Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn sinh carotenoid có khả năng chống oxy hóa ở núi cấm huyện tịnh biên tỉnh an giang

ĐẠI HỌC QUỐC GIA - TPHCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN SINH CAROTENOID CÓ KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA Ở NÚI CẤM, HUYỆN TỊNH BIÊN, TỈNH AN GIANG BẰNG HỒNG LAM AN GIANG, THÁNG 09 NĂM 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA - TPHCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN SINH CAROTENOID CÓ KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA Ở NÚI CẤM, HUYỆN TỊNH BIÊN, TỈNH AN GIANG Chủ nhiệm đề tài: Bằng Hồng Lam Thành viên: Văn Viễn Lương AN GIANG, THÁNG 09 NĂM 2020 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Đề tài nghiên cứu khoa học: “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn sinh carotenoid có khả chống oxy hóa Núi Cấm, huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang” nhóm tác giả Ths Bằng Hồng Lam Ths Văn Viễn Lương, công tác Khoa Nông Nghiệp - TNTN thực Nhóm tác giả báo cáo kết nghiên cứu Hội đồng Khoa học Đào tạo Trường Đại học An Giang thông qua ngày 10/09/2020 Thư ký Ths Nguyễn Thị Lan Phương Phản biện Phản biện TS Nguyễn Hữu Thanh Chủ tịch hội đồng PGS.TS Võ Văn Thắng Ths Lý Thị Thanh Thảo LỜI CÁM ƠN Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Ban Giám Hiệu Trường Đại học An Giang, lãnh đạo Khoa Nông Nghiệp - TNTN tạo điều kiện thời gian, đồng nghiệp môn CNSH Bộ môn Khoa học KHCT hỗ trợ thời gian thực đề tài nghiên cứu khoa học Phòng Quản trị - Thiết bị hỗ trợ, giúp đỡ chúng tơi suốt q trình thực đề tài nghiên cứu Các đồng nghiệp Khu thí nghiệm nhiệt tình hỗ trợ chúng tơi suốt q trình thực nghiên cứu i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu nhóm chúng tơi Các số liệu kết có nguồn gốc rõ ràng Các kết luận khoa học đề tài chưa công bố tài liệu trước An Giang, ngày 15 tháng 09 năm 2020 Người thực Bằng Hồng Lam ii TÓM TẮT Nghiên cứu phân lập 55 dòng vi khuẩn có khả sinh carotenoid từ 20 mẫu đất thu Núi Cấm, huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang Trong đó, 10 dịng vi khuẩn có hàm lượng carotenoid tổng số cao NC7-4 = 3,40 µg/mL λmax = 539 nm, NC20-6 = 3,17 µg/mL λmax = 478 nm, NC3-3 = 3,10 µg/mL (λmax = 475 nm), NC13-2 = 2,90 µg/mL (λmax = 455 nm), NC1-6 = 2,79 µg/mL (λmax = 450 nm), NC15-7 = 2,75 µg/mL (λmax = 449 nm), NC10-2 = 2,69 µg/mL (λmax = 448 nm), NC12-2 = 2,58 µg/mL (λmax = 500 nm), NC8-3 = 2,50 µg/mL (λmax = 446 nm) NC4-3 = 2,41 µg/mL (λmax = 460 nm) Bên cạnh đó, kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa phương pháp DPPH từ dịch trích carotenoid 10 dịng vi khuẩn có khả sinh carotenoid cho thấy dịch trích carotenoid dịng NC12-2 có hoạt tính chống oxy hóa tốt tất dịng (IC50=2,57 mg/mL) tốt β-carotene chuẩn (IC50=2,70 mg/mL) Kết giải trình tự 16S rRNA cho thấy NC1-6, NC3-3, NC4-3, NC7-4, NC8-3, NC10-2, NC12-2, NC13-2, NC157 NC20-6 có mức độ tương đồng 100% với dòng Corynebacterium xerosis strain FDAARGOS_674, Exiguobacterium aurantiacum var Colo Road, Geobacillus stearothermophilus strain AHBR12, Serratia marcescens strain XPn-6, Stenotrophomonas maltophilia strain XS 84, Burkholderia cenocepacia strain FDAARGOS_720, Bacillus infantis NRRL B-14911, Chryseobacterium shandongense strain H5143, Kocuria rhizophila strain TB19 Brevundimonas vesicularis strain Os_Ep_VSA_58 Từ khóa: 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), carotenoid, half maximal inhibitory concentration (IC50), kháng oxy hóa iii ABSTRACT The research were isolated 55 strains of bacteria capable of producing carotenoids from 20 soil samples collected at Cam moutain, Tinh Bien district, An Giang province In which, 10 strains of bacteria with high total carotenoid