Nghiên cứu khả năng tách chiết dịch acid amin thô từ phế thải nấm bào ngư

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KĨ THUẬT CÔNG NGHỆ TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM o0o ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁCH CHIẾT DỊCH ACID AMIN THÔ TỪ PHẾ THẢI NẤM BÀO NGƯ GVHD: Ths Hồ Xuân Hương SVTH : Trần Ngọc Ánh - 106110003 Nguyễn Thị Nga - 106110049 Tp.HCM, tháng năm 2010 Lời cảm ơn Trong thời gian thực đồ án tốt nghiệp chúng em nhận nhiều giúp đỡ, đóng góp ý kiến bảo chân tình thầy cô, bạn bè Trước hết cho chúng em bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đến Thạc sĩ Hồ Xuân Hương, người tận tình hướng dẫn, bảo, đóng góp ý kiến vơ q báu giúp đỡ chúng em tận tình suốt thời gian thực đồ án Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị phụ trách quản lý phịng thí nghiệm trường Đại học Kỹ thuật công nghệ Tp.HCM trường Đại học Công nghiệp Tp.HCM tạo điều kiện thuận lợi cho chúng em hoàn thành đồ án Cuối chúng em xin chân thành cảm ơn thầy cô chủ tịch hội đồng, phản biện ủy viên hội đồng bỏ nhiều thời gian quý báu để đọc tham gia hội đồng chấm đồ án Tp.HCM, Ngày 29 tháng năm 2010 SVTH: Nguyễn Thị Nga Trần Ngọc Ánh ii Tóm tắt đồ án Chế biến phế thải nấm nói chung nấm Bào Ngư nói riêng thành sản phẩm bổ sung vào sản phẩm thực phẩm khác mang lại kinh tế cao cho nhà sản xuất giảm lượng phế thải gây ô nhiễm môi trường Đề chúng em “Nghiên cứu khả tách chiết dịch acid amin thô từ phế thải nấm bào ngư” theo phương pháp thủy phân dùng enzyme kết hợp với acid điều kiện sau: Thủy phân 1: dùng enzyme Protease với thời gian thích hợp 22 Hàm lượng acid amin thơ thu mẫu tách béo 0.086 (g), mẫu không tách béo 0.079(g) Thủy phân 2: dùng HCl 32% với tỷ lệ HCl mẫu thích hợp 1: (v/v), thời gian 10 Hàm lượng acid amin thô thu với mẫu tách béo 0,215 (g), Dùng HCl 32% với tỷ lệ HCl mẫu thích hợp 1: (v/v), hàm lượng acid amin thô thu mẫu không tách béo 0,173 (g) Với hiệu suất thu hồi dịch acid amin thô mẫu tách béo 84%, mẫu không tách béo 64% iii MỤC LỤC CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 2.1 Nguyên liệu 2.1.1 Giới thiệu nấm bào ngư 2.1.2 Cấu tạo 2.1.3 Đặc điểm nấm bào ngư 2.1.3.1 Đặc điểm chung giới nấm 2.1.3.2 Đặc điểm sinh lý dinh dưỡng nấm bào ngư 2.1.3.3 Đặc điểm tế bào học .4 2.1.4 Ảnh hưởng điều kiện ngoại cảnh 2.1.5 Phương pháp thu hoạch bảo quản nấm bào ngư 2.1.6 Thành phần hóa học giá trị dinh dưỡng nấm bào ngư .8 2.1.7 Tình hình phát triển việc trồng nấm nước ta 13 2.2 Tổng quan acid amin phản ứng thủy phân thu dịch acid amin 14 2.2.1 Acid amin 14 2.2.2 Phản ứng thủy phân 16 2.2.2.1 Khái niệm 16 2.2.2.2 Bản chất trình thủy phân protein 17 2.2.2.3 Các phương pháp thủy phân .17 2.2.2.4 Ứng dụng phản ứng thủy phân công nghệ thực phẩm 20 2.3 Tổng quan enzyme 24 2.3.1 Định nghĩa 24 2.3.2 Tính chất enzyme 24 iv 2.3.4 Trung tâm hoạt động enzyme .24 2.3.5 Các nhân tố ảnh hưởng đến hoạt tính xúc tác enzyme .25 2.3.6 