Khảo sát sự ra hoa trong ống nghiệm

Khảo sát sự ra hoa trong ống nghiệm

    KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP  Dischidia pectinoides Pearson) (Drosera burmannii Vahl)   2007  Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 08/2007       Dischidia pectinoides   (Drosera burmannii Vahl)   Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 08/2007 ii   : -  -    - TS.   -  ,    L  . -   n.   iii  NGUYỄN THỊ NGỌC TÚ, Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh. Tháng 08/2007 KHẢO SÁT SỰ RA HOA TRONG ỐNG NGHIỆM Ở CÂY LAN SÒ (Dischidia pectinoides Pearson) và CÂY BẮT RUỒI (Drosera burmannii Vahl)” Hội đồng hƣớng dẫn: TS. Trần Thị Dung Đề tài đƣợc thực hiện từ tháng 03/2007 đến tháng 08/2007 tại Bộ môn Công nghệ sinh học Trƣờng Đại học Nông Lâm Tp.HCM. Cây lan sò và cây bắt ruồi in vitro đƣợc nuôi cấy trong môi trƣờng cảm ứng ra hoa với các yếu tố cảm ứng đƣợc sử dụng là GA3, BA, cƣờng độ ánh sáng và sự gia tăng nồng độ KH2PO4, giảm nồng độ NH4NO3. Những kết quả thu đƣợc:  Đối với cây lan sò - Môi trƣờng thích hợp nhất để cây lan sò ra hoa trong ống nghiệm (đạt tỉ lệ 44,4%) là môi trƣờng MS có bổ sung GA3 1,5mg/l. Cây ra nụ sau 78 ngày nuôi cấy và ra hoa sau 95,5 ngày, trung bình đạt 7 hoa/cây. - Môi trƣờng có bổ sung BA hoặc thay đổi cƣờng độ ánh sáng không có ảnh hƣởng nhiều trên sự ra hoa của cây lan sò in vitro.  Đối với cây bắt ruồi - Việc thay đổi nồng độ KH2PO4 và NH4NO3 không có ảnh hƣởng tốt trên sự ra hoa của cây bắt ruồi in vitro. Cây chỉ ra nụ nhƣng tỉ lệ không cao hơn so với đối chứng. Tất cả các nụ đều không nở thành hoa. iv ABSTRACT NGUYEN THI NGOC TU, Nong Lam University, HCM city, August, 2007. “The study of flowering in vitro in Dischidia pectinoides Pearson and Drosera burmannii Vahl.” Supervisor: Tran Thi Dung, Ph.D The subject was studied from 3/2007 to 8/2007 at the Department of Biotechnology at Nong Lam University. Dischidia pectinoides and Drosera burmannii in vitro were cultured in basic medium Murashige and Skoog (MS) and the supplement with different plant growth regulator such as: GA3, BA; the change of the intensity of light, KH2PO4, NH4NO3. Results:  In Dischidia pectinoides The best medium for flower induction is MS medium supplemented with 1.5mg/l GA3. The plants has formed flower buds after 78 days and bloomed after 95.5 days. There are 7 flowers in plant. The effect of MS medium supplemented with BA or changed the intensity of light isn’t clearly.  In Drosera burmannii The change of KH2PO4 and NH4NO3 concentrations didn’t effect in fowering in vitro in Drosera burmannii. The plants was formed flower buds, but ratio isn’t higher when compared with control treatment. All of flower buds didn’t bloom. v  CHƢƠNG TRANG Trang tựa . i Lời cảm tạ ii Tóm tắt iii Mục lục v Danh sách các bảng . viii Danh sách các hình x Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1 1.1. Đặt vấn đề . 