Định lượng nhanh vibrio parahaemolyticus bằng mẫu dò biotin labeled ap conjugate khảo sát mật độ nhiễm v parahaemolyticus trong nhuyễn thể tại vùng nuôi cần giờ tp hcm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA LÊ VĂN HIỂU ĐỊNH LƯỢNG NHANH VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS BẰNG MẪU DÒ BIOTINLABELED AP CONJUGATE KHẢO SÁT MẬT ĐỘ NHIỄM V.PARAHAEMOLYTICUS TRONG NHUYỄN THỂ TẠI VÙNG NUÔI CẦN GIỜ - TP HCM CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 08 NĂM 2009 Phần MỞ ĐẦU Phần TỔNG QUAN Phần VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phần KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Phần KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH oOo - Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày tháng 08 năm 2009 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập – Tự – Hạnh phúc -oOo TP HCM, ngày tháng 08 năm 2009 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SỸ Họ tên học viên: LÊ VĂN HIỂU Giới tính: Nam Ngày tháng năm sinh: 10/10/1983 Nơi sinh: Hà Tĩnh Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Khóa: 2007 TÊN ĐỀ TÀI: ĐỊNH LƯỢNG NHANH VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS BẰNG MẪU DÒ BIOTIN-LABELED AP CONJUGATE KHẢO SÁT MẬT ĐỘ NHIỄM V.PARAHAEMOLYTICUS TRONG NHUYỄN THỂ TẠI VÙNG NUÔI CẦN GIỜ - TP HCM NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: Nghiên cứu xây dựng dự thảo phương pháp định lượng nhanh V.parahaemolyticus thủy sản thức ăn chế biến dựa q trình lai phân tử, sử dụng mẫu dị biotin-tlh-labele alkaline phosphatase conjugate, đặc hiệu với đoạn gene thermolabile hemolysin có dịng V.parahaemolyticus mà khơng có vi sinh vật khác Xác nhận hiệu lực phương pháp xây dựng Xác định số thông số phương pháp So sánh hiệu phân tích phương pháp xây dựng với phương pháp định lượng truyền thống Ứng dụng phương pháp vào phân tích mẫu nhuyễn thể vùng ni Cần Giờ - Tp Hồ Chí Minh, từ kết đưa khuyến cáo cần thiết NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 02/02/2009 NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 03/08/2009 HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Thầy, PGS.TS Nguyễn Đức Lượng tận tình hướng dẫn, giúp đỡ truyền đạt cho em kiến thức quý báu trình học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Trung tâm Chất lượng Nông Lâm Thủy sản vùng hỗ trợ tạo điều kiện cho Tôi vật chất thời gian để hoàn thành luận văn Em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Thầy Cô Bộ Môn Công nghệ Sinh học, Đại học Bách Khoa thầy cô trực tiếp giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức tảng trình học tập Em xin chân thành cảm ơn Anh, ThS Nguyễn Tiến Dũng nhiệt tình giúp đỡ động viên em hoàn thành tốt luận văn Cảm ơn tất Anh, Chị, bạn đồng nghiệp phận Vi sinh sát cánh chia sẻ Tơi khó khăn cơng việc tận tình giúp đỡ Tơi suốt q trình thực luận văn Lời tri ân cuối cùng, xin gửi đến Ba Má, anh hai em út, người ủng hộ, động viên tạo cho động lực, niềm tin để học tập, lao động vươn lên sống Trân trọng