Tối ưu hóa quá trình trích ly các hợp chất có hoạt tính sinh học trong trái lêkima pouteria campechina theo phương pháp bề mặt đáp ứng

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TỐI ƯU HĨA Q TRÌNH TRÍCH LY CÁC HỢP CHẤT CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG TRÁI LÊKIMA (Pouteria campechina) THEO PHƯƠNG PHÁP BỀ MẶT ĐÁP ỨNG NGUYỄN THỊ MỸ LINH AN GIANG, 7-2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TỐI ƯU HĨA Q TRÌNH TRÍCH LY CÁC HỢP CHẤT CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG TRÁI LÊKIMA (Pouteria campechina) THEO PHƯƠNG PHÁP BỀ MẶT ĐÁP ỨNG NGUYỄN THỊ MỸ LINH DTP163696 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS.TRẦN XUÂN HIỂN AN GIANG, 7-2020 Chun đề “Tối ưu hóa q trình trích ly hợp chất có hoạt tính sinh học trái lê-ki-ma theo phương pháp bề mặt đáp ứng”, sinh viên Nguyễn Thị Mỹ Linh thực hướng dẫn ThS.Trần Xuân Hiển Tác giả trình báo cáo kết nghiên cứu vào ngày 10 tháng năm 2020 Phản biện Phản biện (Ký tên) (Ký tên) Cán hướng dẫn (Ký tên) ThS.Trần Xuân Hiển i LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình học tập nghiên cứu thực chuyên đề tốt nghiệp nhận hướng dẫn giúp đỡ tận tình q thầy cơ, anh chị bạn Với lịng biết ơn tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến: ThS.Trần Xuân Hiển – giáo viên hướng dẫn tận tình hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm quý báu thầy giúp tơi suốt q trình nghiên cứu thực chuyên đề tốt nghiệp tốt Cảm ơn thầy cô Bộ môn Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học An Giang truyền đạt cho kinh nghiệm, kiến thức suốt trình học tập nghiên cứu Chân thành cảm ơn cán khu thí nghiệm tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho nghiên cứu phịng thí nghiệm Cố vấn học tập ThS Trịnh Thanh Duy tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập trường Cảm ơn bạn lớp DH17TP trao đổi thảo luận kết thu giúp tơi hồn thành chun đề tốt nghiệp tốt Xin gửi lời cảm tạ sâu sắc đến ba mẹ anh chị động viên giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho an tâm thực chuyên đề tốt nghiệp Trân trọng cảm ơn!!! An Giang, ngày 10 tháng năm 2020 Sinh viên thực Nguyễn Thị Mỹ Linh ii TÓM TẮT Trái lê-ki-ma loại trái có giá trị kinh tế cao nguồn tốt chất xơ, carbohydrates, β-carotene, protein, khoáng chất, phenolics niacin (vitamin B3), thành phần chống oxy hóa cho da, hoạt động chống viêm, kháng khuẩn kháng nấm, cần thiết cho hoạt động sống thể, giúp tăng thị lực Việc nghiên cứu trích ly hợp chất thịt trái quan tâm Vì trái có nhiều ưu điểm, nên bột lê-ki-ma có giá trị cao ngành cơng nghiệp thực phẩm Điều địi hỏi q trình trích ly bột lê-ki-ma phải sử dụng đến phương pháp đem lại hiểu cao Với mục đích đề tài đạt hiệu suất thu hồi tối đa với hoạt chất chống oxy hóa, đồng thời sản phẩm tạo thành đạt giá trị hoạt tính sinh học carotenoid, tannin, hợp chất chống oxy hóa flavonoid, polyphenol khả bắt gốc tự DPPH trái lê-ki-ma tốt Đề tài tiến hành khảo sát thông số ảnh hưởng đến q trình trích ly nồng độ ethanol, tỷ lệ ngun liệu/dung mơi,nhiệt độ thời gian trích ly Qua nghiên cứu “Tối ưu hóa q trình trích ly trái lê-ki-ma theo phương pháp bề mặt đáp ứng”, kết thu nhận với nồng độ ethanol 70,2%, tỷ lệ nguyên liệu/ethanol 1/702 g/ml, nhiệt độ 50,1oC , thời gian 45,1 phút Cụ thể, hiệu suất thu hồi đạt 95,48%, hàm lượng carotenoid 161,043 µg/g, hàm lượng tannin 73,82 mg/L, hàm lượng flavonoid tổng 7,68 mgQE/g, hàm lượng polyphenol tổng 11,34 mgGAE/g khả loại gốc tự DPPH dịch lê-ki-ma trích ly 98,53 % iii LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu nghiên cứu có xuất sứ rõ ràng An Giang, ngày 10 tháng năm 2020 Sinh viên thực Nguyễn Thị Mỹ Linh iv MỤC LỤC Trang chấp nhận hồi đồng i Lời cảm tạ ii Tóm tắt iii Lời cam kết iv Mục lục v Danh sách bảng ix Danh sách hình x Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt xii CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Tính cấp thiết đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan nguyên liệu 2.1.1 Nguyên liệu lê-ki-ma 2.1.1.1Giới thiệu lê-ki-ma phân bố 2.1.1.2 Mô tả thực vật 2.1.1.3 Thành phần hóa học 2.1.1.4 Tác dụng đôi với sức khỏe 2.1.1.5 Các hợp chất có hoạt chất sinh học lê-ki-ma 2.2 Ethanol 11 2.3 Tổng quan q trình trích ly 12 2.3.1 Tổng quan trình chà 12 2.3.1.