Vài nét enzyme thủy phân protein thực vật (HVP enzyme) 26 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 3.1 Nguyên liệu 27 3.1.1 Nguyên liệu .27 3.1.2 Nguyên vật liệu sử dụng 27 3.1.2.1 Enzyme .27 3.1.2.2 HCl (Acid chlohydric) 27 3.1.2.3 Na2CO3 (Natri cacbonat) 28 3.1.2.4 Nước 29 3.1.3 Địa điểm thời gian thí nghiệm 29 3.1.4 Dụng cụ thí nghiệm 29 3.2 Sơ đồ nghiên cứu 29 3.3 Quy trình dự kiến 30 3.3.1 Quy trình 30 3.3.2 Thuyết minh quy trình .31 3.4 Phương pháp phân tích .36 3.4.1 Xác định độ ẩm nguyên liệu máy sấy hồng ngoại .36 3.4.2 Phương pháp xác định xơ thô 37 3.4.3 Định lượng protein tổng phương pháp Kejdald 38 3.4.4 Định lượng đạm acid amin theo phương pháp Sorensen 41 3.4.5 Định lượng lipid tổng theo phương pháp Soxhlet .42 3.5 Bố trí thí nghiệm .43 v 3.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát q trình tách béo 44 3.5.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát trình thủy phân enzyme .44 3.5.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát q trình thủy phân HCl 46 3.6 Phương pháp xử lý số liệu 47 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 48 4.1 Khảo sát tiêu nguyên liệu .48 4.2 Khảo sát trình tách béo 48 4.3 Khảo sát trình thủy phân enzyme 50 4.3.1 Khảo sát trình thủy phân enzyme mẫu tách béo 50 4.3.2 Khảo sát trình thủy phân enzyme mẫu khơng tách béo .52 4.4 Khảo sát trình thủy phân HCl .56 4.4.1 Khảo sát trình thủy phân HCl mẫu tách béo .56 4.4.2 Khảo sát q trình thủy phân HCl mẫu khơng tách béo 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 5.1 Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 62 Tài liệu tham khảo I Phụ lục A II Phụ lục B III Phụ lục C IV vi DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Nấm bào ngư Hình 2.2 Sơ đồ chu trình sống nấm bào ngư Hình 2.3 Thu hoạch nấm bào ngư Hình 2.4 Sơ đồ biểu diễn hình thành liên kết peptid .15 Hình 2.5 Sơ đồ sản xuất nước tương 21 Hình 2.6 Sơ đồ trình sản xuất Magi .23 Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 Hình 3.2 Sơ đồ quy trình dự kiến 31 Hình 3.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm q trình tách béo 44 Hình 3.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm q trình thủy phân enzyme 45 Hình 3.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm q trình thủy phân HCl 48 Hình 4.1 Bảng phân tích Anova kết trình tách béo .49 Hình 4.2 Đồ thị phân tích LSD trình khảo sát tách béo 49 Hình 4.3 Đồ thị biểu diễn lượng acid amin sinh theo thời gian .51 Hình 4.4 Bảng phân tích Anova kết thủy phân mẫu tách béo Flavourzyme 51 Hình 4.5 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu tách béo Flavourzyme 52 Hình 4.6 Biểu đồ biểu diễn q trình thủy phân mẫu khơng tách béo Flavourzyme .53 Hình 4.7 Bảng phân tích Anova kết thủy phân mẫu chưa tách béo Flavourzyme 54 Hình 4.8 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu chưa tách béo Flavourzyme 54 Hình 4.9 Đồ thị so sánh lượng acid amin sinh mẫu tách béo chưa