Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình trích ly tinh dầu củ gừng zingiber officinale roscoe xác định thành phần hóa học và khảo sát một số hoạt tính sinh học

ĐỒN THANH NIÊN CỘNG SẢN HỒ CHÍ MINH BAN CHẤP HÀNH TP.HỒ CHÍ MINH - CƠNG TRÌNH DỰ THI GIẢI THƢỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC EURÉKA LẦN THỨ XX NĂM 2018 NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN Q TRÌNH TRÍCH LY TINH DẦU CỦ GỪNG (Zingiber oficinale Roscoe), XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC LĨNH VỰC NGHIÊN CỨU : Cơng nghệ Hố – Dƣợc CHUN NGÀNH : Cơng nghệ Hố Mã số cơng trình: ………………… i MỤC LỤC MỤC LỤC…………………………………………………………………… i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT………………………………….…………… v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG viii ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài 2 Mục đích nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu gừng 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Khái quát họ gừng 1.1.3 Sơ lược chi Gừng (Zingiber) 1.1.4 Nguồn gốc củ gừng 13 1.1.5 Đặc điểm thực vật 13 1.1.6 Thành phần hóa học 13 1.1.7 Công dụng gừng 15 1.2 Giới thiệu tinh dầu 23 1.2.1 Khái niệm tinh dầu 23 1.2.2 Phân bố tinh dầu thiên nhiên 24 1.2.3 Q trình tích luỹ tinh dầu 24 1.2.4 Tính chất vật lý tinh dầu 25 1.2.5 Tính chất hóa học tinh dầu 26 1.2.6 Ảnh hưởng nhân tố khác đến thành phần tính chất tinh dầu gừng 26 1.2.7 Ứng dụng tinh dầu gừng 27 1.2.8 Nguyên tắc sản xuất tinh dầu từ nguyên liệu thiên nhiên 28 1.2.9 Nguyên tắc trích ly tinh dầu 28 ii 1.2.10 Các phương pháp trích ly tinh dầu 28 1.3 Giới thiệu phương pháp chưng cất lôi nước 33 1.4 Khả kháng khuẩn chế kháng khuẩn hợp chất kháng khuẩn có nguồn gốc thực vật 35 1.4.1 Khái niệm 35 1.4.2 Các chế kháng khuẩn 35 1.4.3 Một số nhóm hợp chất alkaloid thực vật 36 1.5 Giới thiệu chủng vi khuẩn gây bệnh 42 1.5.1 Staphyllococcus aureus 42 1.5.2 Escherichia coli (E.coli) 44 1.5.3 Shigella spp 45 1.6 Hoạt tính kháng oxy hóa 49 1.6.1 Khái niệm gốc tự 49 CHƢƠNG 2: MỤC TIÊU VÀ PHƢƠNG PHÁP 54 2.1 Thời gian tiến hành nghiên cứu 54 2.2 Vật liệu 54 2.3 Phương pháp nghiên cứu 56 2.3.1 Tiến hành trích ly tinh dầu khảo sát yếu tố ảnh hưởng 58 2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 60 2.3.3 Xác định số hóa học vật lý tinh dầu gừng 63 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt lực kháng khuẩn 68 2.3.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxy DPPH 70 2.4 Thống kê xử lý số liệu 72 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 73 3.1 Ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu biện pháp chưng cất lôi nước 73 3.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu (cắt lát, cắt sợi, xay nhuyễn) đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước 73 iii 3.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát nồng độ muối NaCl đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước 74 3.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát tính ảnh hưởng tuổi nguyên liệu (củ non, củ bánh tẻ, củ già) đến hàm lượng tinh dầu củ gừng thu băng phương pháp chưng cât lôi nước 76 3.1.