợi sinh dưỡng mọc thành đám, có cuống phình Tế bào sinh bào tử trần có cuống dạng hình cầu elip, hình thoi trụ, hình cổ chai Cuống tế bào sinh bào tử trần có hình ziczag mấu dạng nhỏ phát sinh kéo dài gốc ghép (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm Beauveria bassiana xâm nhiễm nhiều lồi trùng gây hại cho nơng nghiệp thuộc cánh vẩy Lepidoptera, cánh cứng Coleoptera, cánh màng Hymenoptera, cánh nửa cứng Hemiptera, hai cánh Diptera (Lewis Bing, 1991) Clark G H ctv., (1986) cho biết sử dụng nấm Beauveria bassiana để diệt muỗi 1.4 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa 1.4.1 Nấm Metarhizium anisopliae Nấm Metarhizium anisopliae sinh trưởng tốt chất khơng có kitin, chúng sống nhiệt độ thấp 80C, có biên độ độ ẩm rộng, nơi tích lũy nhiều CO2 thiếu O2 chúng sống tới 445 ngày Ở nhiệt độ 100C 450C nấm thường khơng hình thành bào tử Nhiệt độ thích hợp cho nảy mầm bào tử từ 25 - 300C bị chết 49 - 550C, nhiệt độ cho nấm phát triển tốt 250C pH thích hợp 6,0 dao động khoảng 3,3 - 8,5 Nấm Metarhizium anisopliae có khả phân giải tinh bột, xenlulose kitin (lông da côn trùng) Nấm Metarhizium anisopliae đồng hóa nhiều nguồn thức ăn carbon khác Chúng phát triển tốt mơi trường có chứa glucose hay lipid Muốn tạo thành bào tử, nấm Metarhizium anisopliae địi hỏi phải có ẩm độ khơng khí cao Phụ chương Phân tích ANOVA hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopilae sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới vào thời điểm ngày sau phun Nguồn Hàng Cột Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,67% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 18436.32 564.83 483.88 211.06 19696.10 Trung bình bình phương 6145.441 188.277 161.294 35.177 F-tính 174.70 5.35 4.59 Xác xuất 0.000 0.039 0.054 Phụ chương 10 Phân tích ANOVA hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới vào thời điểm ngày sau phun Nguồn Hàng Cột Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 14,46% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 3101.07 87.55 3.93 47.35 3239.90 Trung bình bình phương 1033.691 29.182 1.311 7.891 F-tính 131.00 3.70 0.17 Xác xuất 0.000 0.081 0.915 Phụ chương 11 Phân tích ANOVA hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới vào thời điểm ngày sau phun Độ tự Tổng bình Trung bình Xác F-tính Nguồn phương bình phương xuất Hàng 7608.32 2536.106 40.41 0.000 Cột 37.23 12.410 0.20 0.894 Nghiệm thức 161.10 53.699 0.86 0.513 376.59 62.766 Sai số Tổng cộng 15 8183.24 CV = 30,63% Phụ chương 12 Phân tích ANOVA hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới vào thời điểm ngày sau phun Nguồn Hàng Cột Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 17,67% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 15652.15 476.10 203.63 262.99 16594.86 Trung bình bình phương 5217.382 158.700 67.875 43.832 F-tính 119.03 3.62 1.55 Xác xuất 0.000 0.084 0.296 III Phụ chương 13 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 21,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 9.517 5668.617 96.251 5774.384 Trung bình bình phương 3.172 1889.539 10.695 F-tính Xác xuất 0.2966 176.6830 0.0000 Phụ chương 14 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 110.317 1916.812 195.091 2222.219 Trung bình bình phương 0.2367 638.937 21.677 F-tính 1.6964 29.4757 Xác xuất 36.772 0.0001 Phụ chương 15 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 26,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 37.210 2089.400 516.070 2642.680 Trung bình bình phương 0.2163 0.0016 57.341 F-tính Xác xuất 12.403 12.1460 Phụ chương 16 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 32,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 259.565 5985.360 664.295 6909.220 Trung bình bình phương 86.522 1995.120 73.811 F-tính 1.1722 27.0303 Xác xuất 0.3732 0.0001 IV Phụ chương 17 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 20,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 282.100 4295.760 400.220 4978.080 Trung bình bình phương 94.033 1431.920 44.469 F-tính 2.1146 32.2005 Xác xuất 0.1686 0.0000 Phụ chương 18 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 19,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 688.020 4694.600 814.300 6196.920 Trung bình bình phương 229.340 1564.867 90.478 F-tính 2.5348 17.2956 Xác xuất 0.1223 0.0004 Phụ chương 19 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 33,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 481.250 11844.830 