Tinh sạch sắc tố prodigiosin do vi khuẩn serratia marcescens tổng hợp trên môi trường đậu phộng và khảo sát hoạt tính sinh học của các sản phẩm tinh sạch

MỤC LỤC i Ắ v vi vii 1 Tính cấp thiết đề tài ục đích nghiên cứu 2 Nhiệm vụ nghiên cứu c ế Ư u đ đ c đề ỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan prodigiosin 1.1.1 Nguồn gốc prodigiosin 1.1.2 Cấu trúc đặc đ ểm prodigiosin 1.2 Tiềm s n xuất prodigiosin Serratia marcescens 1.2.1 chế tổng h p prodigiosin 1.2.2 Yếu tố nh h ởng đến tổng h p prodigiosin 12 1.2.3 Thu nhận, tinh s ch định l ng prodigiosin 13 Ho t tính sinh học prodigiosin 17 1.3.1 Ho t tính kháng khuẩn 17 i ín ín ng nấ 18 ệ u 18 1.3.4 Ho t tính chống tế bào ung 18 1.3.5 Ho t tính ức chế miễn dịch 21 1.4 Tình hình nghiên cứu prodigiosin Việ Ư Ư 2.1 Thờ g an a Ư - n ếg 22 24 địa đ ểm nghiên cứu 24 2.1.1 Thời gian 24 ịa đ ểm 24 2.2 Vật liệu – thiết bị - hoá chất 24 ậ ệu ac ấ n ậ ng ệ 24 2.2.6 Dụng cụ thiết bị 25 ơng p p 26 2.3.1 Mục đíc 26 2.3.2 Nội dung 27 2.3.3 Bố trí thí nghiệm 27 ơng p p ng 41 íc 4 44 ng n cứu 28 ng 28 ơng p p ắc ắc gấ cộ 30 n a a g ap 31 X c định phổ hấp thụ ắc ố 33 ể a n an pc ấ c ng ắc ố 33 ii 46 ơng p p ể a / / u ắc 33 uang p ổ ấp ụ c c đ 34 2.4.8 Xây d ng đ ờng c uẩn sắc tố 34 2.4.9 Kh o sát ho t tính kháng khuẩn STSTLLL STSSKC 35 2.4.10 Ho t tính kháng nấm 37 2.4.11 Ho t tính diệt sâu 39 2.4.12 Ho Ư ín ng ế 40 ẬN 41 T QU 3.1 Trích ly l ng l ng 41 3.1.1 Quy trình trích ly l ng l ng 41 3.1.2 Quang phổ hấp thụ STSTLLL 43 3.1.3 Các thành phần hóa học c sau trích ly l ng l ng 43 3.1.4 Kh o sát phổ LC/MS/MS STT STSTLLL 48 3.2 Sắc cộ 52 3.2.2 Các thành phần hóa học c sau sắc ký cột 58 3.8 Xây d ng đ ờng c uẩn sắc tố 60 3.9 Kh o sát ho t tính kháng khuẩn STSTLLL STSSKC 61 3.11 Ho t tính diệt sâu 69 3.11 ệu 11 ố 3.12 Ho ể ín a c ệ ng ng ế u ắc u 69 u 73 73 uang p ổ ấp iii ụ c c đ 74 Ậ 77 79 Ệ 80 Ư Ư Ắ 14 STSTLLL 14 STSSKC 15 X Ệ 16 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT n ố ng ệp HPLC: High-performance liquid chromatography LC/MS: Liquid chromatography–mass spectrometry PG: prodigiosin ắc ố thơ ắc ố au íc STSSKC ắc ố au ắc ng ng cộ v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Xác định cấu trúc số chất đ i diện prodigiosin Bảng 1.2 Bả nh h ởng prodigiosin đến kh tồn t i tế bào miễn dịch 22 2.1: ố í í ng ệ ố u ung íc 30 ã p a ãng để d ng đ ờng chuẩn STSTLLL 35 Bảng 2.3 ã p a ãng để d ng đ ờng chuẩn STSSKC 35 Bảng 2.2 Bả ị 3.1: u tỉ lệ P n c uố ã a n thu nhận sắc tố trích ly l ng l ng 42 Bả 3.2: ịnh tính Bả 3.3 p c ấ STT STSTLLL 43 n íc c c p n n p n p g n ị n a p n íc ố p ổ E -MS 52 Bảng 3.4 Tóm tắ c c p n đ n sau sắc ký cột 54 Bả 3.5: ế u c c Bả 3.6: K ng Bả 3.7 ng Neoscytalidium dimidiatum Bả 3.8: ế độ Bả u ệ ng ệ pc ấ c ng STSSKC 59 uẩn g 61 độc ế n ng ế 66 ung - nồng µg/ml 74 3.9: u uang p ổ ấp ụ c c đ ắc ố vi g an 74 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỜ, SƠ ĐỜ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Các chất đ i diện prodigiosin Hình 1.2 Cấu trúc prodigiosin Hình 1.3 So sánh cụm sinh tổng h p prodigiosin (cụm pig) từ Serratia ATCC uđ 39.006, Sma 274 cụm sinh tổng h p undecylprodigiosin (cụ từ Streptomyces coelicolor A3(2) Hình 1.4 Con đ ờng đ n ơng n c đề xuất cho trình sinh tổng h p p g n ề xuất đề xuấ đối v i undecylprodigiosin 11 Hình 1.5 chế kháng tế bào ung H 2.1 H 2.2: đồ íc prodigiosin 19 đồ thí nghiệm kh o sát ho t tính sinh học h p chất thứ cấp màu 28 p g n can ờng nu cấ 29 Hình 2.3 Cách chuẩn bị giấy ch y sắc ký 32 Hình 2.4 H 3.1 c đục giếng th ch thí nghiệm kháng khuẩn 37 ế u u uang p ổ ấp thụ UV/VIS cho STT 42 ố p ổE - Hình 3.2 Hình 3.3 ắc đồ u a u - ẫu 48 ẫu STSTLLL 49 Hình 3.4 ố p ổE - Hình 3.5 n íc ẫu 50 ố p ổ E -MS prodigiosin 51 H 3.6: cp nđ n H n ắc u n ận au c c ng ung ắc n-hexan cộ 53 ac a 1; c phun thuốc th Dragendorff, B) sau phun thuốc th Dragendorff 55 H ế u c c p n đ n au ắc cộ ằng ung u : Acetone (7 :3 ; v :v) 56 Hình 3.9 ế Hình 3.10 u ắc ố p ổE - n ng g a u ắc ố a u - vii ẫu ệ ung 57 58 H 3.11: ờng c uẩn H 3.12 ờng c uẩn STSSKC 61 H 3.13 ế u đố H 3.14 H 3.15 H 3.16 ế u ng nấ Neoscytalidium dimidiatum ắc ố 66 H 3.17 u ng nấ Colletotrichum p ắc ố; 67 Hình 3.18 ế 60 ng ắc ố c ủng ng E coli ắc ố ng S aureus ắc ố ệ c ế u an uẩn c ỉ ị 62 au n c 63 c c au n a ng Spodoptera exigua uổ c 64 c ăn g an 69 Hình 3.19 STSSKC Hình 3.20 ệ c ế u an a ng Spodoptera exigua uổ c ăn g an 71 ệg ố ng u ng viii í ng ệ g an73 MỞ ĐẦU Tí cấp t iết đề tài Prodigiosin sắc tố đ có b n chấ p n chủ yếu n ộ c ấ c n a a đ ờng peptone glycerol u c c c ín n c tổng h p kh o sát g ọc n nđ c ế đến n ức c ế ăng tr ởng mộ số loài vi khuẩn (Khanafari cộng s , 2006), gây độc tế bào c ống l ộ dịng tế ng nh ng trì tế bào lành ung ng nấ tính (Pandey cộng s ,2009; Pérez-Tomás Viđas, 201 cộng íc p ệ c u gu ễn ếu n ể ứng ụng ắc ố vào ĩn v c nông nghiệp ếu đ an n ( c u n n xuấ ệc s n xuất s n phẩm phục vụ cho ọc Ngồi ra, v ệc ứng dụng q trình sinh tổng p chấ màu vào ngành dệ may ngày mộ thu hút nh ng năm gần (Chidambaram Perumalsamy, 2009), tiềm s nhuộm rấ đ g P c quan tâm nđ c kh o sát chủ yếu lên men Serratia marcescens môi ờng peptone glycerol n phộng ụng ắc ố đ làm màu ng S.marcescens lên men n ờng huyền p ù đậu ăng nồng độ prodigiosin tổng h p đ ng ể theo báo cáo Quyên (2014) Tuy nhiên quy trình tinh s ch h p chất từ can đậu phộng c ẫn đ a Ti trƣờ ađ c mơ t chi tiết Vì c c n đ ín n ng ọc p c đ up ả s t g ện đề s c s c t pr di i si d vi t tí ệc a u n c ọn u n ần ờng huyền phù n xuấ ấn đề cần đ ng c p c uan đồ n ố ng ệp Serratia marcescens tổ si íc c c c sả p p tr ti s c i Mục đíc i u n ận p đậu phộng g n cứu n vi khuẩn Serratia marcescens tổng h p c n ờng n ho t tính sinh học s n phẩm tinh kh o sát s ch N iệ vụ i cứu - X c địn ệ íc ố u - Tinh s ch phần