Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 155 21​

BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HUY TRÌNH GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 155.21 KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Hà Nội, 05/2013 BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HUY TRÌNH GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 155.21 KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS Cao Văn Thu Nơi thực : Bộ môn Vi Sinh – Sinh Học Trường Đại Học Dược Hà Nội Hà Nội, 05/2013 LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến thầy giáo PGS -TS Cao Văn Thu người đã tận tình hướng dẫn từ những bước đầu tiên cho đến hoàn thiện khóa luận này Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo , các cán bộ, kỹ thuật viên giảng dạy, công tác tại Bộ môn Vi sinh - Sinh học, Bộ môn Công nghiệp dược trường Đại học Dược Hà Nợi , Bợộ̣ mơn Hóa vậộ̣t liệộ̣u - khoa Hóó́a trườờ̀ng Đạộ̣i họộ̣c Khoa họộ̣c tự nhiên Hà Nộộ̣i đã giúp đỡ thời gian làm thưc nghiệm Nhân dịp này cũng xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu cùng toàn thể các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy dỗ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập tại trường Và cuối cùng là lời cảm ơn gửi tới gia đình và bạn bè đã động viên , giúp đỡ suốt thời gian thưc hiện khóa luận Do thời gian làm thưc nghiệm cũng kiến thức của bản thâ n có hạn, khóa luận này có nhiều thiếu sót Tôi rất mong nhận được sư góp ý của các thầy cô, bạn bè để khóa luận được hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, 16, tháng 5, năm 2013 Sinh viên NGUYỄN HUY TRÌNH MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương về khang sinh 1.1.1 Định nghĩa kháng sinh 1.1.2 Phân loại kháng sinh 1.1.3 Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh 1.1.4 Ứng dụng của kháng sinh 1.2 Đại cương về xạ khuẩn (Actinomycetes) 1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.2.2 Đặc điểm câu tạo tế bào xạ khuẩn 1.2.3 Phân loại xạ khuẩn 1.3 Phương pháp phân lập vi sinh vật sinh kháng sinh 1.4 Tuyển chọn, cải tạo, bảo quản giống xạ khuẩn 1.4.1 Chọn chủng có hoạt tính cao nhờ sàà̀ng lọc ngẫu nhiên 1.4.2 Đột biến cai tạo giống 1.4.3 Bao quan giống xạ khuẩn 1.5 Lên men sinh tổng hợp khang sinh 1.6 Chiết tách tinh chế sản phẩm 1.7 Một sốố́ phương pháp phổổ̉ đểổ̉ xác định cấu trúc kháng sinh 10 1.7.1 Phổổ̉ hồà̀ng ngoạạ̣i (IR) 10 1.7.2 Phổổ̉ tử ngoạạ̣i (UV) 10 1.7.3 Khốố́i phổổ̉ (MS) 11 1.8 Một sốố́ nghiên cứu liên quan 11 1.8.1 Tốố́i ưu hóố́a thốố́ng kê củổ̉a quáố́ trìà̀nh lên