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chà 12 2.3.1.2 Biến đổi nguyên liệu 12 2.4 Tổng quan q trình trích ly 12 v 2.4.1 Bản chất q trình trích ly 12 2.4.2 Đặc điểm q trình trích ly 13 2.4.3 Phương pháp trích ly 13 2.4.4 Những biến đổi nguyên liệu sau trình trích ly 14 2.4.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly 14 2.5 Một số nghiên cứu trước 15 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Phương tiện nghiên cứu 17 3.1.1 Địa điểm thời gian thực 17 3.1.2 Nguyên liệu 17 3.1.3 Hóa chất sử dụng 17 3.1.4 Thiết bị dụng cụ sử dụng 17 3.2 Phương pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Chuẩn bị dịch lê-ki-ma 18 3.2.1.1 Quy trình trích ly dịch lê-ki-ma 18 3.2.1.2 Thuyết minh quy trình 18 3.2.2 Nội dung nghiên cứu 19 3.2.2.1 Thí nghiệm 1:Khảo sát ảnh hưởng nồng độ ethanol đến tính chất 19 3.2.2.2 Thí nghiệm 2:Khảo sát ảnh hưởng tyr lệ đến tính chất 20 3.2.2.3 Thí nghiệm 3:Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến tính chất 21 3.2.2.4: Thí nghiệm 4:Khảo sát ảnh hưởng thời gian đến tính chất 21 3.2.2.5 Thí nghiệm 5:Tối ưu hóa yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng dịch lêki-ma theo phương phá bề mặt đáp ứng 22 3.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Ảnh hưởng nồng độ trích ly 25 4.1.1 Ảnh hưởng nồng độ trích ly đến hiệu suất thu hồi 25 4.1.2 Ảnh hưởng nồng độ trích ly đến TPC TFC 25 4.1.3 Ảnh hưởng nồng độ trích ly đến DPPH 26 vi 4.1.4 Ảnh hưởng nồng độ trích ly đến tannin 27 4.1.5 Ảnh hưởng nồng độ trích ly đến carotene 27 4.2 Ảnh hưởng tỷ lệ ngun liệu/dung mơi trích ly 28 4.2.1 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến hiệu suất thu hồi 28 4.2.2 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đếnTPC TFC 28 4.2.3 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến DPPH 29 4.2.4 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến tannin 30 4.2.5 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến carotene 30 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly 31 4.3.1 Ảnh hưởng nhiệt dộ trích ly đến hiệu suất thu hồi 31 4.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến TPC TFC 32 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến DPPH 32 4.3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến tannin 33 4.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến carotene 33 4.4 Ảnh hưởng thời gian trích ly 34 4.4.1 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến hiệu suất thu hồi 34 4.4.2 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến TPC TFC 35 4.4.3 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến DPPH 35 4.4.4 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến tannin 36 4.4.5 Ảnh hưởng thời gian trích ly đến carotene 36 4.5 Tối ưu hóa q trình trích ly paste lê-ki-ma 37 4.5.1 Thiết lậ mơ hình 37 4.5.2 Tối ưu hóa q trình trích ly đến hiệu suất thu hồi 39 4.5.3 Tối ưu hóa trình trích ly đến hàm lượng TPC 40 4.5.4 Tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng TFC 42 4.5.5 Tối ưu hóa q trình trích ly đến DPPH 44 4.5.6 Tối ưu hóa q trình trích ly đến tannin 46 4.5.7 Tối ưu hóa trình trích ly đến carotene 48 4.5.8 Tối ưu hóa q trình trích ly đến tất tiêu phân tích 49 vii Chương KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Khuyến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ CHƯƠNG pc1 viii PHỤ CHƯƠNG B: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VÀ THU THẬP SỐ LIỆU 1.1 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HIỆU SUẤT THU HỒI Hiệu suất thu hồi: Là tỉ lệ % khối lượng dịch lọc khối lượng hỗn hợp (puree nước cất) ban đầu H(%) = (𝑚 /𝑚0) x 100 Trong đó: m: Khối lượng dịch lọc thu sau lọc (g) m0: Khối lượng