Nghiên cứu nuôi cấy Meristem cây tỏi

Nghiên cứu nuôi cấy Meristem cây tỏi

Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1PHN I M U1.1. t vn Rau xanh l mún n khụng th thiu c trong ba n hng ngy ca ngi Vit Nam. Mu xanh ca lỏ, v ngt ca rau khụng ch giỳp chỳng ta ngon ming m rau xanh cũn l ngun cung cp cht khoỏng, cht m v cỏc loi vitamin cho c th.Trong th gii rau xanh phong phỳ ú cú hng trm cõy rau c dng lm gia v. Rau gia v l nhng cõy rau cú mựi v c bit cú th lm cho cỏc mún n thm hn, ngon hn. Rau gia v cũn l nhng v thuc nam cú giỏ tr, s dng an ton v tin li. Mt trong nhng loi rau gia v ú phi k n cõy ti. Ti l mt loi rau c dựng lm thc n v thuc t nhng nm trc cụng nguyờn trờn cỏc vựng nhit i Trung , v sau c trng rng rói Hi Lp, Ai Cp v La Mó. Hin nay ti c trng rng rói tt c cỏc nc trờn th gii. Cú th s dng c lỏ v c lm thc n v lm thuc cha bnh cho con ngi.Theo nghiờn cu ca cỏc nh khoa hc trong v ngoi nc ó phỏt hin ra nhiu cụng dng ca ti i vi sc khe ca con ngi. Trong ti cú cht Alixin cú tỏc dng dit khun. Trong y hc ngi ta ó dựng ti cha bnh thng hn, t l, bch hu. Ti cũn cha y hi bng cỏch n trc tip hoc gió nh xoa vo bng khi b cỳm thỡ n ti sng hoc ung ru ti cng khi. 1 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1Ngy nay ngi ta cng bit n rt nhiu cụng dng ca cõy ti ang c rt nhiu nụng dõn, cỏc vựng chuyờn canh rau ln ca nc ta ó mnh dn u t vo cõy ti, a cõy ti tr thnh cõy ch lc ca nhiu a phng. Xa nay ngi dõn thng ging bng c, phng phỏp ging ú gp mt s khú khn nh: T l mc mm ca ging kộm, ging t v ny sang v khỏc qua thi gian di nờn ging rt d b hng nu nh bo qun khụng tt, khụng loi b c cỏc bnh c bit l cỏc bnh do virus, t l thoỏi húa ca cỏc ging l rt cao khc phc nhng khú khn ú ngi ta ó s dng nh sinh trng (Meristem) ca cõy ti v tin hnh nuụi cy in vitro to vt liu khi u sau ú tin hnh nhõn nhanh to cõy sch bnh.Vi mc ớch ú chỳng tụi tin hnh nghiờn cu ti: Nghiờn cu nuụi cy Meristem cõy ti1.2. Mc ớch v yờu cu 1.2.1. Mc ớchNghiờn cu quy trỡnh v nuụi cy Meristem cõy ti nhm to ra vt liu sch bnh cung cp cho quỏ trỡnh nhõn nhanh in vitro.1.2.2. Yờu cu- Xỏc nh c k thut kh trựng mu thớch hp.- Xỏc nh kớch thc Meristem thớch hp.- Xỏc nh mụi trng nhõn chi thớch hp.