tách béo .55 Hình 4.10 Biểu đồ biểu diễn trình thủy phân mẫu tách béo HCl 56 Hình 4.11 Bảng phân tích Anova kết thủy phân mẫu tách béo HCl 57 vii Hình 4.12 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu tách béo HCl theo thời gian thủy phân .58 Hình 4.13 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu tách béo HCl theo tỉ lệ HCl 58 Hình 4.14 Biểu đồ biểu diễn q trình thủy phân mẫu khơng tách béo HCl 59 Hình 4.15 Bảng phân tích Anova kết thủy phân mẫu không tách béo HCl 59 Hình 4.16 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu không tách béo HCl theo tỉ lệ HCl 60 Hình 4.17 Đồ thị phân tích LSD kết thủy phân mẫu không tách béo HCl theo thời gian thủy phân .61 Hình 5.1 Quy trình đề xuất 64 viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các yếu tố ảnh hưởng tới sinh trưởng phát triển nấm bào ngư .6 Bảng 2.2 Thành phần hóa học nấm bào ngư Bảng 2.3 Thành phần acid amin nấm Agaricus bisporus Pleurotos ostreatus (mg/g) theo trọng lượng nấm khô .9 Bảng 2.4 Thành phân acid amin có hệ sợi nấm Bảng 2.5 Thành phần chất béo có sợi nấm thân nấm 10 Bảng 2.6 Thành phần số vitamin nấm bào ngư 11 Bảng 2.7 Thành phần dinh dưỡng xủa số nấm ăn quen thuộc (theo FAO 1972) 13 Bảng 2.8 So sánh phương pháp thủy phân 19 Bảng 2.9 Một số enzyme dùng phản ứng thủy phân protein 26 Bảng 3.1 Bảng tiêu HCl 28 Bảng 3.2 Bảng tiêu Na2CO3 28 Bảng 3.3 Bảng thành phần hóa học nấm (theo trọng lượng khô) 33 Bảng 3.4 So sánh ưu nhược điểm q trình tách béo khơng tách béo 33 Bảng 3.5 Bảng so sánh độ phân cuwucj số dung môi nước .33 Bảng 3.6 Các tiêu nguyên liệu cần phân tích phương pháp sử dụng Bảng 3.6 Bảng thông số kỉ thuật cho q trình thí nghiệm 36 Bảng 3.7.Bố trí thí nghiệm trình thủy phân HCl 47 Bảng 4.1.Chỉ tiêu ban đầu nguyên liệu 48 Bảng 4.2 Kết khảo sát trình tách béo 48 Bảng 4.3 Lượng acid amin (g) thu trình thủy phân enzyme Flavourzyme mẫu tách béo 50 Bảng 4.4 Lượng acid amin (g) thu trình thủy phân enzyme Flavourzyme mẫu không tách béo .53 ix Bảng 4.5 Lượng acidamin (g) thu trình thủy phân HCl mẫu tách béo 56 Bảng 4.6 Lượng acid amin (g) thu trình thủy phân HCl mẫu không tách béo 59 x + X: hàm lượng xơ thô, % Phụ lục 3.3 Định lượng Protein tổng theo phương pháp Kejdalh Cơ sở phương pháp Tất Nitơ có thể mơ gọi Nito tổng số nitơ có thành phần acid amin Protein gọi Nito Protein, Nito khơng có thành phần Protein muối vô cơ, axit citric, acid amin tự do…là Nitơ phi Protein Nitơ tổng = Nitơ Protein + Nitơ phi Protein Ngun lý Mẫu vơ hố H2SO4 đậm đặc nhiệt độ cao có chất xúc tác Các phản ứng q trình vơ hố mẫu xảy sau: 2H2SO4 H2O + 2SO2 + O2 Oxy tạo thành phản ứng lại oxy hoá nguyên tố khác Các phân tử chứa Nitơ tác dụng H2SO4 tạo thành NH3 Các Protein bị thuỷ phân thành acid amin Carbon hydro acid amin tạo thành CO2 H2O, Nitơ giải phóng dạng NH3 kết hợp với axit H2SO4 dư tạo thành (NH4)2SO4 tan dung dịch 2NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4 Các nguyên tố khoáng