Nghiên cứu ảnh hưởng của các elicitor hệ thống LED cải tiến môi trường hai lớp đến quá trình nhân giống tạo củ và tích lũy saponin trong sâm ngọc linh panax vietnamensis ha et grushv in vitro

ĐỒN THANH NIÊN CỘNG SẢN HỒ CHÍ MINH BAN CHẤP HÀNH TP HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH DỰ THI GIẢI THƯỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC EURÉKA LẦN THỨ XX NĂM 2018 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ELICITOR, HỆ THỐNG LED CẢI TIẾN, MÔI TRƯỜNG HAI LỚP ĐẾN Q TRÌNH NHÂN GIỐNG, TẠO CỦ VÀ TÍCH LŨY SAPONIN TRONG SÂM NGỌC LINH (PANAX VIETNAMENSIS HA ET GRUSHV.) IN VITRO LĨNH VỰC NGHIÊN CỨU: CÔNG NGHỆ SINH – Y SINH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số cơng trình: …………………………… (Phần BTC Giải thưởng ghi) i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC HÌNH ẢNH ix DANH MỤC BẢNG xii TÓM TẮT MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài 2 Mục tiêu nghiên cứu 3 Đối tượng nghiên cứu 4 Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vi nhân giống elicitor 1.1.1 Khái niệm vi nhân giống 1.1.2 Các chất cảm ứng – Elicitor 10 1.1.2.1 Than hoạt tính 10 1.1.2.2 Saccharose 11 1.1.2.3 Bạc nitrate 12 1.1.3 Phương pháp nuôi cấy lỏng lắc 12 1.1.4 Vai trò ánh sáng vi nhân giống 14 1.1.4.1 Vai trò ánh sáng trình quang hợp thực vật 14 1.1.4.2 Vai trò ánh sáng trình sinh trưởng phát triển thực vật 15 1.1.4.3 Vai trò ánh sáng nhân giống in vitro 17 1.1.4.4 Nguồn chiếu sáng nhân tạo sử dụng nuôi cấy in vitro 18 1.1.5 Đèn LED (Light Emitting Diode) 21 1.1.5.1 Giới thiệu đèn LED 21 1.1.5.2 Ưu, nhược điểm đèn LED 22 1.1.5.3 Một số thành tựu giới Việt Nam sử dụng nguồn sáng LED nuôi cấy in vitro 23 1.1.5.4 Hướng phát triển ứng dụng đèn LED nuôi cấy in vitro Việt Nam 26 ii 1.1.6 Ánh sáng thực vật 27 1.1.6.1 Vai trò số phổ ánh sáng đơn sắc đến đời sống thực vật 27 1.1.6.2 Vai trị ánh sáng đến q trình tích lũy chất hữu thực vật 29 1.2 Phương pháp định tính định lượng saponin Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 32 1.2.1 Định tính saponin Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) phương pháp Sắc ký lớp mỏng 32 1.2.2 Định lượng saponin Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) phương pháp Sắc ký lỏng hiệu cao 33 1.3 Sơ lược Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 36 1.3.1 Giới thiệu sơ lược Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 36 1.3.2 Đặc điểm hình thái 37 1.3.3 Đặc điểm sinh trưởng phát triển 38 1.3.4 Đặc điểm phân bố 39 1.3.5 Nhân giống Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 39 1.3.5.1 Nhân giống từ hạt 39 1.3.5.2 Nhân giống in vitro 41 1.3.6 Thành phần hóa học tác dụng dược lý Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 41 1.3.6.1 Thành phần hóa học 41 1.3.6.2 Tác dụng dược lý 42 1.3.7 Một số nghiên cứu nhân giống bảo tồn Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 44 1.3.7.1 Nghiên cứu nhân giống bảo tồn nguồn gene Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) giới 44 1.3.7.2 Nghiên cứu nhân giống bảo tồn nguồn gene Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Việt Nam 45 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 49 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 49 2.1.1 Địa điểm 49 2.1.2 Thời gian 49 iii 2.2 Vật liệu 49 2.2.1 Nguồn mẫu 49 2.2.2 Môi trường điều kiện nuôi cấy 49 2.2.3 Thiết bị dụng cụ 50 2.3 Phương pháp nghiên cứu 50 2.3.1 Thiết kế hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED đơn 52 2.3.2 Thiết kế hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED hỗn hợp 53 2.4 Bố trí thí nghiệm 54 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng than hoạt tính đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 54 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng saccharose đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 54 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng bạc nitrate (AgNO3) đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 55 2.