So sánh với các nghiên cứu trước cho thấy, kết quả nghiên cứu là phù hợp [15, 21] và điều này có thể giải thích, trong thời gian và nhiệt độ nghiên cứu chưa đủ để tác động mạn[r]
(1)THÔNG BÁO KHOA HỌC
ẢNH HƯỞNG CỦA QUÁ TRÌNH CHẾ BIẾN LÊN CHẤT LƯỢNG ĐỒ UỐNG GIÀU POLYPHENOL TỪ THÂN CÂY NGÔ
PROCESSING EFFECTS ON THE QUALITY OF POLYPHENOL-RICH BEVERAGES PREPARED FROM CORN STOVER
Lê Tuấn Anh1, Đặng Xuân Cường2, Vũ Ngọc Bội3 Ngày nhận bài: 25/03/2016; Ngày phản biện thông qua: 22/12/2016; Ngày duyệt đăng: 15/6/2017
TÓM TẮT
Mục tiêu nghiên cứu đánh giá trình chế biến đồ uống giàu polyphenol từ thân ngô Điểm cảm quan trung bình chung, hàm lượng polyphenol, hoạt tính (chống oxy hóa tổng, khử sắt bắt gốc tự DPPH) độ màu sử dụng để lựa chọn thông số phù hợp quy trình chế biến Đầu tiên, dịch chiết giàu polyphenol từ thân ngơ chuẩn bị Sau dịch chiết sử dụng để chế biến đồ uống giàu polyphenol thơng qua bước đồng hóa, đóng hộp, trùng bảo quản Đồ uống chuẩn bị từ thân ngơ có hàm lượng: saccharose 15%, acid citric 0,07%, carrageenan 0,04%, acid ascorbic 0,04% hàm lượng polyphenol 15 mg/250ml đồ uống Hoạt tính (chống oxy hóa tổng, khử sắt bắt gốc tự do DPPH) 250ml đồ uống giàu polyphenol từ thân ngô tương đương 54,9554±0,02 mg acid ascorbic, 157,2730±0,01 mg FeSO4 60,5±0,005% Độ màu polymer đồ uống 0,388.
Từ khóa: chống oxy hóa, đồ uống, hoạt tính, polyphenol, thân ngơ
ABSTRACT
The objective of the present study is to investigate the processing of polyphenol-rich beverages from corn stover A sensory score, total polyphenol content, antioxidant potentials and color values were used to select the appropriate parameters of the processing procedure The polyphenol-rich extract was fi rstly prepared from corn stover, then the extract was then used for the polyphenol-rich beverages production through several steps including homogenization, canning, pasteurization, and fi nally was stored The beverages prepared from corn stover had the contents of saccharose (w/v) of 15%, citric acid (w/v) of 0.07%, carrageenan (w/v) of 0.04%, acid ascorbic of 0.04% and total polyphenol content of 15 mg/250 ml beverages The total antioxidant, reducing power and DPPH radical scavenging assays of beverages prepared from corn stover were 54.9554 mg ascorbic acid equivalent/250 ml, 157.2730mg FeSO4 equivalent /250 ml and 60.5%, respectively The polymer color value was 0.388.