khác P, K, Ca, Mg…chuyển thành dạng oxit: P2O5, K2O, CaO, MgO…tuy tồn dung dịch mẫu không ảnh hưởng đến kết phân tích Đuổi NH3 khỏi dung dịch NaOH (NH4)2SO4 + 2NaOH = Na2SO4 + H2O + 2NH3 NH3 bay với nước sang bình hứng Bình hứng có chứa dung dịch H2SO4 (đã biết trước nồng độ, thể tích) NH3 + H2O → NH4OH 2NH4OH + H2SO4 → (NH4)2SO4 + 2H2O Định lượng H2SO4 dư dung dịch NaOH, từ ta tính lượng H2SO4 phản ứng tính hàm lượng Nito tổng có mẫu Cách tiến hành Vơ hố mẫu + Cân khoảng g mẫu khô nghiền mịn + Cho mẫu vào tận đáy ống Kjeldahl (chú ý khơng để dính thành ống) VII + Cho 2-3g hỗn hợp xúc tác K2SO4 CuSO4 theo tỉ lệ 3:1 + Dùng pipet hút 10ml H2SO4 đậm đặc (d=1.84) cho vào ống vơ hố mẫu có chứa hỗn hợp + Để nghiêng bình Kjeldahl 450 bếp điện đun từ từ đun sôi dung dịch suốt có màu xanh lơ CuSO4 + Làm nguội bình Kjeldadl tủ hút cho an tồn Tiến hành cất đạm: Chuẩn bị bình hứng: hút 50ml H2SO4 0.1N cho vào erlen 100ml, thêm giọt methyl đỏ Lắp erlen vào ống sinh hàn cho đầu ống sinh hàn ngập nước vào dung dịch Chuẩn bị dịch chưng cất: chuyển dung dịch vơ hóa mẫu bình Kjeldahl vào bình chưng cất máy cất đạm, tráng bình nước cất chuyển vào bình chưng cất, thêm giọt phenolphthalein Trung hịa dung dịch bình chưng cất NaOH 30% dung dịch bình chuyển màu hồng Sau cho thêm 2ml dung dịch NaOH 30% khóa phễu lại Chưng cất: cho 800ml nước cất vào bình đun Mở nước ống sinh hàn Chưng cất liên tục 40 phút kể từ bình bắt đầu sơi Hạ bình hứng rửa đầu ống sinh hàn nước cất Đặt giấy pH sát miệng ống sinh hàn Nếu pH khơng đổi màu q trình chưng cất hồn tất Định lượng H2SO4 dư bình hứng dung dịch NaOH 0.1N dung dịch chuyển sang màu xanh mạ Tính kết Hàm lượng nitơ tổng tính theo cơng thức Nito tồn phần (%) = 0.014 * ( N1V1 − N 2V2 ) * 100 M Trong đó: + V1: số ml dd H2SO4 0.1N cho vào bình hứng để kết hợp với NH3 + N1: Nồng độ đương lượng dung dịch H2SO4 cho vào bình hứng + V2: Số ml dd NaOH 0.1N dùng để chuẩn độ H2SO4 dư + N2: Nồng độ đương lượng dung dịch NaOH dùng để chuẩn độ + 0.014 khối lượng 1mdlg N + 100: hệ số quy chuẩn % VIII + M: trọng lượng mẫu ban đầu tính mg Hàm lượng Protein xác định: Pr (%) = N* 5.85 + 5.85 : hệ số quy chuẩn từ Nitơ tổng Protein Hóa chất: + Hỗn hợp chất xúc tác K2SO4 / CuSO4 + NaOH 20 – 30% + Nước cất lần (3:1) + H2SO4 đậm đặc 98% + Methyl đỏ + H2SO4 0.1N + Phenolphtalein Dụng cụ - thiết bị + Bộ Kjeldahl + Pipet, bóp cao su + Bếp điện, bếp đun bình cầu + Erlen + Burette + Phễu thủy tinh Phụ lục 3.4 Định lượng đạm acid amin theo phương pháp Sorensen Nguyên tắc: aldehyt dễ kết hợp với nhóm amin Khi cho formaldehyt tác dụng với acid amin, nhóm amin bị methyl hóa tạo thành dẫn xuất methylen imino axit + CH O R – CH –COOH R – CH –COOH NH2 R – CH –COOH N = CH2 + NaOH R – CH –COONa + H2O N = CH2 N = CH2 Hợp chất tạo thành có tính axit mạnh acid amin tự do, nhóm carboxyl chúng dễ dàng định phân kiềm, qua gián tiếp tính hàm lượng nitơ amin acid amin có nguồn dung dịch Dụng cụ + Bình định