trích ly l ng l ng - Tinh s ch ần a sắc ký cột - Kh o sát a s n phẩm tinh s ch th nghiệm nhanh, sắc ký b n m ng, sắc ký l ng cao áp/ khối phổ - Kh o sát ho t tính sinh học s n phẩm tinh s ch phần sắc tố sau trích ly l ng l ng (STSTLLL) sắc tố tinh s ch ần a sắc ký cột gọ au ắc ắc ố cộ (STSSKC) C c ết đ t đƣ c đề tài đ - u - ế c n c ung íc íc n u ín ng uẩn p g c n n u n ận đ ọc c ệ íc u ấ p cp g ắc ố au íc n n c H 11: a ãng uẩn c ỉ H 12: ị S aureus í ng ệ E coli ng uẩn a n ệ ố c a an H ng H 14: 13: í ng ệ í ng ệ đ c u ng nấ ín ắc ố ng ến n c u u ăn H 15: au u ăn ĐC TN H 16: ĐC uc ế ĐC H ng ộp đố c ứng uc ế TN 17: Sâu hộp đố c ứng 10 ng ộp í ng ệ TN ộp í ng ệ a n ộng ĐC ĐC TN TN H 18: ộng ng ộp đố c ứng 11 ộp í ng ệ a H 19: Kế u c địn độc ín 12 ế H ổ / au uần u n H ổ / au uần u n 13 PHỤ LỤC C ĐƢỜNG CHUẨN SẮC TỐ STSTLLL Sau kh o sát phổ hấp thụ sắc tố, thấ c độ hấp thụ c c đ i c sóng 535 nm dung mơi e an ùng ung an đ ờng chuẩn sắc tố ể a ố ; ẫu đ ; đ đ c n n ng c ua ng để a n đề để xây d ng ến n c n ng - Khố ng pp n an đầu: 1,0664 g - Khố ng eppendorf khố ng sắc tố thơ sau lo i b hồn tồn dung môi: 2,1854 g - Khối ng sắc tố = khố ng pp n đầu – khố ng eppendorf sau = 2,1854 – 1,0664 = 1,119 g = 1119 mg Nồng độ sắc tố ml dung dịch sắc tố = 1119 mg/ml ến ng n đ n địn ằng c c ức ằng E an loãng ta tiếp tục p a Bảng ã p a ể ịc ng ẫu au íc đ đ c ua đ ; c địn dung dịch pha ãng để d ng n n đ ờng chuẩn sắc tố ãng để d ng đ ờng chuẩn sắc tố íc u ể íc Ethanol : HCl ồng độ ắc ố OD (ml) N ( 95:5 ; v:v ) (ml) (mg/ml) 535 4,4768 0,687 3,5 0,5 3,9172 0,607 3 3,3576 0,522 2,5 1,5 2,798 0,44 2 2,2384 0,352 1,5 2,5 1,6788 0,265 14 ức STSSKC ơng a c c ến n ẫu au íc n c n ể a ố ẫu au ắc đ ng g ị đ c ua để ẫu uđ c ết qu : Khố ng pp n an đầu: 1,0492 g Khố ng eppendorf khối ng sắc tố thô sau lo i b hồn tồn dung mơi: 1,8892 g Khố ng sắc tố = khố ng pp n đầu – khố ng eppendorf sau = 1,8892 – 1,0492 = 0,84 g = 840 mg Nồng độ sắc tố ml dung dịch sắc tố = 840 mg/ml ến ng n đ n địn ằng c ch: ức ằng E an loãng ta tiếp tục p a Bảng ã p a ng ố ể íc ẫu ẫu au n c đ đ c ; ua ãng để d ng đ ờng chuẩn sắc ồng độ : HCl N ( 95:5 tính tốn ; v:v ) (ml) (mg/ml) OD 535 ồng độ c ế 0,2 4,8 0,067 0,086 0,023 0,3 4,7 0,101 0,134 0,034 0,4 4,6 0,134 0,180 0,045 0,5 4,5 0,168 0,245 0,056 0,336 0,422 0,113 1,3 3,7 0,437 0,574 0,147 15 ức dung dịch pha ãng để d ng n n đ ờng chuẩn sắc tố ể íc E an địn PHỤ LỤC D XỬ LÝ SỐ LIỆU -T í iệ t i ƣu t ệ du i tríc ys ct Summary Statistics for OD TyLe Count Average Standard deviation Coeff of variation Minimum Maximum Range Stnd skewness 1:1 0.932 0.0493862 5.29895% 0.902 0.989 0.087 1.21966 1:2 0.862667 0.00321455 0.372629% 0.859 0.865 0.006 -1.09276 1:3 0.785333 0.00404145 0.514616% 0.781 0.789 0.008 -0.510608 2:3 0.96 0.0485077 5.05289% 0.904 0.989 0.085 -1.2224 Total 12 0.885 0.0765364 8.64818% 0.781 0.989 0.208 0.10873 - Thí nghiệm ho