Khảo sát một số yếu tố hóa học ảnh hưởng lên sự sinh tổng hợp glocosinolate của tế bào bông cải xanh brassica oleracea var italica bằng phương pháp nuôi cấy tế bào

ðẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ðẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC TRƯƠNG THỊ KIM OANH KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ HÓA HỌC ẢNH HƯỞNG LÊN SỰ SINH TỔNG HỢP GLUCOSINOLATE CỦA TẾ BÀO BÔNG CẢI XANH BRASSICA OLEARCEA VAR ITALICA BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số : 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, 03/2011 ðẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ðẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHIÃ VIỆT NAM ðộc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc -oOo Tp HCM, ngày 09 tháng 03 năm 2011 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRƯƠNG THỊ KIM OANH Ngày, tháng, năm sinh : 30 – 11 - 1982 Giới tính : Nữ Nơi sinh : TP.HCM Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoá (Năm trúng tuyển) : 2009 1- TÊN ðỀ TÀI: “Khảo sát số yếu tố hóa học ảnh hưởng lên sinh tổng hợp glucosinolate tế bào cải xanh Brassica oleracea var italica phương pháp nuôi cấy tế bào” 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: Xác ñịnh ảnh hưởng chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật đến tạo mơ sẹo Xác định ảnh hưởng sáng đến tăng trưởng mơ sẹo Xác ñịnh ảnh hưởng sucrose ñến tăng trưởng mơ sẹo Xác định ảnh hưởng loại amino acid khác ñến sinh tổng hợp glucosinolate mơ sẹo Xác định ảnh hưởng chất chiết từ tảo Spirulina lên sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : tháng 03/ 2010 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : tháng 12/ 2010 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS LÊ THỊ THỦY TIÊN Nội dung ñề cương Luận văn thạc sĩ Hội ðồng Chun Ngành thơng qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CHỦ NHIỆM BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) CƠNG TRÌNH ðƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ðẠI HỌC BÁCH KHOA ðẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học : TS.LêThịThủyTiên Cán chấm nhận xét : Cán chấm nhận xét : Luận văn thạc sĩ ñược bảo vệ Trường ðại học Bách Khoa, ðHQG Tp HCM ngày tháng 03 năm 2011 i LỜI CẢM ƠN Trải qua hai năm học tập trường ðại học Bách Khoa, đây, hồn tất luận văn tốt nghiệp, vô biết ơn tất thầy trường, đặc biệt giáo viên Bộ môn Công nghệ sinh học Các thầy khơng truyền đạt kiến thức mà cịn dạy cho kỹ học tập, làm việc cách khoa học, niềm say mê nghiên cứu lịng u nghề Tơi xin gửi đến tất thầy cô lời cảm ơn chân thành Tôi gửi lời cảm ơn đến cán phụ trách phịng thí nghiệm thầy phịng thí nghiệm 102B2, tạo điều kiện tốt để tơi thực tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Lê Thị Thủy Tiên Cơ người chị, người bạn chia sẻ khó khăn với tơi thời gian thực luận văn Con xin cảm ơn gia đình, em cảm ơn ơng xã Mọi người tạo điều kiện cho học tập bên lúc khó khăn, để đạt thành ngày hôm Cuối xin chân