Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Mô tả đặc điểm hình thài theo phương pháp mô tả phân tích làm vi phẫu thân và là theo phuưng pháp nhuộm kép; định lượng Polyphenol toan phản th[r]
(1)glyceride solid lipid nanoparticles (SLN®)", International Journal of Pharmaceutics 196, pp 219-222.
4 Khaiil R M-, et a! (2013), "Influence of formulation parameters on the physicochemical properties of meloxicam-loaded solid lipid nan'opartides", Egyptian Pharmaceutical Journal, 12(1), pp 63-72.
5 Liu D., et (2010), "Solid lipid nanopartides for transdermal delivery of diclofenac sodium: preoaration characterization and in vitro studies, Journal of Microencapsulation, 27(8), pp 726-734.
6 Liu D., et (2014), "Formulation and characterization of hydrophilic drug diclofenac sodium- loaded soil'd lipid nanopariicles based on phosphoiipid complexes technology", Journal o f liposome research, 24(1), pp 17-26
7 Schubert M A., et al (2005), "Characterisation of surface-modified solid lipid nanoparticies (SLN): influence
n f Ieci*hin n r * n n q ÌQ n !/-' o m jjt g if ic ip " fTr i r A n o g n rst pharmaceutics and biopharmaceutics, 61(1-2), pp 77-86.
NGHIÊN c ứ u ĐẶC ĐIẺM THƯC VÃT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC, TÁC
DỤNG SINH HỌC CÙA CẤY TRÀ HOA VÀNG THU ' HÁI TẠI HUYỆN BA CHẼ, TỈNH QUẢNG NINH
Ngô Thị Thảo (Học viên Cao học 18, Trường Đ ại h ọ c D ược Hà Nội), Nguyễn Thị Hà Ly (Sinh viên K66, Trường Đ ại h ọ c D ợ c Hà Nội) Phạm Thị Lỉnh Giang (Giảng viên, B ọ m ôn Thực vật, T rường Đ ại học D ược Hà Nọi)
PGS TS Trần Văn n (Bọ m ôn Thực vạt, T rường Đ ại học D ược Hả Nọi), TS Hoàng Quỳnh Hoa (Bộ m ôn Thực vạt, T rường Đ ại họ c D ược Hà Nọí) TĨM TẤT
Đặt vấn đề: Trà hoa vàng (Camellia sp.) loài dược liệu quý với nhiều tác dụng sinh học quan trọng hạ huyết áp, hạ đường huyết, giảm cholesterol mấu, giảm mơ mầu, chống u bướu, 'tăng cường hẹ miển dĩch kéo ơài tuổi thọ đồng thời loài mang nhiều giâ trị kinh tế cao Tuy nhiên, Việt Nam loài cày Chưa quan tâm nghiên cứu đầy đủ thực vật, thành phần hoá học tàc dụng sinh học.
Mục tiêu nghiên cứu: Mô tả đặc điểm thực vật, xác định hàm íữợng polyphenol tồn phần hàm lượng EGCG lâ trà hoa vàng, thừ tốc dụng chổng oxy hóa xác định hoạt tính gây độc sổ dong tế bào ung thư trà hoa vàng.
Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Mơ tả đặc điểm hình thài theo phương pháp mơ tả phân tích làm vi phẫu thân theo phuưng pháp nhuộm kép; định lượng Polyphenol toan phản theo phương pháp đo quang xàc định hàm lượng EGCG HPLC, xốc định hoạt tính chống oxy hóa theo mơ hình DPPH thử độc tể bào theo phương pháp Monks(1991)
J Kết quả: Trajioa vàng thu hái huyện Ba Chẽ, tỉnh Quảng Ninh mô tả chi tiết đặc điểm hỉnh thài, cấu tạo giải phẫu, góp phần vào việc nhận biết phân loại cốc loại Trà hoa vàng Hàm lượng polyphenol toàn phần trà hoa vàng 6,943% hàm lượng EGCG 0,40% Tác dụng ức chế tế bào ung thư in vitro đuực thể giá trị ỊCso dòng tế bào ung thư gan, ung thư vú, ung thư trực tràng, ung thư da ùng thư phổi tuưng ứng 24,95; 25,23; 36, 81; 64,46 53,13 Tác dụng chống oxi hoá mơ hình DPPH đạt tỷ / Ị trung hoà gốc tự 9,13% nồng độ 10 ụg/ml 82,01 % nồng độ 200 ụg/ml.
Kết luận: Đã mơ tả đặc điểm hình thối giải phẫu Trà hoa vàng (Ba Chẽ, Quảng Ninh), sơ xác định là Camellia sp1 Hàm lượng polyphenol toàn phần 6,943% hàm lượng EGCG 0.40% Tra hoa vầng có 'tác dụng ức chế trung bình số dịng tế bào ung thư (in vìtro) ung thư gan (Hep-G2); ung thư vú (MDA-BA- 231) ung thư đạitràng{SW480); có tác d ụ n g lh ịp dòng tế bào ung thư da (SK-Mel2) va ung thư phổi (LU- 1) Tác dụng trung hồ gốc tự mơ hình DPPH cho kết có tác dụng yếu với tỷ lệ 9,13% nồng độ mẫu thử 10ụg/ml; 82,01 % nồng độ 0 ụg/m i
Từ khóa: Trà hoa vàng SUMMARY
Ngo Thi Thao (Ha Noi University of Pharmacy), Nguyen Thi Ha Ly (Ha Noi University of Pharmacy) Pham Thi Linh Giang (Ha Noi University of Pharmacy)
Tran Van On (Ha Noi University of Pharmacy), Hoang Quynh Hoa (Ha Noi University of Pharmacy)
Background: Tra hoa vang (Camellia sp.) has been known as a prospective medicinal plant with a lots of biological effects such as hypotension, hypoglycemia, controlling cholesterol level in blood, anti cancer, improvement o f immune system and anti aging In addition, Tra hoa vang has been known as a highly economic valuable plant However, this plant has not been fully researched in botanical characteristics, chemical components and biological effects in Vienam.
Materials and method: Botanical characteristics was analytically described; microspecimens o f herb and leaf were implemented by dual staining; the total polyphenol was identified by UV-VIS spectroscopy, total EGCG level was identified by HPLC method; anti oxidant o f leaves extract was demonstrated by DPPH method■ anti caneer cells proliferation o f leaves extract was demonstrated by Monks (1991).
Results: Tra hoa vang from Ba Che district, Quang Ninh province had been fully described in morphological
(2)-and anatomical characteristics, in order to identify the species o f Camellia The total amount o f polyphenol in leaves o f Tra hoa vang was 6.943% and the amount o f EGCG was 0.40% The values o f iCsoin anti cell proliferationof hepatoma cancer (Hep-G2), high metastasis human breast cancer (MDA-BA-231), human colon adenocarcinoma (SW480), lung cancer (LU-1) and melanoma (SK-Mel2) were 24.95; 25.23; 36.81; 64.46 and 53.13 respectively The anti oxidant effects had been identified as9.13% free radical neutralisation at concentration o f 10 fjg/m l and 82.01% at 200 ụg/ml.
Conclusion: Tra hoa vang from Ba Che (Quang Ninh) was innitially identified as Camellia sp1.,Theaceae by morphological and anatomical characteristics The The total amount o f polyphenol in leaves o f Tra hoa vang was 6.943% and the amount o f EGCG was 0.40% The anti cancer cell proliferation seffects shown medium level with hepatoma cancer (Hep-G2), high metastasis human breast cancer (MDA-BA-231), human colon adenocarcinoma (SW480)and lower level with lung cancer (LU-1) and melaloma (SK-Mel2) The anti oxidant effects had been identified by 9.13% free radical neutralisation at concentration o f 10 ụg/ml and 82.01% at 200 ụg/ml.