t tính kháng khu n E coli s c t sau tríc y ti Multiple Range Tests for OD by TyLe Method: 95.0 percent LSD TyLe Count Mean Homogeneous Groups 1:3 0.785333 X 1:2 0.862667 1:1 0.932 X 2:3 0.96 X X Contrast Sig Difference +/- Limits 1:1 - 1:2 * 0.0693333 0.0653505 1:1 - 1:3 * 0.146667 0.0653505 -0.028 0.0653505 1:1 - 2:3 1:2 - 1:3 * 0.0773333 0.0653505 1:2 - 2:3 * -0.0973333 0.0653505 1:3 - 2:3 * -0.174667 0.0653505 * denotes a statistically significant difference Analysis of Variance for E coli_VongKhangKhuan - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value A:EOI_LOAI 4.8151 4.8151 19.60 0.0000 B:EOI_NongDo 269.091 11 24.4628 99.58 0.0000 AB 8.40365 11 0.763968 3.11 0.0018 RESIDUAL 17.6875 72 0.24566 TOTAL (CORRECTED) 299.997 95 MAIN EFFECTS INTERACTIONS 16 s c All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for EOI_VongKhangKhuan by EOI_LOAI Method: 95.0 percent LSD EOI_LOAI Count LS Mean LS Sigma Homogeneous Groups E_SauTrichLy 48 2.1875 0.0715396 X 2.63542 0.0715396 E_SauTinhSach 48 X Contrast Sig Difference +/- Limits E_SauTrichLy – E_SauTinhSach * 0.447917 0.201684 * denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for E_OI_VongKhangKhuan by EOI_NongDo Method: 95.0 percent LSD EOI_NongDo Count LS Mean LS Sigma Homogeneous Groups 8.4 0.0 0.175235 X 16.8 0.0 0.175235 X 4.2 0.1875 0.175235 X 2.1 0.75 0.175235 X 1.05 2.25 0.175235 X 1.68 2.3125 0.175235 X 0.84 3.375 0.175235 X 0.0525 3.625 0.175235 X 0.525 3.6875 0.175235 XX 0.105 4.125 0.175235 XX 0.21 4.125 0.175235 XX 0.42 4.5 0.175235 X - Thí nghiệm ho t tính kháng khu n S aureus s c t sau tríc s c Analysis of Variance for SOI_VongKhangKhuan - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value A:SOI_Loai 0.666667 0.666667 3.80 0.0551 B:SOI_NongDo 11.0938 11 1.00852 5.75 0.0000 MAIN EFFECTS 17 y ti INTERACTIONS AB 2.27083 11 0.206439 RESIDUAL 12.625 72 0.175347 TOTAL (CORRECTED) 26.6563 95 1.18 0.3180 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for SOI_VongKhangKhuan by SOI_Loai Method: 95.0 percent LSD SOI_Loai Count LS Mean LS Sigma Homogeneous Groups S_SauTinhSach 48 4.32292 0.0604406 X S_SauTrichLy 48 4.48958 0.0604406 X Contrast Sig S_SauTinhSach - S_SauTrichLy Difference +/- Limits -0.166667 0.170393 * denotes a statistically significant difference Analysis of Variance for VongKhangNam_mm - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value A:LOAI 0.0 0.0 0.00 1.0000 B:NONGDO 36.0 12.0 1.90 0.1639 RESIDUAL 120.0 19 6.31579 TOTAL (CORRECTED) 156.0 23 MAIN EFFECTS - Thí nghiệm ho t tính kháng khu n S aureus s c t sau tríc s c Table of Least Squares Means for VongKhangNam_mm with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Error Limit Limit Level Count Mean GRAND MEAN 24 78.0 S_SauTinhSach 12 78.0 0.725476 76.4816 79.5184 S_SauTrichLy 12 78.0 0.725476 76.4816 79.5184 0,0168 76.0 1.02598 73.8526 78.1474 0,168 