thành cám ơn tập thể lớp cao học Công nghệ sinh học khóa 2009, bạn chia kiến thức, kinh nghiệm động viên giúp đỡ tơi để tơi hồn thành tốt năm học trường thời gian thực luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày 06/01/2011 Trương Thị Kim Oanh ii TÓM TẮT LUẬN VĂN Tên ñề tài: “Khảo sát số yếu tố hóa học ảnh hưởng lên sinh tổng hợp glucosinolate tế bào cải xanh Brassica oleracea var italica phương pháp nuôi cấy tế bào” Học viên thực hiện: Trương Thị Kim Oanh Cán hướng dẫn: TS Lê Thị Thủy Tiên Thời gian thực hiện: Từ tháng 3/2010 ñến tháng 12/2010 Nội dung ñề tài: Xác ñịnh ảnh hưởng của chất điều hịa sinh trưởng thực vật đến tạo mơ sẹo Xác định ảnh hưởng sáng đến tăng trưởng mơ sẹo Xác ñịnh ảnh hưởng sucrose ñến tăng trưởng mô sẹo Xác dịnh ảnh hưởng loại amino acid khác ñến sinh tổng hợp glucosinolate Xác ñịnh ảnh hưởng chất chiết từ tảo Spirulina lên sinh tổng hợp glucosinolate Kết ñề tài: Sự kết hợp 2,4–D mg/l kết hợp với kinetin mg/l thích hợp cho hình thành tăng trưởng mơ sẹo Trọng lượng tươi mơ sẹo thu 2,035 g sau tuần nuôi cấy Sự tăng trưởng mơ sẹo điều kiện chiếu sáng tốt tối Trọng lượng tươi mơ sẹo thu 1,657 g sau tuần nuôi cấy Sự tăng trưởng mô sẹo nhiều môi trường có chứa 30 g/l sucrose Trọng tươi tươi mơ sẹo đạt sau tuần ni cấy 1,579 g Sự sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo nhiều mơi trường có chứa phenylalanine 40 mg/l tuần thứ Hàm lượng glucosinolate ñạt ñược 1,88 µmol/g Sự sinh tổng hợp glucosinolate mơ sẹo nhiều mơi trường có chứa g/l dịch chiết tảo Spirulina tuần thứ Hàm lượng glucosinolate đạt 2,32 µmol/g iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TĂT LUẬN VĂN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC ẢNH x CHƯƠNG 1: MỞ ðẦU 1.1 - ðẶT VẤN ðỀ 1.2 - MỤC TIÊU ðỀ TÀI 1.3 - NỘI DUNG THỰC HIỆN CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.GIỚI THIỆU VỀ BÔNG CẢI XANH 2.1.1.Nguồn gốc cải xanh 2.1.2.ðặc điểm hình thái 2.1.2.1.Rễ 2.1.2.2.Thân 2.1.2.3.Lá 2.1.2.4.Hoa 2.1.2.5.Hột 2.1.3.Giá trị dinh dưỡng cải xanh 2.1.4.Cây mầm cải xanh 2.2.GlUCOSINOLATE 2.2.1.Giới thiệu 2.2.2.nguồn cung cấp glucosinolate 2.2.3.Cấu trúc hóa học 2.2.4.ðặc tính glucosinolate 2.2.4.1.Sự thủy phân glucosinolate thành isothiocyanate 2.2.4.2 Sự chuyển hóa glucosinolate thể 2.2.5 Công dụng glucosinolate 10 2.2.5.1 ðối với thực vật 10 2.2.5.2 ðối với người 10 2.2.6 Sự sinh tổng hợp glucosinolate 11 2.3 GIỚI THIỆU VỀ NUÔI CẤY TẾ BÀO THU HỢP CHẤT THỨ CẤP - 11 2.3.1 ðịnh nghĩa hợp chất thứ cấp 11 2.3.2 Những thành tựu công nghệ nuôi cấy tế bào thu hợp chất thứ cấp - 12 2.3.3.Giới thiệu mô sẹo 13 2.3.3.1 Mô sẹo 13 2.3.