content were NC7-4 = 3,40 µg/mL λmax = 539 nm, NC20-6 = 3,17 µg/mL λmax = 478 nm, NC3-3 = 3,10 µg/mL (λmax = 475 nm), NC13-2 = 2,90 µg/mL (λmax = 455 nm), NC1-6 = 2,79 µg/mL (λmax = 450 nm), NC15-7 = 2,75 µg/mL (λmax = 449 nm), NC10-2 = 2,69 µg/mL (λmax = 448 nm), NC12-2 = 2,58 µg/mL (λmax = 500 nm), NC8-3 = 2,50 µg/mL (λmax = 446 nm) NC4-3 = 2,41 µg/mL (λmax = 460 nm), respectively In addition, the results of the antioxidant activity survey by DPPH method from carotenoid extract of 10 carotenoid-producing bacteria strains showed that the carotenoid extract of NC12-2 has the best antioxidant activity in all lines (IC50 = 2,57 mg/ mL) and better than standard β-carotene (IC50 = 2,70 mg/ mL) Bacterial identification by sequencing the 16S rRNA gene displayed that NC1-6, NC3-3, NC4-3, NC74, NC8-3, NC10-2, NC12-2, NC13-2, NC15-7 and NC20-6 showed 100% similarity with Corynebacterium xerosis strain FDAARGOS_674, Exiguobacterium aurantiacum var Colo Road, Geobacillus stearothermophilus strain AHBR12, Serratia marcescens strain XPn-6, Stenotrophomonas maltophilia strain XS 8-4, Burkholderia cenocepacia strain FDAARGOS_720, Bacillus infantis NRRL B-14911, Chryseobacterium shandongense strain H5143, Kocuria rhizophila strain TB19 and Brevundimonas vesicularis strain Os_Ep_VSA_58, respectively Keywords: Antioxidant, carotenoid, DPPH, IC50 iv MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii TÓM TẮT iii ABSTRACT iv MỤC LỤC v DANH SÁCH HÌNH viii DANH SÁCH BẢNG x CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI CHƯƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 CAROTENOID 2.1.1 Giới thiệu carotenoid 2.1.2 Cấu trúc carotenoid 2.1.3 Đặc điểm chung carotenoid 2.1.4 Phân loại carotenoid 2.1.5 Sự sinh tổng hợp carotenoid vi khuẩn 2.1.6 Ứng dụng carotenoid 10 2.1.7 Một số vi khuẩn có khả sinh carotenoid 11 2.1.7.1 Corynebacterium xerosis 11 2.1.7.2 Exiguobacterium aurantiacum 11 2.1.7.3 Geobacillus stearothermophilus 12 2.1.7.4 Serratia marcescens 12 2.1.7.5 Stenotrophomonas maltophilia 13 v 2.1.7.6 Burkholderia cenocepacia 13 2.1.7.7 Bacillus infantis 13 2.1.7.8 Chryseobacterium shandongense 14 2.1.7.9 Kocuria rhizophila 14 2.1.7.10 Brevundimonas vesicularis 15 2.2 CHẤT CHỐNG OXY HÓA 15 2.2.1 Tổng quan chất chống oxy hóa gốc tự 15 2.2.1.1 Tổng quan chất chống oxy hóa 15 2.2.1.2 Tổng quan gốc tự 15 2.2.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa carotenoid 17 2.2.3 Một số phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hóa 18 2.2.3.1 Phương pháp đánh giá dựa lực oxy hóa – khử 19 2.2.3.2 Phương pháp khử gốc tự 20 2.3 CÁC NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 21 2.3.1 Trong nước 21 2.3.2 Ngoài nước 21 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 23 3.1.1 Vật liệu 23 3.1.2 Địa điểm thời gian 23 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất mơi trường 23 3.1.3.1 Thiết bị 23 3.1.3.2 Dụng cụ 23 3.1.3.3 Hóa chất 24 3.1.3.4 Môi trường 24 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.2.1 Phân lập dòng vi khuẩn có khả sản xuất carotenoid 25 3.2.2 Tuyển chọn dịng vi khuẩn có khả sản xuất carotenoid cao từ dòng vi khuẩn phân lập 30 vi 3.2.3 Khảo sát khả chống oxy hóa dịch trích carotenoid thơ từ dịng vi khuẩn tuyển chọn 31 3.2.4 Định danh dòng vi khuẩn tuyển chọn phương pháp sinh học phân tử 33 3.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 34 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 4.1 PHÂN LẬP CÁC DÒNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SẢN XUẤT CAROTENOID 35 4.1.