Ảnh hưởng của chất điều hoà sinh trưởng naphtalen acetic acid và benzyl adenine lên sự tạo chồi in vitro cây huyền tinh tacca leontopetaloides

TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG NAPHTALEN ACETIC ACID VÀ BENZYL ADENINE LÊN SỰ TẠO CHỒI IN VITRO CÂY HUYỀN TINH (Tacca leontopetaloides) VỎ VẠN KIẾP AN GIANG, THÁNG 05 - 2018 TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG NAPHTALEN ACETIC ACID VÀ BENZYL ADENINE LÊN SỰ TẠO CHỒI IN VITRO CÂY HUYỀN TINH (Tacca leontopetaloides) VỎ VẠN KIẾP DTT145412 Giáo viên hƣớng dẫn Th.S Nguyễn Thị Thúy Diễm AN GIANG, THÁNG 05 - 2018 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Đề tài nghiên cứu khoa học “Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng Naphtalen acetic acid Benzyl adenine lên tạo chồi in vitro huyền tinh Tacca leontopetaloides” sinh viên Vỏ Vạn Kiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thạc sĩ Nguyễn Thị Thúy Diễm Tác giả báo cáo kết nghiên cứu đƣợc Hội đồng Khoa học Đào tạo thông qua ngày 10/05/2018 Thƣ ký Phản biện Phản biện Trần Văn Khải Huỳnh Trƣờng Huê Cán hƣớng dẫn Nguyễn Thị Thúy Diễm Chủ tịch Hội đồng i LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình thực đề tài “Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng Napthalen acetic acid Benzyl adenine lên tạo chồi in vitro huyền tinh (Tacca leontopetaloides), nhận đƣợc ủng hộ, giúp đỡ quý Thầy Cơ, gia đình bạn bè Tơi xin chân thành cám ơn đến Mẹ cố gắng chăm lo cho tơi đƣợc học hành hồn thiện ƣớc mơ Xin chân thành cám ơn cô Nguyễn Thị Thúy Diễm, cô Võ Thị Xuân Tuyền, Cô Huỳnh Trƣờng Huê thầy Trần Văn Khải quan tâm, giúp đỡ, hƣớng dẫn tận tình tơi q trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cám ơn cán quản lý phịng thí nghiệm chị Nguyễn Thị Xn Đào, Trình Thị Thu Hồng giúp đỡ tơi tiến trình nghiên cứu đề tài Xin chân thành cám ơn anh Trƣơng Nhật Minh (DH14BT), bạn Từ Thị Nhƣ Quỳnh (DH15TT) giúp đỡ thời gian thực đề tài An Giang, ngày 10 tháng 05 năm 2018 Ngƣời thực Vỏ Vạn Kiếp ii LỜI CAM KẾT Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu cơng trình nghiên cứu có xuất xứ rõ ràng Những kết luận khoa học cơng trình nghiên cứu chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác An Giang, ngày 10 tháng 05 năm 2018 Ngƣời thực Vỏ Vạn Kiếp iii TÓM TẮT Đề tài “Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng Napthalen acetic acid Benzyl adenine lên tạo chồi in vitro huyền tinh (Tacca leontopetaloides)” đƣợc thực nhằm mục đích xác định đƣợc nồng độ BA tổ hợp BA với NAA thích hợp cho tạo chồi in vitro huyền tinh (Tacca leontopetaloides) Đề tài đƣợc thực với thí nghiệm: Hiệu BA đơn lẻ BA kết hợp với NAA lên tạo chồi in vitro huyền tình Thí nghiệm đƣợc bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên Kết cho thấy, môi trƣờng cho hiệu tạo chồi huyền tinh thích hợp mơi trƣờng MS có bổ sung 1,5 mg/L BA đạt 4,4 chồi/mẫu cấy sau tuần ni cấy Từ khóa: huyền tinh, chất điều hịa sinh trưởng, ni cấy mơ, benzyl adenine, napthalen