LÊ VĂN HIỂU 68 GVHD: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Qua kết cho thấy, số 11 mẫu phân tích có 03 mẫu nhiễm V.parahaemolyticus chiếm tỷ lệ 27,3% Mật độ nhiễm V.parahaemolyticus 03 mẫu cao giới hạn cho phép thị trường nhập theo định số 2670/QĐ-BNN-QLCL Bộ NN&PTNT Cả 03 mẫu bị nhiễm mẫu nghêu, không phát mẫu sò huyết mẫu nước Mặc dù mẫu nước (mẫu 11) lấy thời điểm với mẫu nghêu (mẫu 10) bị nhiễm, lại không phát V.parahaemolyticus nước Điều nhuyễn thể hai mảnh vỏ ăn qua lọc nên tăng nguy tích tụ vsv gây bệnh, lượng nước đưa vào phân tích (1 ml) quy trình chưa phù hợp với phân tích mẫu nước Do đó, cần phải tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện quy trình mẫu nước mẫu lỏng Do điều kiện môi trường nuôi trải rộng, tiến hành xử lý môi trường nuôi nhằm loại bỏ V.parahaemolyticus nên tập trung xử lý khâu chế biến Mẫu bị nhiễm phải xử lý nhiệt trước đem tiêu thụ, nhiệt độ luộc từ 120 – 160oC áp lực – kg/cm2 với thời gian luộc từ – phút luộc nước sôi thời gian cần thiết để nhiệt độ bên thịt nhuyễn thể không 65oC thời gian khơng 10 phút Các sản phẩm cần phải gia nhiệt trước sử dụng HVTH: LÊ VĂN HIỂU LUẬN VĂN THẠC SỸ 69 GVHD: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua q trình nghiên cứu, chúng tơi thu số kết sau: Xây dựng dự thảo phương pháp định lượng nhanh Vibrio parahaemolyticus thủy sản sản phẩm chế biến dựa bắt cặp đặc hiệu mẫu dò Biotin-tlh-labele AP conjugate để phát đoạn gene thermolabile hemolysin (tlh) đặc trưng cho V.parahaemolyticus Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng thuộc tính phương pháp xây dựng: giới hạn phát giới hạn định lượng 10 cfu/g 30 cfu/g hai loại mẫu mẫu tươi mẫu khô Độ nhạy phương pháp 96%, độ đặc hiệu 100%, tỷ lệ dương tính giả 0% tỷ lệ âm tính giả 5% Hiệu phân tích phương pháp xây dựng phương pháp đếm đĩa truyền thống tương đương (trên chủng gây nhiễm), với độ tin cậy 95% Có diện V.parahaemolyticus, chiếm tỷ lệ 27,3% mẫu nhuyễn thể khu vực nuôi Cần Giờ với mật độ cao giới hạn cho phép 5.2 ĐỀ NGHỊ Do hạn chế thời gian, nên số nội dung chưa thực hoàn chỉnh Do vậy, chúng tơi có số kiến nghị cho nghiên cứu sau: Mở rộng đối tượng mẫu lỏng mẫu nước nước mắm Tổ chức đánh giá thứ cấp thông số phương pháp dựa việc tham gia phân tích mẫu liên phịng Tiếp tục phân tích mẫu phương pháp: lai khuẩn lạc truyền thống để so sánh hiệu phân tích mẫu nhiễm tự nhiên Nghiên cứu đưa giải pháp cụ thể nhằm đảm bảo chất lượng nhuyễn thể vùng nuôi Cần Giờ HVTH: LÊ VĂN HIỂU LUẬN VĂN THẠC SỸ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y Tế, 2001 Thường quy kỹ thuật định lượng Vibrio parahaemolyticus thực phẩm Quyết định số 3349/2001/QĐ-BYT, ban hành ngày 31 tháng 07 năm 2001 Hà Nội Bộ Thủy sản, 2007 Báo cáo tình hình xuất nhập thủy sản năm 2007 Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang, 2004 Di truyền phân tử NXB Nơng Nghiệp, năm 2004 Hồng Trọng, Chu Nguyễn Mộng Ngọc, 2005 Phân tích liệu nghiên cứu với SPSS NXB Thống kê Nguyễn Chí Thuận, Nguyễn Hồng Un, Nguyễn Thị Thanh