men đểổ̉ tăng cường hoạạ̣t tính kháng sinh củổ̉a Streptomyces sp.CS392 11 1.8.2 Mộạ̣t chủổ̉ng Streptomyces sp với nhiều đặạ̣c điểổ̉m hứa hẹn thúc đẩổ̉y phát triểổ̉n cúa nông nghiệp dịạ̣ch bệnh 12 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên vật liêu, thiết bi 13 2.1.1 Nguyên vật liêu 13 2.1.2 Máy móc, thiết bị, dụạ̣ng cụạ̣ 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phương phap thưc nghiêm 16 2.3.1 Phương pháp nuôi và giữ giống 16 2.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán 16 2.3.3 Phương pháp xác định môi trương nuôi thích hợp 17 2.3.4 Phương pháp chọn chủng có hoạt tính cao bằng sàà̀ng lọc ngẫu nhiên 17 2.3.5 Phương pháp đột biến 18 2.3.6 Phương pháp lên men mẻ 19 2.3.7 Phương pháp xác định độ bên nhiêt, bên pH của kháng sinh dịch lên men 20 2.3.8 Phương pháp chiết kháng sinh từ dịch lọc bằng dung môi hữu 20 2.3.9 Phương pháp tách kháng sinh bằng sắc ky 20 2.3.10 Phương pháp thu tinh thể kháng sinh tinh khiết 22 2.3.11 Phương pháp xác định cấu trúc kháng sinh tinh khiết thu được 22 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 23 3.1 Kết quả qua trình chọn lọc ngâu nhiên 23 3.2 Kết quả đôt biến cải tạo giống lần 24 3.3 Kếố́t quảổ̉ đột biếố́n cảổ̉i tạạ̣o giốố́ng lầầ̀n 25 3.4.Kếố́t quảổ̉ cảổ̉i tạạ̣o giớố́ng lầầ̀n tác nhân hóa họạ̣c 27 3.5 Kếố́t quảổ̉ lên men sinh tổổ̉ng hợạ̣p kháng sinh 28 3.6 Kếố́t quảổ̉ đánh giá ảổ̉nh hưởng pH vàầ̀ nhiệt độ đếố́n độ bềầ̀n kháng sinh dịch lọạ̣c 30 3.7 Kếố́t quảổ̉ chọạ̣n dung môi chiếố́t xuất kháng sinh 31 3.8 Kếố́t quảổ̉ sắc ký lớp mỏng chọạ̣n hệ dung môi 32 3.9 Kếố́t quảổ̉ sắc ký cột 33 3.10 Kếố́t quảổ̉ đo nhiệt độ nóng chảổ̉y vàầ̀ sơ xác định nhóm chức đặc trưng kháng sinh thu đượạ̣c 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid 2’- deoxyribonucleic CLNN Chọộ̣n lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên CW Thành tếó́ bào - Cell wall DMHC Dung mơi hữẫ̃u ĐB Đợộ̣t biếó́n Gr Gram IR Hồng ngoạộ̣i - Infrared KH Khoa họộ̣c KS Kháng sinh L-DAP L - diaminopimelat MTdt Môi trườờ̀ng dịộ̣ch thểể MTth Mơi trườờ̀ng thích hợộ̣p TB Tếó́ bào TĐC Trao đổi chấó́t VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vậộ̣t UV Tửể ngoạộ̣i – Ultraviolet B subtilis Bacillus subtilis P mirabilis Proteus mirabilis G(+) Gram dương G(-) Gram âm SK Sắó́c ký DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ HÌNH Bảng 1: Phân loại các chất kháng sinh dưa theo cấu trúc hóa học Bảểng 2: Các môi trường nuôi cấy xạ khuân Bảng 3: Các mơi trường kiểm định Bảng 4: Cáó́c dung mơi đãẫ̃ sửể dụng Bảểng 5: Kếó́t quảể chọộ̣n lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên Streptomyces 155.21 Bảểng 6: Kếó́t quảể hoạộ̣t tính KS sau đợộ̣t biếó́n UV lầờ̀n Bảểng 7: Kếó́t quảể hoạộ̣t tính KS sau đợộ̣t biếó́n UV lầờ̀n Bảểng 8:Kếó́t quảể hoạộ̣t tính KS sau đợộ̣t biếó́n hóó́a họộ̣c Bảểng 9: Kếó́t quảể chọộ̣n mơi trườờ̀ng lên men Bảểng 10: Kếó́t quảể lên men củểa cáó́c dạộ̣ng chủểng, biếó́n chủểng MT2dt Bảểng 11: Ảnh hưởng củểa nhiệộ̣t đợộ̣ đếó́n đợộ̣ bềờ̀n củểa kháó́ng sinh dịộ̣ch lọộ̣c Bảểng 12: Ảnh hưởng củểa pH đếó́n đợộ̣ bềờ̀n củểa KS sau ngàờ̀y vàờ̀ sau ngàờ̀y Bảểng 13: Kếó́t quảể chiếó́t kháó́ng sinh DMHC pH kháó́c Bảểng 14: Kếó́t quảể SK lớó́p mỏng chọộ̣n hệộ̣ dung môi (hiệộ̣n hìờ̀nh VSV P mirabilis) Bảểng 15: Kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính KS củểa cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảểng 16: Kếó́t quảể SK lớó́p mỏng cáó́c phân đoạộ̣n 1-15 (hiệộ̣n hìờ̀nh P mirabilis) Bảểng 17: Kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính KS củểa cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảểng 18: Kếó́t quảể SK lớó́p mỏng cáó́c phân đoạộ̣n 1-15 (hiệộ̣n hìờ̀nh P mirabilis) Bảểng 19: Kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính KS củểa cáó́c phân đoạộ̣n sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảểng 20: Kếó́t quảể SK lớó́p mỏng cáó́c phân đoạộ̣n 1-10 (hiệộ̣n hìờ̀nh P mirabilis) Bảểng 21: Kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính kháó́ng sinh sau chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Bảểng 22: Kếó́t quảể SK lớó́p mỏng cáó́c phân đoạộ̣n từờ̀ 1-4 ( hiệộ̣n hìờ̀nh P.mirabilis) Hình 1: Sơ đô tông quát sinh tông hợp kháng sinh PHỤ LỤC Phụ lục 1: Biếó́n chủểng Streptomyces 155.21 đượộ̣c cấó́y zizag ớó́ng thạộ̣ch nghiêng vàờ̀o đĩa Petri cho vào tủể ấó́m vàờ̀ đĩa Petri chứó́a biếó́n chủểng Streptomyces 155.21 sau ngày ni cấó́y tủể ấó́m Phụ lục 2: Kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính kháng sinh phương pháó́p khớó́i thạộ̣ch và phương pháó́p giếó́ng thạộ̣ch Phụ lục 3: Bìờ̀nh lên men đượộ̣c đặt máy lắó́c bắó́t đầờ̀u quá trình nhân giớó́ng cấó́p 1, bình nhân giớó́ng cấó́p và bình chứó́a sảển phẩm lên men kếó́t thúc quá trình lên men Phụ lục 4: Cợộ̣t sắó́c ký quá trình chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n và kếó́t quảể thửể hoạộ̣t tính kháng sinh sau quá trình chạộ̣y cộộ̣t Phụ lục 5: Phổ MS chấó́t kháng sinh KS1 phân lậộ̣p đượộ̣c Phụ lục 6: Phổ UV chấó́t kháng sinh KS1 phân lậộ̣p đượộ̣c Phụ lục 7: Phổ IR chấó́t kháng sinh KS1 phân lậộ̣p đượộ̣c ĐẶT VẤN ĐỀ Tác dụng củểa kháng sinh đượộ̣c phát