Keywords: antioxidant, beverages, activity, trunk corn, polyphenol
1 Công ty Cổ phần Fucoidan Việt Nam
2 Viện Nghiên cứu Ứng dụng Công nghệ Nha Trang 3 Khoa Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Nha Trang I ĐẶT VẤN ĐỀ
Polyphenol hợp chất chuyển hóa thứ cấp, đa dạng cấu trúc, giàu hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng nấm [3], chống
(2)chống ung thư polyphenol thực theo đường khác như: loại bỏ tác nhân gây ung thư [8], kìm hãm phát tín hiệu tế bào ung thư [11] thúc đẩy trình apoptosis [12] Khả chống oxy hóa polyphenol dựa chế phản ứng oxy hóa khử với gốc tự do, chúng có khả ngăn ngừa hỗ trợ điều trị 80 loại bệnh xuất người Do đó, sử dụng hoạt chất polyphenol chống oxy hóa để loại bỏ gốc tự do, giảm thiểu bệnh tật cho người thu hút nhiều quan tâm nghiên cứu ứng dụng thập kỷ gần Hiện nay, thị trường có nhiều loại đồ uống chứa polyphenol chống oxy hóa ngày phổ biến thị trường như: việt quất, xoài, dứa loại trà xanh, Thực tế cho thấy, trữ lượng thân ngô vô lớn Việt Nam, giá thành rẻ, sử dụng làm phân bón, thức ăn gia súc
hoặc bị đốt [2] hàm lượng polyphenol thân ngô chiếm 16% [18] Do đó, báo tập trung trình bày kết thử nghiệm sử dụng polyphenol từ thân ngô sản xuất đồ uống
II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1 Vật liệu nghiên cứu
Cây ngô lai số 01 (sweet corn) trồng Diên Khánh – Khánh Hòa niên vụ 2012 – 2014, thu hoạch sau 75 ngày trồng [2]
2 Phương pháp nghiên cứu
2.1 Chuẩn bị mẫu
Dịch chiết giàu polyphenol thu nhận từ trình chiết thân ngô với tỷ lệ nước/ nguyên liệu 60/1 (v/w), 32 nhiệt độ 600C, pH chiết lần theo phương pháp ngâm dầm [2]
2.2 Bố trí thí nghiệm
Hình Quy trình chuẩn bị đồ uống giàu polyphenol từ thân ngô
Các nguyên liệu nghiên cứu với tỷ lệ khác saccharose (6 - 18%), acid citric (0,05-0,09), acid citric (0,02-0,06), carrageenan (0,03-0,07), hàm lượng polyphenol (7,5-17,5) Đồng hóa nghiên cứu thời gian (1-5 phút) nhiệt độ (35-500C) Bố trí thí nghiệm theo phương pháp chạy yếu tố cố định yếu tố cịn lại, kết thí nghiệm sau kế thừa kết thí nghiệm trước Trình tự yếu tố trình bày trình tự thí nghiệm Các nguyên liệu hòa tan theo tỷ lệ khảo sát khác đồng hóa Sau tiến hành đóng chai, trùng, dán nhãn bảo quản Thời gian trùng nghiên cứu 17–19 phút Các hàm mục tiêu sử dụng để đánh giá điểm cảm quan trung bình chung (TBCQ), hàm lượng polyphenol, độ màu hoạt tính chống oxy hóa
2.3 Phương pháp phân tích
2.3.1 Phương pháp định lượng
Định lượng polyphenol theo Swanson cộng (2002) [20]
2.3.2 Phương pháp đánh giá hoạt tính, cảm quan độ màu sản phẩm
- Hoạt tính chống oxy hóa tổng (TA) theo phương pháp Prieto cộng (1999) [14]
- Hoạt tính khử Fe (RP) xác định theo phương pháp Zhu cộng (2002) [24]
- Hoạt tính bắt gốc tự DPPH theo phương pháp Blois cộng (1958) [6]
