Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhijum anisopline

Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhijum anisopline

 TR   *************  S Metarhizium anisopliae  GEN Pr1 -ITS   SINH HC : 2003 - 2007 :   9/2007  TR   ************* KHO Metarhizium anisopliae  GEN Pr1 -ITS : : ThS.   TS.   9/2007 iii N         TS, ThS. , CN. Lu Ph L     ,     , i  .   iv T  Metarhizium anisopliae Pr1 -ITS  .   Metarhizium anisopliae .  Pr1 -ITS  -  Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae var. anisopliae. - Pr1 10 Metarhizium anisopliae. Pr1 10 . Pr1 7 1091bp. -   Metarhizium anisopliae trong  . 95-100%,  g 94-99% Pr1 -  4  2  9 . 1. - 5.8S v2 Metarhizium anisopliae  .  99-100%  92-100% ng rDNA-ITS. v M  TRANG   .iii  iv  v  .viii  . ix  x 1.  1 1.1.  . 1 1.2.   2 1.2.1.  2 1.2.2.  2  . 2 2.  3 2.1. Metarhizium anisopliae . 3 2.2.  . 6 2.3.  . 7 2.4.  2.5. Metarhizium anisopliae  . 8 2.5.1.  . 8 2.5.2.  . 9 2.6. Pr1 10 2.7. Pr1 . 10 vi 2.8.-rDNA . 10 2.8.1.  10 2.9. Metarhizium anisopliae Pr1 -ITS . 12 2.9.1.  . 12 2.9.2.  14 2.10. Pr1 -ITS . 14 3.  . 16 3.1.  . 16 3.1.1.  . 16 3.1.2.  16 3.2.  . 16 3.2.1.  16 3.2.2.  17 3.2.3.  17 3.3.  . 18 3.4.  18 3.4.1. Metarhizium anisopliae . 18 3.4.2. Pr1 . 18 3.4.3. -ITS . 21 3.5. Pr1  22 3.6.  22 3.7. Tinh s . 24 3.8.  24 4.  . 26 4.4. Metarhizium anisopliae  vii  . 26 4.5.  28 4.6. 1-5.8S-ITS2. 28 4.7. ITS1-5.8S-ITS2 29 4.8.  Pr1 .36 4.9. Pr1………………………………………………………36 5.  42 5.4.  42 5.4.2. Pr1 . 42 5.4.3. -ITS 42 5.5.  . 43 5.6.  . 43 6.  44 7.  . 47 viii      RBCQ9  BDQ96 n 9 6 BDTV5  BDTN  BDBD7 :   7 SCLLLA  RNBT  RNLA :  ng : nano gram nm : nano mol g : micro gram m : micro mol M  l : micro  TE : tris EDTA dNTP : deoxyribonucleotide  5  trphosphate TAE : tris acetic EDTA UI : unit international bp : base pair Kb : kilo base ctv  PCR : Polymerase Chains Reaction Rpm : Revolutions per minute ix NG  TRANG  2.1 Metarhizium anisopliae . 3  3.1  Metarhizium anisopiae  16  3.2  Pr1 METPR1/METPR4 . 19  3.3  Pr1 METPR2/METPR5 . 20  -ITS .21 Bng 3.5  23 Bng 4.1  Metarhizium anisopliae -ITS. 30 4.2 Metarhizium anisopliae trong A-ITS . 31 Bng 4.3 Metarhizium anisopliae trong  -ITS .33 4.4 Metarhizium anisopliae Pr1 . 37 4.5 Metarhizium anisopliae trong Pr1 38 Bng 4.6 Metarhizium anisopliae trong  Pr1 40 x   TRANG Metarrhizium anisopliae  nhau 5 2.2  . 12 3.1 Pr1 18 3.2  . 21 3.3  24 3.4  . 25 DNA tng Metarrhizium anisopliae 26 4.2 Metarhizium anisopliae  . 27 4.3 Metarhizium anisopliae  . 28  rDNA-ITS 28 Metarhizium anisopliae c d -ITS 32 Metarhizium anisopliae  gi-ITS 34 i gen Pr1 . 36 Metarhizium anisopliae c d gen Pr1 39 4.9 Metarhizium anisopliae  gigen Pr1 . 41 [...]... rất ít Xuất phát từ những đặc điểm trên, đƣợc sự cho phép và phân công của Bộ môn Công Nghệ Sinh Học chúng tôi đã tiến hành thực hiện đề tài Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNAITS “ 1.2 Mục tiêu và yêu cầu đề tài 1.2.1.Mục tiêu Nghiên cƣ́u sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c phân lâ... việc nghiên cứu về đa dạng sinh học chỉ dừng lại ở mức độ đa nh giá hình thái nên còn nhiều hạn chế Ngày nay với sự ra đời của nhiều kĩ thuật mới nhƣ kĩ thuật PCR và những ứng dụng từ PCR nhƣ RAPD, RFLP, AFLP, Southern blot, Sequence v.v đã giúp cho quá trình nghiên cứu nhanh và chính xác hơn.Tuy nhiên những nghiên cứu nhƣ vậy ở nƣớc ta còn rất ít