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng xuất xứ nguồn nguyên liệu (Gừng thu mua từ Chợ lớn Gừng Long An) đến hàm lượng tinh dầu gừng thu hồi 78 3.1.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng thời gian ngâm thời gian chưng đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 79 3.1.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng việc sấy nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 81 3.2 Xác định số vật lý hóa học tinh dầu gừng 83 3.2.1 Đánh giá cảm quan 83 3.2.2 Định lượng tinh dầu gừng 83 3.2.3 Các số hóa học tinh dầu gừng 85 3.3 Kết xác định thành phần hóa học tinh dầu gừng 86 3.4 Thử hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 88 3.4.1 Hoạt tính kháng Escherichia coli O157 tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 88 3.4.2 Hoạt tính kháng Staphylococcus aureus tinh dầu gừng thu bằng phương pháp chưng cất lôi nước 91 3.4.3 Hoạt tính kháng Shigella boydii tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 93 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Error! Bookmark not defined.99 4.1 Kết luận 99 4.2 Kiến nghị 100 Tài liệu tham khảo 101 Phụ lục 104 Phụ lục 1: Thành phần chất môi trường cách pha số dung dịch thử 104 iv Phụ lục 2: Xử lý thống kê ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước 104 Phụ lục 3: Xử lý thông kê kết mức độ kháng khuẩn tinh dầu gừng nhóm vi sinh vật thị 107 Phụ lục 4: kết xử lý thống kê phần trăm bắt gốc tự tinh dầu gừng 108 Phụ lục 5: Kết kiểm nghiệm thành phần hóa học hàm lượng tương đối hợp chất mẫu tinh dầu gừng phương pháp GC-MS 110 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CTCT : Công thức cấu tạo DMSO : Dimethyl sulfoxyde ĐC : Đối chứng E.Coli : Escherichia coli GC : Gas chromatography MS : Mass spectrometry NA : Nutrient Agar NB : Nutrient Broth NXB : Nhà xuất RNA : Ribonucleic Acid SAS : Statistical Analysis Systems TB : Trung bình TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TCVS : Tiêu chuẩn vi sinh TN : Thí nghiệm DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl CFU : colony-forming unit vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Một số loại củ thuộc họ gừng Hình 1.2 Một số sản phẩn trà gừng đóng gói giới Hình 1.3 Hệ thống chưng cất lơi nước Hình 1.4 Máy ép tinh dầu Hình 1.5 Hệ thống chưng cất nước hỗ trợ vi sóng Hình 1.6 Hệ thống chưng cất lơi nước Hình 1.7 Những vị trí vi khuẩn bị tác động hợp chất thực vật Hình 1.8 Cấu trúc morphine Hình 1.9 Quinine trích ly từ Cinchona officinalis Hình 1.10 Sơ đồ phân loại saponin (Nguyễn Tấn Thịnh, 2013) Hình 1.11 Staphyllococcus aureus Hình 1.12 Vi khuẩn E.coli Hình 1.13 Vi khuẩn Shigella Hình 1.14 Cấu trúc DPPH (1,1 diphenyl-2-picrylhydrazyl) Hình 1.15 Phản ứng gốc tự DPPH Hình 2.1 Củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) Hình 2.4 Nguyên liệu củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) dùng để thu nhận tinh dầu Hình 2.5 Nguyên liệu gừng tươi sau xay ướt Hình 2.6 Kích thước ngun liệu: A Cắt lát; B Cắt sợi; C Xay nhuyễn Hình 2.7 A ) Củ Gừng Việt Nam (trồng Long An); B) Củ Gừng mua Chợ lớn TP HCM Hình 2.8 Gừng nguyên củ sau ngày sấy nhiệt độ 45 ± 5oC Hình 2.9 Quy