hiệộ̣n vào tháng 10/1928 và Penicillin đượộ̣c sửể dụng vàờ̀o năm 1943, đãẫ̃ mở kỷ ngun mớó́i y họộ̣c lâm sàng và ngành cơng nghệộ̣ lên men sảển xuấó́t kháng sinh Ngoàờ̀i đượộ̣c sửể dụng dự phòờ̀ng vàờ̀ điềờ̀u trịộ̣ các bệộ̣nh nhiễm khuẩn, nhiễm nấó́m, bệộ̣nh ung thư cho ngườờ̀i, kháó́ng sinh cịờ̀n đượộ̣c dùờ̀ng chăn ni, trồng trọộ̣t và công nghiệộ̣p thực phẩm Do đượộ̣c sửể dụng tràn lan và khơng đúó́ng cáó́ch nên tìờ̀nh trạộ̣ng kháng kháng sinh ngày càng trở nên nghiêm trọộ̣ng Kháng sinh là lớó́p hoạộ̣t chấó́t hữẫ̃u ích có tác dụng sinh họộ̣c rấó́t mạộ̣nh, đượộ̣c tổng hợộ̣p từờ̀ vi khuẩn, xạộ̣ khuẩn, vi nấó́m từờ̀ mợộ̣t sớó́ thực vậộ̣t bậộ̣c cao Ngày nay, vớó́i phát triểển mạộ̣nh mẽ củểa sinh họộ̣c hiệộ̣n đạộ̣i cùng hỗẫ̃ trợộ̣ củểa nhiềờ̀u ngành khoa họộ̣c khác giúp cho việộ̣c tìm kiếó́m và ứó́ng dụng kháó́ng sinh đạộ̣t đượộ̣c nhữẫ̃ng thành tựu rực rỡẫ̃ Con ngườờ̀i khơng tìm kiếó́m nhữẫ̃ng chủểng vi sinh vậộ̣t sinh kháng sinh từờ̀ tự nhiên mà cảểi tạộ̣o chúng nhiềờ̀u phương pháó́p dùờ̀ng kỹẫ̃ thuậộ̣t di trùờ̀n, cơng nghệộ̣ gen, gây đợộ̣t biếó́n địộ̣nh hướó́ng, chọộ̣n dịng gen sinh tổng hợộ̣p Trong sớó́ 15000 kháó́ng sinh hiệộ̣n đãẫ̃ đượộ̣c biếó́t đếó́n thếó́ giớó́i thì khoảểng 60% là xạộ̣ khuẩn tạộ̣o ra, đóó́ khoảểng 55% chi Streptomyces sảển xuấó́t Đây làờ̀ chi xạộ̣ khuẩn lớó́n, gồm nhiềờ̀u vi sinh vậộ̣t có khảể sinh tổng hợộ̣p kháng sinh, mợộ̣t sớó́ loài có khảể sinh tổng hợộ̣p các chấó́t chữẫ̃a ung thư, điềờ̀u trịộ̣ HIV Do đóó́, chi xạộ̣ khuẩn nàờ̀y đượộ̣c nướó́c và thếó́ giớó́i tậộ̣p trung nghiên cứó́u Tạộ̣i Bợộ̣ mơn Vi sinh- Sinh họộ̣c trườờ̀ng ĐH Dượộ̣c Hà Nợộ̣i, chúó́ng tơi đãẫ̃ chọộ̣n đềờ̀ tài “Góp phầầ̀n nghiên cứu lên men tởổ̉ng hợạ̣p kháng sinh nhờ Streptomyces 155.21” vớó́i các mục tiêu sau: - Nghiên cứó́u cảểi tạộ̣o giớó́ng theo hướó́ng tăng sinh tổng hợộ̣p kháng sinh và lựa chọộ̣n môi trườờ̀ng lên men thích hợộ̣p củểa chủểng Streptomyces 155.21 - Nghiên cứó́u mợộ̣t vàờ̀i đặc tính củểa kháó́ng sinh đãẫ̃ sinh tổng hợộ̣p đượộ̣c 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kếố́t ḷạ̣n Sau quáó́ trìờ̀nh nghiên cứó́u, chúó́ng tơi đãẫ̃ bảển hoàờ̀n thàờ̀nh cáó́c mục tiêu củểa khóó́a ḷộ̣n tớó́t nghiệộ̣p, kếó́t quảể thu đượộ̣c sau:  Chủểng Streptomyces 155.21 đãẫ̃ đượộ̣c sàờ̀ng lọộ̣c ngẫẫ̃u nhiên vàờ̀ gây độộ̣t biếó́n 02 lầờ̀n áó́nh sáó́ng UV (lầờ̀n 1, 2) và 01 lầờ̀n táó́c nhân acid nitrơ HNO (lầờ̀n 3), biếó́n chủểng sau đợộ̣t biếó́n lầờ̀n cóó́ hoạộ̣t tính kháó́ng sinh tăng lên rõ rệộ̣t tăng 140% so vớó́i chủểng x́ó́t pháó́t  Lựa chọộ̣n đượộ̣c mơi trườờ̀ng lên men tớó́i thích làờ̀ MT2dt (hoạộ̣t tính kháó́ng sinh củểa chủểng lên men cao 123,89% đớó́i vớó́i MT1dt, 138,74% đớó́i vớó́i MT5dt thửể hoạộ̣t tính VSV kiểểm địộ̣nh B.subitilis)  Kháng sinh Streptomyces 155.21 sinh tổng hợộ̣p đượộ̣c chiếó́t kiệộ̣t từờ̀ dịộ̣ch lên men Ethylacetat pH  Kháó́ng sinh sau tinh chếó́ cóó́ nhiệộ̣t đợộ̣ nóó́ng chảểy 217,3 C, từờ̀ phổ IR vàờ̀ UV cóó́ thểể sơ bợộ̣ dự đoáó́n cấó́u trúó́c kháó́ng sinh cóó́ thểể cóó́ nhân thơm, cóó́ cáó́c liên kếó́t bợộ̣i liên hợộ̣p vàờ̀ mợộ̣t sớó́ nhóó́m chứó́c -OH, =NH-, -C=C-, -COOH, C=O, Ar-, RCOOR Khớó́i lượộ̣ng phân tửể dự kiếó́n làờ̀ 1268 đvC Hiệộ̣u suấó́t táó́ch vàờ̀ tinh chếó́ KS1: 14,72% 42 Kiếố́n nghị Giảểi trìờ̀nh tự gen đểể xáó́c địộ̣nh xáó́c tên khoa họộ̣c củểa Streptomyces 155.21 đểể dễ dàờ̀ng nghiên cứó́u Tiếó́p tục nghiên cứó́u cảểi tạộ̣o giớó́ng nhiềờ̀u phương pháó́p kháó́c đểể tạộ̣o cáó́c biếó́n chủểng siêu tổng hợộ̣p kháó́ng sinh Nghiên cứó́u tớó́i ưu hóó́a điềờ̀u kiệộ̣n lên men (Bằng cáó́ch thay đổi điềờ̀u kiệộ̣n lên men, thàờ̀nh phầờ̀n mơi trườờ̀ng, tớó́c đợộ̣ lắó́c…) Tìờ̀m quy trìờ̀nh chiếó́t táó́ch kháó́ng sinh đểể nâng cao hiệộ̣u suấó́t tinh chếó́ vàờ̀ tạộ̣o kháó́ng sinh tinh khiếó́t Tiếó́p tục đo phổ cợộ̣ng hưởng từờ̀ hạộ̣t nhân đểể xáó́c địộ̣nh cấó́u trúó́c hóó́a họộ̣c củểa kháó́ng sinh sinh tổng hợộ̣p đượộ̣c Thửể táó́c dụng sinh họộ̣c invivo, in vitro đểể cóó́ ứó́ng dụng thực tếó́ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếố́ng Việt Bộộ̣ môn Hóa phân tích (2006), Hóa phân tích II, trườờ̀ng Đạộ̣i họộ̣c Dượộ̣c Hà Nộộ̣i, Hà Nộộ̣i, tr 23-69, 125-147, 215-219, 318 Bộộ̣ môn Vi sinh- Sinh họộ̣c (2005), Thực tậạ̣p vi sinh- ky sinh, trườờ̀ng Đạộ̣i họộ̣c Dượộ̣c Hà Nợộ̣i, Hà Nợộ̣i, tr 37-54 Bợộ̣ Y tếó́ (2007), Dượạ̣c ly họạ̣c, Nhà x́ó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nợộ̣i, tậộ̣p 2, tr 130-142 Bợộ̣ Y tếó́ (2007), Hóa hữữ̃u cơ, Nhà x́ó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nợộ̣i, tậộ̣p 1, tr.105-119 Bợộ̣ Y tếó́ (2007), Kiểổ̉m nghiệm dượạ̣c phẩổ̉m, Nhà x́ó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nợộ̣i, tr 68-82, 115-133 Bợộ̣ Y tếó́ (2007), Kỹ tḥạ̣t sản xuất dượạ̣c phẩổ̉m, Nhà x́ó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nợộ̣i, tậộ̣p 2, tr.26-40, 81-93 Bợộ̣ Y tếó́ (2008), Vi sinh vậạ̣t họạ̣c, Nhà x́ó́t bảển Giáo dục, Hà Nợộ̣i, tr 22-87 Trầờ̀n Tửể An (2002), Phương pháố́p chiếố́t ứng dụạ̣ng kiểổ̉m nghiệm vàà̀ độạ̣c chất, Trung tâm Thông tin- Thư việộ̣n ĐH Dượộ̣c, Hà Nộộ̣i, tr 40-41, 4959 Kiềờ̀u Hữẫ̃u Ảnh (1999), Vi sinh vậạ̣t họạ̣c công nghiệp, Nhà x́ó́t bảển Khoa họộ̣c kỹẫ̃ tḥộ̣t, Hà Nợộ̣i, tr 