Nghiên cứu nuôi cấy mô hoa hồng.

Nghiên cứu nuôi cấy mô hoa hồng.

MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY HOA HỒNG 1.1.1 Nguồn góc phân bố 1.1.2 Đặc tính thực vật 1.2 SƠ LƯỢT VỀ NUÔI CẤY MỘ THỰC VẬT 1.2.1 Các giai đoạn nuôi cấy mô thực vật 1.2.2 Tầm quan trọng phương pháp nuôi cấy mô thực vật 1.2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy mô thực vật 1.2.3.1Nước 1.2.3.2Các nguyên tố khoáng đa lượng 1.2.3.3Các nguyên tố vi lượng 1.2.3.4Nguồn cacbohydrate 1.2.3.5Vitamin 1.2.3.6Agra 1.2.3.7Nước dừa 1.2.3.8Chất điều hồ sinh trưởng 1.2.3.9Than hoạt tính 1.2.3.10pH 1.3 MỘT SỐ KẾT QUẢ NUÔI CẤY MÔ CÂY HOA HỒNG ĐÃ ĐƯỢC CƠNG BỐ 1.3.1 Các cơng trình nước 1.3.2 Các nghiên cứu nước CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1.1 Vật liệu 2.1.2 Thiết bị hoá chất 2.1.3 Địa điểm thời gian tiếng hành thí nghiệm 2.1.4 Điều kiện thí nghiệm 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Trang 2.2.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy 2.2.2 Khữ trùng mẫu cấy 2.2.3 Bố trí thí nghiệm 2.2.4 Phân tích số liệu CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 HIỆU QUẢ CỦA BA TRÊN SỰ TẠO CHỒI CỦA CÂY HỒNG TỶ MUỘI 3.1.1 Tỷ lệ sống 3.1.2 Số 3.1.3 Chiều cao chồi 3.2 HIỆU QUẢ CỦA BA VÀ NAA TRÊN SỰ NHÂN CHỒI CỦA CÂY HỒNG TỶ MUỘI 3.2.1 Số chồi 3.2.2 Chiều cao chồi 3.2.3 Số 3.2.4 Trọng lượng tươi gia tăng 3.3 HIỆU QUẢ CỦA NAA VÀ THAN HOẠT TÍNH TRÊN SỰ TẠO RỂ CỦA CÂY HỒNG TỶ MUỘI 3.3.1 Số rể chiều dài rể 3.3.1.1 Số rể 3.3.1.2 Chiều dài rể 3.3.2 Chiều cao chồi gia tăng 3.3.3 Số gia tăng 3.3.4 Trọng lượng tươi gia tăng CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN 4.2 ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Trang MỞ ĐẦU Hoa hồng loài hoa đẹp trồng phổ biến nhiều quốc gia giới Nó trồng với nhều mục đích khác như: trang trí làm đẹp cho không gian sống, làm nước hoa, mỹ phẩm thuốc chữa bệnh Và cịn mục đích để làm quà tặng để chinh phục phái đẹp Riêng hoa hồng tỷ muội lại đẹp tú, màu sắc tươi sáng nở hoa quanh năm Công dụng để lảm cảnh sân vườn, lối đi, trang trí nội thức nhà Trong phong thủy, hoa hồng tỷ muội đổi vận “ khai vận mạng phú quý”, gia đình êm ấm thăng quan tiến chức Về kinh tế, hoa hồng loài hoa mang lại lợi nhuận cao Mặc dù có nhiều phương pháp nhân giống cổ truyền không làm bệnh, suất cao Đồng thời, cịn tốn nhiều thời gian cơng chăm sóc Và phương pháp nhân giống đời, phương pháp ni cấy mơ Nó làm cho hoa hồng tăng thêm số lượng lẫn chất lượng ( bệnh) Điểm quan trọng, phương pháp sản xuất số lượng thời gian ngắn, bệnh trồng quanh năm Đó lý chúng em chọn đề tài Cây hoa hồng Nobecourt Kofler nuôi cấy mô thành công tạo mô sẹo rễ từ chồi vào năm 1945 Sau đó, có nhiều cơng trình nghiên cứu ngồi nước lồi hoa Phương pháp ni cấy mơ thực nhằm tìm mơi trường thích hợp cho nhân chồi tạo rễ, làm sở cho việc nghiên cứu, ứng dụng kỹ thuật công nghệ sinh học, đáp ứng nhu cầu chất lượng giống ngày cao người tiêu dùng Chương Trang TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY HOA HỒNG 1.1.1 Nguồn gốc phân bố Cây hoa hồng có tên khoa học Rosa sp, thuộc lớp song tử diệp, Bộ Rosales, Họ Rosaceae có nguồn gốc ôn đới nhiệt đới vùng Bắc bán cầu Cách khoảng 5000 năm, Trung Quốc nơi hóa hoa hồng đến kỷ VIII giống hồng từ Trung Quốc giới thiệu Châu Âu hầu hết giống hồng ngày có nguồn gốc từ Họ hoa hồng có khoảng có 115 chi 3000 lồi phân bố chủ yếu vùng ôn đới cận nhiệt đới bắc bán cầu Các nước sản xuất hoa hồng chính: Hà Lan, Mỹ, Nhật… Trong đó, Hà Lan nước trồng xuất hoa hồng lớn giới