mức 100ml + erlen 100ml + pipet 1ml + becher 100ml + pipet 10 ml + Ống nhỏ giọt + buret 25ml + Máy đo pH IX Hóa chất: + Formon trung tính 20% + NaOH 0,05N + Phenolphtalein 1% + HCl 0.1N Tiến hành Lấy 1ml dịch thủy phân cho vào bình định mức 100ml, dùng nước cất tráng, rữa chuyển vào bình định mức cho khoảng 50ml, đậy nắp lắc 10 phút Thêm giọt thị PP, cho giọt NaOH bão hòa dung dịch có màu hồng Cho dư 3ml NaOH bão hịa, đun sơi -2 phút Trung hịa dung dịch lọc HCl 0,1N không màu Định mức dung dịch nước cất trung tính đến 100ml Lấy 10ml dịch lọc cho vào erlen 250ml, thêm vào 5ml dung dịch formon trung tính, giọt PP lắc phút Chuẩn độ dung dịch chuẩn NaOH 0,05N đến dung dịch có màu hồng nhạt Ghi thể tích NaOH 0,05N tiêu tốn tính kết Tính kết quả: Số gam nito acid amin có lít dịch thủy phân X= 0,014 * ( N * V ) NaOH * Vdm 1000 * V xd Vbd Trong đó: + VNaOH: số ml NaOH dùng chuẩn độ dung dịch thí nghiệm + N: nồng độ dung dịch NaOH + Vbd: thể tích mẫu cho vào bình định mức + 0,014: khối lượng 1mdlg N + Vdm: thể tích bình định mức + Vxd: thể tích mẫu đem phân tích Phụ lục 3.5 Định lượng lipid tổng theo phương pháp Soxhlet Nguyên tắc: dung mơi kỵ nước trích ly hồn tồn lipid từ ngun liệu nghiền nhỏ Một số thành phần hòa tan chất béo trích ly theo bao gồm sắc tố, vitamin tan chất béo, chất mùi…tuy nhiên hàm lượng chúng thấp Do có lẫn tạp chất, phần trích ly gọi lipid tổng X Tiến hành thí nghiệm: Sấy khơ ngun liệu đến khối lượng khơng đổi Cân xác 5g nguyên liệu nghiền nhỏ, cho vào bao giấy sấy khô biết khối lượng (lưu ý gói mẫu phải có bề rộng nhỏ đường kính ống trụ chiều dài ngắn chiều cao ống chảy tràn) Đặt bao giấy vào trụ triết Lắp trụ triết vào bình cầu gắn ống sinh hàn, qua đầu ống sinh hàn dùng phễu cho dung môi vào trụ triết cho lượng dung môi chảy xuống bình cầu lượng phễu chiết cịn đủ ngập mẫu Dùng bơng làm nút đầu ống sinh hàn Mở nước lạnh vào ống sinh hàn, mở cơng tắc đèn bắt đầu trích ly lipid Trích ly 8-12 trích ly hồn toàn chất béo Thử cách lấy vài giọt ether cuối ống xiphong nhỏ lên giấy lọc, dung môi bay khơng để lại vết dầu loang kết thúc Cho dung mơi chảy xuống hết bình cầu Lấy bao giấy ra, đặt tủ hotte cho bay hết dung môi nhiệt độ thường cho vào tủ sấy, sấy nhiệt độ 100-1050C 1.5 Để nguội bình hút ẩm, cân xác định khối lượng Tính kết quả; Hàm lượng phần trăm chất béo tính theo cơng thức X= (M1- M2) /m *100 Trong đó: + M1: khối lượng bao giấy mẫu ban đầu (g) + M2: khối lượng mẫu bao giấy sau trích ly lipid sấy khơ (g) + m : khối lượng mẫu ban đầu (g) Dụng cụ: + Bộ Soxhlet + Tủ sấy 1050C + Cân phân tích + Bình hút ẩm, giấy lọc gấp thành túiđựng ngun liệu Hóa chất: Dung mơi trích ly lipid: diethyl ether XI PHỤ LỤC 4: Bảng dung môi sử dụng[1] XII PHỤ LỤC 5: XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ ( sử dụng phần mền Staraphic Plus Win 3.0) Phụ lục 5.1 Thí nghiệm khảo sát sơ thủy phân enzyme _ Sơ đồ bố trí thí nghiệm: Mẫu Thủy phân Mẫu: Mẫu: 16 Mẫu: 28 Xác định