499.990 12826.070 Trung bình bình phương 160.417 3948.277 55.554 F-tính 2.8876 71.0704 Xác xuất 0.0949 0.0000 Phụ chương 20 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Độ tự Tổng bình Trung bình Xác F-tính phương bình phương xuất Lặp lại 123.535 41.178 0.7821 Nghiệm thức 481.160 160.387 3.0461 0.0450 Sai số 473.885 52.654 Tổng cộng 15 1078.580 CV = 15,8% V Phụ chương 21 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 466.170 2782.990 427.070 3676.230 Trung bình bình phương 155.390 927.663 47.452 F-tính 3.2747 19.5494 Xác xuất 0.0728 0.0003 Phụ chương 22 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 12,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 440.500 5877.680 366.140 6684.320 Trung bình bình phương 146.833 1959.227 40.682 6684.320 F-tính 3.6093 48.1593 Xác xuất 0.0586 0.0000 Phụ chương 23 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 24,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 91.485 1995.310 778.295 2865.090 Trung bình bình phương 30.495 665.103 86.477 F-tính 0.3526 7.6911 Xác xuất 0.0075 Phụ chương 24 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 8,7% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 13.970 2557.630 667.590 3239.190 Trung bình bình phương 4.657 852.543 74.177 F-tính 0.0628 11.4934 Xác xuất 0.0020 VI Phụ chương 25 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 214.865 7610.640 881.435 8706.940 Trung bình bình phương 71.622 2536.880 97.937 F-tính 0.7313 25.9031 Xác xuất 0.0001 Phụ chương 26 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,7% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 470.250 7264.430 937.790 8672.470 Trung bình bình phương 156.750 2421.477 104.199 F-tính 1.5043 23.2390 Xác xuất 0.2787 0.0001 Phụ chương 27 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 22,3% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 417.980 1346.440 942.420 2706.840 Trung bình bình phương 139.327 448.813 104.713 F-tính 1.3306 4.2861 Xác xuất 0.3242 0.0388 Phụ chương 28 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 15,3% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 177.895 11863.400 408.525 12449.820 Trung bình bình phương 59.298 3954.467 45.392 F-tính 1.3064 87.1188 Xác xuất 0.3312 0.0000 VII Phụ chương 29 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 20,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 309.000 12402.440 348.920 13060.360 Trung bình bình phương 103.000 4134.147 38.769 Xác xuất 2.6568 0.1119 106.6357 0.0000 F-tính Phụ chương 30 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 33,2% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 132.430 7403.950 1197.050 8733.430 Trung bình bình phương 44.143 2467.983 133.006 F-tính 0.3319 18.5555 Xác xuất 0.0003 Phụ chương 31 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 29,0% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 154.380 7612.840 410.660 8177.880 Trung bình bình phương 51.460 2537.613 45.629 F-tính 1.1278 55.6142 Xác xuất 0.3885 0.0000 Phụ chương 32 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 30,0% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 186.250 5864.670 530.390 6581.310 Trung bình bình phương 62.083 1954.890 58.932 F-tính 1.0535 33.1718 Xác xuất 0.4155 0.0000 VIII Phụ chương 33 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 190.395 3735.630 551.665 4477.690 Trung bình bình phương 63.465 1245.210 61.296 F-tính 1.0354 20.3147 Xác xuất 0.4224 0.0002 Phụ chương 34 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 23,0% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 178.875 8028.960 492.705 8700.540 Trung bình bình phương 59.625 2676.320 54.745 F-tính 1.0891 48.8870 Xác xuất 0.4023 0.0000 Phụ chương 35 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,8% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 177.410 4472.510 558.790 5208.710 Trung bình bình phương 59.137 1490.837 62.088 F-tính 0.9525 24.0118 Xác xuất 0.0001 Phụ chương 36 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 19,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 104.940 253.640 735.780 1094.360 Trung bình bình phương 34.980 84.547 81.753 F-tính 0.4279 1.0342 Xác xuất 0.0419 IX Phụ chương 37 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 28,4% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 206.880 18586.400 408.800 19202.080 Trung bình bình phương 68.960 6195.467 45.422 Xác xuất 1.5182 