167-172 10 Nguyễn Văn Cáó́ch (2004), Cơng nghệ lên men các chất kháng sinh, Nhà xuấó́t bảển Khoa họộ̣c kỹẫ̃ tḥộ̣t, Hà Nợộ̣i, tr 11-16 11 Lê Huy Chính (2007), Vi sinh vậạ̣t Y họạ̣c, Nhà xuấó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nộộ̣i, tr 15-16, 50-56 12 Nguyễn Lân Dũẫ̃ng, Nguyễn Đìờ̀nh Quyếó́n, Phạộ̣m Văn Ty (2001), Vi sinh vậạ̣t họạ̣c, Nhà xuấó́t bảển Giáo dục, tr 38-40 13 Nguyễn Lân Dũẫ̃ng, Nguyễn Kim Nữẫ̃ Thảểo (2006), Các nhóm vi khuẩổ̉n chủổ̉ yếố́u-Phân loạạ̣i xạạ̣ khuẩổ̉n http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/phanloaixakhuan01.htm 14 Bùi Thịộ̣ Hà (2008), Nghiên cứu xạạ̣ khuẩổ̉n thuộạ̣c chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chốố́ng nấm gây bệnh chè Thái Nguyên Luậộ̣n văn thạộ̣c sỹẫ̃ Sinh họộ̣c, trườờ̀ng Đạộ̣i họộ̣c Sư Phạộ̣m, Thái Nguyên, tr.3-16 15 Từờ̀ Minh Koóng (2004), Cơ sở công nghệ sinh họạ̣c và sản xuất dượạ̣c phẩổ̉m, Nhà xuấó́t bảển Y họộ̣c, Hà Nộộ̣i, tr.42-54 16 Lê Đìờ̀nh Lương, Phan Cự Nhân (2000), Cơ sở di truyền họạ̣c, Nhà xuấó́t bảển Giáo dục, Hà Nợộ̣i, tr 40-49 17 Hồ Viếó́t Quý (2002), Chiếố́t táố́ch, phân chia, xáố́c địạ̣nh các chất bằà̀ng dung môi hữữ̃u cơ, Nhà xuấó́t bảển Khoa họộ̣c kỹẫ̃ thuậộ̣t, Hà Nợộ̣i, tậộ̣p 1, tr.9-27 18 Kh́ó́t Hữẫ̃u Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuậạ̣t gen, Nhà x́ó́t bảển Khoa họộ̣c kỹẫ̃ tḥộ̣t, Hà Nợộ̣i, tr 185-191 19 Nguyễn Văn Thanh (2009), Công nghệ sinh họạ̣c dượạ̣c, Nhà x́ó́t bảển Giáo dục, Hà Nợộ̣i, tr 14-57 20 Trầờ̀n Thịộ̣ Thanh (2001), Cơng nghệ vi sinh, Nhà x́ó́t bảển Giáo dục, Hà Nộộ̣i, tr 9-49 21 từà̀ Trịộ̣nh Thịộ̣ Thịộ̣nh (2009), Nghiên cứu sinh tổổ̉ng hợạ̣p kháng sinh Streptomyces 80.259 Khóa ḷộ̣n tớó́t nghiệộ̣p Dượộ̣c sĩ, Trườờ̀ng ĐH Dượộ̣c Hà Nộộ̣i, Hà Nộộ̣i Tiếố́ng Anh 22 Alan M, Phamis, Abdul-Khaliq, Srivastavask, Samad A, Gupta MK (2012), A promising strain of streptomyces sp with agricultural traits for growth promotion and diesea management, Department of Plant Phathology, CSIR-central institute of Medicinal &Aromatic, Plants (CIMAP), Lucknown 226015, India 23 Mander P, Choi YH, Seong JH, Na BH, Choss, Lee Hyun Joong, Yoo JC (2013), Statistical optimization of a multivariate fermention process for enhacing antibiotic activity of Streptomyces sp.CS 392, Department of Pharmacy, Chosun University, Gwagju, South Korea 24 Tomoniko Tanura, Yuumi Ishida, Misaotoguro, Kazunori Hatano and Ken-Ichiro Suzuki (2008), Classification of Streptomyces tenebrarius, Higgins and kaster as Steptoalloterichus tenebarius nom, rev, comb and emended description of the genus