Lợi Lê Trần Bình, 2003 Phương pháp lai ADN với probe gắn alkaline-phosphatase (AP) để xác định Vibrio parahaemolyticus Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc lần thứ hai, nghiên cứu sinh học, y học, nông nghiệp NXB khoa học kỹ thuật, năm 2003 Trang 1037-1039 Nguyễn Hữu Chí, 1997 Thức ăn bệnh nhiễm trùng đường tiêu hóa Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh No – Series – 1997: 10-15 Phạm Thị Phương Uyên, 2008 Nghiên cứu phát triển phương pháp phát nhanh Clostridium perfringens thực phẩm dựa biểu hoạt tính enzyme acid phosphatase beta-galactosidase Luận văn thạc sỹ, Ngành Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Bách Khoa-ĐHQG thành phố Hồ Chí Minh Sổ tay hướng dẫn thực hành, 2000 Chương trình kiểm sốt an toàn vệ sinh vùng thu hoạch nhuyễn thể hai mảnh vỏ - Bộ thủy sản Trần Linh Thước, 2003 Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm NXB Giáo dục, năm 2003 71 Tiếng Anh 10 A Deepanjali, H Sanath Kumar and I Karunasagar, 2005 Seasonal variation in abundance of total and pathogenic Vibrio parahaemolyticus bacteria in Oyters along the Southwest Coast of India Applied and Environmental Microbiology, Vol 71, No 7, page 3575 – 3580 11 Biotin Chromogenic Detection Kit, 2007 Protocol for detection of biotin AP conjugate, Fermentas 12 ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs – Protocol for the validation of alternative method, first edition 13 J A Gooch, A Depaola, C A Kaysner and D L Marshall, 2000 Evaluation of two direct plating methods using nonradioactive probes for enumeration of Vibrio parahaemolyticus in Oysters Letters in Applied and Environmental Microbiology 67 (2), page 721 – 724 14 McCarthy S A, A Depaola, D W Cook, C A Kaysner and W E Hill, 1999 Evaluation of alkaline phosphatase- and digoxigenin-labeled probes for detection of the thermolabile hemolysin (tlh) gene of Vibrio parahaemolyticus Letters in Applied Microbiology 28, page 66 – 70 15 NordVal Validation, 2004 Protocol for the validation of alternative microbiological methods Department of Microbial Food Safety, Institute for Food and Veterinary Research, Denmark 16 Penru Raghunath, Balakrishnan Pradeep, Indrani Karunasagar and Iddya Karunasagar, 2007 Rapid detection and enumeration of trh-carrying Vibrio parahaemolyticus with alkaline-phosphatase oligonucleotide probe Enviromental Microbiology, Vol 9, No 1, page 266 – 270 17 Taniguchi H, 1986 Comparison of the nucleotide sequences of the genes for the thermolabile hemolysin from Vibrio parahaemolyticus Microbiology Pathogen 1, page 425 – 432 72 18 U.S Food & Drug, 2004 Chapter – Vibrio Administration Center for Food Safety & Applied Nutrition Bacteriological Analytical Manual Online 73 Internet 19 http://www.ncbi.nih.gov/ 20 http://www.fermentas.com 21 http://www.gehealthcare.com/lifesciences i PHỤ LỤC I DANH MỤC THIẾT BỊ, DỤNG CỤ SỬ DỤNG Tủ ấm Memmert 37oC, 80oC Bể điều nhiệt 450C Máy lắc có hệ thống ổn nhiệt Đèn UV (bước sóng 254 nm) Nồi hấp khử trùng Microwave Máy dập