Khảo sát hoạt tính sinh học của cao chiết và các cao phân đoạn từ cây lan một lá nervilia aragoana

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CAO CHIẾT VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TỪ CÂY LAN MỘT LÁ NERVILIA ARAGOANA Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS Trần Thị Ngọc Mai Sinh viên thực : Trịnh Kim Thảo MSSV: 1311100686 Lớp: 13DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan cơng trình nghiên cứu em Các số liệu kết nêu đồ án thật chƣa có cơng bố cơng trình khác TP.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Trịnh Kim Thảo Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Lời em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Trần Thị Ngọc Mai – Giảng viên Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Công nghệ TPHCM, ngƣời tận tình dìu dắt, hƣớng dẫn bảo em suốt thời gian thực đồ án tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Mai Đình Trị - Trƣởng phịng Hợp chất thiên nhiên hoạt tính sinh học, Viện Cơng nghệ Hóa học, ngƣời trực tiếp quản lí, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành đồ án tốt nghiệp em xin cảm ơn đến anh chị cơng tác đơn vị nhiệt tình bảo để em hồn thành tốt đồ án nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Công nghệ TPHCM nhƣ nhà trƣờng tạo điều kiện tốt cho em đƣợc học tập nghiên cứu để hồn thành đồ án Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn đến chị Đỗ Phƣơng Vy, ngƣời hỗ trợ cho em nhiều kinh nghiệm quý báu suốt trình thực đồ án Xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, anh chị nghiên cứu phịng thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Cơng nghệ TPHCM tận tình hỗ trợ, giúp đỡ vƣợt qua khó khăn để hồn thành tốt đồ án tốt nghiệp Cuối xin cảm ơn ngƣời thân yêu gia đình dành cho tơi quan tâm, chia sẻ, động viên, khích lệ suốt thời gian học tập nghiên cứu để tơi hồn thành đồ án Do thời gian thực có hạn, kiến thức cịn nhiều hạn chế nên đồ án thực chắn không tránh khỏi sai sót định Em mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp thầy để em có thêm kinh nghiệm tiếp tục hoàn thiện đồ án tốt nghiệp TP.HCM, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thực Trịnh Kim Thảo Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề .1 Tình hình nghiên cứu nƣớc .2 Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu .3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 5.1 Đối tƣợng nghiên cứu 5.2 Phạm vi nghiên cứu .3 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN .5 1.1 Tổng quan Lan (Nervilia aragoana) 1.1.1 Phân loại khoa học phân bố 1.1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.1.2 Phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Giá trị dƣợc liệu 1.1.5 Các nghiên cứu giới Lan (Nervilia aragoana) 11 1.2 Tổng quan phƣơng pháp chiết xuất 12 1.2.1 Các trình xảy chiết xuất .12 1.2.1.1 Sự hòa tan 13 1.2.1.2 Sự khuếch tán 13 1.2.1.3 Quá trình thẩm tích 14 1.2.2 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình chiết xuất 15 1.2.2.1 Nguyên liệu 15 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.2.2 Dung môi .16 1.2.2.3 Kỹ thuật chiết 17 1.2.3 Các phƣơng pháp chiết .18 1.2.3.1 Phƣơng pháp ngâm 18 1.2.3.2 Chiết phƣơng pháp ngấm kiệt 20 1.2.3.3 Các phƣơng pháp chiết khác 21 1.3 Tổng quan hoạt tính kháng oxy hóa .21 1.3.1 Giới thiệu chung .21 1.3.1.1 Khái niệm stress oxy hóa 21 1.3.1.2 Sự hình thành gốc tự oxy thể 22 1.3.1.3 Sự phòng vệ thể chống lại gốc tự 24 1.3.2 Một số hợp chất thiên nhiên có hoạt tính kháng oxy hóa 26 1.3.2.1 Flavonoid .26 1.3.2.2 Terpenoid 28 1.1.3 Các phƣơng pháp xác định tác dụng chống oxi hóa 29 1.1.3.1 