Thu nhận enzyme phytase từ aspergillus ficuum, thử nghiệm, phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - QUÁCH CẨM HỒNG THU NHẬN ENZYME PHYTASE TỪ ASPERGILLUS FICUUM, THỬ NGHIỆM PHÂN GIẢI NGUỒN NGUYÊN LIỆU LÀM THỨC ĂN GIA SÚC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ NGÀNH: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 11 năm 2007 LỜI CẢM ƠN Trân trọng biết ơn: Ban Giám hiệu Trường Đại học Bách Khoa Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học Quý Thầy Cô Khoa Công nghệ Sinh học Đã truyền đạt cho tảng tri thức vững suốt thời gian học tập trường Để có kết luận án này, xin gởi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến: TS HOÀNG QUỐC KHÁNH Đã tận tình hướng dẫn, quan tâm tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành tốt luận án Cô tuyến, bạn Sanh cô chú, anh chị Viện Sinh học Nhiệt đới nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian thực luận án Chị Ái, anh Duy, bạn Long em Hiền thuộc phòng vi sinh Viện Sinh học Nhiệt đới hỗ trợ giúp đỡ nhiều suốt thời gian thực luận án Xin chân thành cảm ơn Anh Chị Bạn lớp Cao học K2005, bạn bè đồng nghiệp Khoa Công nghệ Sinh học nhiệt tình giúp đỡ hoàn thành tốt luận án Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn vô hạn đến Ba Mẹ yêu thương ủng hộ tiếp bước đường học vấn TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài nghiên cứu thu nhận enzyme phytase từ Aspergillus ficuum, thử nghiệm phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc dựa sở sử dụng nguồn chất cảm ứng cám ngô để thu nhận enzyme phytase sau thử nghiệm phân giải nguồn phế phụ phẩm rẻ tiền sẵn có - cám ngô, cám mì, cám gạo Đề tài tiến hành nghiên cứu với nội dung sau: - Về môi trường nuôi cấy tiến hành lựa chọn môi trường với thành phần thích hợp cho hoạt độ enzyme phytase cao - Về qui trình thu nhận, tiến hành khảo sát thông số trình nuôi cấy – thời gian lên men, nhiệt độ lên men, phổ pH hoạt động, khả chịu nhiệt phytase từ chủng Aspergillus ficuum - Về tinh sạch, tiến hành khảo sát phương pháp tủa – cồn, ammonium sulfate, polyethylene glycol 6000; tinh enzyme sắc ký lọc gel biogel P100; phân tách hệ enzyme phytase phương pháp điện di gel SDS – PAGE - Về sản phẩm, nghiên cứu hoạt độ, hàm lượng prôtêin, thử nghiệm phân giải phytase nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc, tạo chế phẩm enzyme phytase dạng lỏng bột Kết nghiên cứu cho thấy sử dụng cám ngô nguồn chất để thu nhận enzyme phytase Chế phẩm enzyme dạng lỏng, bột có hoạt độ tương đương với sản phẩm loại thị trường Qui trình sản xuất enzyme phytase không phức tạp nên kết nghiên cứu khả thi đưa vào triển khai sản xuất kinh doanh SUMMARY This studying subject to receive enzyme phytase from Aspergillus ficumm, test the splitting of material source used for livestock food which is based on use of inducted substrate source, corn bran, to receive enzyme