- Xỏc nh c mụi trng nhõn nhanh chi thớch hp. 2 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1PHN II TNG QUAN TI LIU2.1. Gii thiu chung v cõy ti2.1.1. Ngun gc, phõn loi, c im thc vt hc ca cõy ti.2.1.1.1. Ngun gcCõy ti cú xut x t cỏc nc Trung cn ụng: Apganixtan, Iran, ú l nhng vựng cú nng nhiu, m khụng khớ thp, biờn nhit ngy v ờm gia cỏc mựa trong nm chờnh lch rừ rt.2.1.1.2. V trớ phõn loiTrong thi gian di ti c xp vo h Liliaccae do hoa ca nú thuc loi bu thng .Nhng sau dú mt s nh thc vt hc ó i thnh h Amaryllidaccea (Amallryllis)- h thu tiờn do hoa ca nú c sinh ra lỏ bc, hỡnh tỏn , ngn cú cỏn hoa. Gn õy trỏnh s sỏo chn J.G. Agard ó phõn loi ti vo h Alliaceac (h hnh ti). H ny cho ti nay cú 30 chi v cú ti 600 loi.2.1.1.3. c im thc vt hc.- Thõn: + Thõn tht ca ti rt ngn ó thoỏi hoỏ chỳng l dng dũ nm sỏt ngay di thõn gi (thõn c). Trờn thõn tht cú mm sinh dng v sinh thc, nhng mm ny c che ph bi nhng b lỏ dy mng nc. 3 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1+Thõn c cõy ti bao gm mt s nhỏnh (ỏnh, tộp) c liờn kt vi nhau bi nhng mng mng.- Lỏ: Lỏ tht u tiờn ca ti l mt lỏ mm, sau khi ny mm c 10 - 15 ngy tu theo iu kin thi tit m lỏ ti cú dng hỡnh bn bng phng, trờn lỏ cú ph mt lp sỏp. Thi k u lỏ ti sinh trng rt chm sau khi ny mm ch di vi cm. Tui th ca lỏ ph thuc vo s sinh trng v phỏt trin ca cõy, khi lỏ bt u cht cng l quỏ trỡnh to c bt u.- Hoa: Hoa ti thuc hoa u trng, hoa cú 6 lỏ i, 6 nh v nhy. Hoa th phn chộo (phn hoa thng chớn trc vỡ vy phi th phn vi hoa bờn cnh hoc trờn cõy khỏc). Hoa cú mu trng xỏm ụi khi pht tớm hoc hng. Vũi nhy rt bộ, bu thng cú 3 ngn nu c th phn thỡ s cho 6 ht. Cnh hoa di 60-100 mm hỡnh ng, mu xanh, mt chựm hoa cú t 250-600 hoa phõn b theo 3 tng. - C: Loi ti trng c to ng kớnh khong 4cm cú v mu trng.Loi ti tớa c nh hn, ng kớnh 3,5 4 cm, c chc v cay, dc thõn gn c cú mu tớa.Trong c ti cha 60- 70 % nc, 35 42% cht khụ, 6,7 8% cht bộo, 0,3- 3,2% ng, 0,1% cht s hu c, 0,1- 0,5% du este, 0,06% m, cỏc cht khoỏng Ca, Na, Mn, P, Fe v cỏc Vitamin C, E, B1, B6, B2.- R: R ti thuc loi r chựm, phỏt trin kộm tp chung ch yu lp t mt, kh nng chu hn kộm. R ti cú nhiu si di phõn nhỏnh yu, chỳng c bao ph bi mt s lng ln lụng hỳt. 4 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K12.2. Giỏ tr v ý ngha ca tiHnh ti l cõy trng lõu i v chim v trớ quan trng trong sn xut rau trờn th gii. Khụng cú nc no, dõn tc no li khụng a hnh ti vo khu phn n thng nht. Hnh ti c s dng rng rói v a dng, lng dựng hng ngy khụng nhiu nhng cho c nm thỡ s lng ỏng k. Thớ d Liờn Xụ nhng nm 1980 bỡnh quõn mt ngi mt s nc t 14-17kg/nm.Ti l mt loi rau cú giỏ tr dinh dng cao, theo Ivannova E.P (1980) trong ti cú cỏc thnh phn hoỏ hc nh sau: protein 3%, ng 9%, vitaminC 30-35%, cỏc vitaminA,B1,B2,v cỏc cht khoỏng Na, Ca, Mg, P, FeDo vy ti l mt loi rau gia v khụng th thiu c trong ch bin mún n hng ngy ca cỏc b ni tr v cỏc u bp.