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng MDA 29 1.1.3.2 Các phƣơng pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hóa 30 1.4 Tổng quan hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm 32 1.4.1 Khái niệm chung 32 1.4.2 Cơ chế đối kháng 33 1.4.3 Một số loài vi khuẩn, nấm gây bệnh thƣờng gặp .33 1.4.3.1 Tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) 33 1.4.3.2 Trực khuẩn (Escherichia coli) .34 1.4.3.2 Nấm mốc Aspergillus 36 1.4.3.3 Nấm sợi Fusarium 37 1.4.3.4 Nấm Neoscytalidium dimidiatum 38 1.4.4 Các phƣơng pháp thử hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm in vitro 40 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 42 ii Đồ án tốt nghiệp 2.1.1 Thời gian nghiên cứu .42 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 42 2.2 Vật liệu nghiên cứu .42 2.2.1 Nguồn mẫu .42 2.2.2 Vi sinh vật thị .42 2.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 42 2.3.1 Thiết bị .42 2.3.2 Dụng cụ 43 2.3.3 Hóa chất 43 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 43 2.4.1 Phƣơng pháp thu xử lý mẫu 43 2.4.2 Phƣơng pháp tách chiết thu nhận cao chiết 44 2.4.2.1 Phƣơng pháp chiết ngâm dầm .44 2.4.2.2 Phƣơng pháp chiết máy Soxhlet 45 2.4.3 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa phƣơng pháp DPPH 47 2.4.4 Đánh giá khả kháng khuẩn, kháng nấm phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch (well diffusion agar method) 49 2.4.5 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC 51 2.4.6 Phƣơng pháp xử lí số liệu .53 2.5 Bố trí thí nghiệm 53 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 60 3.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp tách chiết đến tỷ lệ thu hồi cao chiết N aragoana 60 3.2 Kết khảo sát trình chiết phân đoạn từ cao chiết N aragoana 61 3.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana .63 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết cao phân đoạn N aragoana 68 iii Đồ án tốt nghiệp 3.4.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết cao phân đoạn N aragoana 68 3.4.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết cao phân đoạn N aragoana .70 3.5 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết cao phân đoạn chủng vi sinh vật gây bệnh 75 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 78 4.1 Kết luận .78 4.2 Kiến nghị .79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DMSO : Dimethyl sulfoxide DPPH : 1,1 diphenyl – – picrylhydrazyl EA : Ethyl Acetate EtOH : Ethanol MeOH : Methanol MIC : Minimum Inhibitory Concentration : Nồng độ ức chế tối thiểu PDA : Potato Dextro Agar PE : Petroleum ether TSA : Tryptic Soy Agar TSB : Tryptone Soya Broth v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Giá trị I % ức chế gốc tự DPPH cao chiết Ethanol .63 Bảng 3.2 Giá trị I % ức chế gốc tự DPPH cao phân đoạn PE 64 Bảng 3.3 Giá trị I % ức chế gốc tự DPPH cao phân đoạn EA .65 Bảng 3.4 Giá trị I % ức chế gốc tự DPPH cao phân đoạn nƣớc 66 Bảng 3.5 Giá trị I % ức chế gốc tự DPPH Vitamin C 67 Bảng 3.6 Kết so sánh hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết cao phân đoạn chủng vi sinh gây bệnh .74 Bảng 3.7 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết cao phân đoạn chủng vi sinh vật gây bệnh .76 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Ảnh Nervilia aragoana .7 Hình 1.2 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 34 Hình 1.3 E.coli quan sát dƣới kính hiển vi với kích thƣớc µm .35 Hình 1.4 Nấm mốc Aspergillus 37 Hình 1.5 Nấm sợi Fusarium .38 Hình 1.6 Nấm Neoscytalidium dimidiatum 39 Hình 2.1 Mẫu bột N aragoana 44 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 