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng ñến tạo sẹo 13 iv 2.3.4 Các giai đoạn ni cấy tế bào thu hợp chất thứ cấp 15 2.3.4.1 Mô sẹo 15 2.3.4.2 Huyền phù tế bào 15 2.3.5 Một số phương pháp tăng suất hợp chất thứ cấp nuôi cấy tế bào 16 2.3.5.1 Chọn lọc dòng tế bào cho suất cao 16 2.3.5.2 Tối ưu hóa mơi trường nuôi cấy 16 2.3.5.3 Cung cấp tiền chất 16 2.3.5.4 Phương pháp cảm ứng 16 2.3.6 Glucosinolate cộng nghệ nuôi cấy tế bào 17 2.3.7 Tảo Spirulina 18 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP VÀ VẬT LIỆU 3.1 VẬT LIỆU 20 3.2 PHƯƠNG PHÁP 20 3.2.1 Tạo mầm cải xanh củ cải in vitro 20 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng nguồn gốc mẫu cấy chất điều hịa sinh trưởng lên thành khả hình thành tăng trưởng mô sẹo 22 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng lên tăng trưởng mô sẹo Brassica oleracea var italica 24 3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng sucrose lên tăng trưởng mô sẹo 24 3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng amino acid lên sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo 25 3.2.6 Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết tảo Spirulina lên sinh tổng hợp glucosinolate 25 3.2.7 Phương pháp thu dịch chiết tảo Spirulina 25 3.2.8 Thu nhận ñịnh lượng glucosinolate 25 3.2.8.1 Nguyên tắc 25 3.2.8.2 Phương pháp 25 3.2.8.3 Tính tốn kết 27 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 4.1 KẾT QUẢ 29 4.1.1 Sự tạo mầm in vitro 29 4.1.2 Tỉ lệ mẫu cấy tạo mô sẹo 29 4.1.3 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật lên tăng trưởng mô sẹo 29 4.1.3.1 Ảnh hưởng NAA 29 4.1.3.2 Ảnh hưởng 2, 4–D 31 4.1.3.3 Ảnh hưởng BA 32 4.1.3.4 Ảnh hưởng NAA kết hợp với BA 34 4.1.3.5.Ảnh hưởng NAA kết hợp với kinetin 36 4.1.3.6 Ảnh hưởng 2,4–D kết hợp với BA 37 4.1.3.7 Ảnh hưởng 2,4–D kết hợp với kinetin 39 4.1.4 Ảnh hưởng yếu tố khác lên tăng trưởng mô sẹo 40 4.1.4.1 Ảnh hưởng ñiều kiện chiếu sáng 40 4.1.4.2 Ảnh hưởng nồng ñộ sucrose 41 4.1.5 Khảo sát sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo 42 v 4.1.6 Ảnh hưởng amino acid lên sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo - 42 4.1.6.1 Methionine 42 4.1.6.2 Tyrosine 43 4.1.6.3 Phenylalanine 44 4.1.6.4 Ảnh hưởng chất chiết từ tảo Spirulina 45 4.1.6.5 So sánh Ảnh hưởng methionine, tyrosine, phenylalanine dịch chiết tảo lên tổng hợp glucosinolate cua mô sẹo 44 4.2 BIỆN LUẬN 45 4.2.1 Sự tạo mô sẹo 45 4.2.2 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật lên hình thái tăng trưởng mô sẹo 45 4.2.3 Ảnh hưởng ñiều kiện ánh sáng lên sinh trưởng mô sẹo - 46 4.2.4 Ảnh hưởng sucrose lên sinh trưởng mô sẹo 45 4.2.5 Ảnh hưởng amino acid lên sinh tổng hợp glucosinolate mô sẹo 47 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 49 5.2 ðỀ NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 53 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT MS: Môi trường Murashige skoog (1962) NAA: – naphthleneacetic acid IAA: Indole – – acetic acid 2,4 – D: 2,4 – diclorophenoxyacetic acid IBA: Indole – – butyric acid BA: Benzylaminnopurine TN: Thí nghiệm vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: So sánh giá trị dinh dưỡng đầu hoa, tươi bơng cải xanh ñã ñược hấp Bảng 2.2: Thành phần dinh dưỡng mầm cải xanh Bảng 2.3: Lượng glucosinolate tổng số glucosinolate phổ biến Trong loại rau thuộc họ thập tự Bảng 2.4: Thành