CAC PHUONG PHAP SAC KY

BÀI DỊCH TIẾNG ANH MÔN : CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ TRONG HÓA HỌC HỌC VIÊN : LỚP CAO HỌC 18 HÓA HỮU CƠ 2.4 Phương pháp đại khai thác hợp chất hoạt động từ nguyên liệu sản phẩm từ biển Tiền xử lý mẫu bước tốn nhiều thời gian phân tích q trình việc quan trọng Thực vật chứa nhiều hoạt tính sinh học hợp chất quan trọng để chiết xuất tất số tốt nhất, ngắn hiệu so với việc sử dụng dung mơi tối thiểu Thích hợp với khai thác kỹ thuật giá rẻ đơn giản [5,6] Quan trọng khả phục hồi cao, thấp, khả tái phát giới hạn, tự động hóa [7] Khai thác rắn lỏng cách lâu đời chất rắn mẫu tiền xử lý [5] Khai thác phân đoạn chiết xuất phương pháp quan trọng cô lập nhóm hợp chất chất đơn giản từ nguyên liệu thực vật 2.4.1 Phương pháp khai thác máy Soxhlet Khai thác máy Soxhlet đượccoi kỹ thuật hàng đầu chủ yếu sử dụng thời gian dài coi kỹ thuật tiêu chuẩn tài liệu tham khảo cho phương pháp lọc khác so sánh [5] Mẫu đặt chủ thimble hoạt động liên tục đầy với phần dung mơi từ bình chưng cất Khi chất lỏng đạt tới tràn mức, hút aspirates chất tan chủ thimble unloads trở lại vào bình chưng cất, tiến hành phân tích tách thành chất lỏng số lượng lớn Cáchoạt động lặp lặp lại khai thác hoàn toàn đạt [5,6] - cao học 18 hóa học Các dung mơi khác sử dụng q trình khai thác Bổ sung đồng dung môi sửa đổi lần để tăng phân cực pha lỏng Soxhlet khai thác chủ yếu phụ thuộc vào đặc tính ma trận kích thước hạt nội khuếch tán bước hạn chế trình khai thác [6] Lợi quan trọng kỹ thuật thông thường khai thác Soxhlet liên tục nhân vật Mẫu có số liên lạc với phần dung mơi Sau kết thúc q trình khai thác, lọc khơng u cầu Nó rẻ phương pháp đơn giản, nơi kinh nghiệm nhỏ cần thiết Phương pháp có khả để trích xuất hàng loạt mẫu nhiều phương pháp khác [5] Ngồi rộng cơng nghiệp ứng dụng hiệu tốt lợi khai thác Soxhlet tiểu thuyết phương pháp khai thác [6] Những khó khăn đáng kể so với kỹ thuật khác dài thời gian khai thác, thâm nhập nghèo ma trận cách dung môi, lớn lượng dung mơi cần thiết, tốn ngun nhân môi trường vấn đề Một số dung môi gần đặt câu hỏi độc tính họ Ngồi chúng tơi khơng thể qn khai thác xảy thời gian dài điểm sơi dung mơi, phân hủy nhiệt hợp chất đồ tạo tác tạo [5,6] Do tất lợi nhược điểm phương pháp chiết xuất Soxhlet phổ biến nhiều nhà khoa học cố gắng để cải thiện Đầu tiên, thay đổi tập trung vào thiết kế đơn vị (thimble chủ, xi phông, ngưng tụ) cải thiện ứng dụng thu kết [5] Ngồi cịn có số thay đổi rút ngắn thời gian khai thác cách sử dụng lượng phụ trợ - cao học 18 hóa học Do dẫn đến tạo Soxhlet chiết áp suất cao tập trung trợ giúp lị vi sóng (FMASE) Áp lực cao đạt cách đặt vắt nồi hấp sử dụng siêu tới hạn dịch Soxhlet vắt [8] FMASE cho thấy số khác biệt so với lò vi sóng có trợ giúp kỹ thuật khai thác: khai thác áp lực bình thường, chiếu xạ tập trung vào mẫu, lọc không cần thiết Những lợi kỹ thuật mà ngắn thời gian khai thác, khả tự động hóa, khai thác số lượng Khai thác hiệu độ xác tốt so với phương pháp truyền thống Vẫn cịn giữ lợi phương pháp truyền thống [8] Ngồi cịn có số ứng dụng siêu âm, hỗ trợ Soxhlet khai thác [9] 2.4.2 Khai thác chất lỏng siêu tới hạn Khai thác chất lỏng siêu tới hạn (Lâm trường) kỹ thuật thành công siêu tới hạn nhà nước thực nhiệt độ áp suất chất giá trị quan trọng Trong điều kiện siêu tới hạn, chất lỏng có đặc tính hai chất lỏng khí làm cho khai thác nhanh hiệu nhiều chất lỏng siêu tới hạn sử dụng, chẳng hạn freons, ammonia, dung môi hữu cơ, phổ biến CO2 có độc tính thấp dễ cháy thấp siêu tới hạn nhiệt độ khí carbon dioxide làm cho hấp dẫn việc khai thác thermolabile hợp chất [5,6] Áp dụng số người số họ hạn chế tính chất khơng thuận lợi họ an tồn xem xét mơi trường Nước trạng thái siêu tới hạn có khả khai