Hiện nay, giống trồng Việt Nam hầu hết giống nhập từ Hà Lan, Mỹ, Pháp, Trung Quốc trồng phổ biến Đà Lạt đổ xuống vùng Tiền Giang, Hậu Giang, Cái Mơn, Sa Đéc… hoa hồng trồng đại trà với nhiều giống quí lạ 1.1.2 Đặc tính thực vật Rễ: rễ hồng thuộc loại rễ chum, chiều ngang tương đối rộng, rễ lớn phát triển nhiều rễ phụ Thân: hồng thuộc nhóm thân gỗ bụi thấp, thẳng có nhiều cành gai cong Lá: hoa hồng kép lông chim mọc cách, cuống có kèm nhẵn, có 3-5 hay 7-9 chét, xung quanh chét có nhiều cưa nhỏ Tùy giống mà có màu xanh đậm hay xanh nhạt, cưa nơng hay sâu có hình dạng khác Hoa: có nhiều màu sắc kích thước khác Cụm hoa chủ yếu có hoa tập hợp hoa cuống dài, cứng, có gai Hoa lớn có cánh dài hợp thành chén gốc, xếp thành hay nhiều vòng, siết chặt hay lỏng tùy theo giống Hoa hồng thuộc loài hoa Trang lưỡng tính Nhị đực nhụy hoa, nhị đực dính vào bao quanh vịi nhụy Khi phấn chín rơi đầu nhụy nên tự thụ phấn Đài hoa màu xanh Quả: hình trái xoan có cánh đài cịn lại Hạt: hạt hồng nhỏ có lơng, khả nảy mầm hạt có lớp vỏ dày 1.2 SƠ LƯỢC VỀ NI CẤY MƠ THỰC VẬT Ni cấy mô hệ thống sử dụng phát triển nhân tạo nhân điểm sinh trưởng tồn mô phân sinh Sự thành công vi nhân giống phụ thuộc vào nhiều yếu tố: môi trường ni cấy, tỷ lệ chất điều hịa sinh trưởng thực vật, giống, nhiệt độ, ánh sáng, chọn mẫu vật tất giống nuôi cấy Chọn nguyên liệu ban đầu cho nuôi cấy mô quan trọng, khơng định thành cơng ban đầu cho trình nhân Việc chọn vật liệu phụ thuộc vào phương pháp nuôi cấy phổ biến chọn đoạn than có mang chồi nhũ, chọn vật liệu có nhiều vật liệu để tiến hành nuôi cấy chồi 1.2.1 Các giai đoạn nuôi cấy mô thực vật Nuôi cấy mô thực vật chia thành giai đoạn khác nhau, giai đoạn có mơt chức riêng Giai đoạn giữ nhà lưới; giai đoạn khử trùng mẫu cấy; giai đoạn nhân chồi nhanh; giai đoạn kéo dài, kích thích tạo rễ tiền dưỡng; giai đoạn dưỡng.Trong đó, giai đoạn giai đoạn định số lượng tạo Sự thành cơng giai đoạn tùy thuộc vào kích thích chồi bất định phát triển chồi bên tùy thuộc vào số lần cấy truyền, hệ số nhân giống, môi trường chung quanh 1.2.2 Tầm quan phương pháp nuôi cấy mô thực vật Trang Nuôi cấy mô kỹ thuật nhân giống mang nhiều ưu điểm bật tạo bệnh, hệ số nhân giống cao thời gian sản xuất rút ngắn Vì vậy, cơng nghệ ni cấy mơ có ý nghĩa kinh tế cao, sinh sản chậm cần cung cấp số lượng giống lớn Nuôi cấy mô phương pháp làm giảm giá thành Đồng thời, tạo số lượng lớn đồng đáp ứng nhu cầu thị trường Phương pháp nhân số lượng lớn diện tích nhỏ Trong 1m2 để 18.000 Thuận tiện làm hạ giá thành vận chuyển (1 thùng 40.000 dâu tây nặng 15 kg) Ngoài ra, việc bảo quản giống thuận lợi Bằng phương pháp nuôi cấy mô người ta nhân giống nhiều loại từ vùng khí hậu khác giới mà nhân giống vơ tính in vitro khơng thể thực Đồng thời, trì kiểu gen quý làm vật liệu cho phương pháp lai tạo giống Bên cạnh đó, ni cấy mơ cịn bao gồm ưu điểm bật: tạo số lồi thực vật mà khơng thể tiến hành in vitro nhân giống in vitro cảm ứng trẻ hóa mơ; Sự tăng trưởng nhân giống vơ tính in vitro thường mạnh nhân giống in vivo trẻ hóa bệnh; việc nhân giống in vitro tạo bệnh có chọn lọc đối tượng bệnh để đưa vào nuôi cấy đồng thời xử lý mẫu cấy mang mầm bệnh trước đưa vào môi trường nuôi cấy; Trong nuôi cấy in vitro sử dụng mẫu cấy ban đầu nhỏ chọn lọc kỹ lưỡng dễ dàng; Việc nhân giống in vitro giúp làm giảm không gian sử dụng so với nhân giống in vivo; Do in vitro nuôi cấy điều kiện hồn tồn thích hợp nên sản xuất quanh năm 1.2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy mô thực vật Trang Một