Keyw ords: Tra hoa vang (Camellia sp.) Đ Ậ T V Á N Đ È V À M Ụ C T IẾ U
Tren-thế giới, chi Camellia L có tới 200 lồi, nhiều iồi có hoa màu vàng Nhiều nghiên cứu hoạt chất lá, hoa Tra hoa vàng có tác dụng hạ huyết áp, hạ đường huyếỉ, hạ cholesterol, hạ mỡ máu, chống u bướu, tăng cường hệ miễn dịch kéo dài tuồi thọ [7],[8],[9],[10] Vỉẹt Nam, theo ước tính có khoảng gần 20 ioài khác thuộc chi Camelliaị2],[4] Cây Trà hoa vàng lần đầu tiên người Pháp phát miền Bắc nước ta năm 1910 xem nguồn gen íự nhiên vơ q Tuy nhiên, cho đen công tác nghiên cứu Trà hoa vàng nước chưa đầy đủ Hiện tại, loài quan tâm đến giá trị cảnh quan, giá trị sinh học, dược học chưa quan tâm khai thác nhiều Do có giá trị kinh ỉế cao nên Trà hoa vàng khai thác cạn kiệt có nguy bị tuyệt chủng ỉrong tự nhiên Tuy nhiên, việc nghiên cứu tim hiểu Trà hoa vàng Việt Nam cịn chưa tồn diện đồng Do đó, việc nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hoá học va số hoạt tinh sinh học cua Trà hoa vàng cần thiết, góp phần tìm hiểu khai thác giá trị loài thuốc quỷ
ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cử u
Đ ối tư ợ n g nghiên u
Trà hoà vang thu hái Ba Chẽ - Quảng Ninh vào tháng năm 2015, đă xử lý lưu trữ tiêu Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dưực Hà Nội (Số hiệu tiêu bản: HNỈP/18146/15)
P hương pháp nghiên u Phương pháp nghiên cửu thực vật
- Mơ ta đạc điểm hình thái phương pháp mơ tả phân tích [3]
Làm tiêu vi học thân, theo phương pháp cắt, tẩy, nhuộm kép
- Quan sát chụp ảnh bột dược liệu thân kính hiền vi tích hợp camera
Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học ~ Định lượng hàm Ịượng Polyphenol tồn phần iá Trà hoa vàng phương pháp đo quang, theo TCVN 9745-1:2013, sư dụng phan ứng tạo phức màu với thuốc thử Folin - Ciocalteu đo quang bước sóng 765nm
- Định iượng hàm lượng EGCG HPLC theo tiêu chuẩn quốc gia TCVN9745-2:2013, sử dụng cột Nucleosin C18, với pha động Acetoniíril Acid Acetic
-EDTA, bước sóng 278nm, với tốc độ dịng 1.0ml/ phút
Phương pháp nghiên cứu tác dụng sinh học
- Xác định hoạt tỉnh gây độc số dòng tế bào ung thư Trế hoa vang
Tiến hành thử' với cắn dịch chiết methanoi theo phương phốp Monks (1991) dòng tế bào: MDA-BA-231; LU-1; SK-Mel2; HepG2 SW480 [6], [8], [9]
Khả ức che tế bào sống có mặt chất thử xác định sau:
[OD(chất thử) - OD(ngày 0)3 X 100 % iế bào sống sót =
-OD(đối chứna âm) - OD(ngày 0) % ức chế ìế bào = 100% - % te bào sống sóí