thác cao hợp chất cực, không phù hợp với hợp chất nhiệt không ổn định [10] Nhiều hợp chất phenol, alkaloids, glycosidic hợp chất hịa tan CO2 cực thấp khó khăn việc chiết xuất chất phân - cao học 18 hóa học tích cực hạn chế phương pháp Để nâng cao hiệu phân cực extractant tăng lên (Ngồi methanol, ethanol, pentane, acetone) Các phổ biến dung môi methanol sửa đổi có hiệu lên đến 20% thể trộn lẫn với CO2 Đôi khi, ethanol lựa chọn tốt Nutraceuticals độc tính thấp phân cực chất phân tích giảm (bằng hình thành cặp phức tạp ion) [1,10-14] Bởi lâm trường với CO2 chiết xuất chất béo từ ma trận, tiếp tục dọn dẹp cần thiết để loại bỏ chất béo trước phân tích Lâm trường quốc doanh thường sử dụng cho khai thác nguyên liệu thực vật tươi Vấn đề trình độ cao độ ẩm, gây khó khăn khí Để giữ lại độ ẩm số hóa chất Na2SO4 gel silica trộn lẫn với nhà máy vật liệu [10] Cũng quan trọng quy mô nhà máy hạt Các hạt lớn kéo dài thời gian khai thác q trình q trình kiểm sốt cách khuếch tán nội bột mịn tăng tốc khai thác Tuy nhiên, vật liệu dạng bột gây khó khăn việc giữ tốc độ dịng chảy thích hợp gây giảm sản lượng tổng chất chiết xuất [15] Quan trọng lợi kỹ thuật lâm trường quốc doanh so sánh với cổ điển Soxhlet khai thác giảm thời gian, vệ sinh an toàn, khả cho khớp nối trực tuyến với máy dò chromatographs, định lượng xác định, preconcentration hiệu lực, khối lượng chuyển nhượng cao, đầy đủ khai thác (chất lỏng siêu tới hạn có hệ số khuếch tán độ nhớt thấp hơn so với chất lỏng dung môi) Rất quan trọng Lâm trường cung cấp khả cho chọn lọc khai thác chất phân đoạn từ nguyên liệu thực vật cách thao tác với áp lực nhiệt độ Choi et al [16] xác nhận so sánh carbon dioxide siêu tới hạn khai thác với chiết dung môi - cao học 18 hóa học squalene stigmasterol từ Spirodela polyrhiza Lâm trường squalene (10 Mpa, 508C-608C) so sánh để khai thác Soxhlet n-hexane, stigmasterol không phát theo điều kiện Phương pháp dễ dàng sử dụng phịng thí nghiệm cho lớn quy mơ [17] Chất chiết xuất có chất phân tích khơng mong muốn thu cách thao tác cẩn thậntrong điều kiện lâm trường quốc doanh (áp suất, nhiệt độ, sử dụng bổ) Tuy nhiên, khối lượng nhỏ vắt, mà chứa vài gram vật liệu, bất lợi khối lượng mẫu cao cần thiết Dioxide carbon siêu tới hạn dung môi đầy hứa hẹn cho việc khai thác tài nguyên thiên nhiên hợp chất, đặc biệt thermolabile Phịng chống suy thối đạt cách loại bỏ ôxy từ CO2 Rõ ràng, việc bổ sung chất chống oxy hóa giải pháp hợp lý khơng có mặt hàng khí để hấp thụ oxy [18] Ngồi ra, lâm trường quốc doanh loại bỏ q trình tốn nhiều thời gian tập trung sử dụng có tối thiểu dung mơi hữu cơ, làm cho phương pháp thân thiện với mơi trường [5,6,12,14,19] Đó giá trị để ý đơi hiệu cao 100% gọi Soxhlet phương pháp thơng thường (một số chất phân tích mạnh mẽ ràng buộc với ma trận không đủ lượng tham gia trình Soxhlet ly thân) [5] Lâm trường với phương pháp sửa đổi lần có hiệu khai thác coumarins từ vỏ Citrus cực đại [12], furanocoumarins terpenoid pentacyclic thân rễ Dorstenia bryoniifolia Mart ex Miq vỏ rễ Brosimum gaudichaudii Trécul (Họ Dâu tằm) [20] - cao học 18 hóa học Ngâm sonication tốt so với Lâm trường khai thác coumarins Mikania glomerata SF chiết xuất có chứa mức độ cao chlorophyll Ngồi Ngồi sửa đổi lần cực (EtOH) khơng có mặt lợi đáng kể [21] Lâm trường sửa đổi lần, khai thác chất lỏng áp lực (PFE) với dichloromethane flavanones xanthones lấy từ nguyên liệu thực vật tương tự cao sản lượng thu cách khai thác rắn lỏng, ngắn nhiều giai đoạn thời gian với số tiền giảm dung môi [22] Chất sinh học tích cực tăng hạt giống hơng giống axit béo khơng bão hịa carotene chiết xuất lâm trường với lượng khí carbon dioxide khí propane Dầu suất cao so với khai thác Soxhlet truyền thống [23] Hiệu lực phân