54 Hình 2.3 Mẫu bột chiết hệ thống Soxhlet 56 Hình 3.1 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ thu hồi cao chiết N aragoana .60 Hình 3.2 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ thu hồi cao phân đoạn từ cao chiết N aragoana 62 Hình 3.3 Biểu đồ biểu diễn % ức chế cao Ethanol 63 Hình 3.4 Biểu đồ biểu diễn % ức chế cao phân đoạn PE 64 Hình 3.5 Biểu đồ biểu diễn % ức chế cao phân đoạn EA 65 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn % ức chế cao phân đoạn nƣớc 66 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn % ức chế mẫu Vitamin C 67 Hình 3.8 Biểu đồ biểu diễn hoạt tính kháng khuẩn cao chiết, cao phân đoạn đối chứng kháng sinh Ampicillin vi khuẩn Escherichia coli .69 Hình 3.9 Biểu đồ biểu diễn hoạt tính kháng khuẩn cao chiết, cao phân đoạn đối chứng kháng sinh Ampicillin vi khuẩn S.aureus 70 Hình 3.10 Biểu đồ biểu diễn hoạt tính kháng nấm cao chiết, cao phân đoạn đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Aspergillus niger 71 Hình 3.11 Biểu đồ biểu diễn hoạt tính kháng nấm cao chiết, cao phân đoạn đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Fusarium solani .72 Hình 3.12 Biểu đồ biểu diễn hoạt tính kháng nấm cao chiết, cao phân đoạn đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Neoscytalidium dimidiatum .73 vii Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO NƢỚC NGOÀI [12] Amaraowiez R., Pegg R P., Rahimi – Moghaddam P., Barl B., Weil J A (2004) "Free radical scavenging capacity and antioxidant activity of selected plant species from the canadian praries", Food Chemistry, 84, 551 – 562 [13] Arjun Prasad Tiwari, Ethnomedicinal Uses of Bhavana Joshi and A A Ansari, Less Known Some Orchids by the Tribal inhabitants of Amarkantak Plateau Madhya Pradesh, India Nature and Science 2012, 10: 12, 3337 [14] Beena C., Radhakrishnan V.V., Bioprospecting on the endangered medicinal plant Nervilia aragoana gaud, Journal of Progressive Agriculture, 2011 [15] EK Dilipkurma, GR Janardhana (2013), “Antidiabetic and regenerative effects of alcoholic corm extract Nervilia aragoana Gaud in Streptozoto – nicotinamide induced NIDDM rats” International Journal of Phytomedicine 5, pp 207 – 210 [16] Elizabeth Thomas, Aneesh T P, Della Grace Thomas, R Anandan (2013), “GC-MS analysis of phytochemial compounds present in the rhizomes Of Nervilia aragoana Gaud” Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, Vol [17] Elizabeth Thomas, Aneesh T P, Della Grace Thomas (2013), “Nervilia aragoana Gaud, a terrestrial Orchid, Amrita Vishwa Vidyapeetham University, India [18] Elizabeth Thomas, Aneesh T P, Della Grace Thomas (2013), “Nervilia aragoana Gaud, a terrestrial Orchid” Indo-Global Research Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol [19] Hisashi Hosoe, Toshihiko Kaise, Kenji Ohmori (2002) “Effect on the reactive oxygen species of Erdosteine and its metabolite in vitro”, Arzneim Forsch Drug Res, 52, 435 – 440 [20] Kaori Yobimoto, Kinzo Matsumoto, Nguyen Thi Thu Huong, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasali, Hiroshi Wantanabe (2000) "Suppressive effects of Vietnamese ginseng saponin and its major component majonoside – R2 on psychological stress 81 Đồ án tốt nghiệp – induced enhancement of lipid peroxidation in the mouse brain" Pharamocology Biochemistry and Behavior, 66, 1661 – 1667 [21] K Himakar Reddy, P.V.G.K Sharma, and O.V.S Reddy (2009), “A comparative in vitrostudy on antifungal and antioxidant activities of Nervilia aragoana and Atlantia monophylla”, Pharmaceutical Biology, Vol 48, pp 595– 602 [22] Lapenna, D Ciofani, G Festi, D Neri, M