acetic acid iv ABSTRACT The study “Effect of plant growth regulator napthelen acetic acid and benzyl adenine on shoot production in vitro Polynesian arrowroot plant (Tacca leontopetaloides) The study was carried out BA and BA combination with NAA of shoot production in vitro Experiment comprised: effect of BA and BA combination with NAA on shoot production in vitro The test was arranged in a completely randomized form Results showed that the shoot were most regenerated on MS medium supplemented with 1,5 mg/L BA (4,4 shoot/explants) after weeks cultivated Keywords: Plant growth regulators, Taccaeace, Tacca leontopetaloides, shoot proliferation Title: Effect of plant growth regulator naphthalene acetic acid and benzyl adenine on shooting in vitro Polynesian arrowroot plant (Tacca leontopetaloides) v MỤC LỤC Trang CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG i LỜI CẢM TẠ ii LỜI CAM KẾT iii TÓM TẮT iv ABSTRACT v MỤC LỤC vi DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1.3 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Đóng góp mặt khoa học 1.5.2 Đóng góp cơng tác đào tạo 1.5.3 Đóng góp phát triển kinh tế xã hội CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN DỀ NGHIÊN CỨU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY HUYỀN TINH 2.1.1 Mô tả huyền tinh 2.1.2 Phân bố sinh thái 2.1.3 Giá trị dinh dƣỡng công dụng Huyền Tinh 2.2 ỨNG DỤNG CHẤT ĐIỀU HỊA SINH TRƢƠNG TRONG NI CẤY MƠ 2.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NUỐI CẤY IN VITRO MỘT SỐ CÂY THUỘC HỌ RÂU HÙM TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 2.4 GIẢ THUYẾT NGHIÊN CỨU CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU vi 3.1 MẪU NGHIÊN CỨU 3.2 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 3.2.1 Môi trƣờng điều kiện nuôi cấy 3.2.2 Bố trí thí nghiệm 3.3 PHÂN TÍCH SỐ LIỆU CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 10 5.1 KẾT LUẬN 23 5.2 KIẾN NGHỊ 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 PHỤ LỤC 26 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng Trang Bảng 1: Các nghiệm thức thí nghiệm 20 Bảng 2: Thời gian xuất chồi .23 Bảng 3: Số chồi cấy huyền tinh giai đoạn 2, 4, tuần sau cấy .25 viii 4.2 SỐ CHỒI HUYỀN TINH TÁI SINH SAU 2, 4, VÀ TUẦN SAU KHI CẤY Ở giai đoạn tuần sau cấy chồi đƣợc ni cấy có xu hƣớng phát sinh chồi nghiệm thức nhƣng khơng có khác biệt mặt thống kê tất nghiệm thức (bảng 3), chồi bắt đầu chịu ảnh hƣởng bới chất điều hòa đƣợc bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy nghiệm thức Ở giai đoạn tuần sau cấy, nghiệm thức có số chồi cao đạt 2,0 chồi/mẫu cấy môi trƣờng MS có bổ sung 1,0 mg/L BA mơi trƣờng MS có bổ sung 2,5 mg/L BA Nghiệm thức có số chồi thấp hai mơi trƣờng MS có bổ sung 0,5 mg/L BA môi trƣờng MS bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng thực vật Bảng 3: Số chồi huyền tinh giai đoạn 2,4,6 tuần sau cấy Nghiệm thức Số chồi/mẫu cấy Tuần Tuần Tuần Tuần MS (Đối chứng) 1,2 1,2 1,8 1,8bc MS + 