- Đánh giá cảm quan theo phương pháp cho điểm quy định TCVN 3215 – 79
- Độ màu xác định theo phương pháp Neslihan Alper cộng (2005) [13]
2.4 Phân tích liệu
(3)III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 1 Xác định tỷ lệ chất sử dụng sản xuất đồ uống
1.1 Xác định tỷ lệ saccharose bổ sung
Kết cho thấy TBCQ sản phẩm tăng tỷ lệ saccharose bổ sung tăng đạt cao tỷ lệ bổ sung 15% giảm tăng
tỷ lệ bổ sung lên 18% Khi bổ sung saccharose với tỷ lệ 6%, TBCQ sản phẩm đạt 12,72 điểm Khi bổ sung với tỷ lệ 9%, TBCQ đạt 13,68 điểm Khi bổ sung saccharose với tỷ lệ 15% TBCQ sản phẩm đạt cao 15,96 điểm, tỷ lệ bổ sung saccharose 18%, TBCQ sản phẩm giảm xuống cịn 11,84 điểm (Hình 2)
Hình Ảnh hưởng tỷ lệ saccharose bổ sung
đến TBCQ đồ uống Hình Ảnh hưởng tỷ lệ acid citric bổ sungđến TBCQ đồ uống
Phân tích ANOVA hồi quy cho thấy, TBCQ hàm lượng saccharose bổ sung tương tác với theo mơ hình phi tuyến bậc với TBCQ cực đại hàm lượng saccharose đạt 15% Điều cho thấy độ saccharose tăng theo nồng độ độ đồ uống cao không phù hợp tạo cảm vị khó uống cho người tiêu dùng Do vậy, tỷ lệ bổ sung saccharose 15% phù hợp
1.2 Xác định tỷ lệ acid citric bổ sung vào đồ uống
Tỷ lệ acid citric bổ sung vào đồ uống có ảnh hưởng đến TBCQ sản phẩm (Hình 3) Khi tỷ lệ acid citric bổ sung vào đồ uống với tỷ lệ thấp 0,05%, TBCQ thu 13,44 điểm Khi tăng tỷ lệ acid citric bổ sung lên 0,07%, TBCQ đạt cao 16,44 điểm Tỷ lệ acid citric bổ sung tăng lên 0,08% 0,09%, TBCQ giảm xuống tương ứng 12,88 điểm 11,48 điểm Kết cho thấy TBCQ sản phẩm tăng tỷ lệ acid citric bổ sung tăng đạt cao tỷ lệ bổ sung 0,07% giảm tiếp tục tăng tỷ lệ bổ sung (Hình 3) Phân tích ANOVA hồi quy cho thấy, tỷ lệ acid citric bổ sung tương tác với TBCQ theo mơ hình phi tuyến bậc với điểm cực đại tỷ lệ acid citric 0,07%
Eid cộng (2014) công bố tỷ lệ acid citric nước giải khát từ 0,05–0,37% [9] Do vậy, kết hoàn toàn phù hợp với lý thuyết thực nghiệm giới tỷ lệ bổ sung acid citric 0,07% chọn để bổ sung vào đồ uống giàu polyphenol
1.3 Xác định tỷ lệ carrageenan bổ sung thích hợp
Khi tỷ lệ carrageenan bổ sung tăng, độ sánh sản phẩm tăng lên (Hình 4) Khi tỷ lệ bổ sung carrageenan 0,03%, TBCQ đồ uống đạt 11,44 điểm Khi bổ sung carrageenan với tỷ lệ 0,04%, TBCQ đồ uống đạt 15,64 điểm
(4)Khi tiếp tục tăng tỷ lệ carrageenan bổ sung lên 0,05%, TBCQ đồ uống lại giảm xuống 11,32 điểm Khi tăng tỷ lệ carrageenan lên tới 0,06% 0,07%, TBCQ 11,12 điểm 10,84 điểm Kết cho thấy, TBCQ đồ uống tăng tỷ lệ carrageenan bổ sung tăng đạt cao tỷ lệ bổ sung 0,04% giảm tiếp tục tăng tỷ lệ bổ sung Thomas (1997) công bố tỷ lệ carrageenan bổ sung vào nước ép trái nước giải khát 0,05% [21] Như thấy kết nghiên cứu phù hợp với công bố Thomas (1997) Phân tích ANOVA hồi quy thấy, tỷ lệ carrageenan TBCQ có tương tác với theo mơ hình phi tuyến bậc với điểm cực đại tỷ lệ carrageenan 0,04% (R2 = 0,98) Những phân tích luận giải hồn tồn phù hợp với nghiên cứu [7] Do vậy, tỷ lệ carrageenan bổ sung
