Bước đầu nghiên cứu điều kiện sản xuất và xác định khả năng kháng bacillus cereus của muối chitosan acetate

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẢN XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG BACILLUS CEREUS CỦA MUỐI CHITOSAN ACETATE Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS Trang Sĩ Trung Th.S Phạm Thị Đan Phượng Sinh viên thực hiện: Hoàng Thị Thùy Trang Mã số sinh viên: 57130114 Khánh Hòa – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẢN XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG BACILLUS CEREUS CỦA MUỐI CHITOSAN ACETATE GVHD: PGS.TS Trang Sĩ Trung Th.S Phạm Thị Đan Phượng SVTH: Hồng Thị Thùy Trang MSSV: 57130114 Khánh Hịa – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài “Bước đầu nghiên cứu điều kiện sản xuất xác định khả kháng Bacillus cereus muối chitosan acetate” cơng trình nghiên cứu cá nhân chưa công bố cơng trình khoa học khác thời điểm Khánh Hòa, tháng năm 2019 iv LỜI CẢM ƠN Trải qua năm mái Trường Đại Học Nha Trang, khoảng thời gian vơ ý nghĩa sinh viên, em học tập, nghiên cứu tìm tịi kiến thức góp phần củng cố nâng cao tầm hiểu biết lĩnh vực chuyên môn Trong tháng với nổ lực thân với quan tâm từ nhiều phía, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Qua cho phép em bày tỏ lòng cảm ơn đến: Ban Lãnh Đạo Nhà Trường, Khoa Công Nghệ Thực Phẩm Trường Đại Học Nha Trang thầy cô tận tình giúp đỡ, giảng dạy trang bị cho em kiến thức quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện Trường Đặc biệt em muốn bày tỏ lòng biết ơn đến PGS.TS Trang Sĩ Trung, Th.S Phạm Thị Đan Phượng, Th.S Nguyễn Công Minh tận tình giúp đỡ, bảo động viên em suốt trình em thực đề tài Em muốn gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cán phịng thí nghiệm Khu Công Nghệ Cao tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đề tài tốt nghiệp Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình, anh chị bạn bè động viên giúp đỡ em nhiều suốt thời gian vừa qua Sinh viên thực Hồng Thị Thùy Trang v TĨM TẮT ĐỒ ÁN Sản xuất xác định tính chất chitosan ban đầu Mục tiêu đề tài nhằm tạo sản phẩm muối chitosan hịa tan nước không gây hại sử dụng để mở rộng phạm vi ứng dụng Mặt khác muối chitosan kháng lại số vi khuẩn hay gặp thực phẩm Chitosan acetate có hoạt tính tương tự với chitosan hịa tan mơi trường acid acetic hoạt tính kháng khuẩn đối tượng vi khuẩn khác so với chitosan Việc tạo sản phẩm chitosan hòa tan nước trạng thái rắn với thông số độ tan tốt độ nhớt cao Từ khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan muối chitosan chủng vi khuẩn Gram + Bacillus cereus Đề tài nghiên cứu theo hướng sản xuất chitosan acetate trạng thái rắn cách cho chitosan dạng rắn tiếp xúc với dung dịch acid acetic, sản phẩm sau rửa ethanol để loại bỏ lượng acid dư thu nhận muối chitosan acetate Sản phẩm sau đem khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn Bacillus cereus để xác định khả kháng khuẩn so với chitosan vi MỤC LỤC Đề mục Trang LỜI CAM ĐOAN iv LỜI CẢM ƠN v TÓM TẮT ĐỒ ÁN vi MỤC LỤC vii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC BẢNG xi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT xii MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tìm hiểu nguồn nguyên liệu 1.2 Giới thiệu chitin, chitosan 1.2.1 Sự tồn chitin, chitosan tự nhiên 1.2.2 Cấu tạo tính chất chitosan 1.2.3 Các phương pháp sản xuất chitin, chitosan 11 1.3 Muối chitosan 14 1.3.1 Đặc tính muối chitosan 15 1.3.2 Các phương pháp sản xuất muối chitosan 16 1.3.3 Tình hình nghiên cứu muối chitosan 17 1.4 Chủng vi khuẩn 19 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.1.1 Chitin, chitosan 20 2.1.2 Chủng vi khuẩn 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Bố trí thí nghiệm tổng quát 23 2.2.2 Bố trí thí nghiệm chi tiết 25 2.2.3 Các phương pháp phân tích 32 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 33 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Tính chất chitin, chitosan ban đầu 34 vii 3.1.1 Ảnh hưởng tỷ lệ chitosan ethanol đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 34 3.1.2 Ảnh hưởng tỷ lệ chitosan acid acetic đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 36 3.1.3 Ảnh hưởng công đoạn xử lý ethanol đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 39 3.2 Đề xuất quy trình tạo muối đánh giá chất lượng chitosan acetate 41 3.3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan muối chitosan acetate chủng vi khuẩn Bacillus cereus 42 3.3.1 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan chủng vi khuẩn Bacillus cereus 42 3.3.2 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan acetate chủng vi khuẩn Bacillus cereus 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 52 PHỤ LỤC I: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 52 PHỤ LỤC II : KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ 58 PHỤ LỤC III: HÌNH ẢNH MỘT SỐ THIẾT BỊ DÙNG TRONG ĐỀ TÀI 62 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học chitin, chitosan cellulose [16] Hình 1.2 Sơ đồ tổng quát quy trình sản xuất chitin, chitosan [3] 12 Hình 1.3 Quy trình sản xuất chitin, chitosan phương pháp hóa học sinh học [22] 13 Hình 1.4 Cơ chế tạo muối chitosan [25] 15 Hình 2.1 Quy trình sản xuất chitosan phương pháp hóa học [31] 20 Hình 2.2 Hình thái khuẩn lạc Bacillus cereus ni cấy môi trường thạch nhuộm Gram 23 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 24 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ chitosan ethanol đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 26 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ chitosan acid acetic đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 28 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng công đoạn xử lý ethanol đến độ tan, độ nhớt muối chitosan 29 Hình 2.7 Sơ đồ bố trí thí nghiệm đánh giá khả kháng khuẩn chitosan acetate 30 Hình 3.1 Sản phẩm muối chitosan tạo thành từ tỷ lệ chitosan ethanol khác 35 Hình 3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ chitosan ethanol đến độ tan, độ nhớt chitosan acetate 36 Hình 3.3 Sản phẩm muối chitosan tạo thành từ tỷ lệ acid acetic ethanol khác 37 Hình 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ chitosan acid acetic đến độ tan, độ nhớt chitosan acetate 38 Hình 3.5 Chitosan phản ứng trực tiếp với acid acetic 39 ix Hình 3.6 Sản phẩm muối chitosan tạo thành thay đổi công đoạn xử lý ethanol 40 Hình 3.7 Quy trình sản xuất muối chitosan acetate 42 Hình 3.8 Khảo sát khả kháng khuẩn