Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n−hexan của lá cây Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)

Chính điều đó tạo nên nguồn nguyên liệu dược liệu (thực vật, động vật, khoáng vật) to lớn, tạo tiền đề để nhân dân Việt Nam từ xưa tới nay tìm tòi, vận dụng rất nhiều phương thuốc Nam [r]

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC

ĐINH HOÀNG GIANG

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT

TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC

ĐINH HOÀNG GIANG

TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT

TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC)

Khóa: QH.2015.Y

LỜI CẢM ƠN

Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu Dược học Cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội ThS

Bùi Thị Xuân – Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

định hướng, tận tâm bảo tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành Khố luận Các thầy cô không truyền đạt kiến thức học thuật mà trang bị cho em thêm nhiều kĩ cần thiết sống

Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu Dược học Cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện cho em q trình thực hồn thành Khố luận

Em xin gửi lời cảm ơn đến Quý thầy cô Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên trực thuộc Khoa Y Dược thầy cô sở liên kết đào tạo với Khoa Y Dược đã nhiệt tình dạy cho em từ điều đến tới tri thức to lớn nhân loại suốt thời gian năm học tập nghiên cứu chuyên ngành Dược học nơi Do kiến thức em hạn hẹp, thời gian nghiên cứu khơng nhiều nên Khố luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận lời nhận xét, góp ý Quý thầy để Khố luận tốt nghiệp Dược sĩ em hoàn thiện

Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, tơi xin cảm ơn người bạn đồng hành tôi, người theo sát, quan tâm tạo điều kiện giúp tơi hồn thành Khố luận

Xin chúc tất người mạnh khoẻ hạnh phúc!

Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Sinh viên

DANH MỤC KÍ HIỆU

STT Kí hiệu Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt

1 CFU Colony-forming unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc

2 DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer

Tăng cường biến dạng chuyển phân cực

3 DPPH 2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl

4 ESI−MS Electrospray ionisation mass spectrometry

Quang phổ khối tia điện ion hoá

5 FabI Enoyl-acyl carrier protein reductase I

6 IC50 Half maximal inhibitory

concentration

Nồng độ ức chế 50% mức tối đa

7 LC50 Median lethal concentration Nồng độ gây chết 50%

8 MIC Minimum inhibitory

concentration Nồng độ ức chế tối thiểu

9 MTT

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide

10 NMR Nuclear magnetic resonance

Quang phổ cộng hưởng từ hạt nhân

11 ORAC Oxygen radical absorbance

capacity Khả hấp thụ gốc oxy

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình Tên hình Trang

Hình 1.1 Ảnh chụp hoa S nobilis

Hình 1.2 Cấu tạo tổng thể S nobilis

Hình 1.3 Cơng thức hoa S nobilis

Hình 1.4 Thành phần bột cuống S nobilis

Hình 1.5 Thành phần bột thân S nobilis

Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 1−22 13 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất S nobilis phân đoạn n−hexan 19

Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất S3 24

Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất S4 26

DANH MỤC BẢNG

Bảng Tên bảng Trang

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ DEPT,

13C−NMR 1H−NMR

hợp chất S3 hợp chất tham khảo 22 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ DEPT,

13C−NMR 1H−NMR

hợp chất S4 hợp chất tham khảo 24 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ DEPT,

13C−NMR 1H−NMR

hợp chất S5 hợp chất tham khảo 26 Bảng 3.4 Liên quan cấu trúc axit béo với tác dụng kháng

khuẩn 29

Bảng 3.5 Tác dụng axit béo lên enoyl reductase vi

khuẩn Gram (+) 29

Bảng 3.6 Nồng độ ức chế tối thiểu axit béo 29 Bảng 3.7 Tỷ lệ ức chế axit palmitic so với đối chứng