Thử ỉâc dụng chống oxy hóa Trà hoa vàng
Tiến hành thử với cắn dịch chiết methanol phép thử DPPH [7],[10] Khả trung hịa gốc oxy hóa tự (Scavenging Activities - SA) sinh từ DPPH mẫu thử tính theo cơng thức sau: % SA — (ODđải chứng “ ODcnẫu thừ)*1 OŨ/OD(JỐÌ chửng (%)
Trong đó: ÕDđổi chứng• Độ hấp thụ giếng không chứa chat thử
ODmi Uthlị: Độ hấp thụ giếng chứa chất thử
KẾT QUA NGHIÊN u
v ề thự c vật Đặc điểm hình thái
(3)w
3 ' :
ỉ • ’
:ắâ>
1
■- " ' X
Ị ~ I c , ( 1 / ỉ - ỉ
r l
- , - t > - i3
V / ' • \ ' X y w >-v n
+ Gâ/7 g iữ a : gân lồỉ mặt, mặt lồi rõ Từ ngoài vào gồm: Biểu 6/(1) gồm hàng tế bào hình chữ nhật kích thước không đều, cô phủ lớp cutin mỏng Mô mểm(2) gồm cốc lớp íế bào hình trịn, xếp lộn xộn để hờ nhieu khoảng gian bào Mô cứng (3) gồm 2-5 lớp tế bào hình đa giác, thành dày hóa gỗ,sắp xếp tạo thành cung bao quanh bó íibé-gỗ Bó íibè- gỗ có gỗ trên, libe phía dươỉ; libe (5) gồm nhiều lớp
Đ ặ c điểm vi phẫu lá:
Hình 1: Đặc điểm hình thái Chú thích:1.Cách mọc hoa 2,3,5 Lá
4 Thân có lơng mịn Hoa nhìn từ xuống Hoa sau tách tràng hoa Lá đài
8.Cánh hoa Bộ nhụy
10,11 Bộ nhị 12 Bầu cắt ngang 13 Cả
Qua đặc điểm mơ tả, đối chiếu với khố phân loại [11], sơ xác định mẫu nghiên cứu íhuộc Camellia L mẫu nghiên cứu đặt Camellia sp1.,The aceae
Đặc điểm v i p h ẫ u thân: Quan sát tiêu vi phẫu
thành dãy xen iẫn với mô mềm gố (tể bào hỉnh vuông hay đa giác) Nằm rải rác mô mềm thể cứng(6) kích thước lớn nhánh nhọn, đa hình dạng Tinh thề calci oxalaỉ hình cầu gai nằm mô mềm
Hỉnh 3: Đặc điểm vi phẫu gẩn
Ghi chú: Biểu bi Mô mềm Mô cứng Mạch gô Libe Thề cứng
+ Phiến lá: Biểu bì(1)gồm iớp tế bào hình chữ nhậĩ, tế bào biểu bi lớn tế bào biểu bì dưới; biều bì có vách dày cutin dày; lỗ khí nhiều biểu bi Mơ giậu(3) gồm iớp tế bào thuôn dài xếp xít Mơ khuyễt(4) gồm 8-9 lớp tế bào đa giác tròn, xếp lộn xộn Nằm rải rác trong mô mềm(2) cac tỉnh thể canxi oxalat(6) hình
cac pnan sau; tiieu Dtự\): gom mọt iơp te Dao ninh Chữ nhật tương đối nhau.phía ngồi có phù lởp cutin Mơ mềm vỏ (2): gồm nhieu lớp tể bào đa giác, kích thuớc khơng đều, xếp lộn xộn Cung mô cứng (6): gồm 2-3 lớp tế bào, kích thước khơng đều, thành dày hóa gỗ, bắt màu xanh.iL/ốe cắp hai (5}gồm tể bào hình trịn, xếp thành dãy xun tâm Gỗ cấp hai(3)liên tục thành mọt quanh mô mềm ruột; tế bào gỗ hình đa giác chữ nhật, kích thước khơng đeu phân bố ổều tronq vùng mô mềm gỗ Rải rác libe cấp hai thề cứng Mô mềm ruột (4): gồm tế bào đa giác, xếp íơn xộn