0.2754 136.3973 0.0000 F-tính Phụ chương 38 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 9,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 285.170 10705.790 544.470 11535.430 Trung bình bình phương 95.057 3568.597 60.497 F-tính 1.5713 58.9883 Xác xuất 0.2631 0.0000 Phụ chương 39 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 72.270 6777.710 1105.930 7955.910 Trung bình bình phương 24.090 2259.237 122.881 F-tính 0.1960 18.3855 Xác xuất 0.0004 Phụ chương 40 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 11,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 372.770 10189.230 875.990 11437.990 Trung bình bình phương 124.257 3396.410 97.332 F-tính 1.2766 34.8950 Xác xuất 0.3400 0.0000 X Phụ chương 41 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 16,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 14.330 3728.750 1186.750 4929.830 Trung bình bình phương 4.777 1242.917 131.861 F-tính 0.0362 9.4260 Xác xuất 0.0039 Phụ chương 42 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 9,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 310.000 5650.760 809.280 6770.040 Trung bình bình phương 103.333 1883.587 89.920 F-tính 1.1492 20.9474 Xác xuất 0.3811 0.0002 Phụ chương 43 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 12,4% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 51.290 8889.230 724.910 9665.430 Trung bình bình phương 17.097 2963.077 80.546 F-tính 0.2123 36.7876 Xác xuất 0.0000 Phụ chương 44 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 20,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 179.930 12255.230 694.190 13129.350 Trung bình bình phương 59.977 4085.077 77.132 F-tính 0.7776 52.9620 Xác xuất 0.0000 XI Phụ chương 45 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 29,8% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 392.130 162.750 1010.550 1565.430 Trung bình bình phương 130.710 54.250 112.283 F-tính 1.1641 0.4832 Xác xuất 0.3760 Phụ chương 46 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 21,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 203.060 4141.880 791.580 5136.520 Trung bình bình phương 67.687 1380.627 87.953 F-tính 0.7696 15.6973 Xác xuất 0.0006 Phụ chương 47 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 11,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 438.035 1813.790 997.665 3249.490 Trung bình bình phương 146.012 604.597 110.852 F-tính 1.3172 5.4541 Xác xuất 0.3280 0.0206 Phụ chương 48 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn tạp ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 7,8% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 837.485 2391.630 395.655 3624.770 Trung bình bình phương 279.162 797.210 43.962 F-tính 6.3501 18.1342 Xác xuất 0.0133 0.0004 XII Phụ chương 49 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,3% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 943.057 6342.667 2480.951 9766.674 Trung bình bình phương 314.352 2114.222 275.661 F-tính 1.1404 7.6696 Xác xuất 0.3841 0.0075 Phụ chương 50 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 9,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 592.445 2633.390 597.815 3823.650 Trung bình bình phương 197.482 877.797 66.424 F-tính 2.9731 13.2151 Xác xuất 0.0894 0.0012 Phụ chương 51 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 21,0% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 58.030 5279.870 1106.010 6443.910 Trung bình bình phương 19.343 1759.957 122.890 F-tính 0.1574 14.3214 Xác xuất 0.0009 Phụ chương 52 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 26,3% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 325.070 3677.710 885.130 4887.910 Trung bình bình phương 108.357 1225.903 98.348 F-tính 1.1018 12.4650 Xác xuất 0.3977 0.0015 XIII Phụ chương 53 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 25,8% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 79.080 3967.800 1397.800 5444.680 Trung bình bình phương 26.360 1322.600 155.311 F-tính 0.1697 8.5158 Xác xuất 0.0054 Phụ chương 54 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 15,6% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 18.020 4069.160 1117.980 5205.160 Trung bình bình phương 6.007 1356.387 124.220 F-tính 0.0484 10.9192 Xác xuất 0.0024 Phụ chương 55 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 195.980 6157.040 894.820 7247.840 Trung bình bình phương 65.327 2052.347 99.424 F-tính 0.6570 20.6423 Xác