lượng acid amin Chọn thời gian thích hợp _ Lượng acid amin (g) trung bình thu từ thí nghiệm khảo sát sơ enzyme Thời gian Lượng acid amin (g) 0.04 0.042 16 0.079 _ Đồ thị kết trình khảo sát sơ enzyme: XIII lượng acid amin 0.09 0.08 acid amin (g) 0.07 0.06 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 16 28 thời gian (giờ) _ Bảng phân tích Anova: ANOVA Table for luong acid amin by thoi gian Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.00297267 0.00148633 136.50 0.0000 Within groups 0.0000653333 0.0000108889 Total (Corr.) 0.003038 Với p – value = < 0.05 nghĩa có khác biệt lượng acid amin sinh thay đổi thời gian thủy phân sụ khác biệt có ý nghĩa thống kê _ Bảng LSD: Multiple Range Tests for luong acid amin by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean Homogeneous Groups -4 0.0396667 X 16 0.042 X 28 0.0793333 X -Contrast Difference +/- Limits -4 - 16 -0.00233333 0.00659273 - 28 *-0.0396667 0.00659273 16 - 28 *-0.0373333 0.00659273 -* denotes a statistically significant difference _ Biểu đồ phân tích LSD XIV Means and 95.0 Percent LSD Intervals luong acid amin (X 0.001) 86 76 66 56 46 36 16 28 thoi gian Dựa vào đồ thị ta thấy lượng acid amin sinh khơng có thay đổi đáng kể tiến hành thủy phân từ tới 16 giờ, từ 16 đến 28 lượng acid amin sinh có khác biệt lớn khác biệt mang ý nghĩa thống kê Hay nói cách khác ủ enzyme đến 16 lúc trình thủy phân diễn mạnh mẽ, chọn khoảng thời gian khảo sát cho thí nghiệm 16 đến 28 Phụ lục 5.2 Khảo sát trình tách béo _ Bảng giá trị trung bình hàm lượng chất béo mẫu khoảng thời gian tách béo: Table of Means for ham luong chat beo by thoi gian with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error thoi gian Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -1 1.32333 0.0381517 1.26322 1.38344 0.993333 0.0381517 0.933224 1.05344 3 0.743333 0.0381517 0.683224 0.803443 0.59 0.0381517 0.529891 0.650109 0.506667 0.0381517 0.446557 0.566776 -Total 15 0.831333 _ Bảng so sánh sai khác cặp thí nghiệm: XV Multiple Range Tests for ham luong chat beo by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean Homogeneous Groups -5 0.506667 X 0.59 X 3 0.743333 X 0.993333 X 1.32333 X -Contrast Difference +/- Limits -1 - *0.33 0.120219 - *0.58 0.120219 - *0.733333 0.120219 - *0.816667 0.120219 - *0.25 0.120219 - *0.403333 0.120219 - *0.486667 0.120219 - *0.153333 0.120219 - *0.236667 0.120219 - 0.0833333 0.120219 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 5.3 Khảo sát trình thủy phân enzyme Flavourzyme 500 MG Phụ lục 5.3.1 Khảo sát thủy phân mẫu tách béo Flavourzyme 500 MG _ Bảng giá trị trung bình hàm lượng acid amin mẫu tách béo khoảng thời gian thủy phân Table of Means for Acid amin by thoi gian with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error thoi gian Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -16 042 00197203 0390092 0449908 18 0536667 00197203 0506759 0566574 20 0606667 00197203 0576759 0636574 