yếu tố quan trọng tăng trưởng, phát triển hình thái tế bào mơ thực vật nuôi cấy thành phần môi trường nuôi cấy Thành phần môi trường nuôi cấy mô tế bào thay đổi tuỳ theo loài thực vật, loại tế bào, mơ phận ni cấy Mặc dù có đa dạng thành phần nồng độ chất tất loại môi trường nuôi cấy mơ gồm thành phần sau: khống đa lượng, khoáng vi lượng, đường làm nguồn cacbon, cac vitamin, chất điều hoà sinh trưởng Ngoài ra, người ta cịn bổ sung số chất hữu có thành phần xác định (amino acid, EDTA,…) số chất có thành phần khơng xác định nước dừa, dịch trích nấm men… 1.2.3.1Nước Phẩm chất nước điều kiện quan trọng nuôi cấy Nước sử dụng nuôi cấy thường nước cất lần Trong số trường hợp người ta sử dụng nước cất lần nước khử khoáng 1.2.3.2Các nguyên tố đa lượng Khống đa lượng cần cho cây, có ảnh hưởng tốt cho hấp thu mô cấy khơng gây độc Nhu cầu khống đa lượng mô, tế bào thực vật không khác nhiều so với trồng tự nhiên Các nguyên tố đa lượng cần phải cung cấp là: Nitrogen (N), Photpho (P), Potassium (K), Magnesium (Mg), Calcium (Ca) 1.2.3.3Các nguyên tố vi lượng Đây nguyên tố mà trồng cần thiếu cho sinh trưởng phát triển bình thường Hầu hết ngun tố khóang vi lượng cần thiết cho mô cấy cung cấp vào môi trường nhân tạo Các vi lượng thường thêm vào môi trường Iode (I), Bo (B), Mangan (Mn), kẽm (Zn), Đồng (Cu), Molybden (Mo), Cobalt (Co), sắt (Fe) Nồng độ khoáng vi lượng sử dụng thường thấp 30 mg/l Các nguyên tố đóng vai trị quan trọng hoạt động enzyme Nhiều nghiên Trang cứu cho thấy sắt kết hợp với chất chelat (EDTA- ethylendiamin-tetra acetic acid) làm tăng khả trao đổi chất sắt 1.2.3.4Nguồn cacbohydrate Các mẫu ni cấy mơ thực vật nói chung khơng thể quang hợp quang hợp thấp thiếu clorophin, nồng độ CO2 nhiều điều kiện khác Vì phải đưa thêm hợp chất carbonhydrate vào thành phần môi trường nuôi cấy hợp chất carbonhydrate sử dụng phổ biến đường sucrose Lý sử dụng phổ biến ổn định hấp khử trùng sử dụng Đường sucrose vừa nguồn carbon cung cấp cho mẫu cấy, đồng thời tham gia vào điều chỉnh khả thẩm thấu môi trường Hàm lượng đường cao mô nuôi cấy khó hút nước Hàm lượng đường thấp nguyên nhân gây tượng mọng nước mẫu cấy Đường cịn có vai trị quan trọng tạo rễ bất định 1.2.3.5Vitamin Thực vật cần vitamin để xúc tác trình biến dưỡng khác Khi tế bào mơ ni cấy vài vitamin trở thành yếu tố giới hạn chúng Các vitamin thường sử dụng nhiều nuôi cấy mô là: Thiamin (vit B1), nicotinic acid, pyridoxine (vit B6) myo- inositol Vitamin có tác dụng thúc đẩy sinh trưởng, phát triển mẫu cấy nhiều trường hợp có vai trị nguồn carbon môi trường nuôi cấy 1.2.3.6Agra Việc làm đông đặc môi trường thường dựa vào hợp chất polysaccharide cao phân tử, chúng giữ nước mơi trường khống cung cấp cho cây, dùng phytagell (gelrite) hay agar Agar thương sử dụng trơ không chịu tác dụng nhiều phản ứng hóa học, tính ổn định cao giá tương đối rẻ Trang Agar trích từ tảo dùng để chuẩn bị môi trường đặc hay môi trường bán lỏng để nuôi cấy mô thực vật Agar tan 100oC đông đặc 45oC Độ cứng agar định nồng độ agar sử dụng độ pH môi trường nuôi cấy Nồng độ agar thường sử dụng môi trường nuôi cấy mô thực vật 6-8 g Nồng độ agar sử dụng ảnh hưởng đến nước môi trường nuôi cấy, độ cứng môi trường, sinh trưởng mẫu cấy, vấn đề sinh lý mẫu cấy thừa nước hoạt động cytokinin mơi trường có agar Độ tinh khiết cua agar môi trường nuôi cấy quan trọng Người ta chứng minh agar có chứa Ca, Mg, K, Na tha agar môi trường nuôi cấy quan trọng 1.2.3.7Nước dừa Trong nuôi cấy mô thực vật thường sử dụng nước dưa từ trái dừa bánh tẻ trái dừa già Thành phần nước dừa phong phú có chứa myo-inositol, chất thuộc nhóm cytokinin số amino acid khác Diphenylurea (DPU) có hoạt tính giống cytokinin thành phần nước dừa Các thành phần có hàm lượng thay đổi khác non, già, chí khác độ tuổi 1.2.3.8Chất điều hoà sinh trưởng Các chất điều hịa sinh trưởng có vai trị quan trọng q trình phát sinh hình thái thực vật ni cấy mơ Hiệu tác động phụ thuộc vào: nồng độ sử dụng, mẫu ni cấy hoạt tính vốn có Tỷ lệ cytokinin auxin mơi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến thành lập tạo chồi rễ thành lập tạo chồi rễ Một tỷ lệ cao cytokinin auxin thấp thích hợp cho tạo rễ, cịn mức độ trung gian thích hợp cho tạo mô sẹo Auxin: Auxin chia thành loại: auxin tự nhiên auxin tổng hợp Auxin tự nhiên tìm thấy thực vật indole-3- acid acetic (IAA) auxin tổng hợp indole-3- Trang butylric acid (IBA), 2,4-dichlorphenolxyacetic acid (2,4-D), 1-napthalene acetic acid (NAA).IAA nhạy cảm với nhiệt độ bị phân hủy q trình hấp tiệt trùng IAA khơng ổn đinh môi trường nuôi cấy mô NAA 2,4- D khơng bị biến tính q trình hấp tiệt trùng Trong lĩnh vực ni cấy mơ, nhóm auxin đưa vào môi trường nuôi cấy nhằm thúc đẩy sinh trưởng giãn nở tế bào, tăng cường trình sinh tổng hợp trao đổi chất, kích thích hình thành rễ tham gia vào cảm ứng phát sinh phơi vơ tính Tùy loại auxin, hàm lượng sử dụng đối tượng nuôi cấy mà tác động sinh lý auxin kích thích sinh trưởng mơ, hoạt hóa hình thành rễ hay hình thành mô sẹo (callus) Nồng độ auxin thường sử dụng môi trường nuôi cấy 0,1- 2,0 mg/l chúng có hiệu nồng độ thấp Cytokinin: Zeatin cytokinin tự nhiên trích từ hạt bắp nảy mầm Kinetin 6-Benzyl adenine tổng hợp gần người ta chứng minh tạo vài loại Cytokinin kích thích phân chia tế bào, hình thành sinh trưởng chồi ni cấy mơ Đồng thời, ức chế tạo rễ hình thành mơ sẹo Nồng độ sử dụng 0,1-2 mg/l Ở nồng độ cao, cytokinin có tác dụng kích thích rõ rệt đến hình thành chồi bất định, đồng thời ức chế tạo rễ chồi nuôi cấy Tuy nhiên trường hợp khơng bổ sung cytokinin sau 10-12 ngày cho chồi tỷ lệ thấp 1.2.3.9Than hoạt tính Bổ sung than hoạt tính vào mơi trường ni cấy có tác dụng khử độc Than hoạt tính cho vào môi trường để hấp thụ chất màu, hợp chất phenol… trường hợp chất gây ức chế sinh trưởng mẫu nghiên cứu Than hoạt tính làm thay đổi mơi trường ánh sáng, mơi trường trở nên sẫm có có kích thích hình thành sinh trưởng rễ Than hoạt tính cịn chất chống oxy hóa tốt Nhìn chung có ảnh hưởng mặt: hút hợp chất cản, hút chất điều hịa sinh trưởng thực vật mơi trường nuôi cấy làm đen môi trường Trang 10 Tuần sau cấy, nghiệm thức BA 0,2 mg/l cho chiều cai chồi gia tăng cao (1,6 cm) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Ở thời điểm chiều cao chồi gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (0,5 cm) 3.2.3 Số Kế trình bày bảng 3.6 cho thấy tuần đầu sau cấy, nghiệm thức BA 0,2 mg/l cho số gia tăng cao (1,9 lá) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Số gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (0,3 lá) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (0,5 lá) Bảng 3.6 Số hoa hồng tỷ muội mơi trường có BA NAA khác tuần sau cấy Đối chứng 1,0 c Tuần sau cấy 2,0 c 2,6 b 3,0 c 3,1 d 0,2 mg/l 1,9 a 3,1 a 4,3 a 5,1 b 6,2 b 1,5 mg/l BA 1,4 b 2,4 b 3,9 a 6,6 a 7,8 a mg/l BA 0,8 cd 1,4 d 2,3 b 3,5 c 4,8 c 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA 0,5 de 1,3 d 1,6 c 1,9 c 2,2 d mg/l BA + 0,2 mg/l NAA F 0,3 e ** 0,8 e ** 1,2 c ** 1,4 d ** 2,1 d ** CV (%) 25,62 17,66 19,71 21,14 26,14 LSD0,05 