- Ti cũn l mt v thuc c ụng y v tõy y s dng t rt sm. Theo mt vn bn ca Ai Cp (1550) thỡ trong 800 n thuc cha bnh cho ngi thỡ cú hn 20 n thuc cú dựng ti.- Cỏc bnh cú th dựng ti nh mt phng thc l nhng bnh v tiờu húa: y bng, chm tiờu, ri lon tiờu húa, tiờu chy, bnh l .au bng do lnh. St rột, ho g, mn nhn, inh c, viờm loột lõu lin, dng túc, nm túc - Hy Lp lng y Hippociate v trit gia Airiftote ó khuyờn n nhiu ti cha bnh.- Nh khoa hc c Pasteur (1885) ó phỏt hin trong ti cú cht khỏng khun.- Ti cũn cú tỏc dng i vi ln da 5 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1Trong ti cú cha Vitamin B1, B2, E l cht men khụ th thiu c trong quỏ trỡnh chuyn i ng, thiu Vitamin B1 s lm gim sc khỏng bnh tt ca c th sinh ra mt s bnh v da.+ Vitamin B2 trong ti khỏc Vitamin B2 v húa cht thụng thng cú cha cỏc axit hong t n ht v hong t nh ht l cht men chuyn i protein, s chuyn i ny nh hng ti v p ca da.+ Vitamin E trong ti cú tỏc dng tng cng sc n hi ca huyt qun chng bnh hoi huyt, gii c, c ch sinh sc t v ng ng cỏc sc t khỏc thng.Ngoi ra ti cú th phũng nga da gim mc, da i mi, cú tỏc dng lm mm da, chng nng, ty vt m lm trng da.- Ngoi tỏc dng lm thc n v tỏc dng cho ngi, ti cũn c s dng ch to thuc tr sõu. ú l nghiờn cu ca nh khoa hc Bangladest li dng tp tớnh ghột ti ca cụn trựng ó bin ti thnh thuc tr sõu. D ỏn kộo di 4 nm do b nụng nghip M ti tr ó cho ra nhng viờn thuc tr sõu ch to t ti.Theo Bahadur Mrad giỏm c phũng thớ ngim qun lớ sõu hi cho bit viờn ti l mt loi thuc tr sõu sinh hc khụng gõy ụ nhim mụi trng. T l mc mm ca ht khi c s lớ t 95- 100% so vi 50- 60% ht khụng qua s lớ, cõy mm cng khe mnh hn, khụng nhim bnh.2.3. Yờu cu sinh thỏi ca ti2.3.1. Nhit 6 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1Ti l cõy chu lnh tt cú th sinh trng v phỏt trin tt nhit 18-200C. Cũn trong quỏ trỡnh to c cn nhit 20 220C2.3.2. ỏnh sỏngTi l nhúm cõy a ỏnh sỏng ngy di. S gi sỏng 12- 13gi/ngy s kớch thớch s sinh trng v phỏt trin ca cõy v thỳc y quỏ trỡnh to c. Tuy nhiờn nhng gingc to ra trong iu kin ỏnh sỏng ngn ngy hoc trung bỡnh thỡ ti phỏt trin rt thớch hp trong iu kin cú ch ỏnh sỏng tng t nh ni chỳng c to ra.2.3.3. mTựy theo giai on sinh trng m cõy ti cú yờu cu khỏc nhau i vi m, phỏt trin thõn lỏ cõy cn cú m t l 70- 80%. phỏt trin c cn m l 60%. Nu thiu nc cõy s anh li, c nh, cũn nu tha nc thỡ gõy ra hin tng ỳng c thi c lm cho c khụng gi c lõu.2.3.4. Yờu cu t trng ti.t tt nht cho trng ti l t nh giu cht hu c, trng ti trờn t cỏt pha, t tht nhiu mựn thng cho nng sut cao.2.3.5. Cỏc yu t dinh dng.