mẫu ban đầu (g) 1.2 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CAROTENENOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP AOAC 941.15 Hóa chất : Acetone, Hexan, MgCO3 Cân g mẫu cho thêm vào 20 ml acetone, 30 ml hexan 0,1 g MgCO3 Để lắng hỗn hợp, lấy phần dung dịch phía vào bình chiết 250 ml Phần cặn tiếp tục trích ly 12,5 ml hexan 12,5 ml acetone Kết hợp dịch trích thu cho vào bình chiết 250 ml Thêm khoảng 100 ml nước cất vào bình chiết, lắc đều, để yên cho phân lớp (bước nhằm loại bỏ acetone hỗn hợp, acetone hòa tan vào pha nước, nằm phía bình chiết, xả bỏ lớp dưới) Rửa lặp lại lần Thu lớp hexan (lớp bình chiết) vào bình định mức 50 ml, thêm 4,5 ml acetone, sau định mức đến vạch hexan 1.3 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG TANNIN THEO PHƯƠNG PHÁP FOLIN-DENIS (zlaitonjam et al.,2013) Nguyên tắc: Dựa vào phản ứng oxy hóa hợp chất tannin với thuốc thử Foli-Ciocalteau tạo phức màu xanh thẫm Cường độ màu tỷ lệ thuận với hàm lượng tannin có mẫu đo bước sóng 700nm Acid tannic chọn làm chất chuẩn để tính tốn hàm lượng tannin có mẫu pc4 Tiến hành: Hút 0,5 mL dịch trích 0,5 mL nước cất cho vào ống nghiệm Sau cho tiếp 0,5 mL thuốc thử Folin-Denis mL dung dịch Na2CO3 20% lắc đều, làm ấm bể nước sôi phút làm nguội nhiệt độ phòng Đo độ hấp thu phức màu bước sóng 700 nm Hàm lượng tannin tính theo đường chuẩn acid tannic 1.5 PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TPC BẰNG PHƯƠNG PHÁP FOLIN-CIOCALTEU (Jiang et al., 2013) Nguyên lý phương pháp: Dựa phản ứng khử hóa học thuốc thử Folin-Ciocalteu có chứa vonfram molypden với diện hợp chất phenol Sản phẩm khử có màu xanh với quang phổ hấp thụ ánh sáng cực đại bước sóng 765 nm Acid gallic sử dụng làm chất chuẩn để xây dựng đường chuẩn Xây dựng đường chuẩn acid gallic: Pha dãy dung dịch acid gallic chuẩn có nồng độ từ 0-0,225 mg/mL Tiến hành đo độ hấp thụ bước sóng 765 nm máy quang phổ UV-VIS Thí nghiệm lặp lại lần lấy kết trung bình vẽ đồ thị tương quan nồng độ acid gallic độ hấp thụ A để xác định phương trình đường chuẩn acid gallic Xác định TPC dịch chiết mẫu Hút xác pipetman 50 µL dịch mẫu, them 200 µL thuốc thử Folin-Ciocalteu 1N, 500 µL dung dịch Na2CO3 7,5% 1750 µL nuớc cất Hỗn hợp đựợc ủ điều kiện bóng tối vịng để phản ứng xảy hồn toàn Đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 765 nm Kết tính tốn hàm lượng polyphenol mẫu phân tích dựa vào phương trình đường chuẩn từ Hình Kết biểu diễn theo số mg acid gallic (GAE)/g 1.5 PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TFC (Meda et al., 2005; Ozsoy et al., 2008) Hàm lượng flavonoid tổng số mẫu phân tích xác định theo phương pháp quang phổ chủ yếu dựa vào hình thành phức nhôm-flavonoid pc5 với dung dịch AlCl3 Quercetin sử dụng chất chuẩn để xây dựng đường chuẩn thực cách đo độ hấp thu bước sóng hấp thụ tối đa quercetin 415 nm Xây dựng đường chuẩn quercetin Pha dãy dung dịch quercetin chuẩn có nồng độ từ 0-0,225 mg/mL Đo độ hấp thụ bước sóng 415 nm máy quang phổ UV-VIS.Thí nghiệm lặp lại lần lấy kết độ hấp thụ trung bình vẽ đồ thị tương quan nồng độ quercetin độ hấp thụ A Xác định TFC dịch chiết mẫu Hút xác pipetman 1500 µL nước cất, thêm 75 µL NaNO2 5% (w/v), 250 µL mẫu cần phân tích 150 µL AlCl3 10% (w/v).Hỗn hợp ủ điều kiện bóng tối vịng 30 phút để phản ứng xảy hoàn toàn Tiến hành đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 415 nm Kết tính tốn hàm lựợng flavonoid mẫu phân tích dựa vào phương trình đường chuẩn quercetin Kết biểu diễn theo số mg quercetin (QE)/g 1.6 PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG LOẠI GỐC TỰ DO DPPH (Liu et al., 2011; Singh et al., 2011) DPPH tan methanol có màu tím đậm có bước sóng hấp thu 517 nm Khi tiếp xúc với chất chống oxy hóa hợp chất phenol, DPPH nhận hydro bị khử.Phản ứng xảy làm cho số lượng gốc tự DPPH giảm làm màu tím dung dịch DPPH methanol để chuyển sang màu vàng sáng Khả loại gốc tự DPPH xác định thông qua giảm độ hấp thụ bước sóng 517 nm Xác định phần trăm loại gốc tự DPPH