0,2960 0,3839 0,6115 0,8933 1,336 Nghiệm thức Tại thời điểm tuần sau cấy, nghiệm thức BA 0,2 mg/l cho số gia tăng cao (3,1 lá) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Ở thời điểm số gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (0,8 lá) Kết tuẩn sau cấy, nghiệm thức BA 0,2 mg/l cho số gia tăng cao (4,3 lá) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại từ Trang 24 BA 1,5 mg/l (3,9 lá) Ở thời điểm số gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (1,2 lá) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (1,6 lá) Kết tuần sau cấy, nghiệm thức BA 1,5 mg/l cho số gia tăng cao (6,6 lá) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Vào thời điểm số gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (1,4 lá) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (1,9 lá) Kết tuần sau cấy, nghiệm thức BA 1,5 mg/l cho số gia tăng cao (7,8 lá) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Vào thời điểm số gia tăng thấp nghiệm thức mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (2,1 lá) nhiên khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA (2,2 lá) nghiệm thức đối chứng (3,1 lá) 3.2.4 Trọng lượng tươi gia tăng Kết trình bày Bảng 3.7 cho thấy thời điểm tuần sau cấy, nghiệm thức 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA cho trọng lượng tươi gia tăng tương đối cao (2306,0%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Trọng lượng tươi gia tăng tương đối thấp nghiệm thức đối chứng (477,8%) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức mg/l BA (538,9%) nghiệm thức 0,2 mg/l BA (605,6 %) Bảng 3.7: Trọng lượng tươi gia tăng tương đối (%) hoa hồng tỷ muội mơi trường có BA NAA khác tuần sau cấy Đối chứng Trọng lượng tươi gia tăng tương đối tuần sau cấy 477,8 (0,05) d 0,2 mg/l 605,6 (0,06) d 1,5 mg/l BA 1017,0 (0,10) c mg/l BA 538,9 (0,05) d 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l NAA 2306,0 (0,23) a mg/l BA + 0,2 mg/l NAA F 1583,0 (0,16) b ** Nghiệm thức Trang 25 CV (%) 16,56 LSD0,05 212,5 Tóm lại, môi trường MS kết hợp với BA 1,5 mg/l cho hiệu nhân chồi cao với số chồi 2,2 chồi số đạt 7,8 sau tuần nuối cấy Sử dụng 1,5 mg/l BA giống hồng trắng cho hệ số nhân cao 5,94 sử dụng 1,5 mg/l BA cho hệ số nhân chồi cao 3.3 HIỆU QUẢ CỦA NAA VÀ THAN HOẠT TÌNH TRÊN SỰ TẠO RỂ CÂY HỒNG TỶ MUỘI 3.3.1 Số rể chiều dài rể Kết trình bảng 3.8 cho thấy số rễ chiều dài rễ chịu ảnh hưởng bới nồng độ khác chất điều hoà sinh trưởng 3.3.1.1Số rể Tuần sau cấy, nghiệm thức mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho số rễ gia tăng cao (3,2 rễ) khác biệt có ý thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính (3,0 rễ) (Hình 3.3) Số rễ gia tăng thấp nghiệm thức đối chứng (1,8 rễ) khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 0,5 mg/l NAA (2 rễ) nghiệm thức mg/l NAA (2 rễ) Bảng 3.8: Số rễ chiều dài rễ (cm) hoa hồng tỷ muội mơi trường có NAA khác tuần sau cấy Đối chứng Số rễ tuần sau cấy 1,8 d Chiều dài rễ (cm) tuần sau cấy 0,6 bc 0,5 mg/l NAA 2,0 cd 0,8 bc mg/l NAA 2,2 c 0,8 bc mg/l NAA 2,0 cd 0,4 c Nghiệm thức Trang 26 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính 3,0 a 1,6 a mg/l NAA + g/l than hoạt tính 3,2 a 1,9 a mg/l NAA + g/l than hoạt tính F 2,6 b ** 1,1 b ** CV (%) 13,80 48,26 LSD0,05 0,3317 0,5024 3.3.1.2Chiều dài rể Tuần sau lấy, nghiệm thức mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho chiều dài rễ gia tăng cao (1,9 cm) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính (1,6 cm) Chiều dài rễ gia tăng thấp nghiệm