0,5 mg/L BA 1,0 1,2 2,2 2,4bc MS + 1,0 mg/L BA 2,0 2,2 2,6 3,4abc MS + 1,5 mg/L BA 1,8 2,8 3,2 4,4a MS + 2,0 mg/L BA 1,6 1,8 3,0 3,6abc MS + 2,5 mg/L BA 2,0 2,6 2,8 3,2abc MS + 3,0 mg/L BA 1,2 1,8 2,4 2,0bc MS + 0,5 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA 1,4 2,4 2,4 2,8b MS + 1,0 mg/L BA+ 0,5 mg/ L NAA 1,4 1,4 2,6 3,3abc MS + 1,5 mg/L BA+ 0,5 mg/L NAA 1,2 1,6 2,8 3,6abc MS + 2,0 mg/L BA+ 0,5 mg/L NAA 1,6 1,6 2,3 3,4abc MS + 2,5 mg/L BA+ 0,5 mg/L NAA 1,2 1,4 2,0 3,0abc MS + 3,0 mg/L BA+ 0,5 mg/L NAA 1,0 1,4 1,4 1,6c ns ns ns * F 42,1 51,7 58,8 50,5 CV (%) Ghi chú: chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p < 0,05 (Duncan’s test); * = khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% ns = khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê Hình 4: Chồi huyền tinh tái sinh giai đoạn tuần sau cấy 12 Đối với môi trƣờng MS có bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng BA đơn lẻ số chồi gia tăng từ 1,0 – 1,8 chồi/mẫu cấy Ở nghiệm thức MS có bổ sung 0,5 mg/L BA số chồi chƣa đƣợc tái sinh đạt 1,0 chồi/mẫu cấy, Ở nghiệm thức MS có bổ sung 1,5 mg/L BA cho số chồi đạt 1,8 chồi/mẫu cấy Tuy nhiên gia tăng nồng độ BA lên cao số chồi có xu hƣớng giảm với số chồi đạt 1,2 chồi nghiệm thức MS có bổ sung 3,0 mg/L BA môi trƣờng nghiệm thức MS có bổ sung 2,0 mg/L BA đạt 1,6 chồi/mẫu cấy Kết cho thấy nồng độ chất điều hịa cao ức chế việc hình thành chồi phù hợp với kết Romnanee cs., (2008), kết cho thấy phù hợp với nghiên cứu Borokini cs., (2011) nghiên cứu huyền tinh vùng Nigeria mơi trƣờng có chứa cytokinin đơn lẻ Hình 5: Ảnh hƣởng BA NAA lên tạo chồi in vitro huyền tinh giai đoạn tuần sau cấy Đối với mơi trƣờng nghiệm thức có bổ sung BA kết hợp với NAA cho thấy gia tăng nồng độ BA lên từ 0,5 mg/L – mg/L số chồi có gia tăng mạnh mẽ, đạt từ 1,4 chồi/mẫu cấy môi trƣờng MS + 0,5 mg/L BA + 0,5 NAA môi trƣờng MS + mg/L BA + 0,5 NAA nhƣng khác biệt mặt thống kê Song song đó, mơi trƣờng nghiệm thức MS + mg/L BA + 0,5 mg/L NAA lại cho số chồi cao đạt 1,6 chồi đạt 1,2 chồi nghiệm thức môi trƣờng MS + 1,5 mg/L BA + 0,5 NAA Kết cho thấy, nồng độ cytokinin cao so với auxin việc 13 tái sinh chồi tƣơng đối mạnh hơn, kết cho thấy phù hợp với kết Borotokini cs (2011) kết hợp BAP (cytokinin) NAA (auxin) Tacca leontopetaloides gia tăng số chồi đƣợc hình thành mẫu cấy Bên cạnh gia tăng nồng độ BA lên ngƣỡng mg/L kết hợp với 0,5 mg/L NAA số chồi tái sinh bị ức chế, thấp so với đối chứng đạt 1,0 chồi Hình 6: Chồi huyền tính giai đoạn tuần sau cấy mơi trƣờng MS có bổ sung BA đơn lẻ Ở giai đoạn tuần sau cấy, tất nghiệm thức bắt đầu xuất chồi mới, số chồi giao động từ 1,2 – 2,8 chồi/mẫu cấy (bảng 3, hình 6) Ở nghiệm thức khơng 14 bổ sung chất điều hòa (đối chứng) chƣa gia tăng chồi thêm đạt 1,2 chồi/mẫu cấy Song song đó, mơi trƣờng MS có bổ sung 0,5 mg/L BA, mẫu chồi bắt đầu tái sinh đạt 1,2 chồi/mẫu cấy nồng độ BA tăng lên 1,0 mg/L, số chồi phát sinh mạnh đạt 2,2 chồi/mẫu cấy nhƣng khơng có khác