0,04% vào đồ uống phù hợp
1.4 Xác định tỷ lệ acid ascorbic bổ sung thích hợp
Khi tỷ lệ acid ascorbic bổ sung tăng từ 0,02% đến 0,04%, TBCQ đồ uống tăng tương ứng 11,76 điểm 13,92 điểm (Hình 5) TBCQ đạt cực đại 16,36 điểm tỷ lệ acid ascorbic bổ sung 0,04% Tiếp tục tăng tỷ lệ bổ sung acid ascorbic lên 0,05% 0,06%, TBCQ đồ uống giảm xuống đạt tương ứng 13,04 điểm 11,68 điểm Kết cho thấy TBCQ đồ uống tăng tỷ lệ acid ascorbic bổ sung tăng đạt cao tỷ lệ bổ sung 0,04% Phân tích ANOVA hồi quy cho thấy, TBCQ biến đổi theo mơ hình bậc tỷ lệ acid ascorbic bổ sung tăng dần tương quan mạnh (R2 = 0,98) Như tỷ lệ acid ascorbic bổ sung vào đồ uống có ảnh hưởng đến TBCQ đồ uống
Hình Ảnh hưởng tỷ lệ acid ascorbic bổ sung
đến TBCQ sản phẩm đồ uống Hình Ảnh hưởng hàm lượng polyphenolđến TBCQ đồ uống
Theo Aurelia cộng (2011), hàm lượng acid ascrobic bổ sung vào nước ép trái 54,74 mg/100ml [5] Như kết nghiên cứu phù hợp với thực nghiệm [5] lý thuyết [7] Do tỷ lệ acid ascorbic bổ sung 0,04% vào sản phẩm phù hợp
1.5 Xác định hàm lượng polyphenol cần bổ sung
Kết cho thấy, hàm lượng polyphenol bổ sung vào đồ uống đạt mức 7,5 mg, 10 mg 12,5 mg, TBCQ đồ uống đạt tương ứng 13,12 điểm, 13,68 điểm 15,32 điểm (Hình 6) TBCQ đồ uống đạt mức cao 17,08 điểm bổ sung hàm lượng polyphenol 15 mg Khi hàm lượng polyphenol bổ sung vào đồ uống tăng lên tới mức 17,5 mg, TBCQ đồ uống lại giảm đạt 15,04 điểm
(5)là 213,81 mg/l chinotto B 136,03 mg/l [23] Như kết nghiên cứu hoàn toàn phù hợp với lý thuyết thực nghiệm Do vậy, hàm lượng polyphenol bổ sung vào sản phẩm 15 mg/250 ml lựa chọn để sản xuất nước giải khát chống oxy hóa giàu polyphenol 2 Xác định nhiệt độ thời gian đồng hóa
Thời gian nhiệt độ đồng hóa ảnh hưởng khơng nhiều tới tổng điểm trung bình cảm quan sản phẩm (p>0,05) Thời gian đồng hóa
là 1, 2, 3, phút, TBCQ tương ứng 17,2 ± 0,024 điểm, 17,12 ± 0,018 điểm, 17 ± 0,024 điểm, 17,2 ± 0,03 điểm 16,96 ± 0,01 điểm (Hình 7a) Ở nhiệt độ đồng hóa khác 300C, 400C, 450C 500C, TBCQ đạt tương ứng 17,16 ± 0,03 điểm, 17,08 ± 0,022 điểm, 17,2 ± 0,026 điểm 16,96 ± 0,028 điểm (Hình 7b) Phân tích ANOVA thấy, TBCQ có tương quan chặt chẽ với thời gian nhiệt độ đồng hóa (R2>0,9).
Hình 7a Ảnh hưởng thời gian đồng hóa
đến TBCQ sản phẩm Hình 7b Ảnh hưởng nhiệt độ đồng hóađến TBCQ sản phẩm
So sánh với nghiên cứu trước cho thấy, kết nghiên cứu phù hợp [15, 21] điều giải thích, thời gian nhiệt độ nghiên cứu chưa đủ để tác động mạnh mẽ tới thành phần hoạt chất đồ uống để thay đổi chất lượng đồ uống Do vậy, thời gian đồng hóa lựa chọn phút nhiệt độ đồng hóa 300C.