1 1.2. Mục đích yêu cầu 2 1.2.1. Mục đích 2 1.2.2. Yêu cầu 2 Chƣơng 2:TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3 2.1. Giới thiệu về đối tƣợng nghiên cứu 3 2.2.1. Giới thiệu khái quát về cây lan sò . 3 2.1.2. Giới thiệu khái quát về cây bắt ruồi . 5 2.2. Các yếu tố ảnh hƣởng lên sự ra hoa ngoài tự nhiên 6 2.2.1. Độ tuổi cây . 7 2.2.2. Môi trƣờng . 7 2.2.2.1. Tình trạng dinh dƣỡng . 7 2.2.2.2. Nhiệt độ . 8 2.2.2.3. Quang kỳ 8 2.2.2.4. Hiện tƣợng xuân hóa (hay sự thọ hàn) . 13 2.3. Các yếu tố ảnh hƣởng lên sự ra hoa in vitro . 15 2.3.1. Độ tuổi cây . 16 vi 2.3.2. Dinh dƣỡng 16 2.3.2.1. Nồng độ đƣờng 16 2.3.2.2. Hàm lƣợng photpho và nitơ 17 2.3.3. Các chất điều hòa sinh trƣởng . 18 2.3.3.1. Cytokinins 18 2.3.3.2. Auxins . 19 2.3.3.3. Gibberellins . 19 2.3.4. Các yếu tố khác . 20 2.4. Sự phát triển hoa in vitro . 22 2.5. Các nghiên cứu ra hoa in vitro 23 2.5.1. Trên thế giới 23 2.5.2. Trong nƣớc 24 Chƣơng 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 26 3.2 Nội dung 26 3.3 Bố trí thí nghiệm 26 3.3.1 Nội dung 1: Khảo sát sự ra hoa in vitro của cây lan sò 27 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng của cƣờng độ ánh sáng đến sự tạo sò và ra hoa in vitro của cây lan sò. . 26 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng của nồng độ GA3 đến sự ra hoa in vitro của cây lan sò trên môi trƣờng có và không có bổ sung nƣớc dừa . 27 Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng của nồng độ BA đến sự tạo sò và ra hoa in vitro của cây lan sò. 28 3.3.2 Nội dung 2: Khảo sát sự ra hoa in vitro của cây bắt ruồi 28 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng của nồng độ KH2PO4 đến sự ra hoa in vitro của cây bắt ruồi. 28 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng của nồng độ NH4NO3 đến sự ra hoa in vitro của cây bắt ruồi 29 3.4. Chỉ tiêu theo dõi 29 vii 3.4.1 Theo dõi khả năng tạo chồi và sinh trƣởng . 29 3.4.2 Theo dõi sự ra hoa 29 3.5 Phƣơng pháp tiến hành . 30 3.5.1 Môi trƣờng nuôi cấy . 30 3.5.2 Chuẩn bị mẫu cấy . 30 3.5.3 Điều kiện nuôi cấy 30 3.5.4 Xử lý số liệu . 30 Chƣơng 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 31 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 51 5.1. Kết luận . 51 5.2. Đề nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 1 PHỤ LỤC 2 viii  : Các nghiệm thức thí nghiệm ảnh hƣởng của cƣờng độ ánh sáng đến sự tạo sò và ra hoa trên cây lan sò trong ống nghiệm 26 : Các nghiệm thức thí nghiệm ảnh hƣởng của nồng độ GA3 đến sự ra hoa in vitro ở cây lan sò trên môi trƣờng có và không có bổ sung nƣớc dừa 27 : Các nghiệm thức thí nghiệm ảnh hƣởng của nồng độ BA đến sự tạo sò và ra hoa in vitro trên cây lan sò 28 : Các nghiệm thức thí nghiệm ảnh hƣởng của nồng độ KH2PO4 đến sự ra hoa in vitro trên cây bắt ruồi . 