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng LED đơn cải tiến đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 56 2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng LED hỗn hợp với tỷ lệ 50:50 (đỏvàng; đỏ-xanh dương, vàng-xanh dương) đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 57 2.4.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng nuôi cấy lỏng tĩnh lỏng lắc (giai đoạn cảm ứng) đến khả tăng trưởng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro 58 2.4.7 Thí nghiệm 7: Khảo sát ảnh hưởng môi trường hai lớp (kiểu bổ sung thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy) đến khả tăng trưởng, tạo củ Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro 59 2.5 Hình thái giải phẫu Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro 59 2.5.1 Hình thái giải phẫu khí khổng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro sau 12 tuần nuôi cấy hệ thống LED cải tiến 59 2.5.2 Hình thái giải phẫu củ Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro 61 iv 2.6 Xác định hàm lượng chlorophyll sản phẩm Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) từ q trình ni cấy in vitro hệ thống LED cải tiến 62 2.7 Thu nhận hợp chất saponin triterpenoid từ sản phẩm q trình ni cấy in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) môi trường hai lớp 63 2.7.1 Định tính saponin triterpenoid phương pháp sắc ký lớp mỏng 63 2.6.2 Định lượng saponin triterpenoid phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chrotomatography – HPLC) 63 2.7 Chỉ tiêu theo dõi 64 2.8 Thống kê xử lý số liệu 64 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 65 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng elicitor than hoạt tính đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 65 3.2 Thí nghiệm Ảnh hưởng elicitor saccharose đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 68 3.3 Thí nghiệm Ảnh hưởng elicitor AgNO3 đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 71 3.4 Thí nghiệm Ảnh hưởng ánh sáng LED đơn cải tiến đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 74 3.5 Thí nghiệm Ảnh hưởng ánh sáng LED hỗn hợp cải tiến đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 76 3.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng ni cấy lỏng tĩnh lỏng lắc (giai đoạn cảm ứng) đến khả tăng trưởng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 80 3.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng kiểu bổ sung thành phần môi trường nuôi cấy (môi trường hai lớp) đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro tích lũy saponin Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 82 3.8 Hình thái Giải phẫu Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro 88 3.8.1 Hình thái Giải phẫu khí khổng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro sau 12 tuần nuôi cấy hệ thống LED cải tiến 88 3.8.2 Hình thái Giải phẫu củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) 90 v 3.9 Xác định hàm lượng chlorophyll sản phẩm Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) từ q trình ni cấy in vitro hệ thống LED cải tiến 92 3.10 Định tính saponin sắc ký lớp mỏng 93 3.11 Định lượng saponin củ sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro sau 16 tuần nuôi cấy phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 93 CHƯƠNG 4: KẾT LUẠN VÀ KIẾN NGHỊ 96 4.1 Kết luận 96 4.2 Kiến nghị 97 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AC Than hoạt tính BA Benzyladenine BAP 6-Benzyl Amino Purin DNA Deoxyribonucleic Acid GA3 Acid gibberellic HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HPTLC Sắc ký lớp mỏng cao áp IAA Acid b-Indolyacetic IBA Acid b-Indolybutyric IFR Cường độ ánh sáng đỏ xa IR Cường độ ánh sáng đỏ KH2PO4 Monopotassium phosphate KH&CN Khoa học công nghệ Kin Kinetin LED Light-Emmitting Diode MS Murashige Skoog, 1962 NAA Acid a-naphtaleneacetic NaClO Sodium hypocloride SH Schenk Hildebrandt, 1972 TDZ Thidiazuron TLC Sắc ký lớp mỏng UFLC Sắc ký lỏng hiệu cao siêu nhanh WPM Woody Plant Medium 