chitosan 43 Hình 3.9 Kết khảo sát khả kháng khuẩn muối chitosan 45 x DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học phế liệu tôm thẻ chân trắng [14] Bảng 1.2 Các dung môi dùng để hòa tan chitosan [3] Bảng 1.3 Tính chất số loại chitosan thương mại [3] 10 Bảng 1.4 Các thơng số hóa lý muối chitosan [26] 16 Bảng 3.1 Chỉ tiêu chất lượng chitin đầu vào 34 Bảng 3.2 Chỉ tiêu chất lượng chitosan đầu vào 34 Bảng 3.3 Kết thực nghiệm cho thấy ảnh hưởng tỷ lệ chitosan ethanol đến độ tan, độ nhớt pH muối chitosan acetate 35 Bảng 3.4 Kết thực nghiệm cho thấy ảnh hưởng tỷ lệ chitosan acid acetic đến độ tan, độ nhớt pH muối chitosan acetate 37 Bảng 3.5 Kết thực nghiệm cho thấy ảnh hưởng công đoạn xử lý ethanol đến độ tan, độ nhớt pH muối chitosan acetate 40 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ chitosan (ppm) đến tỷ lệ chết (%) vi khuẩn Bacillus cereus 43 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ muối chitosan acetate (ppm) đến tỷ lệ chết (%) vi khuẩn Bacillus cereus 45 xi 22 Phạm Thị Đan Phượng, Trang Sĩ Trung 2012 Characteristics Of Chitin And Chitosan Extracted From White Shrimp (Penaeus Vannamei) Shells Deproteinized By Chemical And Biological Methods Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Thủy sản số 03, 2012 23 Dang, Q F., Yan, J Q., Li, Y., Cheng, X J., Liu, C S & Chen, X G 2010 Chitosan acetate as an active coating material and its effects on the storing of prunus avium l J Food Sci, 75, S125-31 24 Lisbeth Ilium 1998 Chitosan and its use as a pharmaceutical excipient Pharmaceutical Research, 15, 1326-1331 25 Takeda, M., Abe, E., 1962 Isolation of crustacean chitin 26 Janusz, A & Zofia, M 2005 Some structural properties of spray-dried chitosan microgranules Drying Technology, 23, 1601-1611 27 Yan, L., Xi, G C., Nan, L., Cheng, S L., Chen, G L., Xiang, H M., Le, J Y & John, F K 2007b Physicochemical characterization and antibacterial property of chitosan acetates Carbohydrate Polymers, 67, 227-232 28 Anna Wojtasz-Pająk Chitosan dicarboxylic acid salts Sea fisheries institute in gdynia, ul Kołłątaja 1, 81-332 gdynia, poland 29 Mirna Fernández Cervera, Jyrki Heinämäki, Nilia De La Paz, Orestes López, Sirkka Liisa Maunu, Tommi Virtanen, Timo Hatanpää, Osmo Antikainen, Antonio Nogueira, Jorge Fundora, And Jouko Yliruusi Effects of spray drying on physicochemical properties of chitosan acid salts 30 Rao, M.S., Guyot, J.P., Pintado, J., Stevens, W.F., 2002 Advance in chitin science 31 Edward, J B 2010 Bacillus cereus, a volatile human pathogen Clinical Microbiology Reviews, 23, 382–398 32 A Domard, Gaf Roberts, Km Varum - 1997 - Lyon, France Chitosan Production Routes And Their Role In Determing The Structure And Properties Of The Product 33 Charoenvuttitham, P., Shi, J., & Mittal, G S (2006) Chitin Extraction from Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon) Waste using Organic Acids Separation Science And Technology, 41(6), 1135–1153 50 34 Pranee Lertsutthiwong1,2 , Ng Chuen How1 , Suwalee Chandrkrachang1 And Willem F Stevens1 Effect Of Chemical Treatmennt On The Characteristics Of Shrimp Chitosan Journal Of Metals, Materials And Minerals Vol 12 No Pp 11-18, 2002 35 Hoang Ngoc Cuong, Nguyen Cong Minh, Nguyen Van