Nghiên cứu công nghệ sản xuất đường chức năng steviol glycoside và rebaudioside a từ cỏ ngọt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN THỊ LÀN NGHIÊN CỨU CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT ĐƯỜNG CHỨC NĂNG STEVIOL GLYCOSIDE VÀ REBAUDIOSIDE A TỪ CỎ NGỌT Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã đề tài: CNTP15B-01 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM HƯỚNG DẪN KHOA HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS Nguyễn Thị Minh Tú Hà Nội – 2018 TS Trương Hương Lan MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA i LỜI CAM ĐOAN vi LỜI CẢM ƠN vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG x DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ xi DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY CỎ NGỌT 1.1.1 Nguồn gốc đặc điểm thực vật cỏ Stevia rebaudiana Bertoni 1.1.2 Thành phần dinh dưỡng cỏ 1.1.3 Các hoạt chất sinh học cỏ 1.1.3.1 Các hợp chất diterpene 1.1.3.2 Các hợp chất chống oxy hóa 1.1.3.3 Các hợp chất kháng khuẩn 1.1.4 Sản xuất tiêu thụ cỏ 1.4.1.1 Trên giới 1.4.1.2 Tại Việt Nam 1.2 CÁC LOẠI ĐƯỜNG TỪ CỎ NGỌT 1.2.1 Cấu tạo tính chất loại đường từ cỏ 1.2.2 Vai trò loại đường cỏ 1.2.2.1 Tác dụng bệnh tiểu đường 1.2.2.2 Tác dụng bệnh béo phì, ăn kiêng 1.2.2.3 Tác dụng bệnh cao huyết áp, tim mạch 1.2.3 Tính ổn định đường cỏ 1.2.4 Tính an tồn loại đường cỏ 1.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP TRÍCH LY ĐƯỜNG TỪ CỎ NGỌT 1.3.1 Trích ly đường từ cỏ có hỗ trợ CO2 siêu tới hạn i 9 12 12 15 15 16 17 18 18 1.3.2 Trích ly đường từ cỏ có hỗ trợ sóng siêu âm 19 1.3.3 Trích ly đường từ cỏ có hỗ trợ vi sóng 20 1.3.4 Trích ly đường từ cỏ dung mơi 20 1.3.5 Trích ly đường từ cỏ phương pháp enzyme 21 1.4 KẾT TINH REBAUDIOSIDE A TỪ STG CỦA CỎ NGỌT 23 1.4.1 Kết tinh trực tiếp Rebaudioside A từ dịch STG cỏ 24 1.4.2 Kết tinh Rebaudioside A từ STG cỏ tách Stevioside 25 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CỎ NGỌT TẠI VIỆT NAM CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ 26 28 28 2.1.1 Vật liệu 28 2.1.2 Hóa chất enzyme 28 2.1.3 Thiết bị 28 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1.Phương pháp công nghệ 29 29 2.2.1.1 Xác định dung mơi thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ 30 2.2.1.2 Xác định điều kiện thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ enzyme 30 2.2.1.3 Tinh thu hồi sản phẩm STG từ cỏ 30 2.2.1.4 Xác định điều kiện kết tinh Rebaudioside A từ bột STG cỏ 31 2.2.2 Phương pháp phân tích hóa lý 31 2.2.3 Phương pháp phân tích vi sinh 33 2.2.4 Phương pháp phân tích kim loại nặng 33 2.2.4 Phương pháp tốn học 33 2.2.4.1 Tính hiệu suất 33 2.2.4.2 Phương pháp xử lý số liệu 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT CHÍNH TRONG LÁ CỎ NGỌT TRỒNG Ở VIỆT NAM 3.1.1 Xác định hàm lượng STG, Stevioside Rebaudioside A số giống cỏ khác ii 35 35 3.1.2 Nghiên cứu cảm quan xác định thành dinh dưỡng cỏ S rebaudiana KST01 3.2 NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP TRÍCH LY VÀ THU NHẬN STG 36 37 3.2.1 Nghiên cứu xác định dung mơi trích ly phù hợp 37 3.2.2 Nghiên cứu sử dụng enzyme trình trích ly STG từ cỏ 39 3.2.2.1 Nghiên cứu lựa chọn loại enzyme thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ 39 3.2.2.2 Nghiên cứu tỉ lệ ngun liệu/nước cho q trình trích ly STG từ cỏ 41 3.2.2.3 Nghiên cứu tốc độ khuấy thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ 42 3.2.2.4 Nghiên cứu lựa chọn tỷ lệ enzyme bổ sung thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ 43 