biệt thống kê so với nghiệm thức MS Kế tiếp, mơi trƣờng MS có bổ sung thêm 1,5 mg/L BA, đạt 2,8 chồi/mẫu cấy nồng độ 2,5 mg/L BA đạt 2,6 chồi/mấu cấy Khi gia tăng nồng độ BA lên ngƣỡng 2,0 mg/L, số chồi giảm xuống đạt 1,8 chồi/mẫu cấy 1,8 chồi/mẫu cấy nghiệm thức MS có bổ sung 3,0 m/l BA, nhiên nồng độ BA cao chồi phát triển chậm lại, sau mẫu cấy bắt đầu hình thành phơi vơ tính, phù hợp với số loài họ nhƣ Drosera intermedia (Rejthar cs., 2014), Thermopsis turcia (Tekdal cs., 2014) Hơn chồi phát triển dị thƣờng mơi trƣờng có nồng độ BA từ 2,0 đến 3,0 mg/L BA số chồi có cu hƣớng giảm dần hình thành phơi vơ tính Theo Vũ Văn Vụ cs (2005) cho cytokinin kích thích phân chia tế bào mạnh mẽ, hình thành sinh trƣởng chồi in vitro, ảnh hƣởng rõ rệt đến phát sinh phơi vơ tính mẫu nuôi cấy Theo Leshem cs., (1988) cho rằng, cytokinin cần thiết cho tạo chồi nuôi cấy mô, nhiên vƣợt nồng độ tối ƣu gây độc Đối với mơi trƣờng MS có bổ sung mg/L BA mg/L BA đạt 1,8 chồi/mẫu cấy Mặt khác, môi trƣờng MS có kết hợp BA NAA ni cấy in vitro số chồi mẫu cấy giao động tự 2,4 – 1,4 chồi/mẫu cấy, môi trƣờng MS có kết hợp 0,5 mg/L BA 0,5 NAA cho đƣợc 2,4 chồi/mẫu cấy, đạt số chồi cao mơi trƣờng MS có kết hợp BA NAA, so sánh với thí nghiệm Cepkova cs (2015) Tacca leontopetaloides với nồng độ cytokinin (Zeatin) auxin (NAA) cho số chồi cao Khi gia tăng nồng độ BA từ mg/L đến mg/L với kết hợp 0,5 mg/L NAA cho thấy chồi có xu hƣớng giảm xuống từ 1,6 chồi/mẫu cấy xuống 1,4 chồi/mẫu cấy Theo Bùi Trang Việt (2000); Nguyễn Nhƣ Khanh (2007) cho kết hợp auxin cytokinin làm tăng hoạt tính kích thích phân hóa tạo chồi nhanh chóng, nhiên tổ hợp BA NAA cho thí nghiệm tạo chồi huyền tinh cho thấy tất mẫu hình thành phơi vơ tính, số chồi khơng tằng đáng kể điển hình mơi trƣởng MS + 2mg/L BA + 0,5 mg/L NAA đạt 1,6 chồi/mẫu cấy, môi trƣờng MS + 3,0 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA đạt 1,4 chồi/mẫu cấy nồng độ cytokinin cao mẫu cấy có xu hƣớng giảm xuống 15 Hình 7: Chồi huyền tinh tái sinh mơi trƣờng MS có kết hợp BA NAA giai đoạn tuần sau cấy Kết thí nghiệm giai đoạn tuần sau cấy đƣợc thể bảng cho thấy, nghiệm thức MS khơng bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng (đối chứng) đạt số chồi thấp đạt 1,8 chồi/mẫu cấy, nghiệm thức có bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng BA đơn lẻ số chồi có gia tăng, nghiệm thức có bổ sung 0,5 mg/L BA số chồi đạt 2,2 chồi/mẫu cấy, giai đoạn nghiệm thức MS có bổ sung BA đơn lẻ cho thấy tất phồi bắt đầu hình thành chồi xanh, gia tăng 16 nồng độ BA lên số chồi tăng dần từ 2,6 – 3,2 chồi/mẫu cấy, ứng với nghiệm thức nhƣ sau, nghiệm thức MS kết hợp với 1,0 mg/L BA cho số chồi đạt 2,6 chồi/mẫu cấy, nghiệm thức MS kết hợp với 1,5 mg/L BA cho số chồi cao đạt 3,2 chồi/mẫu cấy, so với thí nghiệm Cepkova cs., (2015) cho thấy nồng độ BA đƣợc bổ sung vào mơi trƣờng MS có bổ sung BA số chồi gia tăng từ 1,75 – 2,16 chồi/mẫu cấy Tacca leontopetaloides Song song đó, gia tăng nồng độ BA lên cao số chồi có xu hƣớng giảm xuống tƣơng ứng với nồng độ 2,5 mg/L – 3,0 mg/L BA, với nồng độ 2,5 mg/L BA số chồi đạt 2,8 chồi 3,0 mg/L BA đạt 2,4 chồi/mẫu cấy Điều cho thấy, vai trò cytokinin kích thích hình thành chồi, gia tăng số chồi nồng độ thích hợp vƣợt ngƣỡng tối ƣu gây ức chế tạo chồi, so với nghiên cứu Charoensub cs (2008) cho thấy nồng độ BAP (cytokinin) nồng độ từ – mg/L số chồi gia tăng nồng độ – mg/L BAP, số chồi đạt từ 1,7 – 2,3 chồi/mẫu cấy, nồng độ mg/L BAP đạt 1,9 chồi/mẫu cấy Tacca chantrieri Andre Các nghiệm thức thí nghiệm nồng độ BA đơn lẻ khơng có khác biệt thống kê mức % Đối với nghiệm thức có kết hợp BA NAA cho thấy số chồi có gia tăng chồi từ 2,4 – 2,8 chồi/mẫu cấy, số chồi cao nghiệm thức MS có kết hợp BA NAA nồng độ 1,5 mg/L BA kết hợp với 0,5 mg/L NAA đạt 2,8 chồi/mẫu cấy số chồi thấp nghiệm thức mg/L BA đạt 1,4 chồi/mẫu cấy Ở nghiệm thức khơng có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Đối với mơi trƣờng MS có bổ sung 0,5 mg/L BA kết hợp với 0,5 mg/L NAA, số chồi đạt 2,4 chồi/mẫu cấy, gia tăng nồng độ BA lên mức 1,0 mg/L BA kết hợp 0,5 mg/L NAA số chồi có cu hƣớng gia tăng lên mức đạt 2,6 chồi/mẫu cấy, để đạt hiệu tạo chồi tối ƣu, thí nghiệm tiếp tục gia tăng nồng độ BA lên mức 1,5 mg/L kết hợp với 0,5 mg/L NAA số chồi đạt 2,8 chồi/mẫu cấy, kết cho thấy phù hợp với kết Cepkova cs (2015) kết hợp 0,1 mg/ Zeatin (Cytokinin) với 0,01 NAA cho số chồi cao đạt 3,71 chồi/mẫu cấy Tacca lenontopetaloides thí nghiệm Borokin cs (2011) kết hợp 0,01 mg/L BAP với 0,01 NAA Tacca lenontopetaloides đạt chồi/mấu cấy Bên cạnh đó, gia tăng nồng độ BA lên mức mg/L kết hợp 0,5 mg/L NAA, số chồi đạt 2,3 chồi/mẫu cấy, nồng độ 2,5 mg/L BA kết hợp 0,5 mg/L NAA số chồi đạt 2,0 chồi/mẫu cấy nồng độ mg/L BA kết hợp 0,5 mg/L NAA , chồ chồi đạt 1,4 chôi/mẫu cấy, điều cho thấy chồi bị ức chế cytokinin nồng độ cao Ở nghiệm thức thí nghiệm hơng có khác biệt thống kê mức 5% 17 Hình 8: Ảnh hƣởng BA lên tái sinh chồi huyền tinh giai đoạn tuần sau cấy 18 Hình 9: Ảnh hƣởng BA NAA lên tái sinh chồi huyền tinh giai đoạn tuần sau cấy Ở giai đoạn tuần sau cấy, chồi huyền tinh bắt đầu xuất nhanh chóng, thể rõ rệt tác động chất điều hòa sinh trƣởng đƣợc bổ sung vào mơi trƣờng ni cấy, kết thí nghiệm đƣợc thể bảng cho thấy, nghiệm thức môi trƣờng có bổ sung BA đơn lẻ cho số chồi cao đạt 4,4 chồi/mẫu cấy nồng độ 1,5 mg/L BA có khác biệt thống kê nghiệm thức MS khơng bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng (đối chứng) có số chồi thấp đạt 1,8 chồi/mẫu cấy, nghiệm thức MS + 0,5 mg/L BA nhƣng khơng có khác biệt so với nghiệm thức MS + 1,0 mg/L BA, nghiệm thức MS +2,0 mg/L BA MS + 3,0 mg/L BA 19 Hình 10: Ảnh hƣởng BA lên tái sinh chồi huyền tinh giai đoạn tuần sau cấy Ở môi trƣờng MS có bổ sung 0,5 mg/L BA, số chồi đạt 2,4 chồi/mẫu cấy, tiếp tục gia tăng nồng độ BA lên mức 1,0 mg/L số chồi có xu hƣớng tăng lên 3,4 chồi/mẫu cấy Khi gia tăng nồng độ BA lên ngƣỡng 2,0 mg/L – 3,0, chồi huyền tin bắt đầu giảm