Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến sản xuất chế phẩm NPV nucleo polyherosis trên ký chủ sâu khoang spodoptera litura

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HCM VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SẢN XUẤT CHẾ PHẨM NPV (NUCLEO POLYHEDROSIS VIRUS) TRÊN KÝ CHỦ SÂU KHOANG SPODOPTERA LITURA Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực hiện: LÊ THỊ HỒNG NHƯ 1411100083 Lớp: 14DSH01 Thành phố Hồ Chí Minh, 2018 LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu chúng tơi hướng dẫn Tiến sĩ Nguyễn Thị Hai Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH trường Đại học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết hồn tồn không chép từ nghiên cứu khoa học khác hình thức Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2018 Sinh viên thực Lê Thị Hoàng Như LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, chúng em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình chúng em Cảm ơn bố mẹ nuôi nấng tạo điều kiện cho chúng em học tập để chúng em có thành ngày hơm Trong suốt khoảng thời gian học trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, chúng em Thầy Cơ Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH hết lịng hướng dẫn, giúp đỡ chúng em trình học tập trường, trình thực đồ án Chúng em xin chân thành cám ơn đến Thầy Cơ, nhờ có Thầy Cơ trang bị kiến thức cho chúng em để thực đồ án Chúng em xin cảm ơn Thầy Cô phịng thí nghiệm bạn khóa quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện để chúng em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Đặc biệt, chúng em xin chân thành cảm ơn Tiến sĩ Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn, bảo chúng em suốt trình thực đồ án Cuối cùng, chúng em xin cảm ơn Thầy Cô hội đồng Phản Biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án tốt nghiệp Chúng em xin gửi đến Thầy Cô lời chúc sức khỏe trân trọng Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2018 Sinh viên thực Lê Thị Hoàng Như MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục đích nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sâu khoang Spodoptera litura 1.1.1 Đặc điểm hình thái sâu khoang 1.1.2 Tập tính sống quy luật phát sinh gây hại 1.1.3 Mức độ gây hại 1.2 Các biện pháp phòng trừ sâu khoang 1.2.1 Biện pháp canh tác, kỹ thuật 1.2.2 Biện pháp sinh học 1.3 Giới thiệu Nucleo Polyhedrosis Virus 1.3.1 Giới thiệu chung 1.3.2 Đặc điểm hình thái NPV 1.3.3 Cơ chế diệt sâu NPV 11 1.3.4 Hiệu lực diệt sâu NPV 13 1.3.5 Ưu điểm nhược điểm NPV 14 1.3.5.1 Ưu điểm chế phẩm NPV 14 1.3.5.1 Nhược điểm chế phẩm NPV 15 1.4 Các nghiên cứu sử dụng NPV để trừ sâu khoang 15 1.4.1 Các nghiên cứu nước 15 1.4.2 Các nghiên cứu nước 17 1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sản xuất chế phẩm NPV 18 1.5.1 Nồng độ lây nhiễm 18 1.5.2 Tuổi sâu 19 1.5.3 Thời gian thu hoạch sâu chết 19 1.6 Quy trình sản xuất chế phẩm NPV 20 1.7 Các sản phẩm NPV thị trường 22 CHƯƠNG II 23 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Vật liệu dụng cụ nghiên cứu 23 2.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 23 2.1.2 Vật liệu 23 2.1.3 Dụng cụ hóa chất thí nghiệm 23 2.1.3.1 Hóa chất 23 2.1.3.2 Dụng cụ 23 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Ảnh hưởng tuổi sâu nồng độ lây nhiễm đến sản lượng NPV 24 2.2.1.1 Chuẩn bị dịch huyền phù NPV 25 2.2.1.2 Chuẩn bị nguồn sâu ký chủ 26 2.2.1.3 Các nghiệm thức bố trí 28 2.2.2 Ảnh hưởng dịch thô dịch ly tâm sử dụng lây nhiễm đến nhân lên virus thể sâu 30 2.2.2.1 Chuẩn bị nguồn sâu ký chủ 31 2.2.2.2 Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí 33 2.2.3 Ảnh hướng thời gian lây nhiễm sâu đến sản lượng NPV 35 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 36 CHƯƠNG III 37 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Ảnh hưởng tuổi sâu nồng độ lây nhiễm đến sản lượng NPV 37 3.1.1 Đánh giá hiệu lực diệt sâu (%) nồng độ sâu ngày tuổi, ngày tuổi 11 ngày tuổi 37 3.1.2 Đánh giá sản lượng NPV thu tổng số sâu chết độ tuổi nồng độ lây nhiễm 39 