3.2.2.5 Nghiên cứu lựa chọn pH thích hợp cho q trình trích ly STG từ cỏ 44 3.2.2.6 Nghiên cứu lựa chọn nhiệt độ thích hợp đến q trình trích STG từ cỏ 45 3.2.2.7 Nghiên cứu lựa chọn thời gian thích hợp đến q trình trích ly STG từ cỏ 47 3.2.2.8 Nghiên cứu ảnh hưởng số lần trích ly 48 3.2.3 Nghiên cứu điều kiện tinh chế dịch chiết 48 3.2.3.1 Xử lý kết tủa tạp chất dịch trích ly Ca(OH) FeCl3 48 3.2.3.2 Nghiên cứu q trình khử màu dịch trích ly từ cỏ 49 3.3.2.3 Nghiên cứu lựa chọn nồng độ than hoạt tính thích hợp cho q trình khử màu dịch trích ly cỏ 51 3.3.2.4 Nghiên cứu lựa chọn nhiệt độ thời gian thích hợp cho q trình xử lý than hoạt tính CN1 52 3.2.4 Nghiên cứu thông số công nghệ để thu nhận bột chế phẩm STG từ dịch trích ly cỏ phương pháp sấy phun 54 3.2.4.1 Xác định nồng độ chất khơ dịch trích ly cỏ thích hợp cho sấy phun 54 3.2.4.2 Xác định nhiệt độ khơng khí đầu vào trình sấy phun 55 iii dịch trích ly cỏ 3.2.4.3 Xác định tốc độ dịng nhập liệu 56 3.2.5 Xây dựng qui trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm STG quy mơ phịng thí nghiệm (1 kg nguyên liệu cỏ ngọt/mẻ) 57 3.3 NGHIÊN CỨU KẾT TINH VÀ THU NHẬN CHẾ PHẨM REBAUDIOSIDE A 90 % TỪ STG 61 3.3.1 Nghiên cứu xác định điều kiện kết tinh Rebaudioside A từ chế phẩm STG 61 3.3.1.1 Xác định nồng độ dung mơi ethanol thích hợp để tách Rebaudioside A 61 3.3.1.2 Xác định tỷ lệ dung mơi/cơ chất thích hợp để kết tinh Rebaudioside A từ chế phẩm STG 62 3.3.1.3 Xác định nhiệt độ thích hợp để kết tinh Rebaudioside A từ chế phẩm STG 63 3.3.1.4 Xác định thời gian kết tinh Rebaudioside A thích hợp 63 3.3.1.5 Bổ sung Rebaudioside A tinh khiết làm mầm tinh thể để khởi động tăng cường tốc độ kết tinh 64 3.3.2 Thu nhận chế phẩm Rebaudioside A 90% phương pháp sấy chân khơng 66 3.3.3 Xây dựng qui trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm Rebaudioside A 90% qui mơ phịng thí nghiệm (1 Kg nguyên liệu/mẻ) 67 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC 78 iv LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, luận văn cơng trình nghiên cứu khoa học độc lập riêng hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Thị Minh Tú TS Trương Hương Lan Các số liệu, kết nêu luận văn tập hợp từ nhiều nguồn tài liệu liên hệ thực tế, thông tin luận văn trung thực có nguồn gốc rõ ràng Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Tác giả Nguyễn Thị Làn v LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt luận văn này, lời tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy cô giáo trường Đại học Bách khoa Hà Nội lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Minh Tú, người thầy dành tâm huyết, tận tình hướng dẫn trang bị cho tơi kiến thức làm tảng để nghiên cứu, ứng dụng luận văn hoạt động thực tiễn Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn TS Trương Hương Lan - Chủ nhiệm Bộ môn Thực phẩm Dinh dưỡng, TS Lại Quốc Phong anh chị em đồng nghiệp Bộ môn Thực phẩm Dinh dưỡng ủng hộ, tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất, trang thiết bị, dụng cụ thí nghiệm tận tình hướng dẫn tơi hồn thành tốt cơng trình nghiên cứu Tơi xin gửi lời tri ân đến gia đình, bạn bè người thân động viên, giúp đỡ, tạo động lực cho tơi hồn thành tốt luận văn Trân trọng cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Làn vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, Viết đầy đủ Nghĩa tiếng Việt chữ viết tắt EDI Estimated Daily Intake Mức tiêu thụ hàng ngày ước tính FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên hợp Quốc FDA Food and Drug