mẫu Hút 800 µL dịch chiết mẫu cho vào ống nghiệm.Thêm 800 µL dung dịch DPPH 0,008%, lắc Sau 30 phút đo độ hấp thụ bước sóng 517 nm Tính kết Phần trăm loại DPPH tính theo cơng thức: Trong đó: % SC: phần trăm loại DPPH Ac: độ hấp thụ dung dịch mẫu thử Ae: độ hấp thụ dung dịch mẫu thí nghiệm pc6 PHỤ CHƯƠNG C: CÁC KẾT QUẢ THỐNG KÊ Kết thống kê ảnh hưởng nồng độ đến hiệu suất thu hồi hợp chất sinh học tái lê-ki-ma ANOVA Table for HSTH by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 1989,53 397,906 1027,52 Within groups 60,411 156 ,38725 Total (Corr.) 2049,94 161 Multiple Range Tests for HSTH by NONG DO Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 75,0374 X 50 27 78,2504 X 60 27 80,1941 X 70 27 83,9789 X 90 27 84,243 X 80 27 84,2456 ANOVA Table for TPC by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 68,0292 13,6058 5454,47 Within groups ,389132 156 ,00249444 Total (Corr.) 68,4183 161 Multiple Range Tests for TPC by NONG DO Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 8,38459 X 50 27 8,77767 X 60 27 9,46533 X 90 27 9,98493 XX 70 27 10,0103 X 80 27 10,0267 ANOVA Table for TFC by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 31,8964 6,37928 8692,44 Within groups ,114487 156 ,000733889 Total (Corr.) 32,0109 161 Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 5,45237 X 50 27 5,66907 X 60 27 5,99007 X 90 27 6,48267 X 70 27 6,55589 X 80 27 6,56033 ANOVA Table for DPPH by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 2059,17 411,834 175,53 Within groups 366,015 156 2,34625 Total (Corr.) 2425,19 161 Multiple Range Tests for DPPH by NONG DO Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 67,9618 X 50 27 70,2129 X 60 27 73,3278 X 90 27 76,8273 X 80 27 76,8644 X 70 27 77,0536 pc7 P-Value , P-Value , P-Value , P-Value , ANOVA Table for TANNIN by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 3600,24 720,048 Within groups 534,595 156 3,42689 Total (Corr.) 4134,84 161 Multiple Range Tests for TANNIN by NONG DO Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 54,0133 X 50 27 57,6805 X 60 27 60,7579 X 70 27 65,9741 X 90 27 65,9907 X 80 27 66,2353 ANOVA Table for CAROTENE by NONG DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 12975,5 2595,09 Within groups 390,051 156 2,50033 Total (Corr.) 13365,5 161 Multiple Range Tests for CAROTENE by NONG DO Method: 95,0 percent LSD NONG DO Count Mean Homogeneous Groups X 40 27 126,892 X 50 27 131,563 X 60 27 141,148 X 90 27 148,366 XX 70 27 148,933 X 80 27 149,679 F-Ratio 210,12 P-Value , F-Ratio 1037,90 P-Value , Kết thống kê ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dethanol đến hiệu suất thu hồi hợp chất sinh học tái lê-ki-ma ANOVA Table for B.HSTH by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 741,961 148,392 Within groups 70,6951 156 ,453174 Total (Corr.) 812,657 161 Multiple Range Tests for B.HSTH by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 83,3283 X 1/6 27 84,925 X 1/7 27 88,3961 X 1/10 27 88,5006 X 1/9 27 88,6172 X 1/8 27 88,7072 ANOVA Table for B.TPC by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 1,16467 ,232933 Within groups ,278973 156 ,00178829 Total (Corr.) 1,44364 161 Multiple Range Tests for B.TPC by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 10,0411 X 1/6 27 10,0953 X 1/10 27 10,2203 X 1/9 27 10,2223 X 1/8 27 10,2357 X 1/7 27 10,281 pc8 F-Ratio 327,45 P-Value , F-Ratio 130,25 P-Value , ANOVA Table for B.TFC by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 1,77172 ,354345 Within groups ,152086 156 ,000974911 Total (Corr.) 1,92381 161 Multiple Range Tests for B.TFC by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 6,53137 X 1/6 27 6,72326 X 1/10 27 6,79478 X 1/9 27 6,79711 X 1/7 27 6,82596 X 1/8 27 6,83437 ANOVA Table for B.DPPH by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 336,19 67,2379 Within groups 775,696 156 4,97241 Total (Corr.) 1111,89 161 Multiple Range Tests for B.DPPH by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 