cực thấp, trung bình cao, áp suất cao cực bổ điều tra Hamburger et al [24] Calendula officinalis, Crataegus sp, Matricaria recutita sử dụng mơ hình nghiên cứu Khai thác sản lượng điều kiện khác phụ thuộc vào mức độ lớn cấu hình Các chất chuyển hóa trung có nguyên liệu thực vật Extractability lipophilic hợp chất tăng lên đáng kể áp suất cao 300 bar, sản lượng polyphenolic glycosides mức thấp áp suất khoảng 700 với 20% sửa đổi lần dịch chiết xuất Một loạt ứng dụng để tách Các hoạt chất sinh học mô tả xem lại viết [6,7,25,26] 2.4.3 áp lực khai thác chất lỏng Áp lực khai thác chất lỏng (PLE) biết đến chiết xuất dung môi tăng tốc (ASE), áp lực cao dung môi chiết xuất (HPSE), khai thác chất lỏng áp lực (PFE) kỹ thuật sử dụng khối lượng nhỏ - cao học 18 hóa học dung mơi thơng thường cao nhiệt độ (2008C) thời gian ngắn để trích xuất mẫu rắn Áp lực cao 200 bar để giữ cho dung môi trạng thái lỏng (dung mơi cịn điểm quan trọng nó), tăng nhiệt độ làm tăng tốc độ động học khai thác (quá trình giải hấp chất phân tích từ ma trận nhanh so với điều kiện dung mơi nhiệt độ phịng sử dụng), cung cấp cho an tồn nhanh chóng phương pháp [6,7,27,28] ASE cho phép sử dụng phổ quát dung môi hỗn hợp dung môi với phân cực khác PLE, mẫu với sulfate natri cát, Hydromatrix phân tán đặt tế bào Tế bào khai thác lấp đầy với dung môi tế bào thiết lập cho số giá trị, sau nung nóng lò nướng đến giá trị thiết lập Trong suốt chu trình nung nóng, dung mơi bơm vào khỏi tế bào để trì áp lực thực chu kỳ định Chất lỏng khỏi tế bào khai thác thu thập sưu tập lọ Trước tải nguyên liệu thực vật vào tế bào khai thác, mẫu thường pretreated Đúng kích thước mẫu cho phép khuếch tán bên phải chất phân tích từ mẫu chiết xuất dung môi Sấy khô mẫu loại bỏ độ ẩm làm giảm khai thác hiệu Việc khai thác lựa chọn dung mơi phải có khả hịa tan chất phân tích lãi suất, giảm thiểu coextraction thành phần ma trận khác phân cực nên cho hợp chất đích [27,29] PLE thực mẫu (tĩnh dung mơi trì xác định thời gian áp suất nhiệt độ không đổi) chế độ động (dung môi chảy qua mẫu cách liên tục) Bởi nhiều trường hợp động, chế độ sử dụng nước extractant, số tác giả ưa thích để sử dụng hạn áp lực khai thác nước nóng (PHWE) để tham khảo Nước nonflammable, không độc hại, dễ dàng có sẵn, dung - cao học 18 hóa học môi thân thiện với môi trường chấp nhận PHWE có khơng có bổ sung tỷ lệ phần trăm nhỏ dung môi hữu ethanol phù hợp với tiêu chuẩn hóa học kiểm sốt chất lượng thuốc Đồng thời, áp dụng quy mơ thí điểm q trình sản xuất cho nhà máy dược Để biết thêm thông tin ứng dụng PHWE khai thác hợp chất hoạt động tìm thấy giấy tờ xét [27,29,30] Rất quan trọng hoàn tồn tự động hóa q trình phân tích tồn tính chọn lọc cao nhổ hợp chất phân cực khác [27] So với khai thác cổ điển máy Soxhlet, khai thác hoàn tồn thể đạt thời gian ngắn với lượng nhỏ dung môi hữu tốt nhiều xâm nhập mẫu dung môi PLE Giữ nhiệt độ cao làm giảm độ nhớt dung môi giúp việc phá vỡ trái phiếu chất phân tích ma trận Ngồi khơng có bổ sung lọc [27] Sự phù hợp khai thác áp lực chất lỏng (PLE) phân tích thuốc điều tra Các chất chiết xuất từ PLE từ thảo dược đại diện có chứa cấu trúc đa dạng chất chuyển hóa phân cực khác khả hòa tan so sánh với chất chiết xuất từ thu theo Dược điển chuyên khảo liên quan đến sản lượng có liên quan thành phần thực vật, thời gian khai thác, tiêu thụ dung môi Thử nghiệm cho thấy 1-3 chu kỳ khai thác từ đến phút nhiệt độ cao dành đầy đủ gần đầy đủ khai thác (thay nhiều khai thác Soxhlet) Nó rõ rệt làm giảm khơng có thời gian mà cịn tiêu thụ dung môi bảo vệ chống lại vật chiết xuất hợp chất nhiệt độ cao Độ lặp lại kết nói chung tốt [31] Trong số khai thác máy Soxhlet, ultrasonification, lị vi sóng có trợ giúp dung mơi khai thác hệ thống mở gần gũi