Administration Cục Quản lý dược Thực phẩm Mỹ FSANZ Food Standards Zealand JECFA Joint Expert Committee on Food Ủy ban Chuyên gia phụ gia thực phẩm Additives STG Steviol Glycoside Steviol Glycoside WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới Australia vii New Các tiêu chuẩn thực phẩm Australia New Zealand DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Thành phần hóa học cỏ S rebaudiana Bảng 1.2 Cấu tạo đường STG cỏ 10 Bảng 1.3 Đặc điểm hàm lượng STG cỏ S rebaudiana khơ 11 Bảng 1.4 Tính chất hoạt động điều kiện tối ưu chế phẩm enzyme thương mại sử dụng để trích ly đường từ cỏ 23 Bảng 3.1 Hàm lượng STG, Stevioside Rebaudioside A số giống cỏ khác 35 Bảng 3.2 Một số thành phần dinh dưỡng cỏ S rebaudiana KST01 37 Bảng 3.3 Ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất trích ly cỏ 42 Bảng 3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình trích ly STG từ cỏ 46 Bảng 3.5 Ảnh hưởng loại than hoạt tính tới q trình khử màu dịch trích ly cỏ 49 Bảng 3.6 So sánh dịch xử lý không xử lý Ca(OH)2 FeCl3 50 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tính Norit CN1 tới q trình khử màu dịch trích ly cỏ 51 Bảng 3.8 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả khử mầu than hoạt tính Norit CN1 52 Bảng 3.9 Ảnh hưởng thời gian xử lý tới khả khử màu than hoạt tính 53 Bảng 3.10 Ảnh hưởng nồng độ chất khơ dịch trích ly cỏ tới hiệu suất thu hồi chất lượng sản phẩm 54 Bảng 3.11 Ảnh hưởng nhiệt độ khơng khí đầu vào sấy phun đến hiệu suất thu hồi sản phẩm thành phần chế phẩm STG 55 Bảng 3.12 Ảnh hưởng tốc độ nhập liệu đến hiệu suất thu hồi sản phẩm 56 viii đánh giá cảm quan chế phẩm STG dạng bột Bảng 3.13 Một số tiêu chất lượng chế phẩm bột STG 60 Bảng 3.14 Ảnh hưởng nồng độ dung môi ethanol đến hiệu suất kết tinh Rebaudioside A hàm lượng Rebaudioside A tinh thể 61 Bảng 3.15 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi /cơ chất đến trình kết tinh Rebaudioside A từ chế phẩm STG 62 Bảng 3.16 Tính chất chế phẩm RebA bổ sung RebA tinh khiết với hàm lượng khác 65 Bảng 3.17 Một số tiêu chất lượng chế phẩm Rebaudioside A 90% 66 ix anticancerous activity against colon cancer, World Journal of pharmacy and pharmaceutical sciences, ISSN 2278 – 4357, Volume 3, Issue 5, 1394-1410 28 Erkucuk A., Akgun I.H., Yesil-Celiktas O (2009), Supercritical CO2 extraction of glycosides from Stevia rebaudiana leaves: Identification and optimization, The Journal of Supercritical Fluids, Volume 51, Issue 1, November, Pages 29-35 29 FAO (Food and Agriculture Organization), (2007b), Chemical and Technical Assessment: Steviol Glycosides Revised by Paul M Kuznesof, PhD for the 68‘h JECFA Meeting 30 Gasmalla Mohammed Abdalbasit A , Ruijin Yang, Xiao Hua (2015), Extraction of rebaudioside-A by sonication from Stevia rebaudiana Bertoni leaf and decolorization of the extract by polymers, Journal of Food Science and Technology, September 2015, Volume 52, Issue 9, pp 5946–5953 31 Geuns J (2002), Safety evaluation of Stevia and Stevioside, Studies in Natural Products Chemistry, Vol 27, p: 299-319 32 Geuns, J (2003) Stevioside, Phytochemistry, 64, 913–921 33 Gregersen S., Jeppensen P.B., Holst J.J.,Hermansen K., (2004) Antihyperglycemic effects of stevioside in type diabetic subjects Metabolism, 53, 73-76 34 Giovanetto; Roger H., 1990, Method for the recovery of Steviosides from plant raw material, United States Patent 4.892.938 35 Hsu YH, LiuJC, Kao PF, Lee CN, Chen YJ, Hsieh MH, Chan P., (2002), Antihypertensive effect of stevioside in different strains