âm 31

Bảng 3.8 Đường kính vùng ức chế vi khuẩn E coli

chất 31

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU

CHƯƠNG TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan chi Sanchezia

1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia

1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Sanchezia

1.1.3 Đặc điểm phân bố chi Sanchezia

1.2 Tổng quan loài Sanchezia nobilis

1.2.1 Đặc điểm đại phẫu loài S nobilis

1.2.2 Đặc điểm bột dược liệu loài S nobilis

1.2.3 Thành phần hố học lồi S nobilis

1.2.4 Tác dụng dược lý 13

1.2.5 Cơng dụng lồi S nobilis theo Y học cổ truyền 15

CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Đối tượng 16

2.1.1 Nguyên vật liệu 16

2.1.2 Hoá chất, thiết bị 16

2.2 Phương pháp nghiên cứu 17

2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17

2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 18

CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 19

3.1 Kết 19

3.1.1 Kết chiết xuất 19

3.1.2 Kết phân lập 20

3.1.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 22

3.2 Bàn luận 28

MỞ ĐẦU

Đất nước Việt Nam sở hữu ranh giới trải dài nhiều vĩ độ, bên biển liên tục thổi gió ẩm, bên núi giữ lại ẩm đó, thời tiết thay đổi liên tục mùa năm khác rõ rệt vùng miền, giúp hệ sinh thái nơi phát triển trù phú với nhiều lồi đặc hữu sinh vật q Chính điều tạo nên nguồn nguyên liệu dược liệu (thực vật, động vật, khoáng vật) to lớn, tạo tiền đề để nhân dân Việt Nam từ xưa tới tìm tòi, vận dụng nhiều phương thuốc Nam dược Cùng kiến thức Đông dược, vị Thần y nước Việt cha ơng ta xây dựng tích luỹ kho tàng tri thức y dược học quý giá

Trong thời điểm tại, y học Tây phương qua thời kì bùng nổ, loại thuốc tổng hợp phát triển chậm chạp tác nhân gây bệnh dần trở nên đề kháng, xu hướng quay với nguồn gốc thiên nhiên lại nhà khoa học ý nhiều Rất nhiều số loài sinh vật sàng lọc tìm kiếm hoạt chất lại loài cỏ mọc hoang dại mà dân gian Việt Nam thường truyền tay làm thuốc điều trị phịng chống nhiều loại bệnh cấp mạn tính

Hiện có nhiều nghiên cứu loài thuộc họ Acanthaceae, số thuộc chi Sanchezia Tuy nhiên nghiên cứu sơ sài thường tập trung vào thành phần hố học [23, 24], nghiên cứu độc tính tác dụng sinh học người Phần lớn nghiên cứu lồi Sanchezia speciosa, cịn lồi Sanchezia nobilis nghiên cứu ít, bao gồm số nghiên cứu giới nghiên cứu Việt Nam nghiên cứu TS Vũ Đức Lợi, ThS Bùi Thị Xuân, PGS.TS Bùi Thanh Tùng… [5−7, 48, 49] Trên mạng internet có xuất số báo viết tác dụng điều trị đau dày Khôi đốm hay Xăng sê (một số có nêu tên khoa học lồi S speciosa) cách sắc khô với nước nhai sống tươi [2], chưa có nghiên cứu chứng minh tác dụng này, mà hoàn toàn lời truyền miệng dân gian

tốt nghiệp dược sĩ sử dụng S nobilis làm đề tài nghiên cứu [3] Việc nghiên cứu sâu vào thành phần hoá học tác dụng sinh học giúp chứng minh kinh nghiệm sử dụng dân gian, hướng tới tìm kiếm, tách chiết phân lập hoạt chất nuôi trồng, sản xuất thuốc điều trị từ Năm 2019 có đề tài khố luận tốt nghiệp “Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan Khôi đốm” dược sĩ Phạm Thị Hà Vì thế, chúng tơi thực đề tài: “Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan của Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau:

1 Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan Xăng sê/Khôi đốm

CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia

1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia

Theo phân loại Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ (USDA) năm 2020 [12],

chi Sanchezia thuộc:

Giới: Plantae (Thực vật)

Phân giới: Tracheobionta (Thực vật có mạch) Siêu ngành: Spermatophyta (Thực vật có hạt)

Ngành: Magnoliophyta (Thực vật hạt kín – Ngọc lan) Lớp: Magnoliopsida (Thực vật hai mầm – Ngọc lan)