ASE khai - cao học 18 hóa học thác áp lực dung môi cung cấp cho suất cao furanocoumarins (đặc biệt kỵ nước) từ Pastinac sativa trái officinalis Archangelica [32,33] Dawidowicz et al tối ưu hóa điều kiện khai thác để phân tích rutin isoquercitrin Sambucus nigra hoa, lá, dâu [34] Ông Len [35] phát triển phương pháp phân tích glycosides dược liệu cách sử dụng PHWE Các kết thu với kỹ thuật chí cịn tốt so với người thu với chiết Soxhlet Nghiên cứu cho thấy kỵ nước nhiệt thành phần bất ổn định thuốc chiết xuất cách sử dụng kết hợp bề mặt áp lực nước nóng nhiệt độ điểm sôi giảm áp lực áp dụng Khả chọn lọc thay đổi cho nhổ tiêu biểu hương thảo hợp chất chống oxy hóa phương tiện thay đổi nhỏ nhiệt độ chứng minh Thí nghiệm cho thấy chiết xuất từ làm giàu với loại khác polyphenol [36] PLE kiểm tra công nghệ thay cho khai thác carotenoid màu xanh tảo biển Haematococcus pluvialis Dunaliella Salina kavalactones Piper methysticum Kết nghiên cứu cho thấy PLE so sánh khai thác hiệu kỹ thuật khai thác truyền thống, nhiên yêu cầu nửa số lượng chiết xuất dung mơi khai thác truyền thống, tốn thời gian [37] PLE với rượu ethyl hợp chất trị đái tháo đường, charantin, từ trái Momordica charantia (mướp đắng) đề xuất thay cho thông thường Chiết Soxhlet với dung môi độc hại chloroform dichloromethane [38] PLE hiệu cho nhổ tecpen (terpenic rượu phytosterol), axit béo vitamin E từ Piper gaudichaudianum - cao học 18 hóa học Kunth giảm đáng kể tổng thời gian khai thác, số lượng dung môi, thao tác mẫu dung môi so sánh với Soxhlet [39] ASE sử dụng phân tích polyphenol [40], taxanoids [41], alkaloids [42] Các khía cạnh khác ứng dụng PLE sản phẩm tự nhiên thảo luận chương [6,7,27] Trung áp lực khai thác rắn chất lỏng (MPSLE), giới thiệu Nyiredy et al [43], kỹ thuật khai thác dựa q trình khuếch tán hịa tan MPSLE thực sắc ký lỏng áp suất trung bình (MPLC) cột đầy với pha rắn tinh bột chiết xuất extractant bơm qua giường văn phòng phẩm Khoảng cách khai thác tương đối ngắn tách hiệu kích thước hạt mịn pha rắn Khai thác thực với lưu lượng dung môi liên tục liên tục áp dụng áp lực Dung môi khác hỗn hợp chúng áp dụng Q trình khai thác đầy đủ nhanh chóng Hiệu so sánh với khai thác đầy đủ phương pháp chiết Soxhlet, trình tập trung khơng cần thiết Ngồi thử nghiệm tất thực chặt chẽ tự động hệ thống với số lượng nhỏ dung môi hữu thân thiện với mơi trường [44] Sự lựa chọn hệ thống dung mơi thực hiệu cách phân tích HPLC Chuyển vị MPLC đơn giản trực tiếp [45] 2.5 Thanh lọc chiết xuất thô mẫu chuẩn bị Để tối ưu hóa tất q trình khai thác phân tích, số can thiệp hợp chất có kích thước phân tử cao chất béo, bột màu, sáp - cao học 18 hóa học 10 trình bày chất chiết xuất thơ nên loại bỏ Mục đích preconcentration cách ly chất phân tích Để loại bỏ chất coextracted thủ tục dọn dẹp khác có phát triển phân vùng chất lỏng, chất lỏng cột sắc ký hấp thụ chất hút bám cực (Florisil hay silica), sắc ký thấm gel (GPC) [27,46] 2.5.1 Chất lỏng- chất lỏng phân vùng Chất lỏng, chất lỏng phân vùng (LLP) khứ đóng vai trò quan trọng tiền xử lý mẫu (làm sạch, tập trung, cô lập) LLE dựa vào nguyên tắc chất thứ ba thêm vào hỗn hợp hai chất lỏng trộn lộn trạng thái cân bằng, thành phần bổ sung phân chia hai giai đoạn chất lỏng tỷ lệ nồng độ giai đoạn đạt giá trị định [47] Phương pháp chậm, yêu cầu thời gian dài, số lượng lớn dung môi hữu mẫu Một khó khăn quan trọng hình thành nhũ tương mà phá vỡ chậm không đầy đủ [48,49] Nhiều bước phân vùng cung cấp khả lọc sơ mẫu, tách trình sắc ký khác Đây thường đạt phương pháp ngược [45] 2.5.2 Giai đoạn khai thác pha rắn Khai thác pha rắn (SPE) phương pháp khác để khai thác chất lỏng lỏng cho tách, lọc tập trung Trong LLE dựa phân vùng hợp chất hai giai đoạn chất lỏng SPE, thay hai