of hypertensive rats, Zhonghua Yi Xue Za Zhi (Taipei), Jan; 65(1):1-6 36 Jackson Mel Clinton , Gordon James Francis, Robert Gordon Chase, 2006, High yield method of producing pure rebaudioside A, United States Patent 7923552 37 Jaitak V., Kumar Kaul V., Bandna, N Kumar, B Singh, L S Savergave, V V Jogdand, S Nene (2009), Simple 72 and efficient enzymatic transglycosylation of stevioside by β-cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus firmus, Biotechnology Letters, 31:1415 38 Jayaraman S., Manoharan M & Illanchezian S (2008), In-vitro antimicrobial and antitumor activities of Stevia rebaudiana (Asteraceae) leaf extracts Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 7, 1143–1149 39 Jittanit Weerachet, Siriwan Niti-Att and Onuma Techanuntachaikul (2010), Study of Spray Drying of Pineapple Juice Using Maltodextrin as an Adjunct, Chiang Mai J Sci 37(3): 498-506 40 Kaur D., Wani A A., Oberoi D P S., & Sogi D S (2008), Effect of extraction conditions on Lycopene extractions from tomato processing waste skin using response surface methodology Food Chemistry, 108, 711-718 41 Kienle, U (1992) Method of making a natural sweetener based on Stevia rebaudiana, and use thereof US Patent 5112.610 42 Kinghorn AD Food Ingredient Safety Review Stevia rebaudiana leaves 1992;16:3 Kinghorn, A., & Soejarto, D (1985) Current status of Stevioside as a sweetening agent for human use In H Wagner, H Hikino, & N Farnsworth (Eds.), Economics and medicinal plant research vol 1(pp 1–52) London, UK: Academic Press 43 Kovylyaeva, G., Bakaleinik, G., Strobykina, I., Gubskaya, V., Sharipova, R., Al¢fonsov, V., et al (2007) Glycosides from Stevia rebaudiana Chemistry of Natural Compounds, 43, 81–85 44 Kroyer G (2010) Stevioside and stevia sweetener in food: application, stability and interaction with food ingredients J Consumer Protec Food Safety 5, 225 – 229 45 Lemus-Mondaca Roberto, Antonio Vega-Gálvez, Liliana Zura-Bravo, Kong Ah-Hen D, (2012), Stevia rebaudiana Bertoni, source of a high-potency natural sweetener: A comprehensive review on the biochemical, nutritional and functional aspects, Food Chemistry, 132: 1121–1132 73 46 Liu JC, Kao PK, Chan P, Hsu YH, Hou CC, Lien GS, Hsieh MH, Chen YJ, Cheng JT (2003), Mechanism of the antihypertensive effect of stevioside in anesthetized dogs, Pharmacology, Jan;67(1):14-20 47 Liu, J., Li, J.W and Tang, J (2010), Ultrasonically Assisted Extraction of Total Carbohydrates from Stevia rebaudiana Bertoni and Identification of Extracts Food and Bioproducts Processing, 88, 215-221 48 Liu YF., Di D.L., Bai Q.Q., Li J.T., Chen Z.B., Lou S., Ye H.L (2011), Preparative separation and purification of rebaudioside A from steviol glycosides using mixed-mode macroporous adsorption resins J Agric Food Chem 59:9629–9636 doi: 10.1021/jf2020232 49 Magomet; Malsagov, Tomov; Tugan, Somann; Timur, Abelyan; Varuzhan H, (2011), Process for manufacturing a sweetener and use thereof, United States Patent, 7.862.845 50 Maki K.C, L.L Curry M.S Reeves, P.D Toth, J.M McKenney, M.V Farmer, S.L.Schwartz, B.C.Lubin, A.C.Boileau, M.R.Dicklin, M.C.Carakostas, S.M.Tarkai (2008), Chronic consumption of rebaudioside A, a steviol glycoside, in men and women with type diabetes mellitus, Food and Chemical Toxicology, Volume 46, Issue 7, Supplement, July 2008, Pages S47-S53 51 Mandarino LJ, Wrihgt KS, Verit LS, Nicolus J, Bell JM, Kolterman OG, Beck-Nielson H (1987) Effects of insulin infusion on human skeletal muscle pyruvate dehydrogenase, osphofructo