thức mg/l NAA (0,4 cm) khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức mg/l NAA + g/l than hoạt tính (1,1 cm) Trang 27 Hình 3.3: số rễ chiều dài rễ (cm) hoa hồng tỷ muội mơi trường có NAA khác tuần sau cấy A) đối chứng, B) 0,5 mg/l NAA, C) mg/l NAA, D) 2mg/l NAA, E) 0,5 mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính, F) mg/l NAA + g/l than hoạt tính, G) mg/l NAA + g/l than hoạt tính 3.3.2 Chiều cao chồi gia tăng Kết trình bày Bảng 3.9 cho thấy nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho hiệu tao chiều cao chồi gia tăng tương đối (%) cao ổn định qua tuần nuôi cấy Tuần đầu sau cấy, nghiệm thức sữ3 dụng mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho chiều cao chồi gia tăng tương đối cao (23,6%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại Chiều cao chồi gia tăng tương đối thấp nghiệm thức mg/l NAA (9,2%) nhiên khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức mg/l NAA (11,4%) Bảng 3.9: Chiều cao chồi gia tăng tương đối (%) hoa hồng tỷ muội môi trường có NAA khác tuần sau cấy Đối chứng 20,6 b Tuần sau cấy 50,0 b 65,4 c 90,5 b 0,5 mg/l NAA 11,9 e 19,0 c 29,6 d 38,7 c mg/l NAA 9,2 f 19,0 c 28,8 d 39,3 c mg/l NAA 11,4 ef 19,9 c 21,7 d 29,4 c 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính 18,1 c 53,8 b 81,0 ab 111,5 a mg/l NAA + g/l than hoạt tính 23,6 a 64,5 a 89,8 a 118,6 a mg/l NAA + g/l than hoạt tính F 15,24 d ** 50,29 b ** 74,90 bc ** 105,7 ab ** CV 14,09 23,70 18,90 20,63 LSD0,05 2,224 9,407 10,61 15,80 Nghiệm thức Tuần sau cấy, nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho chiều cao chồi gia tăng tương đối cao (64,5%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức Trang 28 5% so với nghiệm thức lại Chiều cao chồi gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 0,5 mg/l NAA (19,0%) nghiệm thức mg/l NAA (19,0%) Vào thời điệm tuần cấy, nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + g/l than hoạt tính cho chiều cao chồi gia tăng tương đối cao (89,8%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức 0,5 mg/l NAA g/l than hoạt tính (81%).chiều cao chồi gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 2mg/l (21,7%) nghiệm thức mg/l NAA(28,8%) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 0,5 mg/l NAA(29,6%) Vào thời điểm tuần sau cấy, nghiệm thức sủ dụng mg/Lnaa +2g/l than hoạt tính vẩn cho chiều cao chồi gia tăng tương đối cao (118,6%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% so với nghiệm thức lại trừ nghiệm thức 0,5mg/l NAA +2g/l than hoạt tính (111,5%) nghiệm thức 2mg/l NAA +2 g/l than hoạy tính (105,7%) Chiều cao chồi gia tăng tương đối thấp o nghiệm thức 2mg/l NAA(29,4%) nhiên khác biệt khơng có ý nghỉa so với nghiêm thức 0,5mg/l NAA(38,7%) nghiệm thức mg/l NAA(39,9%) 3.3.3 Số gia tăng Qua kết trình bày bảng 3.10 nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính cho hiệu tạo số gia tăng tương đối (%) cao ổn định qua tuần nuôi cấy Tuần đầu sau cấy, nghiệm thức sử dụng 1mg/l NAA +2 g/l than hoạt tính cho số gia tăng tương đối cao (32,6%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức lại.Số gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 1mg/l NAA(11,4)tuy nhiên khác biệt ý nghĩa so với nghiệm thức 2mg/l NAA(11.5%), nghiệm thức o,5 mg/l NAA (12.5%) Tuần sau cấy ,nghiệm thức sử dụng mg/l NAA +2 g/l than hoạt tính cho số gia tăng tương đối cao (59,9%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức lại.Số gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 2mg/lNAA (15%) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 1mg/l NAA (18,3%)nghiệm thức 0,5 mg/l NAA (19,7%) Trang 29 Vào thời điểm tuần sau cấy ,nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tình có số gia tăng tương đối cao (80,3%) khác biệt có ý nghĩa thong s kê mức 5% so với nghiệm thức lại Số gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 1mg/l(20,5%) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 2mg/l NAA(23,9%) nghiệm thức 0,5 mg/l NAA (24,3%) Bảng 3.10: Số gia tăng tương đối (%) hoa hồng tỷ muội môi trường sử dụng NAA khác tuần sau cấy Đối chứng 23,9 b Tuần sau cấy 48,6 b 59,3 c 71,5 c 0,5 mg/l NAA 12,5 d 19,7 c 24,3 d 30,9 d mg/l NAA 11,4 d 18,3 c 20,5 d 31,1 d mg/l NAA 11,5 d 15,0 c 26,9 d 26,9 d 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính 23,1 b 46,7 b 93,3 b 93,3 b mg/l NAA + g/l than hoạt tính 32,6 a 59,9 a 102,6 a 102.6 a mg/l NAA + g/l than hoạt tính F 17,1 c ** 43,7 b ** 88,9 b ** 88,9 b ** CV (%) 12,13 18,01 15,44 10,13 LSD0,05 2,684 6,513 7,513 6,472 Nghiệm thức Tuần sau cấy, nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính cho số gia tăng tương đối cao (102,6%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức lại.Số gia tăng tương đối thấp nghiệm thức 2mg/lNAA(26,9%) nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức 0,5 mg/l NAA(30,9%), nghiệm thức mg/l NAA (31,1%) 3.3.4 Trọng lượng tươi gia tăng Kết trình bày bảng 3.11 cho thấy vào thời điểm tuần sau cấy, nghiệm thức sử dụng mg/l NAA cho trọng lượng tươi gia tăng tương đối cao (1431,6%) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức lại Trọng lượng Trang 30 tươi gia tăng tương đối thấp nghiệm thức đối chứng (371,2%) Nghiệm thức 0,5 mg/l NAA (866,9%) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức mg/l NAA (908,3%), khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức đối chứng (371,2%), nghiệm thức sử dụng 0,5 mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính (492,7%), nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính (494,4%).Cịn nghiệm thức sử dụng 0,5 mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính (492,7%), nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính (494,4%) nghiệm thức sử dụng mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính (498,3%) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê nhiên khác biệt có ý nghĩa thống kê mức (5%) so với nghiệm thức đối chứng (371,2%) Bảng 3.11: Trọng lượng tươi gia tăng tương đối (%) hoa hồng tỷ muội môi trường sử dụng NAA khác tuần sau cấy Đối chứng Trọng lượng tươi gia tăng tương đối (%) tuần sau cấy 371,2 (0,12) d 0,5 mg/l NAA 866,9 (0,27) b mg/l NAA 14,31 (0,43) a mg/l NAA 908,3 (0,27) b 0,5 mg/l NAA + g/l than hoạt tính 492,7 (0,15) c mg/l NAA + g/l than hoạt tính 494,4 (0,16) c mg/l NAA + g/l than hoạt tính F 498,3 (0,18) c ** CV (%) 8,33 LSD0,05 60,54 Nghiệm thức Tóm lại, mơi trường MS kết hợp với 0,5 mg/l NAA 2g/l than hoạt tính cho hiệu tạo rễ với số rễ rễ, chiều dài rễ 1,6cm chiều cao chồi gia tăng tương đối đạt 111,5% sau tuần nuôi cấy Điều phù hợp với nhận định Nguyễn Hữu Tính (2008), sử dụng 0,5 mg/l NAA + 2g/l than hoạt tính để tạo hoàn chỉnh tốt Trang 31 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Trong giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu sử dụng 0,1 mg/l BA để tạo chồi cho hoa hồng tỷ muội thích hợp với chiều cao chồi 1,8 cm số đạt 5,6 sau tuần nuôi cấy Trong giai đoạn nhân chồi sử dụng 1,5 mg/l BA cho hệ số nhân chồi hoa hồng tỷ cao với số chồi 2,2 chồi số