chất lỏng khơng thể trộn lộn giai đoạn, chất phân tích phân chia rắn lỏng (sorption bước chất phân tích có mối quan hệ để pha rắn ma trận mẫu) giữ lại hợp chất loại bỏ từ pha rắn cách tẩy rửa với dung mơi thích hợp hỗn hợp dung mơi với lực lớn để phân tích (giải hấp bước) chiết xuất chất phân tích eluted từ đĩa SPE chất lỏng siêu tới hạn Sử dụng khí carbon dioxide SF có - cao học 18 hóa học 11 số lợi dung mơi hữu chất lỏng khơng độc hại, tính trơ hố học, dễ dàng để loại bỏ [46,48,49] Duy trì phổ biến Các chế dựa van der Waals lực lượng, liên kết hydro, lưỡng cực-lưỡng cực tương tác, cation-anion tương tác [50,51] SPE thường sử dụng để làm mẫu trước phân tích sắc ký định lượng chất phân tích mẫu để loại bỏ thành phần can thiệp ma trận phức tạp để có trích xuất có chứa phần tinh khiết chất thú vị [50] Các ứng dụng SPE chủ yếu xác định cách sử dụng sorbents khác alumina, silica gel, silica giai đoạn hóa học ngoại quan, trao đổi ion, polyme Một số người số họ sửa đổi chọn lọc Sự phân cực điện thoại di động giai đoạn phụ thuộc vào thành phần hóa học pha tĩnh thay đổi chọn lọc tách [46,49,50] SPE có nhiều lợi Hiệu lực preconcentration quan trọng đặc biệt phân tích dấu vết Thơng thường khối lượng dung môi cần thiết để rửa giải đầy đủ chất phân tích nhỏ nhiều so với khối lượng mẫu ban đầu Nồng độ chất phân tích đạt [48,49] Rất quan trọng phân đoạn mẫu thành hợp chất khác nhóm hợp chất tẩy rửa phần nhỏ với giai đoạn chất lỏng khác Zgórka [52,53] phát triển phương pháp để xác định đồng thời axit phenolic furanocoumarins cách sử dụng octadecyl amin bậc bốn SPE-microcolumns với thay đổi phân cực giai đoạn di động sức mạnh eluent Ngồi ra, thực phân chia flavonoids axit phenolic cách sử dụng microcolumns tương tự SPE thủ tục với sửa đổi RP-18 chất hút bám sử dụng cho rửa giải proanthocyanidins [54,55] Các kết hợp polyme phân tử in (MIPS) - cao học 18 hóa học 12 SPE hứa hẹn kỹ thuật cho phép khai thác có chọn lọc chất phân tích cụ thể từ ma trận phức tạp (Liv) SPE q trình dễ dàng, nhanh chóng, địi hỏi số lượng nhỏ mẫu khối lượng nhỏ dung mơi thực trực tuyến tắt dòng dễ dàng tự động Nó hiệu LLE cho thấy phục hồi cao chất phân tích [46,48-50,56] Một thơng số quan trọng để kiểm soát phương pháp SPE bước đột phá khối lượng, đại diện cho khối lượng mẫu tối đa áp dụng với phục hồi 100% lý thuyết, phục hồi định nghĩa tỷ lệ số lượng trích xuất số tiền áp dụng [49,57] Tổng quan SPE xuất _Zwir-Ferenc Biziuk [50], Camel [51], Hennion [57], Poole [58] Hệ thống sắc ký tương tự sử dụng SPE áp dụng kinh điển cột sắc ký lọc phân đoạn chất chiết xuất từ dự bị quy mơ 2.5.3 GEL thấm sắc ký GPC, cịn gọi kích thước loại trừ sắc ký, sử dụng để định lượng tách phân tử dung môi dung dịch nước đệm sở phân tử kích thước, phân vùng, hấp thụ Q trình hồn tồn tự động Đây dọn dẹp postextraction có hiệu cao phương pháp để loại bỏ nhiễu cao, trọng lượng phân tử chất béo, protein, chất màu từ mẫu chiết xuất trước phân tích Thủ tục tự động thích hợp cho tinh chế ma trận phức tạp với nội dung chất lỏng cao [27,46] Làm mẫu béo tốn thời gian, thường yêu cầu bước Trong hầu hết trường hợp sau GPC giải nén tách vào khác chất hút bám sử dụng phương pháp khác - cao học 18 hóa học 13 sắc ký Sự kết hợp hai kết kỹ thuật để làm hai chiều mạnh mẽ kích thước phân tử phân cực Bởi kích thước lớn cột GPC, nồng độ thu phần nhỏ trước bước thứ hai cần thiết [27,59] Để loại bỏ chất béo từ mẫu phương pháp làm chỗ phát triển Loại bỏ chấn lưu đạt cách thêm sorbents Florisil, alumina, silica gel để tế bào PLE, mà giữ lại đồng khai thác vật liệu từ trích xuất [27] 2,6 Phương pháp sắc ký vai trị phân tích ngun liệu thực vật 2.6.1 sắc ký khí Sắc ký khí (GC) sử dụng chủ yếu cho phân tích dễ bay hơi, unpolar (hydrophobe) hợp