trình đánh giá hoạt lực kháng khuẩn tinh dầu gừng Hình 2.10 Quy trình đánh giá hoạt tính chống oxy hóa tinh dầu gừng Hình 3.1 Đồ thị ảnh hưởng kích thước nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước vii Hình 3.2 Đồ thị thể ảnh hưởng nồng độ muối NaCl đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lơi nước Hình 3.3 Đồ thị thể ảnh hưởng độ tuổi đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Hình 3.4 Đồ thị thể hàm lượng tinh dầu theo nguồn nguyên liệu Hình 3.5 Sự biến thiên hàm lượng tinh dầu gừng sau chưng cất lôi nước vơi thời gian ngâm Hình 3.6 Tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lơi nước Hình 3.7 Kết kháng E.coli O157 tinh dầu gừng mẫu đối chứng dương nồng độ: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.8 Kết kháng Staphylococcus aureus mẫu đối chứng dương nồng độ tinh dầu khác nhau: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.10 Kết kháng Shigella boydii mẫu đối chứng dương nồng độ tinh dầu khác nhau: nguyên chất, 10-1, 10-2 Hình 3.11 Đồ thị độ tương quan nồng độ dung dịch với phần trăm bắt gốc tự tinh dầu gừng Hình 3.12 Phản ứng DPPH với tinh dầu gừng Phản ứng hoạt tính chống oxy hóa: 1) Đối chứng âm DPPH, 2) Đối chứng dương: vitamin C, 3) Tinh dầu mg/ml DPPH, 4) Tinh dầu 0,75 mg/ml DPPH, 5) Tinh dầu 0,5 mg/ml DPPH, 6) Tinh dầu 0,25 mg/ml DPPH, 7) Tinh dầu 0,1 mg/ml DPPH viii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ muối NaCl đến hàm lượng tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.3 Ảnh hưởng tuổi nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.4 Ảnh hưởng xuất xứ nguồn nguyên liệu (Gừng thu mua từ Chợ lớn TP HCM Gừng Long An) đến hàm lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.5 Ảnh hưởng thời gian ngâm mẫu thời gian chiết đến hàm lượng tinh dầu củ gừng phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.6 Ảnh hưởng việc sấy nguyên liệu đến lượng tinh dầu thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.7 Kết định lượng tinh dầu gừng Bảng 3.8 Kết xác định tỷ trọng tinh dầu gừng Bảng 3.9 Kết xác định độ hòa tan tinh dầu gừng ethanol Bảng 3.10 Các số hóa học tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.11 Kết phân tích hàm lượng tương đối hợp chất mẫu tinh dầu gừng phương pháp GC-MS Bảng 3.12 Kết kháng Escherichia coli O157 tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.13 Kết qủa kháng Staphylococcus aureus tinh dầu gừng thu bằng phương pháp chưng cất lôi nước Bàng 3.14 Kết kháng Shigella boydii tinh dầu gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Bảng 3.15 Kết đo OD mẫu thử DPPH giá trị phần trăm bắt gốc tự T M TẮT Trong nghiên cứu tiến hành hướng sau đây: Đầu tiên nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng (kích thước nguyên liệu, tuổi nguyên liệu, nồng độ dung dịch NaCl, thời gian ngâm nguyên liệu dung dịch NaCl, thời gian chưng cất, độ h o nguyên liệu, lượng nước chưng cất) đến hàm lượng tinh dầu Gừng thu phương pháp chưng cất lôi nước Kết cho thấy nguyên liệu củ gừng già xay nhuyễn phút, tỷ lệ rắn l ng 1:2,5 ; nồng độ muối: 15%; thời gian chưng cất: từ – tiếng kể từ giọt tinh dầu ngưng tụ rơi xuống Tinh dầu