Hình 2: Đặc điểm vỉ phẫu thân Ghi chú: Biểu bì Mô mềm vỏ Gỗ cẩp Mô mềm ruột Libe cấp Cung mô cứng Lơng che chở
ng, có nhánh nhọn Hình 4: điểm vỉ phiến Chú thích:
1 Biểu bì Mơ mềm Mị giậu Mơ khuyết Thể cứng Tinh the oxalat
Đằc phấu
calci
Đặc điểm b ộ t d ợ c liệ u :
Bột lố Trà hoa váng màu xanh rêu, có mùi thơm đặc trưng cùa trà Các đặc điềm chỉnh quan sát từ bột Trà hoa vàng bao gồm: mảnh mô mềm; tinh thể canxi oxalat; mảnh mang màu; thể cứng, biểu bì mang lỗ khí; lơng che chồ’; mảnh mạch xoắn
(4)-Hình 5: Đặc điểm vỉ phầu bột dư ợ c liệu Trà hoa vàng
Chú thích: 1.MÔ mềm
2 Tinh thề Canxi oxalate Mảnh mang màu Hạt diệp lục Lỗ khí Thể cứng
7 Biểu bì chứa iỗ khí
8 Lông che chở
9,10,11 Mảnh mạch xoắn Về thành phần hóa học
Định lượng Polyphenol phương pháp đo quang
+ Xác định khoảng tuyến tính: Kếỉ khảo sát độ tuyến tỉnh trình bày bảng 1
Bảng 1: Kết khảo sát nong độ tuyến tính acid gallic
Cchuấn (ựg/ml)
10 20 30 40 50
Độ hấp thụíABS)
0.131 0.258 0.366 0.442 0.553 Phương trình hồi quy tuyến tính:y = 0.01 Ox + 0.041
Hệ số tương quan:R2= 0.993
Kết cho íhấy khoảng nồng độ khảo sát bước sóng 765nm, đọ hấp thụ nồng độ acid gallic có tương quan chặt chế VỚI hệ số tương quan R2= 0.993
+ Xâc định độ lặp lại quy trình: Kết trình bày bảng 2
Khối lượng
mẫu(g) 0.5023 0.5020 0.5021 0.5021 0.5022 0.5023 Độ hap
thụ(ABS) 0.347 0.348 0.347 0.350 0.349 0.346 Hàm lượng
Polyphenol (%)
6.922 6.949 6.925 6.993 6.969 6.900
Độ lệch chuấn: RSD = 3.41 %
chấp nhận với RSD - 3.41 %
+ Xác định hàm lượng Polyphenol: Dựa vào phương trình đường chuẩn, tính hàm lượng Poỉyphenoi mẫu Trà hoa vàng ià: 6,943%
Định lượng EGCG phương pháp HPLC + Xác ả n h khoảng tuyến tính: Ket khảo sáỉ độ tuyến tỉnh ỉrinh bày bảng
Bảng 3:Két khảo sát nòng độ tuyén tỉnh EGCG Cchuấn fucj/ml) 28.752 57.504 86.256 115.008 143.76
Diện ỉích pic(mAu.s)
302.8 583.5 926.3 1291.8 1588.4 Phương trình hối quy tun tính:y = 11.40x - 45.29
Hệ số tương quan :R2= 0.998
quan tuyến tính dỉẹn tích pic nồng độ với hệ sỗ từơng quan gàn (R=0,99ồ)
+ Hàm lượng EGCG: Dựa vao phương trinh đường chuẩn, diện tich pic thu là: 357.6, tĩnh định hàm íượng EGCG mẫu Trà hoa vàng là: 0,40%
Về tác dụng sính học
Xác định hoạt tinh gây độc số dòng tế bào ung thư câỳ Trà hoa vàng
Hoạt íính gây độc số dong íế bào ung thư trà hoa vàng trinh bày bảng
Bảng 4: Tỷ lệ ức chế phát triển tế bào ung thư dịng íế bào ung thư Nống độ
mẫu íhư (pg/ml)
Nịng độ Eiiiptici
ne