mẫu Cân phân tích 0,000 g Cân kỹ thuật 0,00 g Máy đo pH Tủ cấy Biosafety cấp Tủ mát – 8oC Transfer pipette - 10 µl, 10 – 100 μl, 100 – 1.000 µl – 10 ml Dispensette ml 10 ml Đĩa petri đường kính 90 mm Ống nghiệm loại Que cấy vịng, que cấy thẳng Túi PE vơ trùng Chai thủy tinh 500 ml 1.000 ml ii Ống đong 500 ml 1.000 ml II DANH MỤC MƠI TRƯỜNG, HĨA CHẤT CHÍNH SỬ DỤNG Saline peptone water (SPW): Peptone 1,0 g Sodium chloride 8,5 g Nước cất 1.000 ml pH 7,0 ± 0,2 25oC Đun tan môi trường phân phối 9,0 ml vào ống nghiệm Thanh trùng 121oC/15 phút Thiosulfate-Citrate-Bile Salts-Sucrose Agar (TCBS): Cao nấm men 5,0 g Peptone 10 g Sucrose 20 g Sodium thiosulfate.75H2O 10 g Sodium citrate.72H2O 10 g Sodium cholate 3,0 g Oxgall 5,0 g NaCl 10 g Ferric citrate 1,0 g Bromothymol blue 0,04 g Thymol blue 0,04 g Agar 15 g Nước cất 1.000 ml iii Chuẩn bị erlen tích lớn lần so với thể tích cần dùng Cho chất vào nước cất làm ấm hấp khử trùng đun nóng để hịa tan Chỉ để vừa sôi nhấc Không hấp khử trùng Để nguội 50oC đổ đĩa Môi trường thạch T1N3 (1% tryptone, 3% NaCl): Tryptone 10 g NaCl 30 g Agar 20 g Nước cất 1.000 ml Hòa tan hỗn hợp hấp khử trùng 121oC/15 phút Để nguội 45 – 50oC, đổ vào đĩa petri trống Pha blocking/washing buffer (DD1): Hút 20 ml dd gốc 10X + 180 ml nước cất lần khử ion = 200 ml dd 1X (DD1) Trữ 4oC tuần Pha blocking solution (DD2): Cân 0.5 g Blocking Reagent + 50 ml Washing Buffer 1X (DD1) Hòa tan hoàn toàn nhiệt độ 50 – 60oC bể điều nhiệt Trữ dung dịch -20oC Pha Streptavidin-AP conjugate (DD3): Pha loãng nồng độ Streptavidin-AP conjugate xuống 5000 lần DD2 Hút µl + 20 ml Bloking solution (DD2) = DD3 Chỉ bắt đầu pha trước sử dụng Pha detection buffer (DD4): Hút ml dd gốc 10X + 27 ml nước cất lần khử ion = 30 ml dd 1X (DD4) iv Trữ 4oC tuần Pha substrate solution (DD5): Hút 0.2 ml dd gốc 50X + 9.8 ml DD4 = 10 ml dd 1X (DD5) Không pha trực tiếp vào 10X Detection buffer mà pha DD4 1X Chỉ bắt đầu pha trước sử dụng Pha tránh ánh sáng Pha 2X SSC - 0.1% SDS: Hút 20 ml dd gốc 20X SSC + 180 ml H2O cất lần khử ion + cân 0.2 g SDS = 200 ml dd 2X SSC - 0.1%SDS 10 Pha 1X SSC - 0.1% SDS: Hút ml dd gốc 20X SSC + 95 ml H2O nước cất lần khử ion + cân 0.1 g SDS = 100 ml dd 1X SSC - 0.1%SDS 11 Pha dung dịch pre-hybridization: - Pha phosphate buffer 0.5M pH 7.2: Cân 87.09 g K2HPO4 + 500 ml H2O = dd stock 1M Cân 68.045 g KH2PO4 + 500 ml H2O = dd stock 1M Hút 71.7 ml K2HPO4 + 28.3 ml KH2PO4 + 500 ml H2O = dd 0.5M pH 7.2 - Pha dd pre-hybridization: thể tích 100 ml 7% SDS: cân g 10 mM EDTA: cân 0.37224 g 0.5 M phosphate buffer, pH 7.2: hút 14.34 ml K2HPO4 + 5.66 ml KH2PO4 12 Pha SDS 10%: Cân 10 g SDS + 90 ml nước cất lần khử ion = 100 ml dd SDS 10% 13 Pha 2X SSC: Hút 10 ml dd SSC 20X + 90 ml nước cất hai lần khử ion = 100 ml dd 2X SSC 14 Pha denaturation buffer: v Cân 87.66 g NaCl + 20 g NaOH + 1000 ml H2O cất lần khử ion Hịa tan hồn tồn Trữ nhiệt độ phòng tháng 15 Pha neutralization buffer: Cân 87.66 g NaCl + 60.5 g Trizma base + 1000 ml nước cất lần khử ion Hòa tan hồn tồn Trữ nhiệt độ phịng tháng vi III GIỚI HẠN CHO PHÉP CỦA VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS TRONG THỰC PHẨM DO BỘ NN&PTNT BAN HÀNH THEO QUYẾT ĐỊNH 2670/QĐ-BNN-QLCL Nhóm thực phẩm Thị trường Giới hạn cho phép (Trong 1g sản phẩm) Giáp xác tươi đông lạnh Nga 100 cfu/g Nga 100 cfu/g Nhuyễn thể sơ chế Nga 100 cfu/g Nhuyễn thể dạng xử lý Nga 100 cfu/g Nhuyễn thể hai mảnh vỏ Nhập chế biến/ Nội 100 cfu/g (nấu chín trước ăn) địa Thủy sản sản phẩm Nhập chế biến/ Nội thủy sản tươi, ướp đá, địa dạng sơ chế Cá đông lạnh (nguyên con, phi lê, cắt khúc) nhiệt 100 cfu/g đông lạnh Thủy sản khô, sơ chế nấu Nhập chế biến/ Nội chín trước ăn địa Thủy sản sản phẩm Nhập chế biến/ Nội thủy sản ăn liền địa Nước mắm sản Nhập chế biến/ Nội phẩm dạng mắm địa 100 cfu/g 10 cfu/g 10 cfu/g vii IV BẢNG PHÂN PHỐI T-STUDENT Upper critical values of Student's t distribution with degrees of freedom Probability of exceeding the critical value 0.10 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 3.078 1.886 1.638 1.533 1.476 1.440 1.415 1.397 1.383 1.372 1.363 1.356 1.350 1.345 1.341 1.337 1.333 1.330 1.328 1.325 1.323 1.321 1.319 1.318 1.316 1.315 1.314 1.313 1.311 1.310 1.309 1.309 1.308 1.307 1.306 1.306 1.305 1.304 1.304 1.303 1.303 1.302 1.302 1.301 1.301 1.300 1.300 1.299 1.299 1.299 1.298 1.298 1.298 1.297 1.297 1.297 1.297 1.296 1.296 1.296 1.296 0.05 6.314 2.920 2.353 2.132 2.015 1.943 1.895 1.860 1.833 1.812 1.796 1.782 1.771 1.761 1.753 1.746 1.740 1.734 1.729 1.725 1.721 1.717 1.714 1.711 1.708 1.706 1.703 1.701 1.699 1.697 1.696 1.694 1.692 1.691 1.690 1.688 1.687 1.686 1.685 1.684 1.683 1.682 1.681 1.680 1.679 1.679 1.678 1.677 1.677 1.676 1.675 1.675 1.674 1.674 1.673 1.673 1.672 1.672 1.671 1.671 1.670 0.025 12.706 4.303 3.182 2.776 2.571 2.447 2.365 2.306 2.262 2.228 2.201 2.179 2.160 2.145 2.131 2.120 2.110 2.101 2.093 2.086 2.080 2.074 2.069 2.064 2.060 2.056 2.052 2.048 2.045 2.042 2.040 2.037 2.035 2.032 2.030 2.028 2.026 2.024 2.023 2.021 2.020 2.018 2.017 2.015 2.014 2.013 2.012 2.011 2.010 2.009 2.008 2.007 2.006 2.005 2.004 2.003 2.002 2.002 2.001 2.000 2.000 0.01 31.821 6.965 4.541 3.747 3.365 3.143 2.998 2.896 2.821 2.764 2.718 2.681 2.650 2.624 2.602 2.583 2.567 2.552 2.539 2.528 2.518 2.508 2.500 2.492 2.485 2.479 2.473 2.467 2.462 2.457 2.453 2.449 2.445 2.441 2.438 2.434 2.431 2.429 2.426 2.423 2.421 2.418 2.416 2.414 2.412 2.410 2.408 2.407 2.405 2.403 2.402 2.400 2.399 2.397 2.396 2.395 2.394 2.392 2.391 2.390 2.389 0.005 0.001 63.657 318.313 9.925 22.327 5.841 10.215 4.604 7.173 4.032 5.893 3.707 5.208 3.499 4.782 3.355 4.499 3.250 4.296 3.169 4.143 3.106 4.024 3.055 3.929 3.012 3.852 2.977 3.787 2.947 3.733 2.921 3.686 2.898 3.646 2.878 3.610 2.861 3.579 2.845 3.552 2.831 3.527 2.819 3.505 2.807 3.485 2.797 3.467 2.787 3.450 2.779 3.435 2.771 3.421 2.763 3.408 2.756 3.396 2.750 3.385 2.744 3.375 2.738 3.365 2.733 3.356 2.728 3.348 2.724 3.340 2.719 3.333 2.715 3.326 2.712 3.319 2.708 3.313 2.704 3.307 2.701 3.301 2.698 3.296 2.695 3.291 