xuất 0.0002 Phụ chương 56 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 18,9% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 153.820 5834.760 1202.980 7191.560 Trung bình bình phương 51.273 1944.920 133.664 F-tính 0.3836 14.5508 Xác xuất 0.0008 XIV Phụ chương 57 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 20,1% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 150.980 967.200 1080.300 2198.480 Trung bình bình phương 50.327 322.400 120.033 F-tính 0.4193 2.6859 Xác xuất 0.1095 Phụ chương 58 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 27,2% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 55.220 7160.560 803.180 8018.960 Trung bình bình phương 18.407 2386.853 89.242 F-tính 0.2063 26.7458 Xác xuất 0.0001 Phụ chương 59 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,5% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 259.470 9841.790 842.570 10943.830 Trung bình bình phương 86.490 3280.597 93.619 F-tính 0.9239 35.0420 Xác xuất 0.0000 Phụ chương 60 Phân tích ANOVA độ hữu hiệu chế phẩm nấm Beauveria bassiana sâu ăn đọt ngày sau phun thuốc lần cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 11,7% Độ tự 3 15 Tổng bình phương 22.380 6517.160 956.580 7496.120 Trung bình bình phương 7.460 2172.387 106.287 F-tính 0.0702 20.4389 Xác xuất 0.0002 XV Phụ chương 61 Năng suất cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Nghiệm thức M.a 10 g.l-1 M.a 15 g.l-1 M.a 20 g.l-1 Proclaim 1.9 EC ĐC Năng suất (tấn/ha) Thương phẩm Năng suất tổng 17,0 c 20,7 c 24,5 b 26,7 b 25,6 b 27,0 b 29,9 a 31,2 a 7,9 d 17,3 d CV% Mức ý nghĩa 10,4 * 8,2 * Ghi chú: Trong cột số có chữ theo sau giống khơng khác biệt mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5% Bảng 62 Năng suất cải tùa xại P Long Tuyền – Q Bình Thủy – TP Cần Thơ, từ 05/2009 đến 07/2009 Năng suất (tấn/ha) Thương phẩm Năng suất tổng 18,8 c 20,7 c Nghiệm thức B.b 10 g.l-1 B.b 15 g.l-1 -1 B.b 20 g.l Proclaim 1.9 EC ĐC CV% Mức ý nghĩa 25,6 b 25,1 b 28,9 a 26,7 b 26,6 b 31,0 a 8,3 d 11,6 * 16,3 d 9,8 * Ghi chú: Trong cột số có chữ theo sau giống khơng khác biệt mức ý nghĩa 5% qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5% Phụ chương 63 Phân tích ANOVA suất thương phẩm cải tùa xại thí nghiệm nấm Metarhizium anisopliae Phường Long Tuyền, Quận Bình Thủy, Thành phố Cần Thơ, từ 05/2009 – 07/2009 Nguồn Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Độ tự 12 19 Tổng bình phương 13.804 1200.912 40.056 1254.772 Trung bình bình phương 4.601 300.228 3.338 F-tính 1.3785 89.9425 Xác xuất 0.2966 0.0000 CV = 10,4 % XVI Phụ chương 64 Phân tích ANOVA suất cải tùa xại thí nghiệm nấm Metarhizium anisopliae Phường Long Tuyền, Quận Bình Thủy, Thành phố Cần Thơ, từ 05/2009 – 07/2009 Nguồn Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 8,2 % Độ tự 12 19 Tổng bình phương 12.244 488.912 38.776 539.932 Trung bình bình phương 4.081 122.228 3.231 F-tính 1.2630 37.8259 Xác xuất 0.3310 0.0000 Phụ chương 65 Phân tích ANOVA suất thương phẩm cải tùa xại thí nghiệm nấm Beauveria bassiana Phường Long Tuyền, Quận Bình Thủy, Thành phố Cần Thơ, từ 05/2009 – 07/2009 Nguồn Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 11,6 % Độ tự 12 19 Tổng bình phương 15.788 1063.728 46.432 1125.948 Trung bình bình phương 5.263 265.932 3.869 F-tính 1.3601 68.7281 Xác xuất 0.3018 0.0000 Phụ chương 66 Phân tích ANOVA suất cải tùa xại thí nghiệm nấm Beauveria bassiana Phường Long Tuyền, Quận Bình Thủy, Thành phố Cần Thơ, từ 05/2009 – 07/2009 Nguồn Lặp lại Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 9,8 % Độ tự 12 19 Tổng bình phương 10.216 531.568 32.944 574.728 Trung bình bình phương 3.405 132.892 2.745 F-tính 1.2404 48.4065 Xác xuất 0.3382 0.0000 XVII ... học diệt sâu hai chế phẩm vi sinh Đề tài: ? ?Thử nghiệm quy trình sản xuất chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học cải tiến thử nghiệm hiệu lực sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabricius), sâu ăn đọt cải (Hellula... ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TNTN BỘ MÔN KHOA HỌC CÂY TRỒNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG THỬ NGHIỆM QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM THUỐC TRỪ SÂU SINH HỌC CẢI TIẾN VÀ THỬ NGHIỆM... phẩm sâu ăn tạp cải tùa xại điều kiện nhà lưới Khảo sát độ hữu hiệu chế phẩm sâu ăn tạp sâu ăn đọt cải cải tùa xại điều kiện đồng B ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU I ĐỐI TƯỢNG Hai chế phẩm trừ sâu