Tỳ lệ ức chế phát íriến tế bào dòng tế bào ung íhư (%)
MDA-BA-231 HepG2 SW480 SK-Mel2 LU-1
CA EL CA EL CA EL CA EL CA EL
100 10 93,46 98,49 98,43 91,99 73,26 87,16 88,33 85,56 79,65 87,26
20 48,79 76,26 46,86 76,69 40,24 75,93 13,62 78.83 21,37 68,85
4 0.4 10,23 49,62 16,46 48,68 14,53 45,98 9,98 49,36 5,30 50,13
0,8 0,08 4,20 19,44 10,26 15,67 4,08 19,06 0,43 18,56 -6,07 26,24
IC50 25.23 0,47 24,95 0,54 36,81 0,56 64,46 0,51 53,13 0,47
Nhận xét: Mẫu nghiên cứu thể mức hoại tính gây độc tế bào khác dòng tế bào khác Kết IC5 0trên dòng tế bào ung thư gan; ung thư vú ung thư trực tràng tương ứng 24,95; 25,23 36,81
Thử nghiệm có tác dụng thấp dòng tế bào ung thư da (SK-Mel2) ung thư phổi (LU-1) với giá trị ÍC50 tương ứng ià 64,46 53,13 Các kếỉquà ià xac với í2 k 0,99.
Thử tác dụng chống oxy hóa trà hoa vàng
(5)Bàng 5: Khả trung hịa gốc oxy hóa tự mẫu thử
Nồng độ Giả trị SA (%) Nống độ Giá trị SA (%) (ịjg/mt) Màu thử (ụg/mí) Ascorbic Acid
(Vít C)
200 82,01 100 85,37
100 77,85 50 83,14
50 61 64 mIW 59,96
10 9,13 25,46
SC50 42,43 7,58
Nhận xét: Mâu íhử có tác dụng yeu với tỷ lệ trung hoà gốc tự đạt 9,13% nồng độ 10 Ịjg/mi; 82,01 % nồng độ 2Ò0 Ịjg/ml
BÀN LUẬN
vè thực vật: Mẫu nghiên cứu chưa xác định íồi chưa đủ liệu hình thái ỉất quan sinh sản quả, hạt Tuy nhiên, thực tể thu mẫu, có nhiều mẫu có đặc điềm tương đổi giống nên ngồi phương pháp mơ tả hỉnh thái giải phẫu, cần tiến hành thêm việc nghiên cứu đa dạng di truyền để nghiên cứu sâu phản loại loài va loài
Về thành phần hoá học: Nghiên cứu xác định hàm lượng polyphenoi toàn phần 6,943% hàm iượng EGCG ỉà 0,40% từ dịch chiết toàn phần methanol Xét khoảng tuyến tính, phương pháp có độ lặp lại cao mẫu thử với RSD 3.41% Kết định lượng cho thấy áp dụng phương pháp đề định lữợng Polyphenol vả EGCG ỉrong trà hoa vàng
Về tác dụng sinh học: Nghiên cứu góp phần đánh giá khả ức chế phát triển số dòng tế bào, thể qua tỷ lệ tế bào sống giảm có ý nghĩa với nồng độ khác nhau, cho thay Trà hoa vàng có khả ức chế phát triển nhiều loại iế bào ung thư,với nồng độ dòng tế bào ung thư khác tác dụng ức che khác Tuy nhiên, với nghiên cứu dừng lại việc thử dịch chiết toàn phần nên tác dụng chưa cao Với tác dụng chống oxy hoá, mẫu nghiên cứu thể tác dụng trung hóà gốc tự với íỷ lệ thấp (9.13 % nồng độ mẫu 10fjg/ml)
KẾT LUÂN
Đã mô t*ả chi tiết đặc điểm hình thái Trà hoa vàng íhu hái huyện Ba Chẽ, tỉnh Quảng Ninh sơ xác định tên khoa học cùa mẫu nghiên cứu ià Camellia sp1, Theaceae.