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Các bước sóng ánh sáng (nguồn Internet) 14 Hình 1.2 A Sự hấp thu bước sóng loại sắc tố quang hợp cường độ quang hợp; B Sự hấp thu ánh sáng chlorophyll a chlorophyll b (nguồn Internet) 16 Hình 1.3 Các hệ thống chiếu sáng đèn LED a Đèn LED với tỷ lệ chiếu sáng 70% LED đỏ kết hợp 30% LED xanh; b LED uni-Pack (LP) (Nguyễn Bá Nam, 2012) 21 Hình 1.4 Hệ thống ni cấy LED truyền điện không dây (Wireless power transfer – LED uni-Pack (WPT - LP)) a Thiết bị phát; b Thiết bị thu; c.d Hoạt động hệ thống (Nguyễn Bá Nam, 2012) 26 Hình 1.5 Các bước trình sắc ký lớp mỏng 33 Hình 1.6 Sơ đồ hệ thống Sắc ký lỏng hiệu cao – HPLC 35 Hình 1.7 Hệ thống Sắc ký lỏng hiệu cao – HPLC 35 Hình 1.8 Cây Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) (Nhut et al., 2011) 36 Hình 1.9 Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) (nguồn Internet) 37 Hình 2.1 Mơ hình thiết kế hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED đơn a Hệ thống chiếu sáng đèn LED trắng; b Hệ thống chiếu sáng đèn LED vàng; c Hệ thống chiếu sáng đèn LED xanh dương; d Hệ thống chiếu sáng đèn LED đỏ 53 Hình 2.2 Hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED đơn sau thiết kế thi công a Hệ thống chiếu sáng đèn LED trắng; b Hệ thống chiếu sáng đèn LED vàng; c Hệ thống chiếu sáng đèn LED xanh dương; d Hệ thống chiếu sáng đèn LED đỏ 53 Hình 2.3 Mơ hình hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED kết hợp a 100% LED đỏ (ĐC); b 50% LED đỏ kết hợp 50% LED vàng; c 50% LED đỏ kết hợp 50% LED xanh dương; d 50% LED vàng kết hợp 50% LED xanh dương 54 Hình 2.4 Hệ thống chiếu sáng cải tiến đèn LED hỗn hợp sau thiết kế thi công a Tỷ lệ chiếu sáng 100% LED đỏ (ĐC); b Tỷ lệ 50% LED đỏ kết hợp 50% LED vàng; c Tỷ lệ 50% LED đỏ kết hợp 50% LED xanh dương; d Tỷ lệ 50% LED vàng kết hợp 50% LED xanh dương 54 Hình 3.1 Ảnh hưởng elicitor than hoạt tính đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 12 tuần nuôi cấy A0, viii A1, A2, A3, A4, A5, A6, A7 tương ứng với nồng độ than hoạt tính 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 g/L 67 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ elicitor saccharose đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 12 tuần nuôi cấy B0, B1, B2, B3, B4, B5, B6, B7 tương ứng với nồng độ saccharose 30; 40; 50; 60; 70; 80 g/L 70 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ elicitor AgNO3 đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 12 tuần nuôi cấy C0, C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7 tương ứng với nồng độ AgNO3 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 mg/L 73 Hình 3.4 Ảnh hưởng ánh sáng LED đơn cải tiến đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 12 tuần nuôi cấy D0, D1, D2, D3, D4 tương ứng với với nguồn sáng đèn huỳnh quang; LED trắng; LED vàng; LED xanh dương; LED đỏ 75 Hình 3.5 Ảnh hưởng ánh sáng LED hỗn hợp cải tiến đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 12 tuần nuôi cấy G0, G1, G2, G3 tương ứng với với tỷ lệ 100% đỏ; 50% đỏ:50% vàng; 50% đỏ:50% xanh dương 50% vàng:50% xanh dương 79 Hình 3.6 Ảnh hưởng ni cấy lỏng tĩnh lỏng lắc (giai đoạn cảm ứng) đến khả tăng trưởng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau tuần nuôi cấy L0, L1, L2 tương ứng với trạng thái nuôi cấy rắn (agar), lỏng tĩnh, lỏng lắc 81 Hình 3.7 Ảnh hưởng kiểu bổ sung thành phần môi trường nuôi cấy đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 16 tuần nuôi cấy 83 Hình 3.8 Ảnh chụp hiển vi soi hình thái củ Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro sau 16 tuần ni cấy 87 Hình 3.9 Cấu tạo củ Sâm Ngọc Linh Ngọc in vitro sau 16 tuần ni cấy 88 Hình 3.10 Ảnh chụp kính hiển vi sơi ảnh chụp hình thái giải phẫu khí khổng kính hiển vi quang học Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) in vitro sau 12 tuần nuôi cấy điều kiện chiếu sáng khác 89 ix Hình 3.11 Ảnh chụp hình thái giải phẫu kính hiển quang học củ Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) sau 16 tuần nuôi