85,3406 X 1/6 27 87,5443 X 1/9 27 88,7664 X 1/10 27 88,7774 X 1/7 27 89,3911 X 1/8 27 89,5327 ANOVA Table for B.TANNIN by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 233,806 46,7612 Within groups 509,38 156 3,26526 Total (Corr.) 743,187 161 Multiple Range Tests for B.TANNIN by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 65,7537 X 1/6 27 66,816 X 1/10 27 68,3281 X 1/9 27 68,3655 X 1/7 27 68,7811 X 1/8 27 69,2058 ANOVA Table for B.CAROTENE by TY LE Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 848,718 169,744 Within groups 797,241 156 5,11052 Total (Corr.) 1645,96 161 Multiple Range Tests for B.CAROTENE by TY LE Method: 95,0 percent LSD TY LE Count Mean Homogeneous Groups X 1/5 27 148,781 X 1/6 27 151,514 X 1/9 27 154,084 X 1/10 27 154,114 XX 1/7 27 154,788 X 1/8 27 155,428 pc9 F-Ratio 363,46 P-Value , F-Ratio 13,52 P-Value , F-Ratio 14,32 P-Value , F-Ratio 33,21 P-Value , Kết thống kê ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thu hồi hợp chất sinh học tái lê-ki-ma ANOVA Table for C.HSTH by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 447,131 89,4262 Within groups 86,5531 156 ,554827 Total (Corr.) 533,684 161 Multiple Range Tests for C.HSTH by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 87,5568 X 40 27 89,0101 X 45 27 90,9101 X 60 27 90,9571 X 55 27 91,0094 X 50 27 92,7683 ANOVA Table for C.TPC by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 6,22657 1,24531 Within groups ,524141 156 ,00335988 Total (Corr.) 6,75071 161 Multiple Range Tests for C.TPC by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 10,2641 X 40 27 10,4437 X 45 27 10,4814 X 60 27 10,6662 X 55 27 10,6662 X 50 27 10,8779 ANOVA Table for C.TFC by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 3,50096 ,700193 Within groups ,196003 156 ,00125643 Total (Corr.) 3,69697 161 Multiple Range Tests for C.TFC by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 6,83385 X 45 27 7,05859 X 40 27 7,06304 X 60 27 7,1393 X 50 27 7,26419 X 55 27 7,26537 F-Ratio 161,18 P-Value , F-Ratio 370,64 P-Value , F-Ratio 557,29 P-Value , ANOVA Table for C.DPPH by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 177.994 35.5988 4.71 Within groups 1178.41 156 7.5539 Total (Corr.) 1356.4 161 Multiple Range Tests for C.DPPH by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 94,6079 X 40 27 94,6597 X 45 27 94,7218 X 60 27 96,2608 X 55 27 96,8142 X 50 27 97,0439 pc10 P-Value 0.0005 ANOVA Table for C.TANNIN by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 141,275 28,2549 Within groups 737,184 156 4,72554 Total (Corr.) 878,458 161 Multiple Range Tests for C.TANNIN by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 70,026 X 40 27 71,328 XX 45 27 72,2784 X 50 27 72,509 X 60 27 72,5426 X 55 27 72,585 ANOVA Table for C.CAROTENE by NHIET DO Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 459,67 91,934 Within groups 693,768 156 4,44723 Total (Corr.) 1153,44 161 Multiple Range Tests for C.CAROTENE by NHIET DO Method: 95,0 percent LSD NHIET DO Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 153,055 X 40 27 153,917 X 45 27 155,604 X 60 27 157,089 X 50 27 157,188 X 55 27 157,342 F-Ratio 5,98 P-Value , F-Ratio 20,67 P-Value , Kết thống kê ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thu hồi hợp chất sinh học tái lê-ki-ma ANOVA Table for D.HSTH by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 189,61 37,9221 Within groups 73,5927 156 ,471748 Total (Corr.) 263,203 161 Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 92,8937 X 40 27 93,3137 X 60 27 95,147 XX 55 27 95,3503 XX 50 27 95,4059 X 45 27 95,5726 ANOVA Table for D.TPC by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 5,77211 1,15442 Within groups ,527314 156 ,00338022 Total (Corr.) 6,29943 161 Multiple Range Tests for D.TPC by THOI GIAN Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 10,8681 X 40 27 11,0156 X 60 27 11,2697 X 55 27 11,2851 X 45 27 11,3586 X 50 27 