Đã mô tả đặc điểm cấu íạo giải phẫu thân Trà hoa vàng Ba Chẽ (Quảng Ninh), góp phần vào việc nhận biết phân loại loại Tra hoa vang
Đã định lượng tồng hàm lượng polyphenol có mẫu nghiên cưu 6.943% bang phương pháp đo quang, sư dụng phản ứng tạo màu vơi thuốc thử Folin- Ciocaiteu, với hệ số tương quan R2=0.993, có độ lặp lại RSD=3.41%
Đã xác định hàm lượng EGCG có mẫu
nahiên cứu 0.40% theo phương pháp HPLC, với hệ sỗ tương quan R2=0.998
Đâ thử tác dụng gây độc tế bào số dòng tế bào ung thu’ thực nghiệm (in vitro), dịch chiết từ Trà hoa vang (Camellia sp1.) thể tác dụng ức chế trung binh đoi với ung thư gan (Hep-G2); ung thư vú (MDA-BA-231) ung thư trực tràng (SW480) với giá trị ICsotương ứng 24.95; 25.23 36.81; tác dụng thấp dòng tế bào ung thư da (SK-Meỉi) ung thư phổi (LU-1) với giá trị ICso tương ứng 64.46 53.13
Đã thử tác dụng trung hoà gốc tự dịch chiết lá Camellia S p ltrê n mô hỉnh DPPH cho kết có tác dụng yếu với tỷ lệ 9,13% nồng độ mẫu thử 10 Mg/ml; 82,01 % nồng độ 200 ug/ml.
TÀỈ LIỆU THAM KHAO
1 Bộ Y tế (1998), Dược liệu học (2001), tập 1, 2,
N XBYhọc _
2 Đỗ Ngọc Quý, Nguyễn Kim Phong (1997), Cây chè Việt Nam, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội.
3 Nguyễn Bá (2010), Hình thái học thực vật, NXBGiáo dục
4 Võ Văn Chỉ Trần Hợp (1999), Cây cỏ có ích Việt Nam, NXB Giáo dục, Hà nộL
5 Vũ Thị Thư, Đoàn Hùng Tiến cs (2001),Các hợp chất có chè số phương pháp phân tích thơng dụng sản xuất chè Việt Nam, NXB Nông Nghiệp
6 AlleyM c , Scudỉero et al (1988),“Feasibility of drug screening with paneis of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay”, Cancer Research, 48: 589-601.
7 Kamran G, Yosef G, Mohammad A, Ebrahimzadeh (2009), “Antioxidants Activity, flavonoids phenoi and contents peels and 13 of citrus species tissues”, Pak J Pharm Sci., vol.22, No.3, pp.277-281
8 Mosmann T (1983),“Rapid colorimetric assay for celluiar growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays”, J Immunol Meth, 65: 55-63.
9 Peiyuan Li, Uni Hou, Wei Su, Rumei Lu, Chaocheng Deng, Liangqưan Liu, Yongkun' Deng, Nana Guo, Chengsheng Lu and Chunling He (201Ị),“Free radical-scavenging capacity, antioxidant activity and phenolic content of Pouzolzia zeylanica”,Journal o f the Serbian Chemical Society, vol 76, No 5, pp 709-717
10 ScudieroDA.ShoemakerR.H et (1988),“Evaluation of a soluble Tetrazolium/Formazan assay for celi growth and drug sensivity in culture using human and other tumor cell lines”,Cance/- Research, 48: 4827-4833
H T ia n lu Min, Bruce Bartholomew (2007), “Theaceae” in Flora o f China, VOỈ 12, 367 - 412, Missouri Botanical Garden Press