cấy; a) Lát cắt dọc chồi mọc từ củ; b) Lát cắt ngang củ; c1) Lát cắt ngang mơ củ, c2) Hình thái tế bào mô củ, c3) Mô củ với tế bào nhân bắt màu hồng đậm (mũi tên), c4) Hình thái bó mạch lát cắt dọc củ 91 Hình 3.12 Sắc ký đồ HPLC định lượng Rg1 Rb1 nghiệm thức E8 (nuôi cấy môi trường lớp lỏng-rắn: có than hoạt tính) Sâm Ngọc Linh (Panaxx vietnamensis Ha et Grushv.) sau 16 tuần nuôi cấy 92 Hình 3.13 Sắc ký đồ HPLC định lượng Rg1 Rb1 nghiệm thức ĐC (nuôi cấy môi trường agar lớp: không than hoạt tính) Sâm Ngọc Linh (Panaxx vietnamensis Ha et Grushv.) sau 16 tuần nuôi cấy 94 Hình 3.14 Sắc ký đồ HPLC định lượng Rg1 Rb1 nghiệm thức E8 (nuôi cấy mơi trường lớp lỏng-rắn: có than hoạt tính) Sâm Ngọc Linh (Panaxx vietnamensis Ha et Grushv.) sau 16 tuần nuôi cấy 95 A B C D SỐ CỦ Source Model Source NT ĐƯỜNG KÍNH CỦ Source Model Source NT 1.33333 0.66333 0.43000 0.12667 30 30 30 30 B0 B3 B2 B1 Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 26.94444444 5.38888889 24.25 F 26.94444444 5.38888889 24.25 F 26.94444444 5.38888889 24.25 F 26.94444444 5.38888889 24.25 F 0.17466667 0.03493333 196.50 F 0.17466667 0.03493333 196.50 F 0.32910096 0.04701442 1367.69 F 0.32910096 0.04701442 1367.69 F 0.00943663 0.00134809 224.68 F 0.00943663 0.00134809 224.68 F 20.50000000 4.10000000 12.30 0.0002 Error 12 4.00000000 0.33333333 Corrected Total 17 24.50000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.836735 26.64694 0.577350 2.166667 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 20.50000000 4.10000000 12.30 0.0002 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 12 Error Mean Square 0.333333 Critical Value of t 2.17881 Least Significant Difference 1.0271 t Grouping Mean N NT A 3.6667 30 C5 A B A 3.3333 30 C3 B B C 2.3333 30 C4 C D C 1.6667 30 C2 D C D C 1.3333 30 C1 D D 0.6667 30 C0 DF Source Model Source NT SỐ LÁ Source Model Source NT ĐƯỜNG KÍNH LÁ Source Model Source NT SỐ CỦ Source Model Source NT Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00849828 0.00169966 223.31 F 0.00849828 0.00169966 223.31 F 6.00000000 3.00000000 9.00 0.0156 Error 2.00000000 0.33333333 Corrected Total 8.00000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.750000 24.74358 0.577350 2.333333 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 6.00000000 3.00000000 9.00 0.0156 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.333333 Critical Value of t 2.44691 Least Significant Difference 1.1535 t Grouping Mean N NT A 3.3333 30 C0 A B A 2.3333 30 C3 B B 1.3333 30 C1 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.05457689 0.02728844 16373.1 F 0.05457689 0.02728844 16373.1 F 0.20769067 0.10384533 2168.46 F 0.20769067 0.10384533 2168.46 F 0.03023693 0.00755923 804.17 F 0.03023693 0.00755923 804.17 F 0.00641360 0.00160340 19.29 0.0001 Error 10 0.00083133 0.00008313 Corrected Total 14 0.00724493 R-Square Coeff Var Root MSE cm Mean 0.885253 2.449252 0.009118 0.372267 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.00641360 0.00160340 19.29 0.0001 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.000083 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0166 t Grouping Mean N NT A 0.398333 30 D4 A B A 0.387667 30 D3 B B 0.376333 30 D1 C 0.358667 30 D0 D 0.340333 30 D2 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00761867 0.00190467 16.47 0.0002 Error 10 0.00115667 0.00011567 Corrected Total 14 0.00877533 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.868191 1.004500 0.010755 1.070667 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.00761867 0.00190467 16.47 0.0002 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.000116 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0196 t Grouping Mean N NT A 1.100667 30 D4 A B A 1.086667 30 D3 B B 1.074667 30 D1 C 1.053333 30 D0 C C 1.038000 30 D2 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.04248627 0.01062157 20.24 F 0.04248627 0.01062157 20.24 F 19.33333333 4.83333333 18.12 0.0001 Error 10 2.66666667 0.26666667 Corrected Total 14 