phytase, then continue testing the splitting of available cheap waste material source such as bran of corn, manioc, rice, etc… The study was proceeded as follows: - Nutrient medium was chosen to be the one with components well-suited to hight activity of enzyme phytase - Receving procedure was carried on testing parameters of nutrient medium, fermentation time and temperature, acting pH spetrum, heat-proof capacity of phytase from Aspergillus ficuum - Purity was undergone to confirm examining the methods of alcolhol precipitation, ammonium sulfate, polyethylene glycol 6000, purifying enzyme by gel chromatography on biogel P100, separating enzyme phytase system by method of gel SDS-PAGE electrophoresis - Products was carried on studying activity, protein content, testing phytase zymolysis on material source to produce livestock food, liquid and flour prepation Studying results prove corn bran to be able to be used as the sustrate source to receive enzyme Liquid and flour enzyme preparation with activity equivalent to the same market products Procedure to manufacture enzyme phytase is not complex, therefore it is very realizable and able to be put into processing and trading MỤC LỤC Trang Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng biểu, hình vẽ MỞ ÑAÀU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược trình nghiên cứu enzyme phytase 1.2 Axít phytic 1.2.1 Cấu trúc hóa học 10 1.2.2 Chức sinh lý 12 1.2.3 Tác động kháng dưỡng axít phytic 13 1.3 Enzyme phytase 14 1.3.1 Định nghóa 14 1.3.2 Phân loại danh phaùp 14 1.3.3 Cơ chế thủy phân enzyme phytase 17 1.3.4 Nguồn thu nhận 20 1.3.4.1 Phytase từ thực vật 20 1.3.4.2 Phytase từ động vật 20 1.3.4.3 Phytase từ vi sinh vaät 21 1.3.5 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa phytase 22 1.3.5.1 Nhiệt độ 22 1.3.5.2 pH 23 1.3.5.3 Tác động chất 26 Luận văn thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng 1.3.5.4 Khả chịu nhiệt 27 1.3.6 Các yếu tố vật lý ảnh hưởng lên trình sinh tổng hợp phytase 28 1.3.6.1 Các yếu tố vật lý 28 1.3.6.2 Các yếu tố dinh dưỡng 29 1.4 Các ứng dụng enzyme phytase 32 1.4.1 Trong công nghiệp thức ăn gia súc 32 1.4.2 Trong công nghiệp thực phẩm 33 1.4.3 Trong tổng hợp myo-inositol phosphate 34 1.4.4 Trong coâng nghiệp giấy bột giấy 35 1.4.5 Các ứng dụng khác 35 1.5 Sô lược nấm mốc Aspergillus ficuum 36 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .38 2.1 Vật liệu 38 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 38 2.1.2 Các thiết bị 38 2.1.3 Nguyên liệu sử dụng làm chất 38 2.1.4 Môi trường nuôi cấy nấm mốc 38 2.1.5 Hóa chất dùng xác định hàm lượng prôtêin 39 2.1.6 Hóa chất dùng xác định hoạt độ 39 2.1.7 Các hóa chất dùng định lượng đường tổng số phản öùng maøu 40 2.1.8 Các hóa chất dùng chạy điện di 40 2.1.9 Hóa chất dùng sắc ký loïc gel 41 2.1.10 Các hóa chất dùng xác định ảnh hưởng pH lên hoạt độ Luận