22 0863333 00197203 0833426 0893241 24 084 00197203 0810092 0869908 26 0793333 00197203 0763426 0823241 28 0793333 00197203 0763426 0823241 -Total 21 0693333 _ Bảng so sánh sai khác cặp thí nghiệm thay đổi thời gian thủy phân: XVI Multiple Range Tests for Acid amin by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count Mean Homogeneous Groups -16 042 X 18 0536667 X 20 0606667 X 26 0793333 X 28 0793333 X 24 084 XX 22 0863333 X -Contrast Difference +/- Limits -16 - 18 *-.0116667 00598154 16 - 20 *-.0186667 00598154 16 - 22 *-.0443333 00598154 16 - 24 *-.042 00598154 16 - 26 *-.0373333 00598154 16 - 28 *-.0373333 00598154 18 - 20 *-.007 00598154 18 - 22 *-.0326667 00598154 18 - 24 *-.0303333 00598154 18 - 26 *-.0256667 00598154 18 - 28 *-.0256667 00598154 20 - 22 *-.0256667 00598154 20 - 24 *-.0233333 00598154 20 - 26 *-.0186667 00598154 20 - 28 *-.0186667 00598154 22 - 24 00233333 00598154 22 - 26 *.007 00598154 22 - 28 *.007 00598154 24 - 26 00466667 00598154 24 - 28 00466667 00598154 26 - 28 00598154 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 5.3.2 Khảo sát thủy phân mẫu không tách béo Flavourzyme 500 MG _ Bảng giá trị trung bình hàm lượng acid amin mẫu khơng tách béo khoảng thời gian thủy phân XVII Table of Means for ACID AMIN by THOI GIAN with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error THOI GIAN Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -16 0513333 00249444 0475503 0551164 18 0536667 00249444 0498836 0574497 20 0583333 00249444 0545503 0621164 22 0793333 00249444 0755503 0831164 24 077 00249444 0732169 0807831 26 0723333 00249444 0685503 0761164 28 063 00249444 0592169 0667831 -Total 21 065 _ Bảng so sánh sai khác cặp thí nghiệm thay đổi thời gian thủy phân: Multiple Range Tests for ACID AMIN by THOI GIAN -Method: 95.0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups -16 0513333 X 18 0536667 X 20 0583333 XX 28 063 X 26 0723333 X 24 077 X 22 0793333 X -Contrast Difference +/- Limits -16 - 18 -.00233333 00756611 16 - 20 -.007 00756611 16 - 22 *-.028 00756611 16 - 24 *-.0256667 00756611 16 - 26 *-.021 00756611 16 - 28 *-.0116667 00756611 18 - 20 -.00466667 00756611 18 - 22 *-.0256667 00756611 18 - 24 *-.0233333 00756611 18 - 26 *-.0186667 00756611 18 - 28 *-.00933333 00756611 20 - 22 *-.021 00756611 20 - 24 *-.0186667 00756611 20 - 26 *-.014 00756611 20 - 28 -.00466667 00756611 22 - 24 00233333 00756611 22 - 26 007 00756611 22 - 28 *.0163333 00756611 24 - 26 00466667 00756611 24 - 28 *.014 00756611 26 - 28 *.00933333 00756611 -* denotes a statistically significant difference Phụ lục 5.4 Khảo sát trình thủy phân HCl 32% XVIII Phụ lục 5.4.1 Khảo sát trình thủy phân HCl 32% mẫu tách béo _ Bảng giá trị trung bình hàm lượng acid amin mẫu tách béo khoảng thời gian thủy phân tỉ lệ HCl 32% sử dụng Table of Least Squares Means for luong acid amin with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 36 0.173833 thoi gian 12 0.127167 