22.00000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.878788 25.81989 0.516398 2.000000 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 19.33333333 4.83333333 18.12 0.0001 Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.266667 Critical Value of t 3.16927 Least Significant Difference 1.3363 t Grouping Mean N NT A 3.6667 30 D4 A B A2.6667 30 D3 B B 2.0000 30 D1 B B C 1.3333 30 D0 C C 0.3333 30 D2 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00558627 0.00139657 21.71 F 0.00558627 0.00139657 21.71 F 1.76666667 5.30 0.0149 Error 10 3.33333333 0.33333333 Corrected Total 14 10.40000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.679487 32.07501 0.577350 1.800000 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 7.06666667 1.76666667 5.30 0.0149 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.333333 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 1.0504 t Grouping Mean N NT A 2.6667 30 G4 A A 2.3333 30 G3 A B A 1.6667 30 G0 B A B A 1.6667 30 G1 B B 0.6667 30 G2 DF Squares 7.06666667 ĐƯỜNG KÍNH CỦ Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 10 Model Source NT 0.00473173 0.00118293 18.48 0.0001 Error 10 0.00064000 0.00006400 Corrected Total 14 0.00537173 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.880858 1.045934 0.008000 0.764867 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.00473173 0.00118293 18.48 0.0001 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.000064 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0146 t Grouping Mean N NT A 0.786000 30 D4 A B A 0.780000 30 D3 B B 0.768667 30 D1 C 0.751333 30 D0 C C 0.738333 30 D2 CHIỀU DÀI CỦ Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00597760 0.00149440 20.72 F NT 0.00597760 0.00149440 20.72 F Model 0.17753233 0.05917744 2070.35 F NT 0.17753233 0.05917744 2070.35 F Model 0.40021433 0.13340478 952.32 F NT 0.40021433 0.13340478 952.32 F 11.33333333 3.77777778 11.33 0.0030 Error 2.66666667 0.33333333 Corrected Total 11 14.00000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.809524 28.86751 0.577350 2.000000 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 11.33333333 3.77777778 11.33 0.0030 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.333333 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 1.0871 t Grouping Mean N NT A 3.3333 30 G2 A B A 2.3333 30 G0 B B C 1.6667 30 G3 C C 0.6667 30 G1 Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F 1.94590000 0.64863333 276.01 F 1.94590000 0.64863333 276.01 F 8.66666667 2.88888889 11.56 0.0028 Error 2.00000000 0.25000000 Corrected Total 11 10.66666667 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.812500 21.42857 0.500000 2.333333 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 8.66666667 2.88888889 11.56 0.0028 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.25 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.9414 t Grouping Mean N NT A 3.6667 30 G2 B 2.3333 30 G0 B C B 2.0000 30 G3 C C 1.3333 30 G1 Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 1.20740000 0.40246667 335.39 F 1.20740000 0.40246667 335.39 F 6.91666667 2.30555556 9.22 0.0056 Error 2.00000000 0.25000000 Corrected Total 11 8.91666667 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.775701 35.29412 0.500000 1.416667 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 6.91666667 2.30555556 9.22 0.0056 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.25 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.9414 t Grouping Mean N NT A 2.3333 30 G0 A A 2.0000 30 G2 B 0.6667 30 G1 B B 0.6667 30 G3 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00101825 0.00033942 9.15 0.0058 Error 0.00029667 0.00003708 Corrected Total 11 0.00131492 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.774384 3.478120 0.006090 0.175083 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.00101825 0.00033942 9.15 0.0058 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.000037 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.0115 