văn thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng phytase 42 2.1.11 Caùc hóa chất dùng bảo quản enzyme phytase 42 2.2 Phương pháp 43 2.2.1 Qui trình thu nhận enzyme phytase 44 2.2.2 Phương pháp quan sát hình thái Aspergillus ficuum 45 2.2.3 Phương pháp nuôi cấy Aspergillus ficuum sinh tổng hợp enzyme phytase 45 2.2.4 Phương pháp chiết dung dịch enzyme từ canh trường nuôi cấy nấm mốc 45 2.2.5 Xác định hoạt độ theo phương pháp Murphy Riley 46 2.2.6 Xác định hàm lượng prôtêin theo phương pháp Bradford 48 2.2.7 Phương pháp xác định đường tổng số phản ứng màu 50 2.2.8 Phương pháp qui hoạch thực nghiệm 51 2.2.9 Nghiên cứu lựa chọn môi trường thích hợp cho sinh tổng hợp phytase hoạt độ cao 52 2.2.10 AÛnh hưởng thời gian lên men đến hoạt độ phytase từ chủng A ficuum 53 2.2.11 Ảnh hưởng nhiệt độ lên men đến hoạt độ phytase từ chủng A ficuum 53 2.2.12 Phổ pH hoạt động phytase từ chủng A ficuum 53 2.2.13 Khả chịu nhiệt phytase từ chủng A ficuum 53 2.2.14 Phương pháp tủa enzyme phytase 54 2.2.14.1 Phương pháp tủa ethanol 54 2.2.14.2 Phương pháp tủa baèng ammonium sulfate (NH4)2SO4 54 2.2.14.3 Phương pháp tủa polyethylenglycol (PEG) 6000 Luận văn thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng 55 2.2.14.4 Hiệu suất thu hồi độ tinh enzyme sau tuûa 56 2.2.15 Phương pháp điện di gel SDS-polyacrylamid 57 2.2.16 Phương pháp sắc ký lọc gel (rây phân tử) 59 2.2.17 Phương pháp sấy phun enzyme phytase 62 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .64 3.1 Kết quan sát hình thái 64 3.2 Định lượng đường tổng số phản ứng màu 65 3.3 Khảo sát thành phần môi trường cho sinh tổng hợp phytase hoạt độ cao 66 3.4 Nghiên cứu lựa chọn môi trường thích hợp cho sinh tổng hợp phytase hoạt độ cao 71 3.5 AÛnh hưởng thời gian lên men đến hoạt độ phytase từ chủng A ficuum 72 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ lên men đến hoạt độ phytase từ chủng A ficuum 74 3.7 Phổ pH hoạt động phytase từ chủng A ficuum 75 3.8 Khả chịu nhiệt phytase từ chủng A ficuum 77 3.9 Khảo sát phương pháp tủa enzyme phytase 78 3.10 Thử nghiệm phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc 82 3.11 Tinh enzyme sắc ký lọc gel Biogel P-100 83 3.12 Phân tách hệ enzyme phytase phương pháp điện di treân gel SDS-PAGE 86 Luận văn thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng 3.13 Thử nghiệm bảo quản enzyme dạng lỏng, bột 89 3.13.1 Thử nghiệm bảo quản phytase dạng lỏng 89 3.13.2 Thử nghiệm bảo quản phytase dạng bột 95 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 99 4.1 Kết luận 99 4.2 Đề nghị 101 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Luận văn thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT A.ficuum Aspergillus ficuum HAP Histidine axít phytase Hđph Hoạt độ enzyme phytase HđR Hoạt độ riêng enzyme phytase Hđs Hoạt độ riêng dung dịch enzyme sau qua lọc gel Hđt Hoạt độ riêng dung dịch enzyme trước