Xuất phát từ những đặc điểm trên, đƣợc sự. .. trình tƣ̣ của ribosomal RNA trong giống nấm Metarhizium 2.9.2 Nghiên cƣu trong nƣớc ́ Nhƣ̃ng nghiên cƣ́u về sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n trong quầ n thể nấ m Metarhizium anisopliae dƣ̣a vào gen Pr1 và vùng rDNA -ITS ở Việt Nam có rất ít Phầ n lớn nhƣ̃ng nghiên cƣ́u về sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của quầ n thể nấ m Metarhizium anisopliae chỉ dừng lại ở mức độ đa nh giá hình thái của bào... Pr1 )và vùng rDNA-ITS của nấm Metarhizium anisopliae 2 Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự vùng rDNA-ITS và gen Pr1 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.4.1 Kiể m tra DNA tổ ng số đƣơ ̣c ly trích tƣ̀ các dòng nấ m Metarhizium anisopliae DNA tổ ng số đƣơ ̣c kiể m tra bằ ng kỹ thuâ ̣t điê ̣n di trên gel agarose 1% với hiê ̣u điê ̣n thế 100V trong 20... kiểu này chủ yếu là bào tử của các loài nấm ở nƣớc Dƣới tác động của độc tố do bào tử nấm tiết ra có thể dẫn tới hiện tƣợng ngừng nhu động ruột của vật chủ Thí dụ, trƣờng hợp bào tử nấm Aspergillus trong ruột ong mật Bào tử nấm còn có thể xâm nhập qua lỗ thở hoặc cơ quan sinh dục để vào bên trong cơ thể côn trùng nhƣng rất ít Sự xâm nhiễm và phát triển của nấm trong cơ thể côn trùng là... một cách hiệu quả và an toàn hơn Trong các loại vi sinh vật gây hại cho côn trùng đa ng chú ý nhất là ngành phụ nấm bất toàn mà đại di n tiêu biểu là nấm Metarhizium anisopliae-một trong những loài có đặc tính di t côn trùng mạnh nhất Trên thế giới nấm Metarhizium anisopliae là đối tƣợng nghiên cứu của rất nhiều công trình khoa và đã đƣợc thƣơng mại hóa từ lâu – nhƣ là một loại thuốc... Điều đó tạo khả năng phát tán rộng lớn hơn trong quần thể côn trùng Sự phát tán có hiệu quả cao hay không ở mức độ nhất định cũng phụ thuộc vào độ nhất định cũng phụ thuộc vào 2.3 Hoạt tính sinh học Theo nhiều tài liệu của nhiều tác giả cho biết các nấm Muscardine (ví dụ nấm Muscardine trắng: Beauveria bassiana, nấm Muscardine xanh : Metarhizium anisopliae có khả năng tổng hợp một lƣợng lớn... rầy xanh 75 – 96% và sâu đo xanh hại đay 43,9 – 64,2% Hiệu lực di t các loài rầy hại lúa trên đồng ruộng của nấm Beauveria bassiana biến động từ 33 – 75% tùy theo vụ và năm khác nhau Hiệu lực của nấm kéo dài 3- 4 tuần sau khi phun nấm, vì vậy chỉ cần phun nấm một lần trong một vụ là đủ để quản lý các loài rầy hại lúa trong vụ Dùng nấm B bassiana để quản lý các loài rầy hại lúa đã làm tăng... tƣơng đối tốt nhƣng không đều (Trần Văn Mão, 2004) 2.5 Một số nghiên cứu trong nƣớc và ngoài nƣớc về nấm Metarrhizium anisopliae và những nấm ký sinh côn trùng khác ứng dụng để phòng trừ sâu hại 2.5.1 Nghiên cứu trong nƣớc Lần đầu tiên tại Bến Tre, Phạm Thị Thuỳ (2000) đã sử dụng nấm Metarhizium để trừ bọ dừa, kết quả ban đầu cho thấy nấm Metarhizium sau khi đã thử nghiệm trong phòng, trong nhà lƣới... trong 8 loài nấm đƣợc tìm thấy đều lan truyền và giết chết rầy mềm, gồm 6 loài thuộc Entomophthorales (Pandora neoaphidis, connidiobolus thromboides, C.coronatus, Entomophthora planchoniana và neozygites fresenii) và hai loài thuộc Hyphomycetes (Beauveria basssiana, Verticillium lecanii) Theo A.M Kammp và M J Bidochka (1994), tiến hành đa nh giá sự sản xuất bào tử của 3 loại nấm gây bệnh . -        Pandora neoaphidis, connidiobolus thromboides, C.coronatus, Entomophthora planchoniana  neozygites