chất thành phần tinh dầu unpolar khác thành phần (loại khác tecpen) Bây thường kết hợp với khối phổ (GC-MS) Kỹ thuật cho phép đo trọng lượng phân tử hợp chất lần phân tử ion xác định, đo ion xác để xác định xác số lượng hydrogens, nguyên tử cacbon, oxy, nguyên tử khác có mặt phân tử Điều cung cấp cho công thức phân tử Một số kỹ thuật có sẵn MS, có tác động điện tử sử dụng rộng rãi Kỹ thuật cung cấp cho phân mảnh tốt phân tử hữu ích cho sáng tỏ cấu trúc mảnh vỡ được giao cho nhóm chức có mặt phân tử Những bất lợi điều kỹ thuật ion phân tử vắng mặt Mềm kỹ thuật ion hóa hóa học (CI), ion hóa electrospray (ESI), bắn phá nguyên tử nhanh (FAB) phổ khối lượng ion hóa phân tử với lượng hơn, đó, phân tử ion nay, với thơng tin phân mảnh cho cấu trúc sáng tỏ mục đích Ví dụ, kỹ thuật GC-MS sử dụng để phân tích biến động hợp chất - cao học 18 hóa học 14 diện loại khác của-cây bạc hà piperita tinh dầu bạc hà, menthone, isomenthone, 1,8-cineole, limonene, [60] 2.6.2 Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phổ biến rộng rãi sử dụng để phân tích cách ly sản phẩm tự nhiên hoạt tính sinh học phân tíchđộ nhạy kỹ thuật này, đặc biệt kết hợp với phát tia cực tím photodiode mảng (DAD), cho phép việc mua lại quang phổ tia cực tím đỉnh tẩy rửa 190-800 nm Tỷ lệ dòng chảy hệ thống thường 0,5-2,0 ml = tải mẫu chế độ phân tích cho phép phát phân tách nhà máy trích xuất thành phần Với phát UV DAD, chí hợp chất với tia cực tím nghèo đặc tính phát HPLC kỹ thuật có độ nhạy cao với thư viện điện tử tìm kiếm hợp chất với quang phổ tia cực tím biết đến Phần mềm đại cho phép Quang phổ tia cực tím đỉnh tẩy rửa so sánh với quang phổ lưu trữ điện tử, cho phép nhận dạng hợp chất biết đến, hữu ích, so sánh hợp chất với quang phổ tia cực tím tương tự, cho biết cấu trúc giống Nó tăng kích thước thư viện điện tử nâng cao sức mạnh tìm kiếm kỹ thuật HPLC kỹ thuật mạnh mẽ cho dấu vân tay chiết xuất hoạt tính sinh học để so sánh rút với sắc ký quang phổ tia cực tím lưu trữ thư viện điện tử Điều quan trọng cho việc kiểm soát chất lượng loại thuốc thảo dược Với HPLC, chạy chế độ hoàn toàn tự động, autosamplers băng chuyền, phân tích hàng chục đến hàng trăm mẫu HPLC máy chạy máy tính điều khiển sắc ký lập trình Máy tính sử dụng cho việc lưu trữ liệu sắc ký Công - cao học 18 hóa học 15 nghệ đại áp dụng sorbents cột, bao gồm sorbents tiêu chuẩn silica nhôm, đảo ngược giai đoạn C8 C18, giai đoạn văn phòng phẩm, phenyl sorbents đại cực ngoại quan giai đoạn văn phòng phẩm (CN-diol, aminopropyl-silica), giai đoạn văn phịng phẩm chiral, kích thước-gel loại trừ phương tiện truyền thơng, trao đổi ion Tính linh hoạt giai đoạn văn phòng phẩm thực HPLC phương pháp phổ biến cách ly sinh thử nghiệm hướng dẫn HPLC kỹ thuật có độ phân giải cao, với hiệu quả, nhanh chóng phân tách Nhất pha tĩnh sử dụng rộng rãi C18 (ngược pha) sắc ký, nói chung sử dụng acetonitrile = nước nước = hỗn hợp methanol giai đoạn di động Những giai đoạn di động chạy chế độ rửa giải Gradient, nồng độ dung môi đặc biệt tăng khoảng thời gian, bắt đầu từ, ví dụ, 100% nước tăng 100% acetonitrile 30 phút, chế độ rửa giải isocratic, thành phần khơng đổi (ví dụ, 70% acetonitrile nước) trì thiết lập khoảng thời gian 2.6.3 Điện di dòng electron sắc ký Điện di biết đến nhiều năm đạt ý rộng rãi Jorgenson Lukacs chứng minh ống thạch anh nhỏ Kể từ thời gian mao mạch điện di (CE) có phương pháp phổ biến để tách hợp chất hoạt động Tách thu cách khác biệt di chuyển chất tan điện lĩnh vực, thúc đẩy hai lực lượng, di chuyển điện di điện thẩm thấu dòng chảy Di cư vào khu riêng biệt khác biệt vào mobilities điện di có liên quan đến tỷ lệ khối lượng-phí Trong cơng cụ CE điển hình, chất phân tích giới thiệu cực dương phát cực âm [61,62] - cao