t Grouping Mean N NT A 0.187667 30 G2 A B A 0.178667 30 G0 B B C 0.171333 30 G3 C C 0.162667 30 G1 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.00129892 0.00043297 8.07 0.0084 Error 0.00042933 0.00005367 Corrected Total 11 0.00172825 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.751579 2.112690 0.007326 0.346750 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NT 0.00129892 0.00043297 8.07 0.0084 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.000054 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.0138 t Grouping Mean N NT A 0.360333 30 G2 A B A 0.352000 30 G0 B B C 0.342000 30 G3 C C 0.332667 30 G1 Thí nghiệm Ảnh hưởng nuôi cấy lỏng tĩnh lỏng lắc (giai đoạn cảm ứng) đến khả tăng trưởng Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRỌNG LƯỢNG TƯƠI Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 0.13590150 0.13590150 695.15 F NT 0.13590150 0.13590150 695.15 F 0.07752067 0.07752067 180.42 0.0002 Error 0.00171867 0.00042967 Corrected Total 0.07923933 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.978310 2.840804 0.020728 0.729667 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.07752067 0.07752067 180.42 0.0002 Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.00043 Critical Value of t 4.60409 Least Significant Difference 0.0779 t Grouping Mean N NT A 0.84333 30 L2 B 0.61600 30 L0 Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 24.00000000 24.00000000 72.00 0.0011 Error 1.33333333 0.33333333 Corrected Total 25.33333333 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.947368 15.74592 0.577350 3.666667 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NT 24.00000000 24.00000000 72.00 0.0011 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.333333 Critical Value of t 2.77645 Least Significant Difference 1.3088 t Grouping Mean N NT A 5.6667 30 L2 B 1.6667 30 L0 Thí nghiệm Ảnh hưởng kiểu bổ sung thành phần môi trường nuôi cấy đến khả tăng trưởng, tạo củ in vitro Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRỌNG LƯỢNG TƯƠI Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 2.17956267 0.31136610 294.20 F NT 2.17956267 0.31136610 294.20 F 2.58838196 0.36976885 358.85 F 2.58838196 0.36976885 358.85 F 14.50000000 2.07142857 5.52 0.0023 Error 16 6.00000000 0.37500000 Corrected Total 23 20.50000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.707317 27.21655 0.612372 2.250000 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 14.50000000 2.07142857 5.52 0.0023 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 16 Error Mean Square 0.375 Critical Value of t 2.11991 Least Significant Difference 1.06 t Grouping Mean N NT A 3.6667 30 E8 A B A 2.6667 30 E6 B A B A 2.6667 30 E7 B B C 2.3333 30 E5 B C B C 2.3333 30 E3 B C B C D 2.0000 30 E4 C D C D 1.3333 30 E2 D D 1.0000 30 E1 DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 3.02018333 0.43145476 122.25 F 3.02018333 0.43145476 122.25 F 14.50000000 2.07142857 5.52 0.0023 Error 16 6.00000000 0.37500000 Corrected Total 23 20.50000000 R-Square Coeff Var Root MSE Mean 0.707317 27.21655 0.612372 2.250000 DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 14.50000000 2.07142857 5.52 0.0023 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 16 Error Mean Square 0.375 Critical Value of t 2.11991 Least Significant Difference 1.06 t Grouping Mean N NT A 3.6667 30 E8 DF 15 ĐƯỜNG KÍNH TÁN LÁ CHÉT Source Model Source NT SỐ CỦ Source Model Source NT ĐƯỜNG KÍNH CỦ Source Model Source NT B A B A B C B C B C C D D A 2.6667 B A 2.6667 B 2.3333 B C 2.3333 B C D 2.0000 C D 1.3333 D 1.0000 30 E6 30 E7 30 E5 30 E3 30 E4 30 E2 30 E1 Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F 0.70942917 0.10134702 22.82 F 0.70942917 0.10134702 22.82 F 0.01561462 0.00223066 23.92 F 0.01561462 0.00223066 23.92 F 0.00852429 0.00121776 75.33 F 0.00852429 0.00121776 75.33 F 0.01242933 0.00177562 43.00 F NT 0.01242933 0.00177562 43.00 F Model 0.01172933 0.00134562 27.00 F NT 0.01172933 0.00134562 27.00