- Phõn hu c c bit l phõn g, vt cú tỏc dng rt tt i vi cõy ti. Loi phõn chung ny khụng nhng cung cp cht dinh dng cn thit cho cõy nht l Kali m cũn gúp phn tỏi to t lm cho lp t mt luụn ti xp, iu ú rt cú ý ngha i vi s sinh trng v phỏt trin ca h r ca cõy ti. 7 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1- m: Cú tỏc dng tng quỏ trỡnh sinh trng ca ti c bit l h r, sinh trng ca cõy v lỏ, tng ng kớnh c, do ú m l yu t quan trng quyt nh n nng sut ca cõy ti. Cõy m lỏ cú mu xanh ti, lỏ thng. Nu cõy tha m c bit vo thi k sau s thỳc y s sinh trng ca lỏ, lỏ mng, bin dng d b góy v rt d b bnh hi xõm nhp.Yờu cu m cho cõy l 300kg/ha trong sut quỏ trỡnh phỏt trin.- Lõn: Ti rt mn cm vi lõn. Cõy con c bit mn cm vi s thiu ht lõn trong t. t thiu lõn lm gim nng sut, lõn xỳc tin s hỡnh thnh phỏt trin v s chớn gi ca c, ngoi ra cõy lõn c sau ny s bo qun tt.- Kali: Cú tỏc dng tng nng sut ca cõy ti trờn c s bún lõn v m. Kali khụng nhng lm tng nng sut m cũn lm tng cht lng ca c ti. Kali lm tng hm lng ng v vitamin. Theo Ivanova E.P (1980) trong iu kin bún phõn y mt ngy ờm 1 ha ti hp thu 2,5 kg N, 0,8kg P2O5, 4,2kg K2O.i vi ti mt vn quan trng l k thut bún v cụng thc phi hp gia cỏc loi phõn cú tớnh cht quyt nh n nng sut v cht lng ca ti. V nguyờn tc, thi k u khi bt u hỡnh thnh c thỡ bún nhiu m, kali, photpho va phi. Khi thõn c phỡnh to n thi k thnh thc cn tng cng bún lõn v kali hn ch bún m hoc ngng bún m.- Cỏc nguyờn t vi lng: Ti l cõy trng mn cm vi s thiu ht cỏc nguyờn t vi lng trong t. 8 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1+ Nguyờn t vi lng nh hng n nng sut v cht lng. t thiu ng (Cu) lm cho cõy ti gy yu, mu sc kộm, gim kh nng bo qun, khi bún ng (Cu) hp lý s lm cho mu mó c p, thỳc y quỏ trỡnh thnh thc v chớn gi ca c. t thiu mangan (Mg) gõy ra bnh vng lỏ, c bit nng trờn t giu mựn cú tớnh kim cao cú th lm cho cõy b cht. t thiu Mn gõy ra vt vng gõn lỏ, lỏ b cong v nhn, cõy tr nờn cn ci.2.4. Ging trng trt2.4.1. Ging ti H Ni : c im ca ging ti ny l cú lỏ mm xanh hi xm, lỏ tht dng mm mu xanh ng, phin lỏ mng (dng lỏ lỳa), thõn c khi non cú mu tớa nht , thi gian sinh trng t 120-130 ngy.2.4.2.Ging ti trng: Cú lỏ mu xanh ng , c non cú mu pht tớa, c gi cú mu trng, thi gian sinh trng t 120-130 ngy.2.4.3. Ging ti Vit Nam: Lỏ mu xanh xm , lỏ ng cú dng lũng mỏng, c non v gi u cú mu tớm dng c trũn v dt, thi gian sinh trng 130-135 ngy.2.4.4. Ging ti tớa: Lỏ xanh xm, lỏ ng phin lỏ dy dng lũng mỏng, cung lỏ xanh, cõy cao to, c non cú mu tớm xm c gi cú mu tớa hỡnh dng trũn u. Thi gian sinh trng 125-130 ngy.2.5. K thut trng trt.2.5.1. Luõn canh tng v 9 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1Tu theo iu kin ca ngi sn xut hoc