qua loïc gel IP6 hay InsP6 Myo-inositol hexakis dihydrogen phosphate OD0 Mật độ quang thử không ODT Mật độ quang thử thật ∆ OD Hiệu số mật độ quang thử thật thử không PEG Polyethylenglycol SDS Sodium Dodecyl Sulfate TĂGS Thức ăn gia súc TB Trung bình TN Thí nghiệm UI Đơn vị hoạt độ (tính theo đơn vị quốc tế) ∑ UI Tổng đơn vị hoạt độ (tính theo đơn vị quốc tế) ∑C Tổng hàm lượng prôtêin dung dịch enzyme sau qua lọc gel ∑H Tổng hoạt độ enzyme sau qua lọc gel Luận văn Thạc só Khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng 45 ULLAH A H J., SETHUMADHAVAN (1997) Differences in the Active Site Environment of Aspergillus ficuum phytases Biochemical and Biophysical Research Communications 243, pp 458-462 46 VATS P., BANERJEE U.C (2004) Production studies and catalytic properties of phytases (myo-inositolhexakisphosphate phosphohydrolases Enzyme and Microbioal Technology 35, pp 3-14 47 VOLRA A., SATYANARAYANA T (2003) Phytase: Microbial Sources, Production, Purification, and Potential Biotechnological Applications Critical reviews in Biotechnology, 23(1), pp 29-60 48 ZIMMERMANN B., LANTZSCH H.-J., LANGBEIN, DROCHNER (2002) Determination of phytase activity in cereal grains by direct incubation Journal of Animal Nutrition 86, pp 347-352 Luận văn Thạc só khoa học HVTH: Quách Cẩm Hồng PHỤ LỤC ĐỒ THỊ CHUẨN PHOSPHO ĐỂ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH PHYTASE THEO PHƯƠNG PHÁP MURPHY VÀ RILEY Bảng 1: Tương quan giá trị ∆ OD 660nm nồng độ Na3PO4.12H2O (mgP/ml) Nồng độ Na3PO4.12H2O (mgP/ml) 0,0001 0,0002 0,0005 0,001 0,002 0,004 0,006 0,022 0,038 0,102 0,211 0,458 0,865 ∆ OD = ODT – OD0 0,000 0,016 0,032 0,096 0,205 0,452 0,859 MẬT ĐỘ QUANG OD (660nm) ODT ( λ =660nm) 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 y = 216.01x R2 = 0.9986 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 NỒNG ĐỘ PHOSPHO (mg P/ml) Hình 1: Sự tương quan giá trị ∆ OD 660nm nồng độ Na3PO4.12H2O (mgP/ml) ĐỒ THỊ CHUẨN ALBUMIN ĐỂ XÁC ĐỊNH HÀM LƯNG PRÔTÊIN THEO PHƯƠNG PHÁP BRADFORD Bảng 2: Tương quan giá trị ∆ OD595nm nồng độ albumin ( µ g/ml) Nồng độ Albumin ( µ g/ml) 1,41 2,82 4,23 5,64 7,05 8,46 9,87 ODT( λ =595nm) 0,050 0,181 0,300 0,391 0,551 0,629 0,787 0,875 ∆ OD = ODT – OD0 0,000 0,131 0,250 0,341 0,501 0,579 0,737 0,825 MẬT ĐỘ QUANG OD (595nm) 0.9 y = 0.0849x 0.8 R = 0.995 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 10 12 NỒN G ĐỘ ALBUMIN (microgram/ml) Hình 2: Tương quan giá trị ∆ OD 595nm nồng độ Albumin ( µ g/ml) ĐỒ THỊ CHUẨN SACCHAROSE ĐỂ XÁC ĐỊNH HÀM LƯNG ĐƯỜNG TỔNG SỐ BẰNG PHẢN ỨNG MÀU Bảng 3: Tương quan giá trị ∆ OD 595nm nồng độ Saccharose ( µ g/ml) Nồng độ Saccharose ( µ g) 10 20 30 40 50 60 ODT ( λ =490nm) 0,007 0,104 0,255 0,334 0,440 0,572 0,745 ∆ OD = ODT – OD0 0,000 0,097 0,248 0,327 0,433 0,565 0,738 Mật độ quang OD (490nm) 0.9 0.8 y = 0.011x 0.7 R2 = 0.9919 