gừng thu có màu vàng nhạt, nhẹ nước, có mùi thơm đặc trưng, vị cay nồng Đã xác định số hóa lý tinh dầu gừng sau: hàm lượng tinh dầu 0,58%; tỷ trọng tinh dầu gừng: 0,902; số acid: 5,93; số ester: 14,399; số savon hóa: 20,327; số ethanol: tỷ lệ tinh dầu: cồn tuyệt đối = 1:1,6; tỷ lệ tinh dầu: cồn 90o = 1:2,3; tỷ lệ tinh dầu: cồn 80o = 1:12,4; tỷ lệ tinh dầu: cồn 70o = 1:27 Thứ hai phân tích thành phần hóa học tinh dầu Gừng thu phương pháp sắc ký khí gh p khối phổ (GC-MS) Thành phần tinh dầu gừng nhóm terpenes: α-Ciral (16,2%), β-Citral (11,424%), Camphene (11,21%), α-Zingiberene (10,68%), Sabinene (7,776%), Cineole (7,375%) chiếm đại đa số bên cạnh cịn có nhóm nh chất thuộc nhóm sesquiterpenes có chứa hoạt tính sinh học cao: Sesquisabinene, α-Famesene (3,17%), β-Bisabolene (1,999%), α-Curcumene (2,228%) Thứ ba đánh giá khả kháng chủng vi khuẩn (Escherichia coli O157, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Shigella boydii) tinh dầu Gừng Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại vi khuẩn: E.coli O157, Staphylococcus aureus, Shigella boydii cho thấy tinh dầu gừng có khả ức chế loại vi khuẩn gram (+), gram (-) gây ngộ độc gây viêm Trong Tinh dầu gừng kháng mạnh vi khuẩn Shigella boydii kháng yêu vi khuẩn Staphylococcus aureus Thứ tư đánh giá khả kháng oxy hóa tinh dầu gừng Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cho thấy tinh dầu gừng có khả chống oxy hóa tương đối cao, kết IC50 thu 273µg/ml 100 dầu gừng kháng mạnh vi khuẩn Shigella boydii kháng yêu vi khuẩn Staphylococcus aureus Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cho thấy tinh dầu gừng có khả chống oxy hóa tương đối cao, kết IC50 thu 273µg/ml 4.2 Kiến nghị Vì điều kiện thời gian, chí phí không cho ph p nên đề tài xây dựng quy trình trích ly tinh dầu với điều kiện thích hợp thử hoạt tính kháng khuẩn hoạt tính chống oxy hóa Vì có điều kiện cần tiếp tục nghiên cứu tinh dầu gừng ứng dụng vào sản xuất để tăng nguồn lợi cho người nông dân nước nhà - Cần khảo sát thêm vùng cung cấp nguyên liệu - Cần khảo sát thêm thiêt bị trích ly tinh dầu gừng để đạt hiệu cao - Khảo sát khả kháng tế bào ung thư - Khảo sát việc ứng dụng tinh dầu gừng vào dược phẩm mỹ phẩm thực phẩm - Cần nghiên cứu theo hướng mở rộng để xác định thành phần chất có thân rễ hoa gừng loại họ với gừng Từ so sánh thành phần chất có tác dụng dược lý có hàm lượng cao để tiếp tục nghiên cứu hoạt tính sinh học phục vụ cho y học 101 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Tống Thị Ngọc Ánh Nguyễn Văn Kiên, trường đại học Cần Thơ 2011 “Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chưng cất tinh dầu gừng” Tạp chí khoa học 19b:62-69 [2] Nguyễn Quốc Bình 2009 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ 3, 22/10/2009 – Viện ST&TNSV - Viện KH&CN Việt Nam [3] Nguyễn Thanh Huệ, Nguyễn Thị Bích Tuyển, Nguyễn Tấn Hồng Sơn, Trịnh Minh Khang Năm 2012 Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu gừng (Zingiber officinale Roscoe.) tinh dầu tiêu (Piper nigrum L.), trang 139-143 [4] Hồ Thị Nguyệt Linh Lê Văn Mười (2015) Khảo sát thành phần hóa hoc tinh dầu củ gừng (Zingiber officinale Roscoe) trồng thành