kinase, and glycogen synthase Evidence for their role in oxidative and nonoxidative glucose metabolism J Clin Invest 80:655–663 52 Markosyan Avetik, Yerevan (AM) (2013), High purity Steviol glycoside, United States Patents 0071339A1 53 Martin, Robert L., (2010), GRAS Assessment – PureCircle USA, lnc High Purity Steviol Glycoside, GLG Life Tech, Ltd Vancouver, British Columbia, CANADA 74 54 Mishra, P., Singh, R., Kumar, U., & Prakash, V (2010) Stevia rebaudiana– A magical sweetener Global Journal of Biotecnology & Biochemistry, 5, 62–74 55 Nikolai B, Oxana R, Alexander N (2001) Peculiarities of deterpenoid steviol glycoside production in vitro cultures of Stevia rebaudiana Bertoni Plant Sci 161: 155-163 56 Onakpoya Igho and Carl J Heneghan (2015), Effect of the natural sweetener, steviol glycoside, on cardiovascular risk factors: A systematic review and metaanalysis of randomised clinical trials, Eur J Prev Cardiol., 22(12):1575-8 57 Payzant John Donal, Laidler James Kenneth, Ippolito Robert Maurice, (1999), Method of extracting selected sweet glycosides from the Stevia rebaudiana plant, United States Patent, 5962678 58 Prakash I, Upreti M, Dubois GE, King, GA, Klucik J, San M, Rafaelel I (2009b) Sweetness enhancers, sweetness enhanced sweetener compositions, methods for their formulation, and uses US patent no WO/2008/147727 59 Puri M, Kaur A, Singh RS, Singh N (2010) Response surface optimization of medium components for naringinase production from Staphylococcus xylosus MAK2 App Biochem, Biotech; 19: 162:181 60 Puri M, Sharma D, Tiwari AK, Barrow CJ (2012), Optimisation of novel method for the extraction of steviosides from Stevia rebaudiana leaves, Food Chemistry, 132, 1113–1120 61 Phillips K.C (1989) Stevia: steps in developing a new sweet ener Pages 143 in T H Grenby ed Developments in sweeteners, Volume Elsivier Applied Science, London 62 Phisut N (2012), Spray drying technique of fruit juice powder: some factors influencing the properties of product, International Food Research Journal 19(4): 1297-1306 63 Rao A Bhaskar, Sara A George, Sateesh Alavala, H M Meshram, K Chandra Shekar (2015), Metal Salts Assisted Enzyme-Based Extraction of 75 Stevioside from the Leaves of Stevia rebaudiana Bertoni, Advances in Bioscience and Biotechnology, 6, 734-743 64 Raskovic A., Gavrilovic M., Jakovljevic V., Sabo J (2004), Glucose concentration in the blood of intact and alloxan –treated mice after treatment with commercial preparation of Stevia rebaudiana (Bertoni), Eur J Drug Metab Pharmacokinet, 29 (2): 87-90 65 Rizzo Benedetta, Laura Zambonin, Cristina Angeloni, Emanuela Leoncini, Francesco Vieceli Dalla Sega, Cecilia Prata, Diana Fiorentini and Silvana Hrelia (2013), Steviol Glycosides Modulate Glucose Transport in Different Cell Types, Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2013, Article ID 348169, 11 pages 66 Roden M., Bernroider E (2003) Hepatic glucose metabolism in humans—its role in health and disease Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 17:365–383 67 Saravanan R, Vengatash babu K, Ramachandran V (2012), Effect of Rebaudioside A, a diterpenoid on glucose homeostasis in STZ-induced diabetic rats, J Physiol Biochem 68(3) :421-31 68 Savita S., Sheela K., Sunanda S., Shankar A., & Ramakrishna P (2004), Stevia rebaudiana – A functional component for food industry Journal of Human Ecology, 15, 261–264 69 Shahidan Nor Hayati BT (2012), Enzymematic extrction of Stevioside from Stevia rebaudiana leaves using