ca cỏc trang tri cú th b trớ cụng thc luõn canh phự hp nhm tng hiu qu s dng rung t, tng thu nhp cho ngi lao ng, ỏp ng yờu cu ca ngi tiờu dựng. Thng ỏp dng cỏc cụng thc luõn canh cho ti nh sau: Lỳa xuõn - Lỳa mựa sm - Ti ta T2- T6 T6- T10 T10- T2 Lỳa xuõn - M mựa - Rau mung - Ti ta T2-T6 T6 - T7 T7- T9 T10-T2 Rau xuõn hố - Lỳa mựa sm - Ti ta T2-T6 T6-T9 T10-T2 Lc xuõn - Lỳa mựa sm - Ti ta T2-T6 T6-T9 T10-T2 C chua xuõn hố - Lỳa mựa sm - Ti ta T2-T6 T6-T9 T10-T22.5.2. Thi v- Thi v sm nht cho t chuyờn canh rau vựng ng bng sụng Hng trng vo cui thỏng 9, nng sut v ny khụng cao, cng khụng n nh, cung cp cho th trng sm nờn giỏ bỏn cao - Thi v tp chung chớnh v t 15-20/10.- Thi v mun trng cui thỏng 10 u thỏng 11. Thi v ny cõy sinh trng khú khn, ti d b bnh hi xõm nhim.2.5.3. t ai v phõn bún 10 [...]... nghim 2: nh hng ca kớch thc Meristem n kh nng tỏi sinh chi Nhm tỡm hiu v kh nng tỏi sinh chi ca Meristem vi cỏc kớch thc khỏc nhau chỳng tụi tin hnh ct cỏc Meristem cỏc kớch thc khỏc nhau Mc ớch ca thớ nghim nhm tỡm ra kớch thc Meristem thớch hp cú t l mu sng cao v mụ nuụi cy sinh trng tt nht Meristem c ct vi 3 kớch thc khỏc nhau 0,3mm; 0,5mm; 0,8mm ri cy vo mụi trng tỏi sinh chi Kt qu sau hai tun... thc Meristem n kh nng tỏi sinh chi ( sau 2 tun nuụi cy) T l mu cht (%) CT T l tỏi sinh chi (%) Chiu cao TB chi (cm) CT1: Ct Meristem vi 44,50 kớch thc 0,3mm 55,65 0,35 CT2: Ct Meristem vi 29,20 kớch thc 0,5mm 70,80 1,27 CT3:Ct Meristem vi 27,80 kớch thc 0,8mm 72,20 1,34 % 80 70 60 50 40 30 20 10 0 CT1 CT2 Công thức CT3 Tỷ lệ mẫu chết TL mẫu T/S chồi Hỡnh 2: nh hng ca kớch thc Meristem n kh nng tỏi. .. HgCl 2 0,1% trong 10 phỳt 3.3.1.2 Thớ nghim 2: Nghiờn cu ca Meristem n s tỏi sinh chi Thớ nghim c b trớ vi 3 cụng thc, mụi trng s dng trong thớ nghim l MS + 30 g/l ng CT1: Ct Meristem vi kớch thc 0,3 mm CT2: Ct Meristem vi kớch thc 0,5 mm CT3: Ct Meristem vi kớch thc 0,8 mm 3.3.1.3 Thớ nghim 3: Nghiờn cu nh hng ca nng BA n kh nng tỏi sinh chi t Meristem Thớ nghim c b trớ vi 5 cụng thc: CT1 : MS + 30g/l... chiu cao trung bỡnh tng lờn rt cao 1,7- 1,34cm Nh vy cú th kt lun rng: Khi ct Meristem vi kớch thc 0,8 mm cho t l tỏi sinh chi cao nht (72,2%) v chiu cao chi ln nht (1,34cm) v t ú chng t rng kh nng tỏi sinh chi ca Meristem ph thuc rt nhiu vo kớch thc Meristem c nuụi cy 4.1.3 Thớ nghim 3: nh hng ca nng BA n kh nng tỏi sinh chi t Meristem Nghiờn cu v mụi trng nuụi cy gi mt v trớ quan trng trong lch s phỏt... nh hng ca kớch thc Meristem n chiu cao trung bỡnh chi Qua bng s liu 2 v hỡnh 2, 3 chỳng tụi thy rng: Vi 3 kớch