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Nồng độ Saccharose (micro gram/ml) Hình 3: Tương quan giá trị ∆ OD 490nm nồng độ Saccharose ( µ g/ml) NGHIÊN CỨU LỰA CHỌN MÔI TRƯỜNG THÍCH HP CHO SINH TỔNG HP PHYTASE HOẠT ĐỘ CAO Bảng 3.5: Hoạt độ tổng enzyme phytase dịch nuôi cấy môi trường khác Môi trường OD0 nuôi cấy ∆ OD ODT TN1 TN2 TN3 Hoạt độ phytase (UI/ml) TB Natri phytate 0,032 0,402 0,404 0,402 0,403 0,371 3,44 Tinh bột bắp 0,030 0,352 0,356 0,358 0,355 0,325 3,00 Cám ngô 0,037 0,387 0,390 0,391 0,389 0,352 3,26 Cám mì 0,042 0,308 0,304 0,307 0,306 0,264 2,44 Cám gạo 0,040 0,348 0,350 0,347 0,348 0,308 2,85 Đậu tương 0,035 0,331 0,327 0,327 0,328 0,293 2,71 Ngũ cốc 0,033 0,313 0,315 0,313 0,314 0,281 2,60 Bảng 3.6: Hoạt độ riêng enzyme phytase dịch nuôi cấy môi trường khác Môi trường nuôi cấy OD0 ∆ OD ODT TN1 TN2 TN3 Hoạt độ phytase (UI/mg prôtêin) TB Natri phytate 0,045 0,513 0,510 0,510 0,511 0,466 27,30 Tinh boät bắp 0,043 0,574 0,577 0,572 0,574 0,531 24,00 Cám ngô 0,048 0,639 0,628 0,633 0,630 0,582 23,80 Cám mì 0,051 0,758 0,762 0,759 0,760 0,709 14,61 Cám gạo 0,050 0,685 0,681 0,680 0,682 0,632 19,13 Đậu tương 0,053 0,730 0,732 0,735 0,732 0,679 16,94 Ngũ cốc 0,054 0,752 0,755 0,751 0,753 0,699 15,76 ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN LÊN MEN ĐẾN HOẠT ĐỘ PHYTASE Bảng 3.7: Hoạt độ tổng phytase canh trường nuôi cấy A.ficuum theo thời gian nuôi cấy Thời gian nuôi cấy (ngày) OD0 ODT TN1 TN2 TN3 TB ∆ OD Hoạt độ phytase (UI/ml) 0,030 0,120 0,117 0,118 0,118 0,088 0,81 0,031 0,162 0,166 0,162 0,163 0,132 1,22 0,032 0,210 0,209 0,212 0,210 0,178 1,65 0,034 0,270 0,274 0,269 0,271 0,237 2,20 0,035 0,341 0,337 0,339 0,339 0,304 2,81 0,037 0,388 0,391 0,388 0,389 0,352 3,26 0,039 0,381 0,382 0,386 0,383 0,344 3,19 0,042 0,360 0,364 0,360 0,361 0,319 2,95 10 0,041 0,344 0,341 0,341 0,342 0,301 2,79 Bảng 3.8: Hoạt độ riêng phytase canh trường nuôi cấy A ficuum theo thời gian nuôi cấy ODT Thời gian nuôi cấy (ngày) OD0 TN1 TN2 TN3 Hoạt độ phytase TB ∆ OD (UI/mg prôtêin) 0,047 1,091 1,092 1,096 1,093 1,046 3,29 0,047 0,968 0,971 0,968 0,969 0,922 5,62 0,047 0,865 0,861 0,861 0,862 0,815 8,59 0,047 0,750 0,754 0,752 0,752 0,705 13,17 0,047 0,698 0,700 0,703 0,700 0,653 18,25 0,047 0,629 0,631 0,627 0,629 0,582 23,80 0,047 0,568 0,563 0,564 0,565 0,518 26,15 0,047 0,516 0,520 0,518 0,518 0,471 26,58 10 0,047 0,482 0,479 0,479 0,480 0,433 27,35 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ LÊN MEN ĐẾN HOẠT TÍNH PHYTASE CỦA CHỦNG A FICUUM Bảng 3.9: Ảnh hưởng nhiệt độ lên men đến hoạt độ phytase chủng A ficuum Nhiệt độ lên men (oC) 20 25 30 35 40 Hoạt độ phytase (UI/ml) 1,21 2,01 3,20 2,32 1,31 PHỔ pH HOẠT ĐỘNG CỦA PHYTASE TỪ CHỦNG A FICUUM Bảng 3.10: Ảnh hưởng pH đến hoạt độ phytase cuûa chuûng A ficuum pH 2,5 5,5 Hoạt độ phytase (UI/ml) 2,16 2,72 2,22 2,40 3,26 3,20 2,60 1,24 0,18 KHAÛ NĂNG CHỊU NHIỆT CỦA PHYTASE