phần dinh dưỡng tảo Spirulina 18 Bảng 3.1: NAA kết hợp với BA mục đích khảo sát hình thành tăng trưởng mô sẹo 22 Bảng 3.2: NAA kết hợp với kinetin mục đích khảo sát hình thành tăng trưởng mơ sẹo 22 Bảng 3.3: 2,4-D kết hợp với BA mục đích khảo sát hình thành tăng trưởng mô sẹo 23 Bảng 3.4: 2,4-D kết hợp với kinetin mục đích khảo sát hình thành tăng trưởng mô sẹo 24 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN: Môi trường MS bổ sung 2,4–D kết hợp với BA kinetin thích hợp cho tăng sinh mô sẹo từ tử diệp trụ hạ diệp mầm cải xanh Mô sẹo có nguồn gốc từ tử diệp tăng trưởng mạnh mô sẹo từ trụ hạ diệp hầu hết môi trường nuôi cấy Sự tăng sinh mô sẹo ñiều kiện chiếu sáng tốt ñiều kiện tối Nồng độ sucrose 30 g/l thích hợp cho tăng sinh mô sẹo Hàm lượng glucosinolate giảm dần theo thời gian nuôi cấy Sự bổ sung phenylalanine, tyrosine methionine ñều làm tăng hàm lượng glucosinolate mơ sẹo so với đối chứng Phenylalanine 40 mg/l có hiệu cao với hàm lượng glucosinolate 1,88 µmol/g tuần thứ Sự bổ sung chất chiết từ tảo Spirulina có ảnh hưởng đáng kể ñến sinh tổng hợp glucosinolate Hàm lượng glucosinolate ñạt ñược 2,32 µmol/g tuần thứ trình ni cấy chất chiết tảo Spirulina bổ sung vào mơi trường với nồng độ g/l 5.2.ðỀ NGHỊ: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hồ sinh trưởng thực vật lên tạo mô sẹo từ mầm bơng cải xanh có nguồn gốc khác ñể làm nguyên liệu tạo huyền phù tế bào Thiết kế qui trình ni cấy giai đoạn nhằm làm tăng khả thu nhận glucosinolate từ huyền phù tế bào cải xanh 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Phạm Văn Lộc Lê Thị Thủy Tiên cộng sự, 2006, Tạo mô sẹo dịch huyền phù tế bào có khả sản xuất Taxol từ thân non thơng đỏ Taxus wallichiana zucc, tạp chí Cơng nghệ sinh học, 221 – 226 Nguyễn ðức Lượng, Lê thị Thủy Tiên, 2002, Công nghệ Tế bào, NXB ðHQG TP.HCM, NXB ðại học Quốc gia TP HCM, trang 156 – 160, 248 – 272 Nguyễn ðức Lượng cộng sự, 2006, Sinh học ñại cương tập – Sinh học thực vật, sinh học ñộng vật hệ sinh thái NXB ðại học Quốc gia TP HCM, 391 trang Lê Thị Thủy Tiên cộng sự, 2006, Tạo mô sẹo dịch huyền phù tế bào có khả sản xuất Taxol từ thân non thơng đỏ Taxus wallichiana zucc, tạp chí Cơng nghệ sinh học, 221 – 226 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Al-Gendy et al, 2008, Phytochemical and biological screening of glucosinolates and volatile constituents of different Brassicacaea plants growing in Egypt, Bull Fac Pharm Cairo Univ., 64 (2): 235 – 244 Bilal haider Abbasi et al, 2010, Efficient regeneration and antioxydative enzyme activities in Brassica rapa var turnip, Plant cell Tiss Organ cult, DOI 10.1007/s11240-010-9872-8 Bronwyn.hb J Barkla, 2009, Zinc tolerance and accumulation in stable cell suspension cultures and in vitro regenerated plants of the emerging model plant Arabidopsis halleri (Brassicaceae), Planta 299, 977 – 986 Chen, S., Andreasson, E., 2001, Update on glucosinolate metabolism and transport, Plant Physiol Biochem 39, 743 – 758 C.Doughlas Grubb C and Steffen Abel, 2006, Glucosinolate metabolism and its control, TRENS in plant science, Vol 11 No.2, 90 – 100 10 D.Rogozinska J, 2006, Glucosinolate in embryo, cotyledon and callus cultures of rape depending on external factor, Fette Seifen Anstrichmittel, 83, 439 – 442 11 Genhan H Amin et al, 2009, Effect of Spirulina platensis extract on growth, phenolic compounds and antioxidant activities of Sysymbrium irio callus and cell suspension cultures, Australian joural of basic and applied science, 2097 – 2110 12 Gui et al, 1997, Nutritional and toxic factors in selected wild edible of Commercial Laboratories Exergetics Ldt, Edington, UK., 334 – 340 13 Halkier, B.A., and Du, L 1997 The biosynthesis of glucosinolates Trends in Plant Science 11: 425-431 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 14 Heaney, R.K, 1980, The glucosinolate content of Brassica vegetables Chemotaxomic Approach to cultivar identification, Journal of the Science of Food and Agriculture 31, 794- 801 15 Heidrun B Gross Steffen Abel, 2000, Functional detection of chemoprotective glucosinolates in Arabidopsis thaliana, Plant science, 159, 265 – 272 16 Hirai, M.Y.,et al, 2004, Integration of transcriptomics and metabolomics for understanding of global responses to nutrition stresses in Arabidopsis thaliana Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 27: 1020510210 17 Jed W Fahey Paul Talalay, 1997, Broccoli spouts: An exceptionally rich source of inducers of enzyemes that protect against chemical carcinogens, Medical sciences, 94, 10367 – 10372 18 Lidia Osuna et al, 2006, Micropropagation of Lepidium Virginicum (Brassicaceae) a plant with antiprotozoal activity, In vitro cell, Biol – plant, 596 – 600 19 Markus Poitrowski “et al”, 2004, Desulfoglucosinolate Sulfotransferases from Arabidopsis thalaiana Catalyze the final step in Biosynthesis of the Glucosinolate Core Structure, J Biol Chem, 279, 50717 – 50725 20 Marcos Taveira et al, 2009, In vitro cultures of Brassica oleracea L var costata DC: Potential plant bioreactor for antioxidant phennolic compounds, J Agric Food Chem, 1247 – 1252 21 Muhammad Jahangir and Robbert Verpoorte, 2009, Healthy and unhealthy plants: the effect of stress on the metabolism of brasscicacea, Sciencedirect, 23-33 22 Natalia Bellostas et al, 2007, Glucosinolate profiling of seeds and spouts of B oleracea varieties used for food, Sci Horticult, doi: 10 1016/j.scienta 2007.06.015 23 Salah Uddin M et al, 2005, Callus induction and indirection regeneration in Peltophorum pterocarpum (DC) backer K heyne, Journal of biological 5(4), 486 – 489 24 Denchev P D B V Conger, 1995, In vitro cultures of switchgrass: Influence of 2,4 – D and piclogram in combination with benzyladenine on callus initiation and regeneration, Plant cell, Tissue and Organ culture 40, 43 – 48 25 Richard N Bennett and Roger Wallsgrove, 1995, Glucosinolates biosynthesis, Plant physiol, 109:299-305 26 Rong Tsao and Joel R Coats, 2002, Glucosinolate