cellulase, A thesis submitted in fulfilment of the requirement For the award of the degree of Bachelor of Chemical Engineering, University Malaysia Pahang 70 Shimazu T (1987), Neuronal regulation of hepatic glucose metabolism in mammals, Diabtes Metabol Rev 3:185– 206 71 Stones Mike (2011), Stevia wins final EU approval Foodmanufacture.co.uk 72 Tadhani, M., Patel, V., & Subhash, R (2007) In vitro antioxidant activities of Stevia rebaudiana leaves and callus Journal of Food Composition and Analysis, 20, 323–329 76 73 Tan, S.; Shibuta, Y.; Tanaka, O (1988) Isolation of sweetener from Stevia rebaudiana Jpn Kokai 63,177,764 74 Tomita, T., Sato, N., Arai, T., Shiraishi, H., Sato, M., Takeuchi, M., et al (1997) Bactericidal activity of a fermented hot-water extracts from Stevia rebaudiana Bertoni and other food-borne pathogenic bacteria Microbiology and Immunology, 41, 1005–1009 75 Toyoda K., Matsui H., Shoda T., Uneyama C., Takada K., Takahashi M., (1997) Assessment of the Carcinogenicity of Stevioside in F344 Rats Food Chem Toxicol 35, 597–603 76 Thomas, J., & Glade, M (2010) Stevia : It’s not just about calories The Open Obesity 77 WHO (1999) Food Additives, Series 42: Safety evaluation of certain food additives ’’Stevioside’’, Genf, pp 119–143 78 WHO, (2006) Joint FAONVHO Expert Committee on Food Additives WHO Food Additive Series 54: Safety absorption of the glycosidic sweeteners Stevioside and Rebaudioside A Experientia 36, 51 9-520 79 Wolwer-Rieck U (2012) The leaves of Stevia rebau diana (Bertoni), their constituents and the analyses there-of: a review Journal of Agricultural and Food Chemistry, 60, pp 886–895 80 Yamada A., Ohgaki S., Noda T., Shimizu M., (1985) Chronic toxicity of dietary Stevia Extracts J Food Hyg Soc Jpn 26, 169–183 81 Zulkarnain Bin Jema’at (2013), Isolation of steviol glycosides from the mixture of S rebaudiana stems and leaves using ethanol and ultrasound technique, Thesis of the degree in Bachelor of Chemical Engineering, Universiti Malaysia Pahang 77 PHỤ LỤC 78 PHỤ LỤC MỘT SỐ KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU BẰNG PHẦN MỀM SPSS 18 Phụ lục bảng 3.1 Descriptives N Ham luong STV (%) Ham luong RebA (%) Ham luong STG (%) Mean Std Deviatio n 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Std Error Upper Bound Minimum Maximum M77 8,8667 ,30551 ,17638 8,1078 9,6256 8,60 9,20 S77 2,2000 ,20000 ,11547 1,7032 2,6968 2,00 2,40 KST01 1,6333 ,05774 ,03333 1,4899 1,7768 1,60 1,70 KST02 2,3000 ,20000 ,11547 1,8032 2,7968 2,10 2,50 Total M77 S77 KST01 KST02 Total M77 12 3 3 12 3,7500 3,10205 8,3667 ,15275 9,5667 ,11547 21,6433 ,15275 12,2000 ,20000 12,9417 5,43933 17,2333 ,32146 ,89549 ,08819 ,06667 ,08819 ,11547 1,57020 ,18559 1,7791 7,9872 9,2798 21,2539 11,7032 9,4857 16,4348 5,7209 8,7461 9,8535 22,0128 12,6968 16,3977 18,0319 1,60 8,20 9,50 21,50 12,00 8,20 17,00 9,20 8,50 9,70 21,80 12,40 21,80 17,60 S77 11,7667 ,23094 ,13333 11,1930 12,3404 11,50 11,90 KST01 23,2767 ,16623 ,09597 22,8637 23,6896 23,10 23,43 14,5000 ,40000 ,23094 13,5063 15,4937 14,10 14,90 16,6942 4,46025 1,28756 13,8603 19,5281 11,50 23,43 KST02 Total 12 ANOVA Sum of Squares Ham luong STV (%) Between Groups Ham luong STG (%) Mean Square 35,166 ,353 ,044 Total 105,850 11 Between Groups Within Groups 325,249 ,200 Total 325,449 11 Between Groups 218,144 Sig ,000 108,416 ,025 4336,656 ,000 72,715 844,782 ,000 ,689 ,086 218,832 11 Within Groups Total F 796,201 Within Groups Ham luong RebA (%) df 105,497 i Ham luong STV (%) Tukey