học 18 hóa học 16 Các thiết bị cho CE đơn giản rẻ tiền Một ống mao mạch điển hình Dài 25-75 cm làm silica Các máy dò sử dụng rộng rãi cho giám sátchất chuyển hóa trồng cực tím (UV) quang phổ [61] CE phổ khối thông qua giao diện ESI [62] Các lớp học khác hợp chất phân tích với CE kết so sánh HPLC CE cung cấp lợi hiệu cao, đơn giản, dung môi tiêu thụ thấp, thời gian phân tích ngắn CE phương pháp cho phép sử dụng lượng nhỏ mẫu kích thước nhỏ mao mạch Các quan trọng lợi lớn bề mặt tỷ lệ khối lượng cho phép áp dụng điện lớn có tiềm mao mạch [62] Việc sử dụng mao mạch làm cho sử dụng điện trường mạnh mẽ làm giảm đáng kể thời gian cần thiết cho việc tách hiệu [63] Số lượng CE ứng dụng phát triển nhanh chóng đặc biệt dược phẩm phân tích khơng có độ nhạy cao phân ly hiệu thường vấn đề lớn [64] Nhược điểm bao gồm độ nhạy thấp so với HPLC hạn chế chuẩn bị quy mơ CE thay phân tích địi hỏi phải có hiệu cao độ phân giải HPLC [61] CE phương pháp vi phân tích cung cấp lợi tốc độ, hiệu cao, chi phí thấp đơn giản Nó áp dụng cho việc tách lớp học hợp chất cách sử dụng thiết bị khác nhau, thay đổi thành phần đệm CE sử dụng mạng với kỹ thuật khác HPLC, NMR, MS Nó cần lượng nhỏ mẫu đệm [65] - cao học 18 hóa học 17 Một số chế độ CE có sẵn, khu vực điện di mao mạch (CZE), Micellar sắc ký điện động (MEKC), mao mạch điện di gel (CGE), mao mạch tập trung đẳng điện (CIEF), mao mạch isotachophoresis (CITP), electrochromatography mao mạch (CEC), CE-nhưng nonaqueous CZE MEKC phổ biến để phân tích phytochemical [61] CZE, mao mạch có chứa chất điện phân chạy treo hai hồ chứa đệm mẫu giới thiệu vào cuối anot Một tiềm lớn áp dụng mao mạch chất di chuyển theo điện di di động MEKC, dung dịch đệm có bề mặt (ví dụ như, sodium dodecyl sulfate) nồng độ cao nồng độ quan trọng micelle Chất phân tích phần vào mixen hình thành giai đoạn văn phòng phẩm [62,63] MEKC cũngm hữu ích cho tan mẫu nước [62] Việc sử dụng gel (CGE) thực tác động đáng kể phân peptide Crosslinked gel làm việc lưới lọc phân tử phân biệt chất sở trọng lượng phân tử (Ed) Các ứng dụng kỹ thuật điện di tách hợp chất khác từ vật liệu tự nhiên mô tả số xem xét giấy tờ [62,63,65,66] CEC kỹ thuật kết hợp lợi CZE (cao hiệu quả) HPLC (chọn lọc cao) Các chất tan vận chuyển qua cột dòng điện thẩm thấu (EOF) dung môi điện di động mình, có khu vực mở rộng LC [67,68] Trên sở khác biệt định dạng cột, ba chế độ CEC phân biệt với cột đóng gói, với cột đá nguyên khối (silica vật liệu polymer) định dạng mở-hình ống, với giai đoạn văn phòng phẩm lớp phủ tường mao mạch (OT-CEC) [69] Một thêm lợi CEC thiếu hạn chế áp lực cho phép sử dụng hạt nhỏ LC Chất tan tách theo phân vùng họ - cao học 18 hóa học 18 giai đoạn di động văn phịng phẩm và, tích điện, điện di họ di động [64] 2.6.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP (GC-MS, LC-MS, LC-NMR) Nhanh chóng phát sản phẩm tự nhiên có hoạt tính sinh học đóng vai trị mang tính chiến lược điều tra phytochemical chất chiết xuất từ thực vật thô Hyphenated kỹ thuật như HPLC với phát UV mảng photodiode (LC-DAD-UV) hàng loạt phổ (LC-MS LC-MS-MS) GC-MS) cung cấp trực tuyến nhiều cấu trúc thông tin chất chuyển hóa trước lập Việc sử dụng tất hyphenated kỹ thuật cho phép xác định nhanh chóng cấu trúc nhà máy biết đến thành phần với số lượng phút nguyên liệu thực vật Với cách tiếp cận vậy, cô lập thời gian tiêu thụ sản phẩm tự nhiên phổ biến tránh hiệu nhắm mục tiêu cô lập hợp chất trình bày thú vị spectroscopical hay sinh học tính thực Chất chiết xuất từ thực vật thô hỗn hợp phức tạp có chứa đơi hàng trăm hàng ngàn chất chuyển hóa khác Bản chất hóa học thành phần khác đáng kể chiết xuất định Sự thay đổi hóa lý thông số hợp chất gây nhiều vấn đề phát Mặc dù loại khác máy dò LC tồn tại, chẳng