78.3333 1.02598 76.1859 80.4807 1,68 78.3333 1.02598 76.1859 80.4807 LOAI NONGDO 18 y ti 16,8 79.3333 1.02598 77.1859 81.4807 Multiple Range Tests for VongKhangNam_mm by LOAI Method: 95.0 percent LSD LOAI Count LS Mean LS Sigma Homogeneous Groups S_SauTrichLy 12 78.0 0.725476 X S_SauTinhSach 12 78.0 0.725476 X Contrast Sig Difference S_SauTinhSach – S_SauTrichLy 0.0 +/- Limits 2.1474 * denotes a statistically significant difference - Thí nghiệm ho t tính kháng ấ tríc y ti Neoscytalidium dimidiatum s c t sau s c Analysis of Variance for VongKhangNam_mm - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value A:LOAI 0.0 0.0 0.00 1.0000 B:NONGDO 36.0 12.0 1.90 0.1639 RESIDUAL 120.0 19 6.31579 TOTAL (CORRECTED) 156.0 23 MAIN EFFECTS All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for VongKhangNam_mm with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Error Limit Limit Level Count Mean GRAND MEAN 24 78.0 SauTinhSach 12 78.0 0.725476 76.4816 79.5184 SauTrichLy 12 78.0 0.725476 76.4816 79.5184 0.0168 76.0 1.02598 73.8526 78.1474 0,168 78.3333 1.02598 76.1859 80.4807 1,68 78.3333 1.02598 76.1859 80.4807 16,8 79.3333 1.02598 77.1859 81.4807 LOAI NONGDO Multiple Range Tests for VongKhangNam_mm by LOAI 19 Method: 95.0 percent LSD LOAI Count LS Mean LS Sigma Homogeneous Groups SauTrichLy 12 78.0 0.725476 X SauTinhSach 12 78.0 0.725476 X Contrast SauTinhSach - SauTrichLy Sig Difference +/- Limits 0.0 2.1474 * denotes a statistically significant difference - Thí nghiệm ho t ực diệt s u Spodoptera exigua s c t sau tríc Analysis of Variance for THO.TyLe%SauChet - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio MAIN EFFECTS A:NongDoSauTrichLy 10354.2 2588.54 77.76 B:THO.ThoiGian 38994.3 4874.28 146.42 RESIDUAL 4061.38 122 33.29 TOTAL (CORRECTED) 53409.8 134 All F-ratios are based on the residual mean square error P-Value 0.0000 0.0000 Table of Least Squares Means for THO.TyLe%SauChet with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit GRAND MEAN 135 30.0747 NongDoSauTrichLy 2,439202 27 28.8889 1.11039 26.6908 31.087 24,402 27 46.7907 1.11039 44.5926 48.9889 243,9202 27 28.1485 1.11039 25.9504 30.3466 2439,202 27 25.0626 1.11039 22.8645 27.2607 24392,02 27 21.4826 1.11039 19.2845 23.6807 THO.ThoiGian 18 15 7.778 1.48974 4.8289 10.7271 24 15 13.556 1.48974 10.6069 16.5051 42 15 20.6673 1.48974 17.7182 23.6164 48 15 23.334 1.48974 20.3849 26.2831 66 15 28.0 1.48974 25.0509 30.9491 72 15 29.5573 1.48974 26.6082 32.5064 90 15 37.3333 1.48974 34.3842 40.2824 96 15 41.5567 1.48974 38.6076 44.5058 120 15 68.8893 1.48974 65.9402 71.8384 Multiple Range Tests for THO.TyLe%SauChet by NongDoSauTrichLy Method: 95.0 percent LSD NongDoSauTrichLy Count 24392,02 27 2439,202 27 243,9202 27 2,439202 27 LS Mean 21.4826 25.0626 28.1485 28.8889 LS Sigma 1.11039 1.11039 1.11039 1.11039 Homogeneous Groups X X XX X 20 y 24,402 27 