0.00374627 0.119516 0.134818 10 12 0.204167 0.00374627 0.196516 0.211818 15 12 0.190167 0.00374627 0.182516 0.197818 ti le 1/4 0.177333 0.00432582 0.168499 0.186168 1/5 0.182 0.00432582 0.173165 0.190835 1/6 0.183556 0.00432582 0.174721 0.19239 1/7 0.152444 0.00432582 0.14361 0.161279 _ Bảng so sánh sai khác thay đổi thời gian thủy phân cặp thí nghiệm: Multiple Range Tests for luong acid amin by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -5 12 0.127167 X 15 12 0.190167 X 10 12 0.204167 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - 10 *-0.077 0.01082 - 15 *-0.063 0.01082 10 - 15 *0.014 0.01082 -* denotes a statistically significant difference _ Bảng so sánh sai khác thay đổi tỉ lệ HCl 32% cặp thí nghiệm: Phụ lục 5.4.2 Khảo sát trình thủy phân HCl 32% mẫu chưa tách béo _ Bảng giá trị trung bình hàm lượng acid amin mẫu không tách béo khoảng thời gian thủy phân tỉ lệ HCl 32% sử dụng XIX Table of Least Squares Means for luong acid amin with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 36 0.144278 thoi gian 12 0.124833 0.00306705 0.11857 0.131097 10 12 0.158667 0.00306705 0.152403 0.16493 15 12 0.149333 0.00306705 0.14307 0.155597 ti le 1/4 0.143111 0.00354152 0.135878 0.150344 1/5 0.154 0.00354152 0.146767 0.161233 1/6 0.143111 0.00354152 0.135878 0.150344 1/7 0.136889 0.00354152 0.129656 0.144122 _ Bảng so sánh sai khác thay đổi thời gian thủy phân cặp thí nghiệm: Multiple Range Tests for luong acid amin by thoi gian -Method: 95.0 percent LSD thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -5 12 0.124833 X 15 12 0.149333 X 10 12 0.158667 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - 10 *-0.0338333 0.0088583 - 15 *-0.0245 0.0088583 10 - 15 *0.00933333 0.0088583 -* denotes a statistically significant difference _ Bảng so sánh sai khác thay đổi tỉ lệ HCl 32% cặp thí nghiệm: Phụ lục 6: kết kiểm nghiệm 3-MCPD XX Multiple Range Tests for luong acid amin by ti le -Method: 95.0 percent LSD ti le Count LS Mean Homogeneous Groups -1/7 0.136889 X 1/6 0.143111 X 1/4 0.143111 X 1/5 0.154 X -Contrast Difference +/- Limits -1/4 - 1/5 *-0.0108889 0.0102287 1/4 - 1/6 0.0 0.0102287 1/4 - 1/7 0.00622222 0.0102287 1/5 - 1/6 *0.0108889 0.0102287 1/5 - 1/7 *0.0171111 0.0102287 1/6 - 1/7 0.00622222 0.0102287 -* denotes a statistically significant difference XXI ... tài nghiên cứu tập trung nhiều vào nguyên liệu như: loại đậu, xương động vật vi sinh vật…còn nghiên cứu acid amin từ nấm phế thải nấm cịn Do vậy, đồ án tốt nghiệp em ? ?Nghiên cứu khả trích dịch acid. .. ô nhiễm môi trường Đề chúng em ? ?Nghiên cứu khả tách chiết dịch acid amin thô từ phế thải nấm bào ngư? ?? theo phương pháp thủy phân dùng enzyme kết hợp với acid điều kiện sau: Thủy phân 1: dùng enzyme... phân • Đưa quy trình sơ tách chiết dịch acid amin từ phế thải nấm Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguyên liệu 2.1.1 Giới thiệu Nấm Bào Ngư Nấm Bào Ngư thuộc: • Chi: Pleurotus