HSDa Giong co ngot Subset for alpha = 0.05 N dimension1 KST01 1,6333 S77 2,2000 KST02 2,3000 M77 8,8667 Sig 1,000 ,935 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 Ham luong RebA (%) Tukey HSDa Giong co ngot Subset for alpha = 0.05 N dimension1 M77 S77 KST02 KST01 Sig 8,3667 9,5667 12,2000 21,6333 1,000 1,000 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 Ham luong STG (%) Tukey HSDa Giong co ngot Subset for alpha = 0.05 N dimension1 S77 KST02 M77 KST01 Sig 11,7667 14,5000 17,2333 23,2767 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 ii 1,000 1,000 Phụ lục Bảng 3.3 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std N Mean Deviation Std Error Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum Hieu suat v/p 26,3000 ,26458 ,15275 25,6428 26,9572 26,00 26,50 trich ly chat 50v/p 31,1667 ,11547 ,06667 30,8798 31,4535 31,10 31,30 100v/p 35,2333 ,05774 ,03333 35,0899 35,3768 35,20 35,30 150v/p 39,4000 ,30000 ,17321 38,6548 40,1452 39,10 39,70 200v/p 41,3667 ,11547 ,06667 41,0798 41,6535 41,30 41,50 250v/p 42,0333 ,25166 ,14530 41,4082 42,6585 41,80 42,30 300v/p 42,2667 ,20817 ,12019 41,7496 42,7838 42,10 42,50 Total 21 36,8238 5,86753 1,28040 34,1529 39,4947 26,00 42,50 v/p 57,3667 ,15275 ,08819 56,9872 57,7461 57,20 57,50 trich ly STG 50v/p (%) 100v/p 61,6667 ,15275 ,08819 61,2872 62,0461 61,50 61,80 65,6000 ,10000 ,05774 65,3516 65,8484 65,50 65,70 150v/p 70,1333 ,11547 ,06667 69,8465 70,4202 70,00 70,20 200v/p 73,5667 ,15275 ,08819 73,1872 73,9461 73,40 73,70 250v/p 74,2333 ,41633 ,24037 73,1991 75,2676 73,90 74,70 300v/p 74,3667 ,20817 ,12019 73,8496 74,8838 74,20 74,60 21 68,1333 6,41033 1,39885 65,2154 71,0513 57,20 74,70 kho (%) Hieu suat Total ANOVA Sum of Squares Hieu suat trich ly Between Groups chat kho (%) Within Groups df Mean Square 687,965 114,661 ,593 14 ,042 Total 688,558 20 Hieu suat trich ly Between Groups 821,227 136,871 STG (%) Within Groups ,620 14 ,044 821,847 20 Total iii F Sig 2705,479 ,000 3090,638 ,000 Hieu suat trich ly chat kho (%) Tukey HSDa Cong thuc khuay Subset for alpha = 0.05 N v/p 26,3000 50v/p 100v/p 150v/p 200v/p 250v/p 42,0333 300v/p 42,2667 31,1667 35,2333 39,4000 dimension1 Sig 41,3667 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 ,799 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 Hieu suat trich ly STG (%) Tukey HSDa Cong thuc khuay Subset for alpha = 0.05 N v/p 57,3667 50v/p 100v/p 150v/p 200v/p 250v/p 74,2333 300v/p 74,3667 61,6667 65,6000 70,1333 dimension1 Sig 73,5667 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 iv 1,000 1,000 1,000 ,984 Phụ lục hình 3.1: One-Way ANOVA Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N HSTL Nuoc STG (%) Ethanol HSTL CK (%) Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 51,5333 1,40119 ,80898 48,0526 55,0141 50,40 53,10 43,9667 1,65630 ,95627 39,8522 48,0811 42,40 45,70 Ethanol 80% 48,9000 ,26458 ,15275 48,2428 49,5572 48,70 49,20 Methanol 59,6000 ,88882 ,51316 57,3921 61,8079 58,60 60,30 Methanol 80% 65,8000 1,41774 ,81854 62,2781 69,3219 64,70 67,40 Total 15 53,9600 8,12938 2,09900 49,4581 58,4619 42,40 67,40 Nuoc 28,2667 ,90738 ,52387 26,0126 30,5207 27,30 29,10 Ethanol 22,4000 1,27671 ,73711 19,2285 25,5715 21,30 23,80 Ethanol 80% 26,2000 1,15326 ,66583 23,3352 29,0648 25,10 27,40 Methanol 31,1333 ,60277 ,34801 29,6360 32,6307 30,50 31,70 Methanol 80% 33,7667 ,55076 ,31798 32,3985 35,1348 33,20 34,30 15 28,3533 4,14261 1,06962 26,0592 30,6474 21,30 34,30 Total ANOVA Sum of Squares HSTL STG Between