nhanh chống, đạt 3,6 chồi/mẫu cấy môi trƣờng MS + 2,0 mg/L BA; môi trƣờng MS + 2,5 mg/L BA đạt 3,2 chồi/mẫu cấy đạt 2,6 chồi môi trƣờng MS + 3,0 mg/L BA Đối với nghiệm thức có tổ hợp BA NAA để gia tăng hiệu tạo chồi cho thấy, số chồi có gia tăng nhanh chóng, đạt từ 2,8 đến 3,6 chồi/mẫu cấy Cụ thể nhƣ sau, môi trƣờng MS + 0,5 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA số chồi đạt 2,8 chồi/mẫu cấy so với kết Sahar S.T cs (2017) cho thấy nồng độ 20 cytokinin auxin mức số chồi gia tăng mức trung bình Dioscorea rotundata, nồng độ BA (cytokinin) cao NAA (auxin) cho thấy chồi xuất nhiều hơn,trên môi trƣờng MS + 1,0 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA số chồi đạt 3,3 chồi/mẫu cấy, môi trƣờng MS + 1,5 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA số chồi có gia tăng theo nồng độ BA gia tăng đạt 3,6 chồi/mẫu cấy Hình 11: Ảnh hƣởng BA NAA lên tái sinh chồi huyền tinh giai đoạn tuần sau cấy Tuy nhiên nồng độ BA tăng lên 2,0 mg/L + 0,5 mg/L NAA số chồi giảm xuống cịn 3,4 chồi/mẫu cấy, sau tiếp tục giảm xuống 3,0 chồi/mẫu cấy 1,6 chồi/mẫu cấy ứng với môi trƣờng MS + 2,5 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA MS + 3,0 mg/L BA + 0,5 mg/L NAA Kết cho thấy việc tổ hợp BA NAA không 21 cho hiệu tối ƣu để tạo chồi nồng độ BA vƣợt qua mức tối ƣu gây chế khả hình thành chồi từ mấu cấy Tóm lại, qua kết tuần sau cấy cho thấy, hiệu chất điều hòa sinh trƣởng ảnh hƣởng rõ rệt đến trình tái sinh chồi huyền tinh Với vai trị cytokinin, BA có tác động đến trình phá vỡ miên trạng chồi tái sinh chồi môi trƣờng nuôi cấy Khi nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng vƣợt mức tối ƣu gây ức chế việc tái sinh chồi Trên mơi trƣờng MS có bổ sung 1,5 mg/L BA số chồi đƣợc hình thành nhiều (4,4 chồi/mẫu cấy), đa số chồi to cứng, phù hợp tạo nguồn vật liệu giai đoạn nuôi cấy Mặt khác, nuôi mô tế bào thực vật việc kết hợp BA NAA để tăng hiệu nuôi cấy nhƣng việc nuôi cấy huyền tinh không mang lại hiệu tạo chồi cao sau tuần nuôi cấy cấy, kết luận phù hợp với báo cáo Cepkova cs., (2015) huyền tinh 22 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Sau nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng BA NAA lên tạo chồi in vitro huyền tinh, đƣa kết luận sau: nồng độ BA đơn lẻ tốt cho tạo chồi in vitro huyền tinh (Tacca leontopetaloides) đƣợc bổ sung vào môi trƣờng MS + 1,5 mg/L BA cho kết 4,4 chồi/mẫu cấy giai đoạn tuần sau cấy mơi trƣờng MS có tổ hợp BA + NAA không hiệu trình tạo chồi in vitro huyền tinh 5.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục khảo ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đên khả nhân nhanh chồi in vitro huyền tinh 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO appropedia.org (2010) Original: Root Crops 15 Appropedia Đọc http://www.appropedia.org/Original:Root_Crops_15 (ngày đọc 10/9/2015) từ: Borokini, T I Lawyer, E.F & Ayodele A E (2011) “In vitro propagation of Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze in Nigeria” Egyption Journal of Biology, Vol: 13: 51 – 56 Bùi Bá Bổng (1995) Nhân giống nuôi cấy mô An Giang: Khoa học Công nghệ Môi trƣờng An Giang Bùi Trang Việt (2000) Sinh lý thực vật đại cương (phần II: phát triển) Tp Hồ Chí Minh: NXB Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh Cao Thị Thu Dung (ngày 23 tháng 09 năm 2013) Cần phát huy nguồn lợi râu hùm Vƣờn Quốc gia Pù Mát Khoa học phổ thông Truy cập từ: http://www.khoahocphothong.com.vn/can-phat-huy-nguon-loi-cay-rau-hum-ovuon-quoc-gia-pu-mat-28099.html Cepkova, P.H, Vitamvas, J, Viehmannova, I, Kisilova, J, Cusimamani, EF & Milella, L (2015) Simplified in vitro propagation protocol for Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze and assessment of genetic uniformity of regenerated plantlets Emirates Journal of Food and Agriculture Vol: (2015); 27(10): 736 – 743 [DOI: 10.9755/ejfa.2015-06-350] duoclieu.org (2014) HUYỀN TINH - Tacca leontopetaloides - công dụng cách dùng Dược liệu Truy cập: http://www.duoclieu.org/2014/11/huyen-tinh-taccaleontopetaloides-cong.html Gao Y, Bai Y & Zhao, Y (2006) Experiment on Tissue Culture of Tacca chantrieri Tropical Agricultural Science & Technology, Vol: 03, 11 -12,15 He, H, Lan, Q & Zhang, Y (2002) In vitro propagation of Tacca chantrieri Journal of Guangxi Agricultured and Biological Science Vol: 21 (2): 108 – 110 Hịa Bình (2016) Cây bột huyền tinh, nguồn thu nhập đáng kể Tịnh Biên Sở Nông Nghiệ tỉnh An Giang Kay, D (1987) “Root Crops 2nd edition”, In: Gooding EGB (ed.) Tropical Development and Research Institute UK (now, National Resources Institute, UK), 380 pp Made Armini Wiendi & Endah Retno Palupi (2017) Evaluation of horticultural traits and seed germination of Tacca chantrieri „André Agriculture and Natuaral Resources Vol 51 (2017), 169 - 172 Manek, RV, Kunle, OO, Emeje , MO, Builders, P, Rama Rao, GV, Lopez GP & Kolling, WM (2005) “Physical, thermal and sorption profile of starch obtained from Tacca leontopetaloides” Starch 57: 55 – 61 Martin Andri Fadillah; Tri Muji Ermayanti, Betalini Widhi Hapsari, Deritha Elffy & Rantau (2012) “Rapid micropropagation of Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze”, in Prosiding the 5th Indonesian Biotechnology Conference Vol: 23018216, pp; 523-534 Meena KL, Yadaf BL (2010) Tacca leontopetaloides (Linn.) Kuntze IJNPR 1(4):512 - 514pp Mỹ Ái & Trọng Ân (20-02-2014) Sản xuất bột huyền tinh vùng núi Báo An Giang Đọc từ: http://www.baoangiang.com.vn/Tam-nong/Nong-lam-thuy24 san/San-xuat- bot-huyen-tinh-vung-nui.html (ngày đọc 15/7/2015) Nguyễn Nhƣ Khanh (2007) Sinh học phát triển thực vật Hà Nội: NXB Giáo dục Noor Anilizawatima, S, Anis Athirah, Z, Aishah & A, Norrizah, J S 2013 Optimization of Plant Growth Hormones for in vitro Seed Germination of Tacca integrifolia ResearchGate Truy cập: Rendy Susanto (2014) Pengaruh kombinasi media tanam dengan bobot umbi mini terhadap pertumbuhan Tanaman Taka (Tacca leontopetaloides (Linn.) O Kuntze) Departemen