46.7907 Contrast Sig Difference 2,439202 - 24,402 * -17.9019 2,439202 - 243,9202 0.74037 2,439202 - 2439,202 * 3.8263 2,439202 - 24392,02 * 7.4063 24,402 - 243,9202 * 18.6422 24,402 - 2439,202 * 21.7281 24,402 - 24392,02 * 25.3081 243,9202 - 2439,202 3.08593 243,9202 - 24392,02 * 6.66593 2439,202 - 24392,02 * 3.58 * denotes a statistically significant difference X 1.11039 +/- Limits 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 3.10862 - Thí nghiệm ho t ực diệt s u Spodoptera exigua STSSKC: Analysis of Variance for TINH.TyLe%SauChet - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value MAIN EFFECTS A:NongDoSauTinhSach 38960.6 9740.16 111.16 0.0000 B:TINH.ThoiGian 27841.2 3480.15 39.72 0.0000 RESIDUAL 10690.1 122 87.6235 TOTAL (CORRECTED) 77491.9 134 All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for TINH.TyLe%SauChet with 95.0 Percent Confidence Intervals Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit GRAND MEAN 135 39.8716 NongDoSauTinhSach 0,81307 27 10.8641 1.80148 7.29787 14.4303 8,1307 27 30.9881 1.80148 27.4219 34.5544 81,307 27 57.283 1.80148 53.7168 60.8492 813,07 27 47.9015 1.80148 44.3353 51.4677 8130,7 27 52.3215 1.80148 48.7553 55.8877 TINH.ThoiGian 18 15 14.6673 2.41693 9.88276 19.4519 24 15 19.3333 2.41693 14.5488 24.1179 42 15 33.2887 2.41693 28.5041 38.0732 48 15 39.1107 2.41693 34.3261 43.8952 66 15 43.3333 2.41693 38.5488 48.1179 72 15 46.4433 2.41693 41.6588 51.2279 90 15 48.4447 2.41693 43.6601 53.2292 96 15 53.1127 2.41693 48.3281 57.8972 120 15 61.1107 2.41693 56.3261 65.8952 Multiple Range Tests for TINH.TyLe%SauChet by NongDoSauTinhSach Method: 95.0 percent LSD NongDoSauTinhSach Count 0,81307 27 8,1307 27 813,07 27 LS Mean 10.8641 30.9881 47.9015 LS Sigma 1.80148 1.80148 1.80148 Homogeneous Groups X X X 21 8130,7 81,307 27 27 52.3215 57.283 XX X 1.80148 1.80148 Contrast Sig Difference +/- Limits 0,81307 - 8,1307 * -20.1241 5.04338 0,81307 - 81,307 * -46.4189 5.04338 0,81307 - 813,07 * -37.0374 5.04338 0,81307 - 8130,7 * -41.4574 5.04338 8,1307 - 81,307 * -26.2948 5.04338 8,1307 - 813,07 * -16.9133 5.04338 8,1307 - 8130,7 * -21.3333 5.04338 81,307 - 813,07 * 9.38148 5.04338 81,307 - 8130,7 4.96148 5.04338 813,07 - 8130,7 -4.42 5.04338 * denotes a statistically significant difference 22 ... a s n phẩm tinh s ch th nghiệm nhanh, sắc ký b n m ng, sắc ký l ng cao áp/ khối phổ - Kh o sát ho t tính sinh học s n phẩm tinh s ch phần sắc tố sau trích ly l ng l ng (STSTLLL) sắc tố tinh s... nghiệm nhanh, sắc ký b n m ng, sắc ký l ng cao áp/ khối phổ - Kh o sát ho t tính sinh học s n phẩm tinh s ch phần sắc tố sau trích ly l ng l ng (STSTLLL) sắc tố tinh s ch ần a sắc ký cột (STSSKC)... h p n ờng đậu c kh o sát ho t tính sinh học s n phẩm tinh s ch 2.3.2 Nội dung - X c địn ệ íc ố u - Tinh s ch phần trích ly l ng l ng - Tinh s ch ần a sắc ký cột - Kh o sát a s n phẩm tinh s ch