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập 35 4.1.2 Đặc điểm hình thái tế bào dòng vi khuẩn phân lập 40 4.1.3 Đặc điểm sinh hóa dịng vi khuẩn phân lập 43 4.2 TUYỂN CHỌN CÁC DÒNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SẢN XUẤT CAROTENOID CAO TỪ CÁC DÒNG VI KHUẨN ĐÃ PHÂN LẬP 46 4.3 KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HĨA CỦA DỊCH TRÍCH CAROTENOID THƠ TỪ CÁC DÒNG VI KHUẨN ĐƯỢC TUYỂN CHỌN 51 4.4 ĐỊNH DANH CÁC DÒNG VI KHUẨN ĐƯỢC TUYỂN CHỌN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ 64 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 5.1 KẾT LUẬN 65 5.2 KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC 77 vii Jorgensen, K and Skibsted, L.H (1993) Carotenoid scavenging of radicals Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und Forschung, 196(5), 423-429 Kardinaal, A.F., Van'T Veer, P., Kok, F.J., Ringstad, J., Gómez-Aracena, J., Mazaev, V.P., Kohlmeier, L., Martin, B.C., Aro, A., Huttunen, J.K and Kark, J.D (1993) Antioxidants in adipose tissue and risk of myocardial infarction: the EURAMIC study The Lancet, 342(8884), 1379-1384 Khaneja, R., Perez‐Fons, L., Fakhry, S., Baccigalupi, L., Steiger, S., To, E., Sandmann, G., Dong, T.C., Ricca, E., Fraser, P.D and Cutting, S.M (2010) Carotenoids found in Bacillus Journal of applied microbiology, 108(6), 889-1902 Kiers, C.T., De Boer, J.L., Olthof, R and Spek, A.L (1976) The crystal structure of a 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) modification Acta Crystallographica Section B: Structural Crystallography and Crystal Chemistry, 32(8), 2297-2305 Kim, D.J., Takasuka, N., Kim, J.M., Sekine, K., Ota, T., Asamoto, M., Murakoshi, M., Nishino, H., Nir, Z and Tsuda, H (1997) Chemoprevention by lycopene of mouse lung neoplasia after combined initiation treatment with DEN, MNU and DMH Cancer letters, 120(1), 1522 Kirti, K., Amita, S., Priti, S., Mukesh Kumar, A and Jyoti, S (2014) Colorful world of microbes: carotenoids and their applications Advances in Biology, 2014, 2-4 Ko, K.S., Oh, W.S., Lee, M.Y., Lee, J.H., Lee, H., Peck, K.R., Lee, N.Y and Song, J.H (2006) Bacillus infantis sp nov and Bacillus idriensis sp nov., isolated from a patient with neonatal sepsis International journal of systematic and evolutionary microbiology, 56(11), 2541-2544 Kotzekidou, P (2014) Geobacillus stearothermophilus (Formerly Bacillus stearothermophilus) Encyclopedia of Food Microbiology, 129-134 Lee, P and Schmidt-Dannert, C (2002) Metabolic engineering towards biotechnological production of carotenoids in microorganisms Applied Microbiology and Biotechnology, 60(1-2), 1-11 Lê Duy Linh, Trần Thị Hường, Trịnh Thị Hồng Lê Duy Thắng (2001) Thực tập vi sinh sở NXB Đại học quốc qia TPHCM 71 Lê Minh Trí, Trần Hữu Tâm, Trần Thị Thanh Thảo Trần Cát Đông (2011) Khảo sát môi trường nuôi cấy Bacillus sinh carotenoid cao từ nguyên liệu rẻ tiền Y học TP Hồ Chí Minh, 15(1), 189-194 Liaaen-Jensen, S and Jensen, A (1971) Quantitative Determination of Carotenoids in Photosynthetic Tissues In Method in enzymology, Academic Press, 23, 586-602 Liu, S., Manson, J.E., Lee, I.M., Cole, S.R., Hennekens, C.H., Willett, W.C and Buring, J.E (2000) Fruit and vegetable intake and risk of cardiovascular disease: the Women's Health Study The American journal of clinical nutrition, 72(4), 922-928 Long, R.A and Azam, F (2001) Antagonistic interactions among marine pelagic bacteria Applied and environmental microbiology, 67(11), 49754983 Lu, S and Li, L (2008) Carotenoid metabolism: biosynthesis, regulation, and beyond Journal of Integrative Plant Biology, 50, 778-785 Luthra, U., Singh, N.K., Bhosle, V., Gupte, V and Patil, R.R (2014) Media Optimization for Serratiopeptidase by Statistical Approach followed by Isolation and Product Purification International Journal of scientific research and management (IJSRM), 2(11), 1608-1614 Mactier, H., and Weaver, L.T (2005) Vitamin A & preterm infants: What