phố Bạc Liêu, Tạp chí khoa học số 17, tháng năm 2015, trang 16-19 [5] Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốcViệt Nam Nhà Xuất Y học, trang 366-369 [6] Nguyễn Ngọc Hạnh 2002 Tách chiết cô lập hợp chất tự nhiên Giáo trình Cao học, Trường Đại học Cần Thơ [7] Phan Quốc Kinh 2007 Giáo trình Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học Nhà Xuất Giáo dục Việt Nam [8] Võ Thị Bạch Huệ, Đặng, Văn Hoài, Phan, Văn Hồ Nam 2010 So sánh thành phần tinh dầu gừng dại gừng trâu thuộc chi Zingiber, họ Gừng (Gingiberaceae) phương pháp GC-MS Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 14 1, tr 16-21 [9] Huỳnh Kim Diệu 2012 Sự chủng tính kháng khuẩn gừng (Zingiber officinale Roscoe) nghệ (Curcuma longa L.) Đại học Cần Thơ [10] Nguyễn Thị Hằng, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Mai Hữu Phương 2016 Khả bắt gốc tự DPPH lực khử nam sâm bò Cần Giờ, TP Hồ Chí Minh Tạp chí khoa học Đại học Sư Phạm TP HCM, số 12(90) 102 [11] Nguyễn Thị Hà Duyên 2011 Nghiên cứu thành phần tinh dầu nhựa dầu gừng (gingiber officinale rosc.), họ gừng (zingiberaceae) Luận văn tốt nghiệp Dược sĩ Trường Đại học Dược Hà Nội [12] Nguyễn Đức Vượng, Phạm Nam Giang, Dương Thị Mai, Đoàn Thị Việt Hà 2016 Nghiên sản xuất dầu gừng tinh dầu gừng từ củ gừng Tạp chí thơng tin khoa học cơng nghệ tỉnh Quảng Bình số 3:42-44 [13] Trịnh Đình Chính, Hồng Triệu Hùng, Nguyễn Thị Hoàng Anh 2007 Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học Gừng dại (Zingiber cassumunar Roxb) tỉnh Kon Tum, tạp chí Dược liệu, tập 12, số 3+4:8991 [14] Tôn Nữ Minh Nguyệt 2010 Chất kháng khuẩn thực vật Trường đại học Bách khoa TP HCM [15] Nguyễn Kim Phi Phụng 2000 Các phương pháp nhận danh trích ly lập chất hữu Trường đại học Khoa học tự nhiên [16] Nguyễn Kim Phi Phụng 2001 Các phương pháp nhận danh trích ly cô lập chất hữu Trường đại học Khoa học tự nhiên [17] Lê Ngọc Thạch 2003 Tinh dầu NXB Đại học Quốc gia Tp.Hồ Chí Minh [18] Nguyễn Quốc Châu Thanh 2013 Ly trích khảo sát thành phần hóa học tinh dầu xả chanh Đại học Cần Thơ [19] Nguyễn Tiến Thắng 2012 Công nghệ sản xuất sinh phẩm Bộ giáo dục đào tạo Trường đại học Công nghệ TP HCM [20] Trần Linh Phước 2010 Phương pháp phân tích Vi sinh vật nước, thực phẩm, mỹ phẩm NXB Giáo dục Hà Nội [21] Tiêu chuẩn Việt Nam 189:1993 Tinh dầu phương pháp thử Năm ban hành 1993-09-07, 430/QĐ-TĐC Tài liệu tiếng Anh [22] Stoilova, I., Krastanov, A., Stoyanova, A., Denev, P & Gargova 2007 Antioxidant activity of ginger extract (Zingiber officinale) J of Food Chem., pp.102, 764-770 103 [23] Wojciech Koch 2017 Application of Chromatographic and Spectroscopic Methods towards the Quality Assessment of Ginger (Zingiber officinale) Rhizomes from Ecological Plantations [24] Abdul A.B.H 2008 Anticancer activity of natural compound zerumbone extracted from Zingiber zerumbet in Human Hela cervical cancer cells International Journal of Pharmacology, 4; pp160-168 [25] Dung.N.X., Chinh.T.D., Piet A.Leclereq 1995 Chemical investigation of the acrial part of Zingiber zerumbet (L) Sm From Vietnam [26] Masuda.T., Jitoe.A., Kato.S., Nakatani.N 1991 Acetylated flavonol glycosides from Zingiber