Pierdomenico, SD Giamberardino, MA Cuccurullo, F (2002) “Antioxidant properties of ursooxycholic acid”, Biochem Pharmacol, 64, 1661 – 1667 [23] Lee, SM, Na, MK, An, RB, BS, HK (2003) “Antioxidant activity of two phloroglucinol derivatives from Dryopteris crassirhizoma”, Biol Pharm Bull, 26, 1354 – 1356 [24] Matsumoto, K Yobimoto, K Huong, NT Abdel – Fattah, M Van, HT Wantanabe (1999) "Psychological stress – induced enhancement of brain lipid peroxidation via nitric oxide systems and its modulation by anxiolytic and anxiogenic drugs in mice" Brain Res, 839, 74 – 84 [25] M Maridass, M I Zahir and G Raju, Phytochemical Survey of Orchids in the Tirunelveli Hills of South India, Ethnobotanical Leaflets, 2008, 12, 70512 [26] P Ramesh, Renganathan and C Mani, Medicinal uses of some epiphytic and terrestrial Orchids, Int J Cur Tr Res., 2012, 1: 1, 13-16 [27] P Y Bhogaonkar and V D Devankar, Pharmacognostic Studies on Padmacarini, Aryavaidyan, Nov 2006- Jan 2007, 20, No 2, 74-79 [28] Rajendra Yonzone, D Lama, R B Bhujel and Samuel Rai (2012), Orchid species diversity of Darjeeling Himalaya of India, International Journal of Pharmacy [29] Shigetoshi Kadota, Takehiko Shima and Tohru Kikochi, Studies on the Constituents of Orchidaceous Plants VII the C24 Stereochemistry of Cyclohomonervilol and 24-Isopropenylcholesterol, Nonconventional Sidechain 82 Đồ án tốt nghiệp and Triterpene and Sterol, from Nervilia purpurea Schlechter Chem Pharm Bull, 1987, 35: 1, 200-210 and Life Sciences, pp 1533-1550 [30] Sies, (1986) “Biochemistry of oxidative stress”, 25 : 1058 – 1071 [31] S Y Kamble, S R Patil, P S Sawant, Sangita Sawant, S G Pawar and E A Singh, Studies on Plants used in traditional medicine by Bhilla tribe of Maharashtra, Indian Journal of Traditional Knowledge, July 2010, 9: 3, 591-598 [32] Tohru Kikuchi, Shigetoshi Kadota, Sayaka Hanagaki, Hisashi Suehara, Tsuneo Namba, Chun-Ching Linn and Woei Song Kan, Studies on the Constituents of Orchidaceous Plants Constituents of Nervilia purpurea SCHLECHTER and Nervilia aragoana GAUD.Pharmaceutical Society of Japan, Chem Pharm Bull, 1981, 29: 7, 2073-2078 TÀI LIỆU THAM KHẢO INTERNET [33] NeMedPlant A Database of medicinal plants from northeast india http://bif.uohyd.ac.in/nemedplant/search/Rightsearch Result.php?g=Nagaland [34] https://vi.wikipedia.org/wiki/Nervilia_aragoana [35] http://ucchau.ndclnh.com/index.php?option=com_content&view=article &id=2528:lan-tran-chau&catid=17:bien-kho&Itemid=36 [36] Prof Summer's Web Garden http://www7a.biglobe.ne.jp/~flower_world/Orchids/Nervilia%20aragoana.htm [37] Australian tropical rainforest orchids http://www.anbg.gov.au [38] Catalogue of life, china 2012 annual checklist http://www.catalogueoflife.org [39] Discover Life http://www.discoverlife.org [40] Ayurvedic medicinal plants http://ayurvedicmedicinalplants.com [41] Envis centre on medicinal plants http://envis.frlht.org [42] http://envis.frlht.org/naragoana.htm 83 Đồ án tốt nghiệp [43] https://duongsinhnucuoixanh.wordpress.com/2013/09/27/cay-mot-la-thanh- thien-quy [44] http://tinhlasen.com/flavonoid-va-tac-dung-cua-flavonoid/ [45] http://www.cyberlipid.org/simple/simp0004.htm 84 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC PHỤ LỤC A: KẾT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA BẮT GỐC TỰ DO DPPH CỦA CAO CHIẾT VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TỪ CÂY N ARAGOANA Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao chiết Ethanol từ N aragoana Giá trị OD 517 nm mẫu đối chứng lặp lại lần kết lần lƣợt là: 1,541 – 1,547 – 1,544 Nồng độ OD 517 nm I (%) IC50 (µg/ml) (µg/ml) 