we know, what we don’t know & what we need to know Archives of Disease in Childhood – Fetal & Neonatal Edition, 90, 103-108 Masetto, A., Flores-Cotera, L.B., Díaz, C., Langley, E and Sanchez, S (2001) Application of a complete factorial design for the production of zeaxanthin by Flavobacterium sp Journal of bioscience and bioengineering, 92(1), 55-58 Matos, H.R., Capelozzi, V.L., Gomes, O.F., Di Mascio, P and Medeiros, M.H (2001) Lycopene inhibits DNA damage and liver necrosis in rats treated with ferric nitrilotriacetate Archives of Biochemistry and Biophysics, 396(2), 171-177 Marmot, M., Atinmo, T., Byers, T., Chen, J., Hirohata, T., Jackson, A., James, W., Kolonel, L., Kumanyika, S., Leitzmann, C and Mann, J (2007) Food, nutrition, physical activity, and the prevention of cancer: a global perspective The Second Expert Report, AICR, Washington D.C 72 Meléndez-Martínez, A.J., Vicario, I.M and Heredia, F.J (2004) Stability of carotenoid pigments in foods Archivos Latinoamericanos de nutricion, 54(2), 209-215 Mohammed, N.T (2019) Histopathological Changes of Mice Immunized by Serratia Marcescens Whole Cell Sonicated Antigens Indian Journal of Public Health Research & Development, 10(10), 1174-1178 Mortensen, A., Skibsted, L.H and Truscott, T.G (2001) The interaction of dietary carotenoids with radical species Archives of biochemistry and biophysics, 385(1), 13-19 Müller, L., Fröhlich, K and Böhm, V (2011) Comparative antioxidant activities of carotenoids measured by ferric reducing antioxidant power (FRAP), ABTS bleaching assay (αTEAC), DPPH assay and peroxyl radical scavenging assay Food Chemistry, 129(1), 139-148 Narisawa, T., Fukaura, Y., Hasebe, M., Ito, M., Aizawa, R., Murakoshi, M., Uemura, S., Khachik, F and Nishino, H (1996) Inhibitory effects of natural carotenoids, α-carotene, β-carotene, lycopene and lutein, on colonic aberrant crypt foci formation in rats Cancer letters, 107(1), 137-142 Narisawa, T., Fukaura, Y., Hasebe, M., Nomura, S., Oshima, S., Sakamoto, H., Inakuma, T., Ishiguro, Y., Takayasu, J and Nishino, H (1998) Prevention of N‐methylnitrosourea‐induced colon carcinogenesis in F344 rats by lycopene and tomato juice rich in lycopene Japanese journal of cancer research, 89(10), 1003-1008 Nasrabadi, M.R.N and Razavi, S.H (2010) Use of response surface methodology in a fed-batch process for optimization of tricarboxylic acid cycle intermediates to achieve high levels of canthaxanthin from Dietzia natronolimnaea HS-1 Journal of bioscience and bioengineering, 109(4), 361-368 Nguyễn Lân Dũng Đinh Thúy Hằng (2006) Phương pháp thực nghiệm dùng để định tên loài vi khuẩn Vietsciences (http://vietsciences.free.fr.) Niki, E., Noguchi, N., Tsuchihashi, H and Gotoh, N (1995) Interaction among vitamin C, vitamin E, and beta-carotene The American journal of clinical nutrition, 62(6), 1322S-1326S Noviendri, D., Hasrini, R.F and Octavianti, F (2011) Carotenoids: Sources, medicinal properties and their application in food and nutraceutical industry Journal of Medicinal Plants Research, 5(33), 7119-7131 73 Nugraheni, S.A., Khoeri, M.M., Kusmita, L., Widyastuti, Y and Radjasa, O.K (2010) Characterization of carotenoid pigments from bacterial symbionts of seagrass Thalassia hemprichii J Coast Dev, 14(1), 51-60 Olson, J.A and Krinsky, N I (1995) Introduction: the colorful, fascinating world of the carotenoids: important physiologic modulators The FASEB Journal, 9(15), 1547-1550 Paniagua-Michel, J., Olmos-Soto, J and Ruiz, M.A., 2012 Pathways of carotenoid biosynthesis in bacteria and microalgae In Microbial carotenoids from bacteria and microalgae Humana Press, Totowa, NJ, 112 Park, P.K., Cho, D.H., Kim, E.Y and Chu, K.H (2005) Optimization of carotenoid