3 Ảnh hưởng thời gian trùng Kết cho thấy, thời gian trùng kéo dài, TBCQ sản phẩm thấp Thanh trùng 800C 17 phút, TBCQ đạt cao (Bảng 1), tương ứng 16,92 điểm (13,877 ± 0,03 mg acid gallic/250ml), thời gian trùng tăng lên 18 19 phút, TBCQ giảm 16,76 ± 0,031 điểm 16,68 ± 0,035 điểm Điều lý giải, tăng thời gian trùng đồng nghĩa với thời gian tác động nhiệt lên polyphenol tăng, dẫn đến màu sản phẩm giảm Hàm lượng polyphenol sản phẩm giảm theo thời gian trùng Hàm lượng polyphenol đồ uống trùng 18 phút 19 phút tương ứng
(6)Hình Ảnh hưởng thời gian trùng đến độ màu sản phẩm đồ uống
0,02 mg FeSO4/250 ml 143,5972 ± 0,026
mg FeSO4/250 ml, tương đương 94,4% 91,29% so với RP đồ uống trùng 800C 17 phút. Bảng Ảnh hưởng thời gian trùng đến tổng điểm trung bình cảm quan, hàm lượng polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa, khử sắt DPPH sản phẩm đồ uống
Thời gian thanh trùng
(phút)
TBCQ
(điểm) Hàm lượng polyphenol(mg acid gallic)
Hoạt tính chống oxy hóa tổng (mg acid ascorbic)
Hoạt tính khử sắt
(mg FeSO4) DPPH (%)Hoạt tính
17 16,92 13,877±0,03 54,9554 ± 0,02 157,2730 ± 0,010 60,5±0,005
18 16,76 13,207±0,002 52,9793 ± 0,003 148,4630 ± 0,020 57,85±0,017
19 16,68 12,697±0,001 50,1770 ± 0,004 143,5972 ± 0,026 55,32±0,021
Hoạt tính bắt gốc tự DPPH đồ uống trùng 800C giảm theo thời gian trùng, giảm tương tự hàm lượng polyphenol, TA RP sản phẩm Hoạt tính bắt gốc tự DPPH đồ uống trùng 17 phút đạt 60,5±0,005% Thanh trùng 18 phút 19 phút, DPPH đồ uống giảm tương ứng 57,85 ± 0,017%
55,32 ± 0,021%, tương đương 95,62% 91,45% so với hoạt tính bắt gốc tự DPPH đồ uống trùng 800C 17 phút Kết phù hợp với nghiên cứu Rembiałkowska cộng (2007), hoạt tính chống oxy hóa nước ép táo trùng 700C 20 phút giảm từ 139,44 μM 100-1g d.m xuống 79,25 μM 100-1g d.m [15].
Độ màu polymer đồ uống trùng 800C giảm theo thời gian trùng Độ màu polymer đồ uống trùng 17 phút 0,388 ± 0,006 Thanh trùng 18 phút 19 phút, độ màu polymer sản phẩm giảm tương ứng 0,363 ± 0,022 0,344 ± 0,019, tương ứng 94,07% 88,7% so với độ màu polymer sản phẩm trùng 800C 17 phút Tổng độ màu sản phẩm trùng 800C giảm theo thời gian trùng giảm cường độ màu sản phẩm Tổng độ màu sản phẩm trùng 17 phút 0,359 ± 0,003 (Hình 7) Thanh trùng 18 phút 19 phút, tổng độ màu sản phẩm giảm tương ứng 0,239 ± 0,005 0,136 ± 0,006, tương đương 66,57% 37,88% so với tổng độ
(7)thanh trùng 800C (R2 > 0,9) Kết nghiên cứu hoàn toàn phù hợp với lý thuyết thực nghiệm [7]
IV KẾT LUẬN
Sản phẩm đồ uống có tỷ lệ thành phần saccharose 15%, acid ascorbic 0,04%, acid citric 0,07%, carrageenan 0,04%, polyphenol 15 mg/250 ml Đồng hóa nhiệt độ (280C ± 20C)
trong phút trùng 800C 17 phút Quy trình sản xuất đồ uống từ thân ngơ hồn tồn phù hợp với điều kiện Việt Nam, nên triển khai sản xuất quy mô công nghiệp, góp phần nâng cao thu nhập cho người sản xuất, kinh doanh tiêu dùng sản phẩm từ ngô Bên cạnh đó, thân ngơ sau chiết polyphenol sử dụng làm phân bón, thức ăn gia súc, ethanol sinh học…
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
1 Đặng Xuân Cường, Lê Tuấn Anh, Vũ Ngọc Bội, Bùi Minh Lý, 2016 Thu nhận polyphenol từ ngơ Tạp chí Khoa học Cơng nghệ thủy sản,
2 Đặng Xuân Cường, 2014 Báo cáo tổng kết đề tài độc lập “Xây dựng quy trình chiết xuất, sản xuất đồ uống giàu polyphenol, chlorophyll từ bắp” cấp tỉnh Khánh Hòa Sở Khoa học Cơng nghệ tỉnh Khánh Hịa 228 trang Trần Văn Sung, Trịnh Thị Thủy, Nguyễn Thị Hoàng Anh, 2011 Các hợp chất thiên nhiên từ số cỏ Việt
Nam, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Hà Nội
Tiếng Anh