1000 0,224 0,222 0,225 85,65 85,43 85,46 400 0,510 0,530 0,500 65,74 67,62 66,90 350 0,591 0,590 0,593 61,86 61,60 61,65 300 0,636 0,634 0,637 59,02 58,74 58,73 250 0,682 0,681 0,685 55,98 55,63 55,74 200 0,726 0,725 0,726 53,14 52,98 52,89 162,26 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao phân đoạn PE từ N aragoana Giá trị OD 517 nm mẫu đối chứng lặp lại lần kết lần lƣợt là: 1,515 – 1,510 – 1,513 Đồ án tốt nghiệp Nồng độ OD 517 nm I (%) IC50 (µg/ml) (µg/ml) 1000 0,535 0,532 0,533 64,69 64,77 64,77 400 0,773 0,770 0,774 48,98 49,01 48,84 350 0,810 0,812 0,814 46,53 46,23 46,20 300 0,852 0,853 0,855 43,76 43,51 43,49 250 0,891 0,890 0,894 41,19 41,01 40,91 200 0,934 0,933 0,935 38,35 38,21 38,20 419,40 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao phân đoạn EA từ N aragoana Giá trị OD 517 nm mẫu đối chứng lặp lại lần kết lần lƣợt là: 1,551 – 1,552 – 1,550 Nồng độ OD 517 nm I (%) IC50 (µg/ml) (µg/ml) 1000 0,278 0,279 0,276 82,08 82,02 82,19 400 0,504 0,507 0,504 67,50 67,33 67,48 350 0,565 0,566 0,563 63,57 63,53 63,67 300 0,601 0,604 0,602 61,25 61,08 61,16 250 0,653 0,657 0,655 57,90 57,67 57,74 200 0,707 0,705 0,702 54,42 54,57 54,70 127,35 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao phân đoạn nƣớc từ N aragoana Giá trị OD 517 nm mẫu đối chứng lặp lại lần kết lần lƣợt là: 1,556 – 1,559 – 1,554 Đồ án tốt nghiệp Nồng độ OD 517 nm I (%) IC50 (µg/ml) (µg/ml) 1000 0,253 0,255 0,251 83,74 83,64 83,85 400 0,572 0,575 0,57 63,24 63,12 63,32 350 0,616 0,617 0,614 60,41 60,42 60,49 300 0,658 0,659 0,655 57,71 57,73 57,85 0705 0,701 54,88 54,79 54,89 0,761 0,758 51,22 51,19 51,22 250 0,702 200 0,759 173,55 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH mẫu Vitamin C Giá trị OD 517 nm mẫu đối chứng lặp lại lần kết lần lƣợt là: 1,557 – 1,559 – 1,553 Nồng độ OD 517 nm I (%) IC50 (µg/ml) (µg/ml) 30 0,212 0,215 0,213 86,38 86,21 86,28 25 0,376 0,379 0,375 75,85 75,69 75,85 20 0,543 0,544 0,545 65,16 65,11 64,91 15 0,767 0,768 0,764 50,74 50,74 50,80 10 1,078 1,076 1,077 30,76 30,98 30,65 15,68 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: KẾT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CAO CHIẾT VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN CÂY N ARAGOANA Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết, cao phân đoạn N aragoana (nồng độ 200 mg/ml) kháng sinh Ampicillin (10 mg/ml) chủng vi khuẩn Escherichia coli, Staphylococcus aureus Vi khuẩn Cao Ethanol Cao nƣớc Cao PE Ampicillin (10 mg/ml) E coli 15 15 15,5 11 S aureus 18,5 18,5 17 11 11,5 12 12,5 12,5 31 31,5 31 11,5 12 11,5 13 13 18,5 18,5 13,5 18 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết, cao phân đoạn N aragoana (nồng độ 200 mg/ml) Ketoconazole (10 mg/ml) chủng nấm Aspergillus niger, Fusarium solani, Neoscytalidium dimidiatum Vi nấm Cao Ethanol Cao nƣớc Cao PE Ketoconazole (10 mg/ml) Aspergillus niger 12 11,5 11 - - - - - - 28 23 21,5 Fusarium solani 22 24 - - - 16 16 16 24 23 23 Neoscytalidium 19 15 15 23 24 25 15 14 19 21 19 dimidiatum 14 14 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CAO CHIẾT VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TỪ CÂY N ARAGOANA ĐỐI VỚI CÁC CHỦNG VI KHUẨN, NẤM GÂY BỆNH Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana vi khuẩn Escherichia coli Bảng One – Way ANOVA Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 777.063 259.021 3108.25 Within groups 0.666667 0.0833333 Total (Corr.) 777.729 11 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Mẫu thử Count Mean Homogeneous Groups Cao PE 11.1667 X Cao nƣớc 12.3333 Cao Ethanol 15.1667 Ampicillin 