đạt 7,8 sau tuần nuôi cấy Trong giai đoạn tạo rễ sử dụng 0,5 mg/l NAA kết hợp 2g/l than hoạt tính để tạo hoa hồng tỷ muội tốt với số rễ rễ, chiều dài rễ 11,6 cm chiều cao chồi gia tăng tương đối đạt 111,5% sau tuần nuôi cấy 4.1 ĐỀ NGHỊ Nghiên cứu hoa hồng tỷ muội giai đoạn vườn ươm TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤC LỤC Bảng 2.16: Số hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Trang 32 Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 113,760 22,752 39,670** Sai số 30 17,206 0,574 Tổng cộng 35 130,966 CV (%) 21,14 Bảng 2.17: Số hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 159,014 31,803 24,784** Sai số 30 38,496 1,283 Tổng cộng 35 197,510 CV (%) 26,14 Bảng 2.18: Trọng lượng tươi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 15837191,393 3167438,279 97,533** Sai số 30 974265,086 32475,503 Tổng cộng 35 16811456,479 CV (%) 16,56 Trang 33 Thí nghiệm Bảng 2.19: Số rễ hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 15,291 2,549 23,345** Sai số 49 5,349 0,109 Tổng cộng 55 20,640 CV (%) 13,80 Bảng 2.20: Chiều dài rễ hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 14,862 2,477 9,903** Sai số 49 12,255 0,250 Tổng cộng 55 27,117 CV (%) 48,26 Bảng 2.21: Chiều cao chồi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 1334,650 222,442 45,394** Sai số 49 240,111 4,900 Trang 34 Tổng cộng 55 CV (%) 1574,761 14,09 Bảng 2.22: Chiều cao chồi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 18199,092 3033,182 34,604** Sai số 49 4295,013 87,653 Tổng cộng 55 22494,105 CV (%) 23,70 Bảng 2.23: Chiều cao chồi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 38571,483 6428,581 57,666** Sai số 49 5462,470 111,479 Tổng cộng 55 44033,953 CV (%) 18,90 Bảng 2.24: Chiều cao chồi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Trang 35 Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 72665,877 12110,979 48,978** Sai số 49 12116,407 247,274 Tổng cộng 55 84782,284 CV (%) 20,63 Bảng 2.25: Số gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 3039,008 506,501 71,009** Sai số 49 349,511 7,133 Tổng cộng 55 3388,519 CV (%) 14,13 Bảng 2.26: Số gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 15384,397 2564,066 61,034** Sai số 49 2058,499 42,010 Tổng cộng 55 17442,895 Trang 36 CV (%) 18,01 Bảng 2.27: Số gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 29402,018 4900,336 87,654** Sai số 49 2739,376 55,906 Tổng cộng 55 32141,394 CV (%) 15,44 Bảng 2.28: Số gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 52706,238 8784,373 211,754** Sai số 49 2032,709 41,484 Tổng cộng 55 54738,947 CV (%) 10,13 Bảng 2.29: Trọng lượng tươi gia tăng tương đối hoa hồng tỷ muội tuần sau cấy Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phương Trang 37 Trung bình bình phương Giá trị F Nghiệm thức 6685761,700 1114293,617 Sai số 49 177854,230 3629,678 Tổng cộng 55 6863615,930 CV (%) 8,33 Trang 38 306,955** ... phần môi trường nuôi cấy Thành phần môi trường nuôi cấy mô tế bào thay đổi tuỳ theo loài thực vật, loại tế bào, mô phận nuôi cấy Mặc dù có đa dạng thành phần nồng độ chất tất loại môi trường nuôi. .. có chọn lọc đối tượng bệnh để đưa vào nuôi cấy đồng thời xử lý mẫu cấy mang mầm bệnh trước đưa vào môi trường nuôi cấy; Trong nuôi cấy in vitro sử dụng mẫu cấy ban đầu nhỏ chọn lọc kỹ lưỡng dễ... hành nuôi cấy chồi 1.2.1 Các giai đoạn nuôi cấy mô thực vật Nuôi cấy mô thực vật chia thành giai đoạn khác nhau, giai đoạn có mơt chức riêng Giai đoạn giữ nhà lưới; giai đoạn khử trùng mẫu cấy;