11,3802 pc11 F-Ratio 80,39 P-Value , F-Ratio 341,52 P-Value , ANOVA Table for D.TFC by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 2,77065 ,554129 Within groups ,319101 156 ,00204552 Total (Corr.) 3,08975 161 Multiple Range Tests for D.TFC by THOI GIAN Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 7,34126 X 40 27 7,56696 X 60 27 7,69293 X 55 27 7,69426 X 50 27 7,69467 X 45 27 7,6967 F-Ratio 270,90 ANOVA Table for D.DPPH by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 166.814 33.3629 4.76 Within groups 1092.4 156 7.00256 Total (Corr.) 1259.21 161 Multiple Range Tests for D.DPPH by THOI GIAN Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 95,9207 X 40 27 96,5806 X 60 27 98,0167 X 55 27 98,0294 X 50 27 98,5734 X 45 27 98,6082 ANOVA Table for D.TANNIN by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 115.123 23.0246 2.87 Within groups 1249.62 156 8.0104 Total (Corr.) 1364.74 161 ultiple Range Tests for D.TANNIN by THOI GIAN Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 71,8775 XX 40 27 72,0938 XX 60 27 73,5527 XX 55 27 73,5642 X 45 27 73,8986 X 50 27 73,9469 P-Value , P-Value 0.0004 P-Value 0.0164 ANOVA Table for D.CAROTENE by THOI GIAN Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 552,364 110,473 Within groups 618,019 156 3,96166 Total (Corr.) 1170,38 161 Multiple Range Tests for D.CAROTENE by THOI GIAN Method: 95,0 percent LSD THOI GIAN Count Mean Homogeneous Groups X 35 27 156,51 X 40 27 157,506 X 55 27 160,59 X 60 27 160,592 X 50 27 161,102 X 45 27 161,121 pc12 F-Ratio 27,89 P-Value , Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hiệu suất thu hồi Analysis of Variance for HSTH Source Sum of Squares Df A:NONG DO 3.89782 B:TY LE 1.86484 C:NHIET DO 0.426133 D:THOI GIAN 0.905593 AA 14.519 AB 0.004489 AC 0.551306 AD 0.962361 BB 16.829 BC 0.0970323 BD 0.605284 CC 5.26641 CD 0.00000625 DD 5.91566 Lack-of-fit 0.14437 10 Pure error 0.00005 Total (corr.) 31.1041 25 R-squared = 99.5357 percent Regression coeffs for HSTH Coefficient Estimate constant -361.725 A:NONG DO 1.31053 B:TY LE 347.529 C:NHIET DO 2.21779 D:THOI GIAN 2.45135 AA -0.00912042 AB -0.01675 AC -0.0037125 AD 0.004905 BB -98.1917 BC 0.15575 BD -0.389 CC -0.0219717 CD 0.000025 DD -0.0232867 Optimize Response Goal: maximize HSTH Optimum value = 95.5541 Factor Low High Optimum NONG DO 50.0 90.0 72.3693 TY LE 1.5 1.9 1.71246 NHIET DO 40.0 60.0 50.4492 THOI GIAN 35.0 55.0 45.9739 Mean Square 3.89782 1.86484 0.426133 0.905593 14.519 0.004489 0.551306 0.962361 16.829 0.0970323 0.605284 5.26641 0.00000625 5.91566 0.014437 0.00005 F-Ratio 77956.32 37296.75 8522.67 18111.87 290380.81 89.78 11026.13 19247.22 336579.62 1940.65 12105.68 105328.18 0.13 118313.21 288.74 P-Value 0.0023 0.0033 0.0069 0.0047 0.0012 0.0669 0.0061 0.0046 0.0011 0.0144 0.0058 0.0020 0.7837 0.0019 0.0452 Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng polyphenol trích ly Analysis of Variance for TPC Source Sum of Squares A:NONG DO 0.04585 B:TY LE 0.015251 C:NHIET DO 0.017876 D:THOI GIAN 0.00352837 AA 0.288074 AB 0.00888306 AC 0.0516426 AD 0.101602 Df 1 1 1 1 Mean Square 0.04585 0.015251 0.017876 0.00352837 0.288074 0.00888306 0.0516426 0.101602 pc13 F-Ratio 22925.02 7625.52 8938.02 1764.19 144036.83 4441.53 25821.28 50800.78 P-Value 0.0042 0.0073 0.0067 0.0152 0.0017 0.0096 0.0040 0.0028 BB 0.220786 BC 0.0133981 BD 5.625E-7 CC 0.318551 CD 0.0442051 DD 0.129751 Lack-of-fit 0.00253875 Pure error 0.000002 Total (corr.) 0.744652 R-squared = 99.6588 percent Regression coeffs for TPC Coefficient Estimate constant -46.8843 A:NONG DO 0.0156396 B:TY LE 39.719 C:NHIET DO 0.659296 D:THOI GIAN 0.305737 AA -0.00128469 AB 0.0235625 AC 0.00113625 AD 0.00159375 BB -11.2469 BC -0.057875 BD 0.000375 CC -0.00540375 CD -0.0021025 DD -0.00344875 Optimize Response Goal: maximize TPC Optimum value = 11.3536 Factor Low High NONG DO 50.0 90.0 TY LE 1.5 1.9 NHIET DO 40.0 60.0 THOI GIAN 35.0 55.0 1 1 1 10 25 0.220786 0.0133981 5.625E-7 