28 : Các nghiệm thức thí nghiệm ảnh hƣởng của nồng độ NH4NO3 đến sự ra hoa in vitro trên cây bắt ruồi. . 29 . Ảnh hƣởng của cƣờng độ ánh sáng đến sự gia tăng số chồi của cây lan sò in vitro . 31 . Ảnh hƣởng của cƣờng độ ánh sáng đến sự gia tăng lá của cây lan sò in vitro 32 . Ảnh hƣởng của nồng độ GA3 đến số chồi của cây lan sò in vitro trên môi trƣờng có và không có bổ sung nƣớc dừa. . 34 4. Ảnh hƣởng của nồng độ GA3 đến sự sinh trƣởng lá của cây lan sò in vitro trên môi trƣờng có và không có bổ sung nƣớc dừa . . 36 . Ảnh hƣởng của nồng độ GA3 đến sự ra hoa in vitro của cây lan sò trên môi trƣờng có và không có bổ sung nƣớc dừa 37 . Ảnh hƣởng của nồng độ BA đến sự gia tăng số chồi của cây lan sò in vitro . 42 . Ảnh hƣởng của nồng độ BA đến sự gia tăng số lá của cây lan sò in vitro . 42 8. Ảnh hƣởng của nồng độ KH2PO4 đến sự sinh trƣởng chiều cao ix của cây bắt ruồi in vitro 45 . Ảnh hƣởng của nồng độ KH2PO4 đến sự ra hoa in vitro của cây bắt ruồi 46 . Ảnh hƣởng của nồng độ NH4NO3 đến sự sinh trƣởng chiều cao của cây bắt ruồi in vitro 47 . Ảnh hƣởng của nồng độ NH4NO3 đến sự ra hoa của cây bắt ruồi in vitro 48 [...]... đặc biệt trong vùng đỉnh Sự chuyển tiếp ra hoa xảy ra 7 đồng thời với sự biến đổi rất rõ của bộ máy dinh dƣỡng, đặc biệt là sự kéo dài lóng thân do hoạt động mạnh của vùng dƣới ngọn của mô phân sinh tiền hoa Sự tƣợng hoa Sự chuyển tiếp ra hoa cần khoảng 2-3 ngày để dẫn tới sự tƣợng hoa, tức sự sinh cơ quan hoa (quan sát đƣợc dƣới kính hiển vi) Sự phát triển của các sơ khởi hoa nói chung xảy ra nhanh... ra hoa thành công cây dừa cạn (Catharanthus roseus) trong điều kiện in vitro Theo thí nghiệm này, môi trƣờng thích hợp nhất cho sự ra hoa của cây dừa cạn trong ống nghiệm là môi trƣờng MS bổ sung 0,05 mg/l TDZ và 0,1 mg/l NAA Tỉ lệ ra hoa là 100% Cây ra nụ sau 58 ngày nuôi cấy và 68 ngày thì hoa nở, trung bình có 4 hoa/ cây [4] Nguyễn Thị Mỹ Duyên và ctv (2007) đã tiến hành thí nghiệm nở hoa trong ống. .. hạn ở cây nhân sâm, hoa tạo ra trong điều kiện in vitro có kích thƣớc nhỏ hơn so với hoa trong điều kiện tự nhiên mặc dù hoa vẫn có đầy đủ các cơ quan hoa) [23]; ở cây hoa hồng, đôi lúc hoa bị đột biến, cánh hoa không đều, đài hoa chƣa chuẩn hoặc có khi chƣa ra đƣợc màu giống với hoa trồng trong môi trƣờng thiên nhiên [26]; ở cây Gentiana triflora Pall var axillarflora, tuy màu sắc hoa có sáng hơn, số... sang nhân giống cây trong ống nghiệm để rút ngắn vòng đời của thực vật, từ đó có thể kiểm soát hầu hết cơ chế của các quá trình diễn ra trong cuộc sống của thực vật Việc nghiên cứu điều khiển thực vật ra hoa trong ống nghiệm cũng là một phần của mục đích trên Nếu con ngƣời hiểu rõ cơ chế và có thể điều khiển thực vật ra hoa trong ống nghiệm dễ dàng thì đây sẽ là một công cụ rất hữu ích trong