production by Rhodotorula glutinis using statistical experimental design World Journal of Microbiology and Biotechnology, 21(4), 429-434 Pincemail, J., Defraigne, J.O., Meurisse, M and Limet, R (1998) Antioxydants et prévention des maladies cardiovasculaires ème partie: la vitamine E Medi-Sphere, 89, 27-30 Pitt, T.L., Malnick, H., Shah, J., Chattaway, M.A., Keys, C.J., Cooke, F.J and Shah, H.N (2007) Characterisation of Exiguobacterium aurantiacum isolates from blood cultures of six patients Clinical microbiology and infection, 13(9), 946-948 Prior, R.L., Wu, X and Schaich, K (2005) Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements Journal of agricultural and food chemistry, 53(10), 42904302 Rao, A.V and Rao, L.G (2007) Carotenoids & human health Pharmacological Research, 55, 207-216 Riegel, P., Ruimy, R., Christen, R and Monteil, H (1996) Species identities and antimicrobial susceptibilities of corynebacteria isolated from various clinical sources European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 15(8), 657-662 Samanta, A.K., Chaudhuri, S and Dutta, D (2016) Antioxidant efficacy of carotenoid extract from bacterial strain Kocuria marina DAGII Materials Today: Proceedings, 3(10), 3427-3433 74 Schmidt-Dannert, C (2000) Engineering novel carotenoids microorganisms Current opinion in biotechnology, 11(3), 255-261 in Semba, R.D., Lauretani, F and Ferrucci, L (2007) Carotenoids as protection against sarcopenia in older adults Archives of biochemistry and biophysics, 458(2), 141-145 Serrato‐Joya, O., Jiménez‐Islas, H., Botello‐Álvarez, E., Rico‐Martínez, R and Navarrete‐Bolos, J.L (2006) Production of β‐cryptoxanthin, a provitamin‐A precursor, by Flavobacterium lutescens Journal of food science, 71(6), E314-E319 Shahidi, F and Zhong, Y (2015) Measurement of antioxidant activity Journal of functional foods, 18, 757-781 Sharma, O.P and Bhat, T.K (2009) DPPH antioxidant assay revisited Food chemistry, 113(4), 1202-1205 Shindo, K and Misawa, N (2014) New and rare carotenoids isolated from marine bacteria and their antioxidant activities Marine drugs, 12(3), 16901698 Stahl, W and Sies, H (2003) Antioxidant activity of carotenoids Molecular aspects of medicine, 24(6), 345-351 Srivastava, S (2015) Food adulteration affecting the nutrition and health of human beings Journal of Biological Sciences and Medicine, 1(1), 65-70 Stabler, S.N., Mack, B., McCormack, G and Cheng, M.P (2018) Brevundimonas vesicularis Causing Bilateral Pneumosepsis in an Immunocompetent Adult: A Case Report and Literature Review The Canadian journal of hospital pharmacy, 71(3), 208-210 Takarada, H., Sekine, M., Kosugi, H., Matsuo, Y., Fujisawa, T., Omata, S., Kishi, E., Shimizu, A., Tsukatani, N., Tanikawa, S and Fujita, N (2008) Complete genome sequence of the soil actinomycete Kocuria rhizophila Journal of bacteriology, 190(12), 4139-4146 Tapiero, H., Tew, K.D., Ba, G.N and Mathe, G (2002) Polyphenols: they play a role in the prevention of human pathologies? Biomedicine & pharmacotherapy, 56(4), 200-207 Tazzini, N (2013) Carotenoids: Definition, structure and classification Biochemistry and Nutrition, 2-5 Terao, J (1989) Antioxidant activity of β‐carotene‐related carotenoids in solution Lipids, 24(7), 659-661 75 Tohill, B.C., Seymour, J., Serdula, M., Kettel-Khan, L and Rolls, B.J (2004) What epidemiologic studies tell us about the relationship between fruit and vegetable consumption and body weight Nutrition reviews, 62(10), 365374 Trần Hữu Tâm (2014) Nghiên cứu xây dựng quy trình pilot sản xuất sinh khối Bacillus spp làm nguyên liệu probiotic cung cấp carotenoid Luận án tiến sĩ dược học chuyên ngành Công nghệ dược phẩm Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh Thành