3.2 Ảnh hưởng dịch thô dịch ly tâm sử dụng lây nhiễm đến nhân lên virus thể sâu 40 3.2.1 Đánh giá hiệu lực diệt sâu (%) dịch thô dịch ly tâm 40 3.2.2 Khối lượng sâu chết (g/sâu) công thức dịch thô dịch ly tâm 42 3.2.3 Tổng vi sinh vật hiếu khí có thức ăn sau nhiễm 01 ngày 43 3.2.4 Đánh giá sản lượng virus có sâu chết (PIB/sâu chết) công thức dịch thô dịch ly tâm 44 3.3 Ảnh hướng thời gian lây nhiễm sâu đến sản lượng NPV 43 3.3.1 Đánh giá hiệu lực diệt sâu (%) công thức sau 6h, 12h, 24h, 48h, 96h lây nhiễm 43 3.3.2 Khối lượng sâu chết (g) sản lượng virus (PIB/sâu chết) công thức sau 6h, 12h, 24h, 48h, 96h lây nhiễm………………………………………………………… 46 CHƯƠNG IV 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 4.1 Kết luận 47 4.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 Tài liệu Tiếng Việt 48 Tài liệu Tiếng Anh 48 Tài liệu Internet 56 PHỤ LỤC 57 DANH MỤC HÌNH ẢNH 57 Công thức – Dịch thô 57 Công thức – Dịch ly tâm 58 Công thức – Đối chứng 58 Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí 58 Sâu chết công thức ảnh hưởng thời gian………………………………… … 62 PHỤ LỤC 63 SỐ LIỆU THÔ 63 Ảnh hưởng tuổi sâu nồng độ lây nhiễm 63 1.1 Hiệu lực diệt sâu…………………………………………….……………….…… 63 1.2 Sản lượng virus thu tổng số sâu chết…………………………………….67 Ảnh hưởng dịch thời gian lây nhiễm 68 2.1 Số sâu chết 68 2.2 Khối lượng sâu công thức 71 2.3 Sản lượng virus công thức 72 Ảnh hưởng dịch ly tâm dịch thô 75 3.1 Số sâu chết công thức dịch thô dịch ly tâm 75 3.2 Khối lượng sâu chết công thức dịch thô dịch ly tâm 76 3.3 Sản lượng virus công thức dịch thô dịch ly tâm 77 3.4 Định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí cơng thức dịch thơ dịch ly tâm 77 PHỤ LỤC 78 XỬ LÝ SỐ LIỆU 78 Hiệu lực diệt sâu sau ngày lây nhiễm nồng độ sâu 7, 9, 11 ngày tuổi 78 Sản lượng NPV thu tổng số sâu chết độ tuổi nồng độ lây nhiễm 80 Hiệu lực diệt sâu (%) dịch thô dịch ly tâm 801 Khối lượng (g) sâu chết công thức dịch thô dịch ly tâm 86 Sản lượng virus (PIB/sâu chết) công thức dịch thô dịch ly tâm 87 Tổng vi sinh vật hiếu khí sau nhiễm ngày 87 Hiệu lực diệt sâu công thức sau 6h, 12h, 24h, 48h, 96h 889 Khối lượng (g) sâu chết công thức sau 6h, 12h, 24h, 48h, 96h 90 Sản lượng virus (PIB/sâu chết) công thức sau 6h, 12h, 24h, 48h, 96h 912 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT NPV: Nucleopolyhedrosis virus PIB: Polyhedral inclusion body SL: Spodoptera litura CT: Công thức ĐC: Đối chứng LT: Ly tâm CLT: Chưa ly tâm DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Spodoptera litura Hình 1.2 Vịng đời sâu khoang Hình 1.3 Cấu tạo Nucleo Polyhedrosis Virus Hình 1.4 Cơ chế diệt sâu virus NPV vào trùng 12 Hình 1.5 Chu trình sống virus trùng 12 Hình 1.6 Biểu sâu chết NPV 13 Hình 1.7 Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm virus trừ sâu 20 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng tuổi sâu nồng độ lây nhiễm đến sản lượng NPV 24 Hình 2.2 Sơ đồ bước tinh dịch NPV 25 Hình 2.3 Nguồn sâu làm thí nghiệm 26 Hình 2.4 Thức ăn nhân tạo 27 Hình 2.5 Quy trình ni sâu phịng thí nghiệm 27 Hình 2.6 Bố trí thí nghiệm 28 Hình 2.7 Quy trình tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng dịch thơ dịch ly tâm sử dụng lây nhiễm đến nhân lên virus 30 Hình 2.8 Quy trình ni sâu phịng thí nghiệm 31 Hình 2.9 Sâu tuổi 32 Hình 2.10 (A) CT1-Dịch thô; (B) CT2-Dịch ly tâm; (C) CT3-Đối chứng 33 Hình 2.11 Quy trình định lượng vi sinh vật hiếu khí 34 Hình 2.12 Sơ đồ quy trình tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thời gian lây nhiễm sâu đến sản lượng NPV 35 Hình 3.1 Biểu đồ thể hiệu lực diệt sâu (%) công thức dịch thô, dịch ly tâm 42 Hình 3.2 Biểu đồ thể hiệu lực diệt sâu (%) công thức 6h, 12h, 24h, 48h, 96h 45 Đánh giá sản lượng NPV thu tổng số sâu chết độ tuổi nồng độ lây nhiễm ‘SAN LUONG’ The GLM Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Model 0.97758519 0.12219815 18 0.05406667 0.00300370 Error Corrected Total Squares 26 Coeff Var Root MSE 0.947592 0.526269 0.054806 DF F Value Pr > F 40.68 F A 0.59249630 0.29624815 98.63