TỪ CHỦNG A FICUUM Bảng 3.11: Khả chịu nhiệt phytase từ chủng A ficuum toC 25 Hoạt độ 0,92 1,55 2,25 3,16 3,30 3,64 3,86 3,18 1,62 0,98 0,41 0,25 phytase (UI/ml) 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 THỬ NGHIỆM PHÂN GIẢI NGUỒN NGUYÊN LIỆU LÀM THỨC ĂN GIA SÚC Bảng 3.15: Lượng phosphat phóng thích phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc Nguyên liệu làm thức ăn gia súc Cám ngô Cám gạo Cám mì Lượng ODT Thời gian (phút) phosphat ODo TN1 TN2 TN3 TB ∆ OD phóng thích (mg/g TĂGS) 30 0,075 0,313 0,310 0,310 0,311 0,236 0,524 60 0,075 0,530 0,534 0,529 0,531 0,456 1,014 90 0,075 0,532 0,530 0,534 0,532 0,457 1,016 120 0,075 0,534 0,537 0,532 0,534 0,459 1,019 180 0,075 0,538 0,534 0,533 0,535 0,460 1,023 240 0,075 0,536 0,539 0,536 0,537 0,462 1,026 300 0,075 0,530 0,538 0,540 0,538 0,463 1,028 30 0,088 0,351 0,353 0,356 0,353 0,265 0,588 60 0,088 0,625 0,628 0,625 0,626 0,538 1,196 90 0,088 0,760 0,755 0,757 0,757 0,669 1,487 120 0,088 0,848 0,850 0,846 0,848 0,760 1,688 180 0,088 0,946 0,947 0,951 0,948 0,860 1,910 240 0,088 1,057 1,061 1,057 1,058 0,970 2,155 300 0,088 1,132 1,128 1,130 1,130 1,042 2,316 30 0,090 0,363 0,360 0,360 0,361 0,271 0,602 60 0,090 0,630 0,635 0,630 0,632 0,542 1,205 Đậu tương 90 0,090 0,794 0,795 0,797 0,795 0,705 1,566 120 0,090 0,888 0,890 0,887 0,888 0,798 1,773 180 0,090 0,995 0,990 0,992 0,992 0,902 2,004 240 0,090 1,100 1,103 1,100 1,101 1,011 2,247 300 0,090 1,252 1,253 1,255 1,253 1,163 2,515 30 0,087 0,349 0,352 0,349 0,350 0,263 0,585 60 0,087 0,626 0,622 0,621 0,623 0,536 1,191 90 0,087 0,717 0,719 0,716 0,717 0,630 1,400 120 0,087 0,803 0,802 0,807 0,804 0,717 1,594 180 0,087 0,903 0,906 0,903 0,904 0,817 1,815 240 0,087 1,017 1,013 1,015 1,015 0,928 2,062 300 0,087 1,078 1,082 1,077 1,079 0,992 2,205 TÓM TẮT LÝ LỊCH Họ tên: Quách Cẩm Hồng Ngày, tháng, năm sinh: 28-10-1980 Nơi sinh: TP Hồ Chí Minh Địa liên lạc: 245/16B Nơ Trang Long, phường 11, quận Bình Thạnh QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: 2000-2004: Sinh viên trường Đại học Dân lập Văn Lang Tp Hồ Chí Minh, Khoa Công nghệ sinh học 2005-2007: Học viên cao học trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh, Khoa Công nghệ sinh học MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHÒ ... VĂN Đề tài nghiên cứu thu nhận enzyme phytase từ Aspergillus ficuum, thử nghiệm phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc dựa sở sử dụng nguồn chất cảm ứng cám ngô để thu nhận enzyme phytase. .. thu nhận enzyme phytase quy mô lớn để ứng dụng chăn nuôi Với lợi ích nêu trên, thực đề tài ? ?THU NHẬN ENZYME PHYTASE TỪ ASPERGILLUS FICUUM, THỬ NGHIỆM PHÂN GIẢI NGUỒN NGUYÊN LIỆU LÀM THỨC ĂN GIA. .. Khả chịu nhiệt phytase từ chủng A ficuum 77 3.9 Khảo sát phương pháp tủa enzyme phytase 78 3.10 Thử nghiệm phân giải nguồn nguyên liệu làm thức ăn gia súc 82 3.11 Tinh enzyme sắc ký