0.318551 0.0442051 0.129751 0.000253875 0.000002 110393.19 6699.03 0.28 159275.54 22102.53 64875.69 126.94 0.0019 0.0078 0.6896 0.0016 0.0043 0.0025 0.0680 Optimum 72.5361 1.71245 50.557 45.7699 Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng flavonoid trích ly Analysis of Variance for TFC Source Sum of Squares A:NONG DO 0.0468167 B:TY LE 0.0176042 C:NHIET DO 0.015606 D:THOI GIAN 0.00416067 AA 0.287187 AB 0.0081 AC 0.0529 AD 0.0961 BB 0.221974 BC 0.0111302 BD 0.00013225 CC 0.319977 CD 0.0410062 DD 0.134848 Lack-of-fit 0.00362258 Pure error 0.000002 Total (corr.) 0.737686 R-squared = 99.5087 percent Regression coeffs for TFC Coefficient Estimate constant -50.8911 A:NONG DO 0.0184958 Df 1 1 1 1 1 1 1 10 25 Mean Square 0.0468167 0.0176042 0.015606 0.00416067 0.287187 0.0081 0.0529 0.0961 0.221974 0.0111302 0.00013225 0.319977 0.0410062 0.134848 0.000362258 0.000002 pc14 F-Ratio 23408.33 8802.08 7803.00 2080.33 143593.37 4050.00 26450.00 48050.00 110987.00 5565.13 66.13 159988.64 20503.13 67424.09 181.13 P-Value 0.0042 0.0068 0.0072 0.0140 0.0017 0.0100 0.0039 0.0029 0.0019 0.0085 0.0779 0.0016 0.0044 0.0025 0.0570 B:TY LE 39.9342 C:NHIET DO 0.646983 D:THOI GIAN 0.321583 AA -0.00128271 AB 0.0225 AC 0.00115 AD 0.00155 BB -11.2771 BC -0.05275 BD -0.00575 CC -0.00541583 CD -0.002025 DD -0.00351583 Optimize Response Goal: maximize TFC Optimum value = 7.69176 Factor Low High NONG DO 50.0 90.0 TY LE 1.5 1.9 NHIET DO 40.0 60.0 THOI GIAN 35.0 55.0 Optimum 72.5393 1.71309 50.5308 45.7701 Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng DPPH trích ly Analysis of Variance for DPPH Source Sum of Squares A:NONG DO 3.90104 B:TY LE 1.86707 C:NHIET DO 0.424536 D:THOI GIAN 0.904817 AA 14.5204 AB 0.004356 AC 0.552049 AD 0.963342 BB 16.8304 BC 0.096721 BD 0.604506 CC 5.26721 CD 0.00000225 DD 5.91651 Total error 0.144911 Total (corr.) 31.11 R-squared = 99.5342 percent Regression coeffs for DPPH Coefficient Estimate constant -358.693 A:NONG DO 1.3102 B:TY LE 347.529 C:NHIET DO 2.21896 D:THOI GIAN 2.45138 AA -0.00912083 AB -0.0165 AC -0.003715 AD 0.0049075 BB -98.1958 BC 0.1555 BD -0.38875 CC -0.0219733 CD 0.000015 DD -0.0232883 Df 1 1 1 1 1 1 1 11 25 Mean Square 3.90104 1.86707 0.424536 0.904817 14.5204 0.004356 0.552049 0.963342 16.8304 0.096721 0.604506 5.26721 0.00000225 5.91651 0.0131737 pc15 F-Ratio 296.12 141.73 32.23 68.68 1102.22 0.33 41.91 73.13 1277.57 7.34 45.89 399.83 0.00 449.11 P-Value 0.0000 0.0000 0.0001 0.0000 0.0000 0.5768 0.0000 0.0000 0.0000 0.0203 0.0000 0.0000 0.9898 0.0000 Optimize Response Goal: maximize DPPH Optimum value = 98.6041 Factor Low High NONG DO 50.0 90.0 TY LE 1.5 1.9 NHIET DO 40.0 60.0 THOI GIAN 35.0 55.0 Optimum 72.3667 1.71244 50.4507 45.9833 Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng tannin trích ly Analysis of Variance for TANNIN Source Sum of Squares Df A:NONG DO 3.89782 B:TY LE 1.86484 C:NHIET DO 0.426134 D:THOI GIAN 0.905594 AA 14.519 AB 0.004489 AC 0.551306 AD 0.962361 BB 16.829 BC 0.0970322 BD 0.605284 CC 5.26641 CD 0.00000625 DD 5.91566 Lack-of-fit 0.14437 10 Pure error 0.00005 Total (corr.) 31.1041 25 R-squared = 99.5357 percent Regression coeffs for TANNIN Coefficient Estimate constant -383.383 A:NONG DO 1.31053 B:TY LE 347.529 C:NHIET DO 2.21779 D:THOI GIAN 2.45135 AA -0.00912042 AB -0.01675 AC -0.0037125 AD 0.004905 BB -98.1917 BC 0.15575 BD -0.389 CC -0.0219717 CD 0.000025 DD -0.0232867 Optimize Response Goal: maximize TANNIN Optimum value = 73.8961 Factor Low High Optimum NONG DO 50.0 90.0 72.371 TY LE 1.5 1.9 1.71238 NHIET DO 40.0 60.0 50.4506 THOI GIAN 35.0 55.0 45.9822 Mean Square 3.89782 1.86484 0.426134 0.905594 14.519 0.004489 0.551306 0.962361 16.829 0.0970322 0.605284 5.26641 0.00000625 5.91566 0.014437 0.00005 pc16 F-Ratio 77956.32 37296.75 8522.67 18111.87 290380.81 89.78 11026.13 19247.22 336579.62 1940.65 12105.68 105328.18 0.13 118313.21 288.74 P-Value 0.0023 0.0033 0.0069 0.0047 0.0012 0.0669 0.0061 0.0046 0.0011 0.0144 