zerumbet Phytochemsitry, 30:2391-1392 [27] Hiserodt R.D., Franzblau S.G., Rosen R.T 1998 Isolation of 6-, 8-, and 10gingerol from ginger rhizome by HPLC and preliminary evaluation of inhibition of Mycobacterium a_ium and Mycobacterium tuberculosis, Journal of Agricultural and Food Chemistry 46, pp: 2504-2508 [28] Masada Y, Inoue T, Hashimoto K, Fujioka M, Shiraki K 1973 Studies on the pungent principles of Ginger by GC-MS Vakugaki Zasshi, 93, 318321 [29] Ali, B.H., Blunden, G., Tanira, M.O and Nemmar, A 2008 Some phytochemical, pharmacological and toxicological properties of ginger (Zingiber officinale Roscoe): A review of recent research” Food Chemistry and Toxicology [30] Ahmed Hassan El-ghorab 1010 A Comparative Study on Chemical Composition and Antioxidant Activity of Ginger (Zingiber officinale) and Cumin (Cuminum cyminum)” Food Chem 58: 8231-8237 104 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần chất môi trƣờng cách pha số dung dịch thử - Dung dịch chuẩn độ KOH 0,1 N Cân khoảng 0,56 g KOH rắn, hòa tan 100 ml ethanol 96o, ta dung dịch KOH cồn nồng độ khoảng 0,1 N - Môi trường tăng sinh NB Cân xác g mơi trường Peptone, g mơi trường Beef extract (có thể thay g mơi trường Meat extract), 15 g muối NaCl Hịa 23 g môi trường Nutrient Broth 1000 ml nước cất vô trùng Đun sôi, khuấy khử trùng nồi hấp 121°C 15 phút PH cuối 7,0 ± 0,2 - Môi truờng cấy kháng khuẩn NA Cân xác g mơi trường Peptone, g mơi trường Beef extract (có thể thay g môi trường Meat extract), 15 g muối NaCl 15 g Agar Hịa 38 g mơi trường Nutrient Agar 1000 ml nước cất vô trùng Đun sôi, khuấy khử trùng nồi hấp 121°C 15 phút, pH cuối 7,0 ± 0,2 Phụ lục 2: Xử lý thống kê ảnh hƣởng yếu tố đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Xử lý thống kê ảnh hƣởng kích thƣớc nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.08162600 0.04081300 275.14 F NT 0.08162600 0.04081300 275.14 F Model 0.05755440 0.01438860 3996.83 F NT 0.05755440 0.01438860 3996.83 F Model 0.13900289 0.06950144 7189.80 F NT 0.13900289 0.06950144 7189.80 F 0.00849761 0.00849761 13632.5 F NT 0.00849761 0.00849761 13632.5 F Model 0.01211373 0.00302843 14.93 0.0003 Error 10 0.00202800 0.00020280 Corrected Total 14 0.01414173 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.856595 2.704632 0.014241 0.526533 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NT 0.01211373 0.00302843 14.93 0.0003 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.000203 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0259 t Grouping Mean N NT A 0.72500 E3 B 0.67500 E2 B B 0.66667 E1 B B 0.65833 E4 C 0.650000 E0 Thí nghiệm 6: Ảnh hƣởng việc sấy nguyên liệu đến hàm lƣợng tinh dầu gừng thu đƣợc phƣơng pháp chƣng cất lôi nƣớc Source Model Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.04454817 0.04454817 3818.41 F DF 107 NT 0.04454817 0.04454817 3818.41 F Model 463.5245856 115.8811464 184897 F NT 463.5245856 115.8811464 184897 F Model 879.4911704 219.8727926 621227 F NT 879.4911704 219.8727926 621227 F Model 803.6184197 200.9046049 633.99 F NT 803.6184197 200.9046049 633.99 F 10434.02133 1304.25267 Infty F 2600.24365 2600.24365 Infty