Streptoalloteichus, Biological Resource center (NBRC), National Insitute of Techology and Evaluation, 2-5-8 Kazusaka Matari, Kisarazu, Chiba, Japan [ International journal of Systematic and Evolution Microbiology] 25 Poulsen M, Oh DC, Clardy J, Currie CR (2011), Chemical analyses of wasp-associated streptomyces bacteria reveal a prolific potential for natural products discovery, Department of Bacteriology, University of Wisconsin-Madison, Madison, Wisconsin, United States of America Phụ lục : Biếố́n chủng Streptomyces 155.21 đượạ̣c cấy zizag ốố́ng thạạ̣ch nghiêng vàầ̀ đĩa Petri cho vàầ̀o tủ ấm vàầ̀ đĩa Petri chứa biếố́n chủng Streptomyces 155.21 sau ngày ni cấy tủ ấm Tủể ấó́m Memmert ,Binder Đĩa Petri chứó́a xạộ̣ khuẩn Streptomyces 155.21 Phụ lục 2: Kếố́t quảổ̉ thử hoạạ̣t tính kháng sinh phương pháp khốố́i thạạ̣ch vàầ̀ phương pháp giếố́ng thạạ̣ch Thửể hoạộ̣t tính KS các biếó́n chủểng sau ĐB2 phương pháó́p khớó́i thạộ̣ch (VSV kiểểm địộ̣nh P.mirabilis.) pH pH pH 11 pH pH Thửể ảểnh hưởng củểa pH đếó́n đợộ̣ bềờ̀n KS phương pháó́p giếó́ng thạộ̣ch (VSV kiểểm địộ̣nh P mirabilis) Phụ lục 3: Bìầ̀nh lên men đượạ̣c đặt máy lắc bắt đầầ̀u trình nhân giốố́ng cấp 1, bình nhân giốố́ng cấp bình chứa sảổ̉n phẩổ̉m lên men kếố́t thúc trình lên men Bìờ̀nh lên men đượộ̣c đặt vào máy lắó́c bắó́t đầờ̀u quá trình tạộ̣o giớó́ng cấó́p Bình nhân giớó́ng cấó́p Bình chứó́a sảển phẩm lên men sau kếó́t thúc quá trình lên men Phụ lục 4: Cột sắc kí trình chạạ̣y lầầ̀n kếố́t quảổ̉ thử hoạạ̣t tính kháng sinh sau trình chạạ̣y cột Hình dạộ̣ng cộộ̣t sắó́c kí chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n Thửể hoạộ̣t tính các phân đoạộ̣n chạộ̣y cợộ̣t lầờ̀n phương pháó́p khoanh giấó́y lọộ̣c (VSV kiểểm địộ̣nh P.mirabilis) Hiệộ̣n hình VSV sắó́c ký lớó́p mỏng vếó́t kháó́ng sinh táó́ch đượộ̣c (VSV kiểểm địộ̣nh P.mirabilis) Phụ lục 5: Phổổ̉ MS chất kháng sinh KS1 phân lậạ̣p đượạ̣c Phụ lục 6: Phổổ̉ UV chất kháng sinh KS1 phân lậạ̣p đượạ̣c Phụ lục 7: Phổổ̉ IR chất kháng sinh KS1 phân lậạ̣p đượạ̣c ... HUY TRÌNH GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 155. 21 KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS Cao Văn Thu Nơi thực : Bộ môn Vi Sinh – Sinh Học Trường... trung nghiên cứó́u Tạộ̣i Bợộ̣ môn Vi sinh- Sinh họộ̣c trườờ̀ng ĐH Dượộ̣c Hà Nộộ̣i, chúó́ng tơi đãẫ̃ chọộ̣n đềờ̀ tài ? ?Góp phầầ̀n nghiên cứu lên men tởổ̉ng hợạ̣p kháng sinh nhờ Streptomyces. .. trình lên men cao  Nhược điểm: Đầu tư trang thiết bị kỹ thuật ban đầu lớn.[10]  Cáó́c phương pháó́p lên men chìờ̀m: Lên men mẻể, lên men có bổ sung, lên men bán liên tục, lên men