thc Meritem khỏc nhau khi c nuụi cy trờn cựng mt mụi trng thỡ kh nng tỏi sinh chi cú s khac nhau Khi ct Meristem vi kớch thc 0,3 mm cho t l tỏi sinh ch l 55,6%, t l mu cht chim ti 44.5% Cũn khi ct mu vi kớch thc 0,5mm v 0,8mm thỡ t l mu tỏi sinh chi tng lờn ỏng k C th: ct Meristem vi kớch thc... 3.2 Ni dung nghiờn cu - Nghiờn cu nh hng ca ch kh trựng n quỏ trỡnh to mu sch a vo nuụi cy in vitro - Nghiờn cu nh hng ca kớch thc Meristem n s tỏi sinh chi - Nghiờn cu nh hng ca nng BA n s tỏi sinh chi t Meristem - Nghiờn cu nh hng ca t hp BA v - NAA n s tỏi sinh chi t Meristem - Nghiờn cu ca nng BA n h s nhõn chi 3.3 Phng phỏp nghiờn cu S dng cỏc bin phỏp nuụi cy mụ t bo hin hnh Cỏch b trớ thớ nghim... 0,5mm (CT2) cho t l mu tỏi sinh chi 70,8% t l mu cht ch cũn 29,2% Cũn khi ct Meristem vi kớch thc 0,8mm thỡ t l mu tỏi sinh chi cũn cao hn cụng thc 2 chim 72,2%, t l mu cht cng thp hn ch cũn 27,8% 33 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1 V chiu cao trung bỡnh chi: thỡ chỳng tụi thy rng Khi ct Meristem vi kớch thc 0,3 mm chiu cao trung bỡnh chi ch t 0,35cm Cũn khi ct Meristem vi kớch thc... cho s tỏi sinh chi t Meristem v cho chi cht lng tt nht 34 Báo cáo thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1 Cỏc mu c kh trựng vi ch kh trựng thớch hp (6 phỳt) sau ú tin hnh ct Meritem trờn kớnh hin vi vi kớch thc 0,8 mm v nuụi cy trờn mụi trng mụi trng : MS + 30g/l ng cú b sung nng BA khỏc nhau Sau 3 tun nuụi cy thu c bng sau: Bng 3: nh hng ca nng BA n kh nng tỏi sinh chi t Meristem, ct Meristem. .. 0,5mg/l BA CT3 : C + 1,0 mg/l BA CT4 : C + 1,5mg/l BA CT5 : C + 2mg/l BA 25 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 3.3.1.4 SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1 Thớ nghim 4: Nghiờn cu nh hng ca t hp BA v - NAA n s tỏi sinh chi t Meristem Thớ nghim c b trớ vi 4 cụng thc CT1 : MS + 30mg/l ng + 1mg/l BA (C) CT2 : C + 0,1 mg/l - NAA CT3 : C + 0,25 mg/l - NAA CT4 : C + 0,5 mg/l - NAA 3.3.1.5 Thớ nghim 5: Nghiờn cu nh hng... thực tập tốt nghiệp SV: Trịnh Văn Hải_ CNSH K1 Tỷ lệ mẫu tái sinh chồi (%) 90 80 70 60 Tỷ lệ (%) 50 40 30 20 10 0 1 Tỷ lệ mẫu tái sinh chôi (%) 2 3 4 5 Công thức Hỡnh 4: nh hng ca nng BA n kh nng tỏi sinh chi t Meristem (sau 3 tun nuụi cy) 36 . hnh nghiờn cu ti: Nghiờn cu nuụi cy Meristem cõy ti1.2. Mc ớch v yờu cu 1.2.1. Mc ớchNghiờn cu quy trỡnh v nuụi cy Meristem cõy ti nhm to ra vt liu sch. húa ca cỏc ging l rt cao khc phc nhng khú khn ú ngi ta ó s dng nh sinh trng (Meristem) ca cõy ti v tin hnh nuụi cy in vitro to vt liu khi u sau ú tin hnh