phố Hồ Chí Minh Trần Linh Thước (2012) Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm NXB Giáo dục Việt Nam Valko, M., Izakovic, M., Mazur, M., Rhodes, C.J and Telser, J (2004) Role of oxygen radicals in DNA damage and cancer incidence Molecular and cellular biochemistry, 266(1-2), 37-56 Vela, A.I., Gracia, E., Fernández, A., Domínguez, L and FernándezGarayzábal, J.F (2006) Isolation of Corynebacterium xerosis from animal clinical specimens Journal of clinical microbiology, 44(6), 2242-2244 Venil, C.K., Aruldass, C.A., Dufossé, L., Zakaria, Z.A and Ahmad, W.A (2014) Current perspective on bacterial pigments: emerging sustainable compounds with coloring and biological properties for the industry–an incisive evaluation RSC Advances, 4(74), 39523-39529 Vershinin, A (1999) Biological functions of carotenoids‐diversity and evolution Biofactors, 10(2‐3), 99-104 Vũ Thanh Thảo, Trần Hữu Tâm, Trần Thành Đạo Trần Cát Đông (2011) Khảo sát tạo Carotenoid theo thời gian pha sinh dưỡng số chủng Bacillus Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 15(1), 211-217 Wauters, G., Van Bosterhaut, B., Janssens, M and Verhaegen, J (1998) Identification of Corynebacterium amycolatum and other nonlipophilic fermentative corynebacteria of human origin Journal of clinical microbiology, 36(5), 1430-1432 Wertz, K., Siler, U and Goralczyk, R (2004) Lycopene: modes of action to promote prostate health Archives of biochemistry and biophysics, 430(1), 127-134 Wisniewska, A and Subczynski, W K (1998) Effects of polar carotenoids on the shape of the hydrophobic barrier of phospholipid bilayers Biochimica et Biophysica Acta, 1368(2), 235-246 76 Wrolstad, R.E and Culver, C.A (2012) Alternatives to those artificial FD&C food colorants Annu Rev Food Sci Technol, 3, 59-77 Yang, F., Liu, H.M., Zhang, R., Chen, D.B., Wang, X., Li, S.P and Hong, Q (2015) Chryseobacterium shandongense sp nov., isolated from soil International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 65(6), 1860-1865 Yoon, J.H., Kim, I.G., Kang, K.H., Oh, T.K and Park, Y.H (2003) Bacillus marisflavi sp nov and Bacillus aquimaris sp nov., isolated from sea water of a tidal flat of the Yellow Sea in Korea Journal of Medical Microbiology, 53(5), 1297-1303 Zheng, Y.G., Hu, Z.C., Wang, Z and Shen, Y.C (2006) Large-scale production of astaxanthin by Xanthophyllomyces dendrorhous Food and bioproducts processing, 84(2), 164-166 77 PHỤ LỤC Phụ lục A: Hình ảnh A1 B1 0 1 2 7 8 10 (μg/mL) 10 (μg/mL) Hình 1: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A1) sau (B1) phản ứng với DPPH mẫu đối chứng β-carotene chuẩn dãy nồng độ – 10 μg/mL A2 B2 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 2: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A2) sau (B2) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC1-6 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 78 A3 B3 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 3: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A3) sau (B3) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC3-3 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) A4 B4 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 4: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A4) sau (B4) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC7-4 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 79 A5 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) B5 Hình 5: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A5) sau (B5) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC8-3 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) A6 B6 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 6: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A6) sau (B6) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC10-2 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 80 A7 B7 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 7: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A7) sau (B7) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC12-2 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) A8 B8 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 8: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A8) sau (B8) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC13-2 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 81 A9 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) B9 Hình 9: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A9) sau (B9) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC15-7 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) A10 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) B10 Hình 10: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A10) sau (B10) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC20-6 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 82 A11 B11 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 (mg/mL) Hình 11: Màu sắc mẫu dịch trích trước (A11) sau (B11) phản ứng với DPPH dòng vi khuẩn NC4-3 dãy nồng độ – 3,0 mg/mL (từ trái qua phải) 83 Phụ lục B: Kết thống kê Bảng PL1: Kết phân tích ANOVA hàm lượng carotenoid tổng số 55 dòng vi khuẩn phân lập Nguồn biến động Tổng bình Độ tự Trung bình phương (df) bình phương Nghiệm thức 79,077 54 1,464 Sai số 0,024 110 0,000 Tổng cộng 567,774 165 F tính Độ ý nghĩa 6787,212* ,000 * Khác biệt mức ý nghĩa thống kê 5% Bảng PL2: Kết phân tích ANOVA phần trăm khử gốc DPPH mẫu đối chứng β-carotene chuẩn Nguồn biến động Tổng bình Độ tự Trung bình phương (df) bình phương Nghiệm thức 30742,42 10 3074,24 Sai số 1,06 22 0,05 Tổng cộng 30743,49 32 F tính Độ ý nghĩa 63605,01* ,000 * Khác biệt mức ý nghĩa thống kê 5% Bảng PL3: Kết phân tích ANOVA phần trăm khử gốc DPPH 10 mẫu dịch trích carotenoid Nguồn biến động Tổng bình Độ tự Trung bình phương (df) bình phương Nghiệm thức 43282,56 15 2885,50 4,47 32 0,14 43287,03 47 Nghiệm thức 61520,31 15 4101,35 1,60 32 0,05 61521,91 47 NC12-2 Nghiệm thức 34806,39 15 NC13-2 Sai số Tổng cộng NC7-4 Sai số Tổng cộng 84 2320,43 F tính Độ ý nghĩa 20646,07* ,000 81958,78* ,000 22947,53* ,000 Sai số 3,24 32 Tổng cộng 34809,63 47 Nghiệm thức 53823,18 15 3588,21 3,11 32 0,10 53826,30 47 Nghiệm thức 53823,83 15 3588,26 5,89 32 0,18 53829,72 47 Nghiệm thức 22502,95 15 1500,20 1,56 32 0,05 22504,51 47 Nghiệm thức 22183,44 15 1478,90 1,47 32 0,05 22184,91 47 Nghiệm thức 22379,25 15 1491,95 2,15 32 0,07 22381,40 47 Nghiệm thức 23311,51 15 1554,10 1,68 32 0,05 23313,19 47 Nghiệm thức 13786,70 15 919,11 1,04 32 0,03 13787,74 47 NC3-3 Sai số Tổng cộng NC20-6 Sai số Tổng cộng NC8-3 Sai số Tổng cộng NC1-6 Sai số Tổng cộng NC10-2 Sai số Tổng cộng NC15-7 Sai số Tổng cộng NC4-3 Sai số Tổng cộng 0,10 36873,09* ,000 19496,09* ,000 30806,18* ,000 32211,18* ,000 22221,62* ,000 29593,69* ,000 28302,18* ,000 * Khác biệt mức ý nghĩa thống kê 5% 85 ... Tịnh Biên, tỉnh An Giang 1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu: Các dòng vi khuẩn sinh carotenoid có khả chống oxy hóa thu từ núi Cấm, huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang Phạm vi. .. vậy, núi Cấm, huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang chọn để thu mẫu đất để phân lập vi khuẩn sinh carotenoid có khả kháng oxy hóa Núi Cấm núi cao tỉnh An Giang, nơi có thời gian chiếu sáng ngày khoảng... TPHCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN SINH CAROTENOID CÓ KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA Ở NÚI CẤM, HUYỆN TỊNH BIÊN, TỈNH AN GIANG Chủ nhiệm đề