hạn tia cực tím, hồng ngoại, huỳnh quang, điện, bay tia laser ánh sáng tán xạ, vv, khơng có giấy phép phát tất thứ chất chuyển hóa gặp phải chiết xuất thực vật phân tích Ví dụ, Một sản phẩm khơng có mang màu quan trọng khơng phát máy dị UV - cao học 18 hóa học 19 Phát tất hợp chất thực khối phổ (MS) phát hiện, coi lý tưởng kỹ thuật phát phổ quát Hiện nay, MS phương pháp nhạy cảm phân tích phân tử có tiềm mang lại thơng tin trọng lượng phân tử cấu trúc chất phân tích Hơn nữa, điện cao tách khối lượng, tốt lựa chọn thu Vấn đề việc sử dụng LC-MS sản phẩm tự nhiên hóa học nằm ion hóa hợp chất tìm thấy chiết xuất thực vật thơ Thật vậy, nhiều LC-MS giao diện tồn thị trường, không số họ cho phép thực tế ion hóa phổ quát tất thành phần cấu tạo chiết xuất thực vật Mỗi giao diện đặc tính phạm vi riêng ứng dụng, vài người số họ thích hợp cho phân tích chất chuyển hóa thực vật thứ yếu [70] - cao học 18 hóa học 20 Tài liệu tham khảo Heinrich, M et al, nguyên tắc Pharmacognosy Phytotherapy, Elsevier Khoa học, Churchill Livingstone, Edinburgh, năm 2004 Gathercoal, E.N Wirth, EH, Pharmacognosy, Lea & Febiger, Philadelphia, năm 1947 Youngken, HW, sách giáo khoa Pharmacognosy, phiên 6, Công ty Blakiston, Philadelphia, Toronto, 1950 Mroczek, T., Widelski, J., Glowniak, K., Tối ưu hóa pyrrolizidine khai thác alkaloid từ nguyên liệu thực vật Chem Hậu môn, 51, 567, 2006 Luque de Castro, MD Garcia-Ayuso, LE, Soxhlet khai thác vật liệu rắn: cửa hàng kỹ thuật với đầy hứa hẹn tương lai sáng tạo, hậu môn Chim Acta, 369, 1, 1988 Wang, L Welle, CL, tiến gần khai thác Nutraceuticals từ nhà máy, Xu thực phẩm Khoa học Công nghệ cao, 17, 300, 2006 Raynie, D.E., kỹ thuật khai thác đại, Chem, 76, 4659, 2004 Luque-Garcia, JL Luque de Castro, MD, tập trung trợ giúp lò vi sóng Soxhlet khai thác thiết bị ứng dụng, Talanta, 64, 571, 2004 Luque-Garcia, JL Luque de Castro, MD, Soxhlet khai thác trợ giúp siêu âm: cách tiếp cận expeditive để điều trị mẫu rắn Áp dụng việc khai thác tổng số chất béo từ hạt có dầu, J Chromatogr Một, 1034, 237, 2004 10 Lang, Q Wai, CM, chất lỏng siêu tới hạn khai thác sản phẩm thảo dược tự nhiên nghiên cứu - đánh giá thực tế, Talanta, 53, 771, 2001 - cao học 18 hóa học 21 11 Lancas, FMMC, Queiroy, MEC, da Silva, ICE, hạt giống dầu khai thác với siêu carbon dioxide đổi với pentane, Chromatographia, 39, 687, 1994 12 Teng, WY, Chen, CC, Chung, RS, HPLC so sánh chất lỏng siêu tới hạn khai thác chiết dung môi coumarins từ vỏ trái Citrus maxima, Phytochem., 16, 459 năm 2005 13 Ashraf-Khorassani, M., Gidanian, S., Zamini, Y., Ảnh hưởng nhiệt độ, áp suất, sửa đổi, sửa đổi lần tập trung mẫu ma trận việc khai thác chất lỏng siêu tới hạn hiệu hợp chất phenolic khác nhau, J Chromatogr SCI, 33, 658, 1995 14 Luque de Castro, MD Jimeènez-Carmona, MM, đâu siêu tới hạn fuid khai thác đi? Xu hướng Chem, 19, 223, 2000 15 Chemat, S et al, So sánh khai thác truyền thống trợ giúp siêu âm carvone limonene từ hạt giống caraway, hương vị Frag J., 19, 188, 2004 16 Choi, Y.H et al So sánh khai thác carbon dioxide siêu tới hạn với dung môi khai thác nonacosan-10-ol-amyrin acetate, một, squalene stigmasterol từ dược liệu nhà máy, Phytochem , 8, 233, 1997 17 King, JW, phân tích q trình chất lỏng siêu tới hạn khai thác: kết hợp synergestic để giải phân tích vấn đề quy mơ phịng thí nghiệm,Xu hướng Chem, 14, 474, 1995 18 Cocero, MJ cộng chiết xuất siêu tới hạn sản phẩm khơng bão hịa Sự xuống cấp b-carotene trình chiết xuất siêu tới hạn, J Supercrit Chất lỏng, 19, 39, 2000 - cao học 18 hóa học 22 ... tử hợp chất lần phân tử ion xác định, đo ion xác để xác định xác số lượng hydrogens, nguyên tử cacbon, oxy, nguyên tử khác có mặt phân tử Điều cung cấp cho công thức phân tử Một số kỹ thuật có