Agronomi Dan Hortikultutura FakulTas Pertanian Institut Pertanian Bogor 2014 Shi.Y, Tang H, Huang.M & Kong, D (2012) Callus Induction and Plant Regeneration from Flowers of Tacca chantrieri Southwest China Journal of Agricultural Sciences, 25(4): 1042 – 1046 Truy cập: http://en.cnki.com.cn/Article Thành Chinh (08.03.2011) Cây huyền tinh vùng Bảy Núi Báo An Giang Đọc từ: http://www.baoangiang.com.vn/An-Giang-24-Gio/Thoi-su/Cay-huyen-tinhvung-Bay- Nui.html (ngày đọc 10/9/2015) Ukpabi, E, Ukenye& Olojede, A O (2009) “Raw-Material Potentials of Nigerian Wild Polynesian Arrowroot (Tacca leontopetaloides) Tubers and Starch” Journal of Food Technology, 7(4): 135-138 Ủy Ban Nhân Dân Tỉnh An Giang (2015) Triển khai thực Quy hoạch bảo tồn phát triển dược liệu ứng dụng công nghệ cao tỉnh An Giang năm 2015 – 2016 An Giang: Ủy Ban Nhân Dân Tỉnh An Giang Võ Thị Bạch Mai (2004) Sự phát triển chồi rễ Tp Hồ Ch Minh: NXB Đại học Quốc Gia Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng & Lê Hồng Điệp (2005) Công nghệ sinh học tế bào (tập hai) Hà Nội: NXB Giáo dục Zhang, W, Lin, B, Lin, D (2010) Tissue Culture and Plant Regeneration of Tacca chantrieri Andre Chinese Journal of Tropical Agriculture, 12: 20-23 Chinese National Knowledge Infrastructure Đọc từ: http://en.cnki.com.cn/Article_en/ 25 PHỤ LỤC BẢNG ANOVA PHỤ CHƢƠNG 1: Thời gian tái sinh chồi Nguồn biến động Giữa nhóm Trong nhóm Tổng cộng Tổng bình phƣơng 49,744 22 71,744 Độ tự 12 36 38 Trung bình bình phƣơng 4,145 0,846 F Sig 4,899 0,00 PHỤ CHƢƠNG 2: Số chồi huyền tinh thời điểm tuần sau cấy Tổng bình Độ tự Trung bình Nguồn biến động F phƣơng bình phƣơng Giữa nhóm 7,138 12 0,595 1,645 Trong nhóm 18,8 52 0,362 Tổng cộng 25,938 64 PHỤ CHƢƠNG 3: Số chồi huyền tinh thời điểm tuần sau cấy Tổng bình Độ tự Trung bình Nguồn biến động F phƣơng bình phƣơng Giữa nhóm 17,2 12 1,433 1,649 Trong nhóm 45,2 52 0,869 Tổng cộng 62,4 64 PHỤ CHƢƠNG 4: Số chồi huyền tinh thời điểm tuần sau cấy Tổng bình Độ tự Trung bình Nguồn biến động F phƣơng bình phƣơng Giữa nhóm 16,154 12 1,346 1,136 Trong nhóm 61,6 52 1,185 Tổng cộng 77,754 64 PHỤ CHƢƠNG 5: Số chồi huyền tinh thời điểm tuần sau cấy Tổng bình Độ tự Trung bình Nguồn biến động F phƣơng bình phƣơng Giữa nhóm 49,415 12 4,118 1,968 Trong nhóm 108,8 52 2,092 Tổng cộng 158,215 64 26 Sig 0,108 Sig 0,107 Sig 0,353 Sig 0,047 ... BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG NAPHTALEN ACETIC ACID VÀ BENZYL ADENINE LÊN SỰ TẠO CHỒI IN VITRO CÂY HUYỀN TINH (Tacca leontopetaloides) VỎ VẠN KIẾP... nghiên cứu khoa học “Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng Naphtalen acetic acid Benzyl adenine lên tạo chồi in vitro huyền tinh Tacca leontopetaloides? ?? sinh viên Vỏ Vạn Kiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thạc... chất điều hòa sinh trƣởng Napthalen acetic acid Benzyl adenine lên tạo chồi in vitro huyền tinh (Tacca leontopetaloides) , nhận đƣợc ủng hộ, giúp đỡ q Thầy Cơ, gia đình bạn bè Tôi xin chân thành