0.0058 0.0020 0.7837 0.0019 0.0452 Kết thống kê Thí nghiệm tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng carotene trích ly Analysis of Variance for CAROTENE Source Sum of Squares Df A:NONG DO 3.90104 B:TY LE 1.86707 C:NHIET DO 0.424536 D:THOI GIAN 0.904817 AA 14.5204 AB 0.004356 AC 0.552049 AD 0.963342 BB 16.8304 BC 0.096721 BD 0.604506 CC 5.26721 CD 0.00000225 DD 5.91651 Lack-of-fit 0.144861 10 Pure error 0.00005 Total (corr.) 31.11 25 Mean Square 3.90104 1.86707 0.424536 0.904817 14.5204 0.004356 0.552049 0.963342 16.8304 0.096721 0.604506 5.26721 0.00000225 5.91651 0.0144861 0.00005 F-Ratio 78020.82 37341.37 8490.72 18096.34 290407.36 87.12 11040.98 19266.85 336608.21 1934.42 12090.13 105344.17 0.05 118330.15 289.72 P-Value 0.0023 0.0033 0.0069 0.0047 0.0012 0.0679 0.0061 0.0046 0.0011 0.0145 0.0058 0.0020 0.8669 0.0019 0.0451 R-squared = 99.5342 percent Regression coeffs for CAROTENE Coefficient Estimate constant -296.183 A:NONG DO 1.3102 B:TY LE 347.529 C:NHIET DO 2.21896 D:THOI GIAN 2.45138 AA -0.00912083 AB -0.0165 AC -0.003715 AD 0.0049075 BB -98.1958 BC 0.1555 BD -0.38875 CC -0.0219733 CD 0.000015 DD -0.0232883 Optimize Response Goal: maximize CAROTENE Optimum value = 161.114 Factor NONG DO TY LE NHIET DO THOI GIAN Low 50.0 1.5 40.0 35.0 High 90.0 1.9 60.0 55.0 Optimum 72.369 1.71249 50.4513 45.9779 TỐI ƯU HĨA Q TRÌNH THỦY PHÂN ĐẾN TẤT CẢ CÁC CHỈ TIÊU PHÂN TÍCH Row CAROTENE 157.38 157.657 159.002 158.003 158.883 157.058 157.647 157.728 DPPH 94.87 95.147 96.492 95.493 96.373 94.548 95.137 95.218 HSTH 91.821 92.097 93.442 92.445 93.321 91.499 92.087 92.168 TANNIN 70.163 70.439 71.784 70.787 71.663 69.841 70.429 70.51 pc17 TFC 7.25 6.966 7.21 6.99 7.414 7.165 7.277 7.258 TPC 10.942 10.628 10.872 10.651 11.076 10.823 10.939 10.921 Desirability 0.268527 0.0 0.473591 0.180514 0.554617 0.196087 0.31432 0.31768 Desirability 0.259741 0.0 0.473421 0.156177 0.56147 0.171052 0.310873 0.31805 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 157.344 158.257 158.545 158.637 159.027 156.439 157.403 161.019 158.536 157.869 158.942 158.334 161.029 156.528 158.117 158.569 159.024 157.033 94.834 95.747 96.035 96.127 96.517 93.929 94.893 98.509 96.026 95.359 96.432 95.824 98.519 94.018 95.607 96.059 96.514 94.523 91.784 92.697 92.985 93.079 93.467 90.879 91.843 95.459 92.976 92.309 93.382 92.774 95.469 90.968 92.557 93.009 93.464 91.473 70.126 71.039 71.327 71.421 71.809 69.221 70.185 73.801 71.318 70.651 71.724 71.116 73.811 69.31 70.899 71.351 71.806 69.815 Optimize Desirability Optimum value = 1.0 Factor NONG DO TY LE NHIET DO THOI GIAN Low 50.0 1.5 40.0 35.0 High 90.0 1.9 60.0 55.0 Response CAROTENE DPPH HSTH TANNIN TFC TPC Optimum 161.043 98.5329 95.4829 73.8249 7.68404 11.346 Optimum 70.2 1.702 50.1 45.1 pc18 7.225 7.309 7.079 7.355 7.36 7.193 7.27 7.683 7.254 7.06 7.396 7.104 7.681 7.074 7.272 7.325 7.227 7.191 10.887 10.971 10.741 11.019 11.033 10.855 10.943 11.345 10.916 10.722 11.059 10.764 11.343 10.732 10.934 10.987 10.889 10.858 0.222645 0.42925 0.331461 0.504722 0.566696 0.0519216 0.264024 0.998809 0.429125 0.207013 0.566103 0.334872 0.998809 0.050582 0.387971 0.458934 0.483076 0.149509 0.241259 0.421806 0.321329 0.499792 0.561591 0.0 0.267014 0.998547 0.437672 0.233463 0.563097 0.319346 0.999069 0.0381611 0.384935 0.475959 0.486937 0.1745 ... Tối ưu hóa q trình trích ly đến hàm lượng TFC 42 4.5.5 Tối ưu hóa trình trích ly đến DPPH 44 4.5.6 Tối ưu hóa q trình trích ly đến tannin 46 4.5.7 Tối ưu hóa q trình trích ly. .. tách tối ưu hợp chất có hoạt tính sinh học trái lê-ki-ma theo phương pháp bề mặt đáp ứng 1.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Khảo sát ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến khả trích ly hoạt tính sinh học trái lê-ki-ma... lê-ki-ma Từ vấn đề trên, đề tài ? ?Tối ưu hóa q trình chiết tách hợp chất hoạt tính sinh học trái lê-ki-ma theo phương pháp bề mặt đáp ứng? ?? thực để tìm hoạt chất sinh học có lợi cho người 1.2 MỤC TIÊU