2.692 3.286 2.690 3.281 2.687 3.277 2.685 3.273 2.682 3.269 2.680 3.265 2.678 3.261 2.676 3.258 2.674 3.255 2.672 3.251 2.670 3.248 2.668 3.245 2.667 3.242 2.665 3.239 2.663 3.237 2.662 3.234 2.660 3.232 2.659 3.229 viii 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 1.295 1.295 1.295 1.295 1.295 1.294 1.294 1.294 1.294 1.294 1.293 1.293 1.293 1.293 1.293 1.293 1.292 1.292 1.292 1.292 1.292 1.292 1.292 1.292 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.291 1.290 1.290 1.290 1.290 1.290 1.282 1.670 1.669 1.669 1.669 1.668 1.668 1.668 1.667 1.667 1.667 1.666 1.666 1.666 1.665 1.665 1.665 1.665 1.664 1.664 1.664 1.664 1.663 1.663 1.663 1.663 1.663 1.662 1.662 1.662 1.662 1.662 1.661 1.661 1.661 1.661 1.661 1.661 1.660 1.660 1.645 1.999 1.998 1.998 1.997 1.997 1.996 1.995 1.995 1.994 1.994 1.993 1.993 1.993 1.992 1.992 1.991 1.991 1.990 1.990 1.990 1.989 1.989 1.989 1.988 1.988 1.988 1.987 1.987 1.987 1.986 1.986 1.986 1.986 1.985 1.985 1.985 1.984 1.984 1.984 1.960 2.388 2.387 2.386 2.385 2.384 2.383 2.382 2.382 2.381 2.380 2.379 2.379 2.378 2.377 2.376 2.376 2.375 2.374 2.374 2.373 2.373 2.372 2.372 2.371 2.370 2.370 2.369 2.369 2.368 2.368 2.368 2.367 2.367 2.366 2.366 2.365 2.365 2.365 2.364 2.326 2.657 2.656 2.655 2.654 2.652 2.651 2.650 2.649 2.648 2.647 2.646 2.645 2.644 2.643 2.642 2.641 2.640 2.640 2.639 2.638 2.637 2.636 2.636 2.635 2.634 2.634 2.633 2.632 2.632 2.631 2.630 2.630 2.629 2.629 2.628 2.627 2.627 2.626 2.626 2.576 3.227 3.225 3.223 3.220 3.218 3.216 3.214 3.213 3.211 3.209 3.207 3.206 3.204 3.202 3.201 3.199 3.198 3.197 3.195 3.194 3.193 3.191 3.190 3.189 3.188 3.187 3.185 3.184 3.183 3.182 3.181 3.180 3.179 3.178 3.177 3.176 3.175 3.175 3.174 3.090 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: LÊ VĂN HIỂU Ngày sinh: 10/10/1983 Nơi sinh: CẨM XUYÊN, HÀ TĨNH Địa liên lạc: 38/2 KP2 – Ngơ Chí Quốc – Bình Chiểu – Thủ Đức – Tp Hồ Chí Minh Điện thoại liên lạc: 098 298 4549 QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO Năm 2006, tốt nghiệp Kỹ sư Công nghệ Sinh học, Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Năm 2007 – 2009: học Cao học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học, Đại học Bách Khoa – Thành phố Hồ Chí Minh Q TRÌNH CƠNG TÁC Năm 2006 – nay: công tác Trung tâm Chất lượng Nông Lâm Thủy sản vùng 4, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn ... TÊN ĐỀ TÀI: ĐỊNH LƯỢNG NHANH VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS BẰNG MẪU DÒ BIOTIN- LABELED AP CONJUGATE KHẢO SÁT MẬT ĐỘ NHIỄM V .PARAHAEMOLYTICUS TRONG NHUYỄN THỂ TẠI VÙNG NUÔI CẦN GIỜ - TP HCM NHIỆM VỤ... hành đề tài nghiên cứu ? ?Định lượng nhanh Vibrio parahaemolyticus mẫu dò Biotin- labeled AP conjugate Khảo sát mật độ nhiễm V .parahaemolyticus nhuyễn thể vùng nuôi Cần Giờ - Tp HCM? ??, với mong muốn... pháp sử dụng mẫu dò DNA áp dụng nhiều phịng thí nghiệm giới kit thương mại hóa [18] Định lượng mật độ V .parahaemolyticus sử dụng mẫu dò Biotin- tlh -labeled Alkaline phosphatase (AP) conjugate