breakdown products as insect fumigants and their effect on carbon dioxide emission of insects, BMC Ecology, 2, 27 S.Afsharypour S and G.B Lockwood, 1985, Glucosinolate degradation products, alkanes and fatty acid from plant and cell cultures of Descurainia Sophia, Plant Cell Report, 4, 341 – 344 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 Serkadis M Getthun and Fung Lung Chung, 1999, Conversion of glucosinolate to isothyocyanates in human after ingestion of cooked watercress, Cancer Epidemiology, Biomakers and prevention, 8, 447 – 451 29 Songsak, G.B Lockwood, 2004, Production of two volatile glucosinolate hydrolysis compounds in Nasturtium momtanium and Cleome chelidonii plant cell cultures, Fitoterapia, 75, 296 – 310 30 Sri Nanan Widiyanto Dwi Erytrina, 2001, Clonal propagation of broccoli Brassica oleracea var italica through in vitro shoot multiplication, JMS Vol No.1, hal, 101 – 111 31 Theresa A Shapiro “et al”, 2001, Chemoprotective glucosinolate and isothiocyanate of broccoli spouts: Metabolism and excretion in human, Cancer Epidemiology, Biomakers and prevention, 10, 501 – 508 32 Theresa A Shapiro and paul Talalay, 1998, Human metabolism and excretion of cancer chemoprotective glucosinolates and isothiocyanates of Cruciferious, Cancer Epidemiology, Biomakers and prevention, 7, 1091 – 1100 33 Xiufeng Yang and sixue Chen, 2007, Regulation of plant glucosinolate metabolism, Planta, 226, 1343 – 1352 34 Ying Qin et al, 2007, High-frequency embryogenesis, regeneration of broccoli (Brassica oleracea var italiaca) and analysis of genetic stability by RAPD, Scientia Horticulture, 111, 203 – 208 35 Ying Qin et al, 2006, Shoot Differentiation, regeneration of cauliflower and analysis of somaclonal variation by RAPD, Hereditas, 143, 91 – 98 36 Jing jang et al, 2009, Interactive effects of phosphorus supply and light intensive on glucosinolates in Packchoi (Brassica campestris L.ssp Chinensis var communis), Plant soil, 323 – 333 37 Zhiyong Zhang et al, 2006, The gene controlling the quantitative trait locus EPITHIOSPECIFIER MODDIFIERI alters glucosinolate hydrolysis and insect in Arabidopsis, Plant Cell, 18, 6, 1524 – 1536 TÀI LIỆU WEBSITE 38 www.arabidopsis.org:1555/ara/new-image?object=glucosinolate_syn 39 www.archives.cnn.com/200/FOOD/news/04/13/broccoli.benefits.wmd 40 www.cesti.gov.vn/images/files/stifo/2008-2009/KGCN-b1 41 www.brassica.com 42 www.broccolispouts.com 43 www.ic-network.com/bev/may02.htm 44 www.isga-spouts.org/broccolispouts.htm 45 www.hort.purdue.edu/rhodcv/hort640c/sulfate/su00019.htm 46 www.uga.edu/vegatable/broccoli.htm 47 www.wikipedia.org/wiki/Broccoli 48 www.wikipedia.org/wiki/Glucosinolate 49 www.vi.wikipedia.org/wiki/T%E1%BA%A3o_xo%E1%BA%AFn 52 PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC : Bảng 1: Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần mơi trường Nồng độ (mg/l) Thành phần khống đa lượng NH3NO4 1650,00 KNO3 1900,00 CaCl2.2H2O 440,00 MgSO4.7H2O 370,00 KH2PO4 170,00 