Hoa, Trang Si Trung 2016 Preparation And Characterization Of High Purity B-Chitin From Squyd Pens International journal of biological macromolecules 36 M.J.T Crobach, O.M.Dekkers, M.H Wilcox, E.J.Kuijper 2009 European society of clinical microbiology and infectious diseases Clininal Microbiology and Inflection 37 Mahmoud, H Seid, M J 2016 Evalution of diffirent factors affecting antimicrobial properties of chitosan International Journal Of Biological Macromolecules, 85, 467475 38 Hong K N., Na, Y P., Shin, H L., Samuel, P M 2002 Antibacterial activity of chitosan and chitosan oligomers with different molecular weight International Journal Of Food Microbiology, 65-72 39 Eaton, P., Fernandes, J C., Pereira, E., Pintado, M E & Malcata, F X 2008 Atomic force microscopy study of the antibacterial effects of chitosans on Escherichia coli and Staphylococcus aureus Elsevier Science 40 Jolanta, K., Mirko, X W., Jorg, T & Piotr, S 2011 Biomedical Activity of Chitin/Chitosan Based Materials—Influence of Physicochemical Properties Apart from Molecular Weight and Degree of N-Acetylation Polymers, 3, 1875-1901 41 Majeti, N V R K 2000 A review of chitin and chitosan applications Reactive & Functional Polymers, 46, 1–27 42 Li, Q., Dunn, E T., Grandmaison, E W & Goosen, M F A 1992 Applications and properties of chitosan Bioact Compat Polym., 7, 370-397 43 Du, Y et al 2009 Preparation of water-soluble chitosan from shrimp shell and its antibacterial activity Innovative Food Science & Emerging Technologies 44 Anayancy Osorio, M et al 2010 Kinetic study of the solid- state acid hydrolysis of chitosan: evolution of the crystallinity Biomacromolecules, vol 11, pp.1376–1386 51 and macromolecular structure PHỤ LỤC PHỤ LỤC I: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Phương pháp phân tích chất lượng chitin chitosan thông dụng Chất lượng chitin, chitosan thể qua thông số sau: hàm lượng ẩm, hàm lượng tro, protein, độ deacetyl, phân tử lượng, đô nhớt Phụ lục Xác định hàm lượng ẩm hàm lượng khoáng ( AOAC,1990) Cốc sấy sấy khô nhiệt độ 105oC 24h đến khối lượng khơng đổi, sau lấy để bình hút ẩm để làm nguội Cân xác định khối lượng cốc sấy W1 Cho mẫu vào cốc sấy, gọi m khối lượng mẫu ban đầu Sấy 105oC 24h , cân khối lượng W2 Tất khối lượng xác định tính gram Hàm lượng ẩm tính theo công thức sau: % hàm lượng ẩm (W) = [(W1 + m) - W2 ] *100 m Sau xác định hàm lượng ẩm, ta đem nung cốc sấy có chứa mẫu khô nhiệt độ 800oC, khoảng 24h, để bình hút ẩm cân khối lượng W3 Hàm lượng tro xác định theo công thức sau: % hàm lượng tro = (W3 - W1) * 10000 m * (100 - W) Phụ lục Xác định hàm lượng protein lại chitin phương pháp Microbiure ( Hein cộng 2004) - Thuốc thử Microbiuret: Dung dịch 1: hòa tan 173g natri citrat 100g natri cacbonat 500ml dung dịch nước cất Dung dịch 2: hòa tan 17,3g đồng sunfat 100ml dung dịch nước cất 52 Trộn dung dịch dung dịch sau làm đầy đến 1000ml nước cất Dung dịch thuốc thử giữ chai màu - Dựng đường chuẩn: Pha dung dịch protein chuẩn BSA( Bovine serum albumine) nồng độ 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25mg/ml Cho vào ống nghiệm 4ml dung dịch BSA chuẩn sau thêm 200µl dung dịch thuốc thử Microbiuret, ủ nhiệt độ phòng 15 phút, sau đo phổ UV bước sóng 330nm Từ số liệu thu được, lập phương trình đường chuẩn để từ tính hàm lượng protein mẫu Từ phương trình đường chuẩn ta có: C= -0,051+18,756A A độ hấp thụ quang học bước sóng 570nm - Phương pháp chiết mẫu: Cân 1g chitin thêm 10ml NaOH 3%, sau ủ 80oC 8h Sau ủ tiến hành lọc khối lượng, định mức dịch lọc đến thể tích định V1 Dịch lọc mang ly tâm với tốc độ 5000 vòng 15 phút Sử dụng 4ml dịch lọc sau ly tâm thêm 200 µl dung dịch thuốc thử microbiuret, ủ 15 phút nhiệt độ phòng đo màu bước sóng 330nm Giá trị thu thay vào phương trình đường chuẩn để suy hàm lượng protein mẫu - Tính tốn kết quả: Hàm lượng protein (%) = V1 * C * 100 w * (100-MC)/100 * 1000 Trong đó: V1 thể tích dịch lọc ml C hàm lượng protein tính theo đường chuẩn Microbiuret mg/ml W khối lượng mẫu ủ g MC độ ẩm mẫu % 53 1000: Hệ số chuyển đổi từ đơn vị mg sang g (mg/g) Phụ lục Xác định độ deacetyl chitosan phương pháp đo UV - Xây dựng đường chuẩn N- acetyl glucosamine Hòa tan 0,1105g N-acetyl glucosamine 10ml H3PO4 dung dịch có nồng độ 0,05M Lấy 2ml dung dịch thêm 98ml nước cất dung dịch có nồng độ 0,001M Từ dung dịch pha loãng thành nồng độ tương ứng 0,0001M, 0,0002M, 0,0004M, 0,0008M Sau có dãy nồng độ ta tiến hành đo bước sóng 230nm để xây dựng đường chuẩn N- acetyl glucosamine - Chuẩn bị mẫu chitosan Hòa tan 100mg chitosan 20ml H3PO4 85%, khuấy đảo 60oC vòng 40 phút Lấy 10ml dung dịch định mức đến 100ml nước cất sau ủ dung dịch 2h 60oC Sau ủ dung dịch đo bước sóng 210nm Từ kết đo thay vào đường chuẩn N- acetyl glucosamine để tính lượng N- acetyl glucosamine - Tính tốn kết Độ deacetyl chitosan tính theo cơng thức: DD = 100 * (1- µmolGlc = µmolGlcNAC ) µmolGlcNAC + µmolGlc w - (µmolGlcNAC * 0.20321) 0.16117 Phụ lục Cách xác định độ nhớt Độ nhớt chitosan xác định nhớt kế Brookfield, model RVT Dung dịch chitosan 1% có 1g chitosan 100ml acid acetic 1% khuấy đến tan hoàn toàn Tiến hành đo độ nhớt với tốc độ quay 60 vòng/phút trục quay số nhiệt độ phịng, đơn vị tính centipoises 54 ❖ Kết xác định công thức sau: ŋ = k. Trong đó: ŋ: Độ nhớt Chitosan : Kết đọc cửa sổ thiết bị đo k : Hệ số tỷ lệ tương đương với tốc độ quay spin Hệ số K cho bảng sau: Tốc độ quay Hệ số K spin Spin 61 Spin 62 Spin 63 Spin 64 0,3 200 1000 4000 20000 0,6 100 500 2000 10000 1,5 40 200 800 4000 20 100 400 2000 10 50 200 1000 12 25 100 500 30 10 40 200 60 20 100 Phương pháp phân tích chất lượng chitosan acetate Phụ lục Phương pháp xác định độ tan chitosan acetate Xác định độ tan muối cách cân 0,5g chitosan acetate hòa tan 50ml nước cất để tan hết, sau tiến hành pha lỗng đến 10 lần Giấy lọc sấy khô đến khối lượng không đổi 60oC 6h sau cân khối lượng m1 Tiến hành lọc dung dịch chitosan acetate giấy lọc xác định khối lượng, đem sấy khô cân ta khối lượng m2 Cơng thức tính độ tan sau: m2 – m1 = % không tan 100% - % không tan = độ tan (%) 55 Phụ lục 6a Tính tốn kết kháng khuẩn chitosan Số khuẩn lạc có 1ml mẫu ban đầu: Mi = - Ai 102 = -6 = 107 (CFU/ml) Di * V 10 * 10 CFUDC - CFU * 100% CFUDC % tế bào chết nồng độ 50ppm = = 107 - 44 * 105 * 100% = 56% 107 (Chia đĩa peptri thành phần, phần đếm 1100cfu, lúc cấy 3micro nên nhân thêm 1000) - % tế bào chết nồng độ 100ppm = CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - 24 * 105 = *100% = 76% (mỗi phần 