31.1667 X X X Đồ án tốt nghiệp Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana vi khuẩn Staphylococcus aureus Bảng One – Way ANOVA Source Sum of Squares Df Mean F-Ratio P-Value 106.40 0.0000 Square Between groups 99.75 33.25 Within groups 2.5 0.3125 Total (Corr.) 102.25 11 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Mẫu thử Count Mean Homogeneous Groups Cao PE 11.6667 X Cao nƣớc 13.1667 Cao Ethanol 18.0 X Ampicillin 18.1667 X X Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng nấm Aspergillus niger Bảng One – Way ANOVA Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between 1194.75 398.25 134.62 0.0000 Within groups 23.6667 2.95833 Total (Corr.) 11 groups 1218.42 Đồ án tốt nghiệp Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Mẫu thử Count Mean Homogeneous Groups Cao PE 0.0 X Cao nƣớc 0.0 X Cao Ethanol 11.5 Ketoconazole 24.1667 X X Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng nấm Fusarium solani Bảng One – Way ANOVA Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between 1045.58 348.528 0.0000 Within groups 5.33333 0.666667 Total (Corr.) 11 522.79 groups 1050.92 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Mẫu thử Count Mean Homogeneous Groups Cao PE 0.0 X Cao nƣớc 16.0 Cao Ethanol 22.3333 X Ketoconazole 23.3333 X X Đồ án tốt nghiệp Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng nấm Neoscytalidium dimidiatum Bảng One – Way ANOVA Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 147.73 0.0000 Between groups 184.667 61.5556 Within groups 3.33333 0.416667 Total (Corr.) 188.0 11 Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Mẫu thử Count Mean Homogeneous Groups Ketoconazole 14.3333 X Cao PE 14.6667 X Cao Ethanol 19.0 Cao nƣớc 24.0 X X Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC D: HÌNH ẢNH VỊNG KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA CAO CHIẾT VÀ CAO PHÂN ĐOẠN TỪ CÂY N ARAGOANA Hình ảnh vịng kháng khuẩn chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng Escherichia coli Hình a Vòng kháng khuẩn cao chiết, cao phân đoạn đối chứng kháng sinh Ampicillin vi khuẩn Escherichia coli Hình ảnh vịng kháng khuẩn chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng Staphylococcus aureus Hình b Vịng kháng khuẩn cao chiết, cao phân đoạn đối chứng kháng sinh Ampicillin vi khuẩn Staphylococcus aureus Đồ án tốt nghiệp Hình ảnh vịng kháng nấm chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng Aspergillus niger Hình c Vịng kháng nấm cao chiết Ethanol đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Aspergillus niger Hình ảnh vịng kháng nấm chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng Fusarium solani Hình d Vịng kháng nấm cao chiết Ethanol, cao nƣớc đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Fusarium solani 10 Đồ án tốt nghiệp Hình ảnh vịng kháng nấm chiết cao phân đoạn từ N aragoana chủng Neoscytalidium dimidiatum Hình e Vịng kháng nấm cao chiết, cao phân đoạn đối chứng thuốc Ketoconazole chủng nấm Neoscytalidium dimidiatum 11 ... 3.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự DPPH cao chiết cao phân đoạn từ N aragoana .63 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết cao phân đoạn N aragoana. .. án tốt nghiệp 3.4.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết cao phân đoạn N aragoana 68 3.4.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm cao chiết cao phân đoạn N aragoana ... hồi cao phân đoạn sau trích ly cao chiết Nervilia aragoana - Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bắt gốc tự từ cao chiết cao phân đoạn Nervilia aragoana Xác định nồng độ ức chế 50% gốc tự (IC50) từ