Thành phần khoáng vi lượng MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2Mo4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O Na2EDTA FeSO4.7H2O 23,30 8,60 6,20 0,83 0,25 0,025 0,025 37,30 27,80 Vitamin amino acid Thiamine HCl Acid Nicotinic Pyridixin HCl Glycerine 0,10 0,50 0,50 2,00 Bảng 2: Ảnh hưởng auxin lên hình thành mơ sẹo tử diệp Auxin (mg/l) Khối lượng mơ Sự hình thành rễ sẹo (g) NAA 2,4–D tuần tuần tuần tuần (mg/l) (mg/l) 0,5 0,231 0,499 + +++ 0,5 0,201 0,353 1,0 0,198 0,381 + +++ 1,0 0,293 0,491 1,5 0,311 0,572 + ++ 1,5 0,148 0,346 2,0 0,353 0,611 + ++ 2,0 0,420 0,571 2,5 0,502 0,603 + +++ 2,5 0,331 0,512 53 PHỤ LỤC Bảng 3: Ảnh hưởng auxin lên hình thành mơ sẹo trụ hạ diệp Auxin (mg/l) NAA (mg/l) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 - 2,4–D (mg/l) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,132 0,093 0,211 0,081 0,188 0,102 0,304 0,135 0,196 0,122 0,421 0,133 0,389 0,199 0,274 0,209 0,554 0,241 0,303 0,221 Sự hình thành rễ tuần tuần + + + ++ ++ - +++ +++ +++ +++ ++++ - Bảng 4: Ảnh hưởng BA lên hình thành mơ sẹo tử diệp BA (mg/l) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,550 0,886 0,596 0,876 0,691 0,959 0,649 1,027 0,792 1,158 Sự hình thành rễ tuần - tuần - Bảng 5: Ảnh hưởng BA lên hình thành mơ sẹo trụ hạ diệp BA (mg/l) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,398 0,702 0,433 0,768 0,536 0,849 0,606 0,943 0,641 0,991 54 Sự hình thành rễ tuần - tuần - PHỤ LỤC Bảng 6: Sự ảnh hưởng NAA cytokinin lên tạo mô sẹo tử diệp NAA (mg/l) 1,0 1,5 2,0 Cytokinin (mg/l) BA 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - Kinetin 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,303 0,779 0,278 0,515 0,255 0,521 0,310 0,505 0,424 0,542 0,366 0,698 0,310 0,632 0,415 0,713 0,588 0,725 0,286 0,402 0,412 0,673 0,320 0,564 0,279 0,691 0,378 0,620 0,328 0,529 0,511 0,778 0,446 0,641 0,419 0,639 0,530 0,722 0,382 0,740 0,351 0,504 0,287 0,595 0,399 0,731 0,421 0,647 0,285 0,515 0,353 0,561 0,467 0,784 0,496 0,672 0,516 0,715 0,315 0,506 55 Sự hình thành rễ tuần + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + tuần +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ PHỤ LỤC Bảng 7: Sự ảnh hưởng NAA cytokinin lên tạo mô sẹo trụ hạ diệp NAA (mg/l) 1,0 1,5 2,0 Cytokinin (mg/l) BA 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - Kinetin 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,112 0,361 0,092 0,279 0,241 0,421 0,193 0,673 0,148 0,343 0,301 0,561 0,221 0,492 0,095 0,302 0,301 0.419 0,284 0,520 0,209 0,482 0,184 0,537 0,078 0,320 0,144 0,515 0,124 0,493 0,250 0,416 0,251 0,388 0,098 0,195 0,276 0,504 0,258 0,475 0,121 0,612 0,158 0,453 0,219 0,782 0,096 0,389 0,086 0,271 0,227 0,690 0,301 0,845 0,109 0,601 0,255 0,472 0,197 0,318 56 Sự hình th ành rễ tuần + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + tuần ++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ PHỤ LỤC Bảng 8: Sự ảnh hưởng 2,4–D cytokinin lên tạo mô sẹo tử diệp 2,4–D (mg/l) 1,0 1,5 2,0 Cytokinin (mg/l) Kinetin 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - BA 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,291 0,471 0,188 0,383 0,501 1,560 0,452 0,337 0,448 1,117 0,254 0,211 0,284 1,280 0,241 0,278 0,296 1,091 0,148 0,213 0,212 0,676 0,310 1,005 0,410 1,996 0,300 0,649 0,422 1,062 0,162 0,192 0,581 0,935 0,256 0,406 0,595 0,973 0,166 0,358 0,612 0,797 0,258 0,653 0,304 0,669 0,256 0,469 0,632 0,987 0,129 0,309 0,420 0,782 0,230 0,425 1,112 2,305 0,319 0,462 57 Sự hình thành rễ tuần - tuần - PHỤ LỤC Bảng 9: Sự ảnh hưởng 2,4–D cytokinin lên tạo mô sẹo trụ hạ diệp 2,4–D (mg/l) 1,0 1,5 2,0 Cytokinin (mg/l) Kinetin 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - BA 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,257 0,477 0,037 0,156 0,239 0,290 0,097 0,344 0,339 0,841 0,112 0,199 0,288 0,512 0,140 0,281 0,296 0,607 0,036 0,109 0,221 0,258 0,085 0,120 0,325 0,399 0,143 0,192 0,324 0,880 0,059 0,480 0,143 0,347 0,086 0,094 0,268 0,527 0,122 0,261 0,199 0,221 0,092 0,177 0,269 0,443 0,155 0,204 0,102 0,366 0,100 0,293 0,289 0,404 0,113 0,171 0,188 0,322 0,125 0,133 58 Sự hình thành rễ tuần - tuần - PHỤ LỤC Bảng 10: Ảnh hưởng ánh sáng lên tăng trưởng mô sẹo Khối lượng mô sẹo (g) Sáng tuần 1,657 tuần 1,326 % gia tăng 12,5% Tối tuần 1,345 tuần 1,05 % gia tăng 12,8% Bảng 11: Ảnh hưởng sucrose lên tăng trưởng mô sẹo Nồng ñộ sucrose (g/l) 20 25 30 35 40 Khối lượng mô sẹo (g) tuần tuần 0,602 1,271 0,780 1,132 0,820 1,579 0,683 0,776 0,522 0,612 Bảng 12 : Khối lượng hàm lượng glucosinolate mô sẹo từ tử diệp theo thời gian Thời gian (tuần) Khối lượng sẹo (g) Hàm lượng glucosinolate (µmol/g) 0,584 0,605 0,649 0,671 0,679 0,638 2,40 1,90 1,63 1,45 1,4 1,18 Bảng 13 : Ảnh hưởng loại amino acid lên tổng hợp glucosinolate mô sẹo theo thời gian Amino acid (mg/l) Hàm lượng glucosinolate (µmol/g) tuần tuần tuần tuần Methionine 20 1,58 1,40 1,32 1,22 30 1,64 1,33 1,15 0,94 40 1,81 1,58 1,15 0,91 Phenylalanine 20 1,68 1,27 1,01 0,87 30 1,65 1,27 1,10 0,91 40 1,88 1,40 1,29 0,87 Tyrosine 20 1,55 1,42 1,13 1,1 30 1,43 1,15 1,11 0,83 40 1,75 1,43 1,18 0,96 59 PHỤ LỤC Bảng 14 : Ảnh hưởng tảo lên tổng hợp glucosinolate mô sẹo theo thời gian Nồng ñộ tảo (g/l) Hàm lượng glucosinolate (µmol/g) tuần tuần tuần tuần 1,68 1,51 1,27 1,00 2,32 1,88 1,55 1,12 2,01 1,75 1,52 1,22 1,74 1,72 1,29 1,17 60 ... MỤC ẢNH Ảnh 2.1: Bông cải xanh Ảnh 2.2: Thân hoa cải xanh Ảnh 2.3: Lá hoa cải xanh Ảnh 2.4: Hoa cải xanh Ảnh 2.5: Hột cải xanh Ảnh 2.6: Cây mầm cải xanh. .. glucosinolate tế bào cải xanh Brassica oleracea var italica phương pháp nuôi cấy tế bào? ?? 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: Xác ñịnh ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật đến tạo mơ sẹo Xác định ảnh hưởng. .. thời phương pháp giúp bảo tồn ñược hệ ge tự nhiên tình hình khai thác để thu nhận sản phẩn bậc từ loài quý ðề tài ? ?Khảo sát số yếu tố hóa học lên sinh tổng hợp glucosinolate tế bào cải xanh Brassica