600) 107 - CFUDC - CFU * 100% CFUDC % tế bào chết nồng độ 150ppm = = - % tế bào chết nồng độ 150ppm = = 107 - * 103 * 100% = 99,99% 107 CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - 103 *100% ≈100% 107 Phụ lục 6b Tính tốn kết kháng khuẩn muối chitosan acetate - % tế bào chết nồng độ 50ppm = = CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - 60 * 103 * 100% = 99,4% 107 56 - % tế bào chết nồng độ 100ppm = = - % tế bào chết nồng độ 150ppm = CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - 20 * 103 *100% = 99,8% 107 CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - 11 * 103 = * 100% = 99,9% 107 - % tế bào chết nồng độ 150ppm = CFUDC - CFU * 100% CFUDC 107 - * 103 = * 100% ≈100% 107 57 PHỤ LỤC II : KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ Kết khảo sát tỷ lệ chitosan ethanol đến chất lượng muối ANOVA Sum of Squares donhot Between Groups 2404.265 791.998 132.000 5600.527 047 023 Within Groups 5.513 919 Total 5.560 Between Groups 005 002 Within Groups 280 047 Total 285 Total pH Mean Square 4808.529 Within Groups dotan df Between Groups F Sig 18.214 003 025 975 050 951 Homogeneous Subsets donhot Subset for alpha = 0.05 tilecon N Duncana 14 126.6667 16 136.2667 12 179.7900 Sig .346 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 58 1.000 dotan Subset for alpha = 0.05 tilecon N Duncana 16 98.2000 14 98.3333 12 98.3667 Sig .843 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 pH Subset for alpha = 0.05 tilecon N Duncana 14 4.8100 16 4.8133 12 4.8600 Sig .793 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 59 Kết khảo sát tỷ lệ chitosan acid acetic đến chất lượng muối chitosan ANOVA Sum of Squares donhot pH dotan df Mean Square Between Groups 4945.290 2472.645 Within Groups 1421.910 236.985 Total 6367.199 Between Groups 069 034 Within Groups 078 013 Total 147 10.105 5.053 2.872 479 12.977 Between Groups Within Groups Total F Sig 10.434 011 2.645 150 10.557 011 Homogeneous Subsets donhot Subset for alpha = 0.05 tileca N Duncana 12 254.4900 21 275.2933 11 311.8500 Sig .157 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 60 1.000 pH Subset for alpha = 0.05 tileca N Duncana 21 4.7400 12 4.9000 11 4.9433 Sig .080 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 dotan Subset for alpha = 0.05 tileca N Duncana 21 11 97.8000 12 98.3233 95.8600 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 61 390 PHỤ LỤC III: HÌNH ẢNH MỘT SỐ THIẾT BỊ DÙNG TRONG ĐỀ TÀI A B Hình A Máy ép vỏ tơm B Tủ sấy Hình Bể ổn nhiệt 62 A B Hình A Máy nghiền B Thiết bị sấy chân khơng 63 A B HÌNH A Thiết bị ủ vi sinh B Tủ cấy vi sinh A B HÌNH A Máy đo độ nhớt B Máy đo Ph 64 ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẢN XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG BACILLUS CEREUS CỦA MUỐI CHITOSAN ACETATE. .. CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài ? ?Bước đầu nghiên cứu điều kiện sản xuất xác định khả kháng Bacillus cereus muối chitosan acetate? ?? cơng trình nghiên cứu cá nhân chưa công bố cơng trình khoa... chitosan pH trung tính cao giới hạn ứng dụng Để cải thiện khả hịa tan nước hoạt tính sinh học chitosan muối chitosan nghiên cứu để sản xuất Vì vậy, đề tài ? ?Bước đầu nghiên cứu điều kiện sản xuất