Groups Mean Square 910,063 227,516 15,153 10 1,515 Total 925,216 14 Between Groups 231,357 57,839 8,900 10 ,890 240,257 14 Within Groups HSTL CK df Within Groups Total F 150,142 ,000 64,988 ,000 HSTL STG H1 Tukey HSDa Loai dung moi TL Subset for alpha = 0.05 N Ethanol Ethanol 80% 48,9000 Nuoc 51,5333 Methanol Methanol 80% 43,9667 dimension1 Sig 59,6000 65,8000 1,000 ,139 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 v 1,000 Sig 1,000 HSTL CK H1 Tukey HSDa Loai dung moi TL Subset for alpha = 0.05 N Ethanol Ethanol 80% 26,2000 Nuoc 28,2667 Methanol Methanol 80% 22,4000 dimension1 Sig 31,1333 33,7667 1,000 ,127 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 vi 1,000 1,000 Phụ lục hình 3.6: One-Way ANOVA Descriptives 95% Confidence Interval for N Mean Std Std Deviation Error Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum HSTL 30 phut 61,0333 ,92916 ,53645 58,7252 63,3415 60,40 62,10 STG 60 phut 79,1000 ,69282 ,40000 77,3789 80,8211 78,30 79,50 H6 90 phut 86,9333 ,45092 ,26034 85,8132 88,0535 86,50 87,40 120 phut 92,1333 ,32146 ,18559 91,3348 92,9319 91,90 92,50 150 phut 92,5333 ,30551 ,17638 91,7744 93,2922 92,20 92,80 180 phut 92,7667 ,40415 ,23333 91,7627 93,7706 92,40 93,20 210 phut 92,9667 ,20817 ,12019 92,4496 93,4838 92,80 93,20 240 phut 93,2000 ,50000 ,28868 91,9579 94,4421 92,70 93,70 24 86,3333 10,82785 2,21023 81,7611 90,9055 60,40 93,70 30 phut 26,8000 ,36056 ,20817 25,9043 27,6957 26,40 27,10 CK H6 60 phut 44,0000 ,45826 ,26458 42,8616 45,1384 43,60 44,50 90 phut 48,1000 ,30000 ,17321 47,3548 48,8452 47,80 48,40 120 phut 52,5000 ,10000 ,05774 52,2516 52,7484 52,40 52,60 150 phut 52,6000 ,10000 ,05774 52,3516 52,8484 52,50 52,70 180 phut 53,5667 ,15275 ,08819 53,1872 53,9461 53,40 53,70 210 phut 54,0000 ,10000 ,05774 53,7516 54,2484 53,90 54,10 240 phut 54,7667 ,15275 ,08819 54,3872 55,1461 54,60 54,90 24 48,2917 8,98762 1,83459 44,4965 52,0868 26,40 54,90 Total HSTL Total Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic df1 df2 Sig HSTL STG H6 2,131 16 ,100 HSTL CK H6 2,167 16 ,095 ANOVA Sum of Squares HSTL STG H6 Between Groups Mean Square 2692,173 384,596 4,400 16 ,275 Total 2696,573 23 Between Groups 1856,865 265,266 1,013 16 ,063 1857,878 23 Within Groups HSTL CK H6 df Within Groups Total vii F Sig 1398,532 ,000 4188,417 ,000 HSTL STG H6 Tukey HSDa Anh huong TGTL Subset for alpha = 0.05 N dimension1 30 phut 60 phut 90 phut 120 phut 92,1333 150 phut 92,5333 180 phut 92,7667 210 phut 92,9667 240 phut 93,2000 Sig 61,0333 79,1000 86,9333 1,000 1,000 1,000 ,266 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 HSTL CK H6 Tukey HSDa Anh huong TGTL Subset for alpha = 0.05 N dimension1 30 phut 60 phut 90 phut 120 phut 52,5000 150 phut 52,6000 180 phut 53,5667 210 phut 54,0000 240 phut Sig 26,8000 44,0000 48,1000 54,7667 1,000 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 viii 1,000 1,000 ,449 1,000 ... gia phụ gia thực phẩm Additives STG Steviol Glycoside Steviol Glycoside WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới Australia vii New Các tiêu chuẩn thực phẩm Australia New Zealand DANH... Asteraceae, có nguồn gốc từ Nam Mỹ, Amambay ph? ?a đơng bắc Paraguay phần Brazil, Argentina Ban đầu, có tên gọi Eupatorium rebaudianum, sau đổi thành Stevia rebaudiana Bertoni mang tên nhà sinh vật học lần... cách dễ dàng vào nước từ mẫu cỏ xử lý Pectinex Ultra SP-L mẫu xử lý với Cellulast 1.5L Kết nghiên cứu tương tự nghiên cứu Abelyan cộng (2010) [10] Nghiên cứu trước Choudhari Ananthanaraya (2007)