việc nghiên... đó sự phát triển dinh dƣỡng chiếm ƣu thế Giới hạn dƣới: là giới hạn mà dƣới đó, dinh dƣỡng không đủ cho sự ra hoa 8 Vì vậy, trong thực tế sự tỉa cành thích hợp sẽ kích thích mạnh sự phát triển hoa Thông thƣờng, sự dinh dƣỡng nhiều đạm kích thích sự phát triển dinh dƣỡng và ngƣợc lại, sự dinh dƣỡng giàu carbon kích thích sự ra hoa Do đó, việc lựa chọn tỉ lệ C/N cao thích hợp sẽ kích thích sự ra hoa, ... tƣợng hoa, làm chất kích thích sự hình thành hoa Tuy nhiên đề tài vẫn còn một số điểm chƣa hoàn thiện lắm: đôi lúc hoa bị đột biến, cánh hoa không đều, đài hoa chƣa chuẩn hoặc có khi chƣa ra đƣợc màu giống với hoa trồng trong môi trƣờng thiên nhiên do vậy cần tiếp tục nghiên cứu, hoàn thiện quy trình ra hoa của cây hoa hồng trong ống nghiệm [26,27] Phạm Thị Minh Thu và ctv (2005) đã cho loài hoa Torenia... này ra hoa Từ các kết quả nhƣ vậy, ngƣời ta cho rằng: florigen là hormon chuyên biệt cho sự ra hoa, có tính phổ biến ở thực vật và không có tính hữu cực Nhƣ vậy, cây chỉ ra hoa khi nào tích lũy đủ lƣợng florigen cần thiết cho sự ra hoa dƣới tác dụng của quang kỳ.[8] Các thí nghiệm trên đã dẫn tới kết luận về sự tồn tại của hormon đặc hiệu chuyên biệt gây ra sự chuyển cây sang trạng thái ra hoa Vì sự. .. cây ra hoa sớm; và một đóng góp to lớn cho nông nghiệp đó là xây dựng một hệ thống có ý nghĩa trong vi nhân giống, cải thiện giống cây trồng, phục hồi các tính trạng quý, tạo cây có năng suất cao, chất lƣợng tốt,… Hơn nữa, trong cuộc sống hiện đại mà hoa kiểng là một phần không thể thiếu của con ngƣời thì việc thƣơng mại hóa hoa trong ống nghiệm rất có tiềm năng phát triển trong tƣơng lai do hoa trong. .. ngày ngắn cho sự nở hoa của cây Wolffia microscopica (Margara và ctv, 1965) [9] 2.4 SỰ PHÁT TRIỂN HOA IN VITRO Sự khởi đầu ra hoa ở cây xảy ra thƣờng theo sau sự cảm ứng của các tín hiệu môi trƣờng Trong điều kiện in vivo và in vitro, giai đoạn này thƣờng đƣợc nhận biết bởi sự tích lũy và lƣu giữ tinh bột, sự phân bố lại phức tạp hơn của mạng lƣới nội chất trong toàn bộ tế bào chất, sự tăng tổng hợp... ba giai đoạn chính: chuyển tiếp ra hoa; tƣợng hoa; tăng trƣởng và nở hoa Sự chuyển tiếp ra hoa Sự chuyển tiếp ra hoa gây nên các biến đổi sâu sắc của mô phân sinh ngọn, từ mô phân sinh dinh dƣỡng thành mô phân sinh tiền hoa Các biểu hiện đầu tiên của sự chuyển tiếp ra hoa không thấy đƣợc bằng mắt thƣờng, chỉ biết đƣợc bởi các phân tích tế bào học hay sinh hóa học, với sự tăng mạnh hoạt tính biến dƣỡng . qua ba giai đoạn chính: chuyển tiếp ra hoa; tƣợng hoa; tăng trƣởng và nở hoa. Sự chuyển tiếp ra hoa Sự chuyển tiếp ra hoa gây nên các biến đổi sâu sắc của. 3.3.2 Nội dung 2: Khảo sát sự ra hoa in vitro của cây bắt ruồi ............ 28 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng của nồng độ KH2PO4 đến sự ra hoa in vitro của cây