4 Anup, K B., Tandon, D K., Dikshit, A., and Kumar, S., 2011 Effect of pasteurization temperature on quality of aonla juice during storage J Food Sci Technol., 48(3), 269–273
5 Aurelia, M P., Aneta, P., Gheorghe, P N., and Aurel, P., 2011 Determination of ascorbic acid content of some fruit juices and wine by voltammetry performed at pt and carbon paste electrodes Molecules, 16, 1349-1365 Blois, M S., 1958 Antioxidant determinations by the use of a stable free radical Nature, 26, 1199–1200 Brijesh, K T., Nigel, P B., Charles, B., 2013 Handbook of plant food phytochemicals: sources, stability and
extraction John Wiley & Sons, Ltd., USA
8 David, V., Ana, R M., Giulia, C., Maria, J O C., and Jeremy P E S., 2010 Polyphenols and human health: Prevention of disease and mechanisms of action Nutrients, 2, 1106-1131
9 Eid, I B., Anass, M A., 2014 Determination of citric acid in soft drinks, juice drinks and energy drinks using titration International Journal of Chemical Studies, 1(6), 30-34
10 Gianmaria, F F., Ivana, A., Aniello, I., Armando, Z., Gabriele, P., and Antonino P., 2011 Plant polyphenols and their anti-cariogenic properties: A Review Molecules, 1(6), 1486-1507
11 Khan, N., Afaq, F., Saleem, M., Ahmad, N., Mukhtar, H., 2006 Targeting multiple signaling pathways by green tea polyphenol (-)-epigallocatechin-3-gallate Cancer Research, 66, 2500-2505
12 Kumar, N., Shibata, D., Helm, J., Coppola, D., Malafa, M., 2007 Green tea polyphenols in the prevention of colon cancer Frontiers in Bioscience, 12, 2309-2315
13 Neslihan, A., Savas, B E K., and Jale, A., 2005 Infl uence of processing and pasteurization on color values and total phenolic compounds of pomegranate Juice Journal of Food Processing and Preservation, 29, 357–368 14 Prieto, P., Pineda, M., and Aguilar, M., 1999 Spectrophotometric quantitation of antioxidant capacity through
(8)15 Rembiałkowska, E., Hallmann, E., Rusaczonek, A., 2007 Infl uence of processing on bioactive substances content and antioxidant properties of apple purée from organic and conventional production in poland, 3rd QLIF Congress, Hohenheim, Germany, March 20-23
16 Reşat, A., Kubilay, G., Birsen, D., Mustafa, Ö., Saliha, E Ç., Burcu, B., Berker K I., and Dilek, Ö., 2007 Comparative evaluation of various total antioxidant capacity assays applied to phenolic compounds with the CUPRAC assay, Molecules, 12, 1496-1547
17 Sangameswaran., B, Balakrishnan, B R., Chumbhale, D., and Jayakar, B., 2009 In vitro antioxidant activity of roots of Thespesia Lampas dalz and gibs Pak J Pharm Sci., 22(4), 368-372
18 Silvia, F., Montserrat, C., Antonio, E., Kan, W., Sami, I., Catherine, L., Katia, R., Joseleau, J P., Jordi B., Pere, P., Joan, R., David, C R., 2012 Altered lignin biosynthesis improves cellulosic bioethanol production in transgenic maize plants down-regulated for cinnamyl alcohol dehydrogenase Mol Plant, 5(4), 817-30
19 Statford, M., and James, S A., 2003 Non-alcoholic beverages and yeasts In: Boekhout T and Robert, V (eds.) Yeasts in Food, Hamburg, Germany: B Behr’s Verlag GmbH & Co, Chapter 12: 309-345
20 Swanson, A K., and Druehl, L D., 2002 Induction, exudation and the UV protective role of kelpphlorotannins Aquatic Botany, 73, 241-253
21 Thomas, E F., 1977 Current aspects of food colorants, CRC Press: 1-93
22 Vibha R., Umesh Y., 2014 Free Radicals in Human Health and Disease, Springer, 430 pp
23 Victor P., 2014 Processing and impact on antioxidants in beverages, Press is an imprint of Elsevier, USA: 1-309 24 Zhu, Q T., Hackman, R M., Ensunsa, J L., Holt, R R., and Keen, C L., 2002 Academic antioxidative activities