Phân lớp: Asteridae (Cúc)

Bộ: Scrophulariales (Hoa môi – Hoa mõm chó) Họ: Acanthaceae (Ơ rơ)

Chi: Sanchezia Ruiz & Pav (xăng−sê) 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Sanchezia

Sanchezia loại bụi thường xanh, nửa gỗ, nhỏ, mọc thẳng đứng,

cao 1,3−2,4 m Thân trơn nhẵn, màu lục sáng đến tím Lá hình giáo, to, dài tới 26 cm, mọc đối Phiến màu lục, vân màu vàng ngà rõ rệt Hoa màu vàng, hình ống, bẹ hoa màu đỏ, dài khoảng cm, mọc thành chùm đến chùm 10 từ nách thân Quả bao thn dài với 6−8 hạt trịn, nén chặt [22, 46]

1.1.3 Đặc điểm phân bố chi Sanchezia

Bangladesh, Belize, Cameroon, Costa Rica, Cuba, Dominica, El Salvador, Fiji, Guatemala, Guinea, Haiti, Hawaii, Honduras, Jamaica, Mexico, Nicaragua, Puerto Rico, Trinidad Tobago, đảo Cook, Leeward, Solomon, Windward Việt Nam [21]

Ở Việt Nam, chi Sanchezia phát loài là S nobilis hay S

speciosa, thường gọi Xăng−sê, Ngũ sắc hay Khôi đốm Chi

phân bố miền núi Tây Giang (Quảng Nam), Hồ Vang (Đà Nẵng), Chiêm Hố Na Hang (Tuyên Quang) [1] mọc nhiều miền Bắc Việt Nam [48] 1.2 Tổng quan loài Sanchezia nobilis

Theo số tài liệu, loài S nobilis S oblonga loài [36, 40, 45] Một số tài liệu khác lại cho S nobilis S speciosa loài [4, 46] Điều việc có nghiên cứu mơ tả phân biệt rõ lồi S

nobilis với lồi gần có hoa màu vàng bóng (S pennellii, S

cyathibracteata), đặc biệt S speciosa, nhiên có ý quan trọng:

Lá S nobilis có hình thn mũi giáo nhọn, khác hồn tồn với thn hình ê líp S speciosa [25] Tuy nhiên, Trung tâm Dữ liệu Thực vật Việt Nam coi S speciosa tên đồng nghĩa với S nobilis [54]

1.2.1 Đặc điểm đại phẫu loài S nobilis

1 Nhuỵ hoa; Nhị hoa; Cánh hoa; Lá đài; Bẹ hoa;

6 Cụm hoa hoàn chỉnh; Thân cây;

8 Lá cây; Cuống

Hình 1.2 Cấu tạo tổng thể S nobilis [22]

1.2.1.1 Lá

1.2.1.2 Thân

Thân mọc thẳng đứng, nửa gỗ, sống lâu năm, phần tròn, phần hình tứ giác Chiều cao đạt 0,5−1 m, đường kính 0,5−2 cm Thân đơn nhánh, có nhiều lóng dài tới cm phần ngắn phần [22]

1.2.1.3 Hoa

+ Cụm hoa hồn chỉnh

Những bơng hoa mọc thành chùm tạo thành cụm hoa kép không cuống, phát triển hướng xuống sau hướng lên Hoa lưỡng tính, khơng cuống, nhỏ, khác cỡ hình dạng giống Hoa có mùi đặc trưng nhẹ, vị đắng, chiều dài 2,5−3,5 cm [22]

+ Bẹ hoa

Bẹ hoa màu lục, hình thn dài hình giáo thn dài, đỉnh nhọn, có chiều dài 1,2−1,3 cm, chiều rộng 0,25−0,5 cm [22]

+ Đài hoa

Đài hoa màu lục, gồm đài xen kẽ (cánh rời), có chiều dài 1,3−1,5 cm, chiều rộng 0,2−0,4 cm, xếp đè [22]

+ Tràng hoa

Tràng hoa màu vàng cam, gồm cánh hoa dính (cánh liền), hình ống, có lơng bên ngồi, gồm thuỳ, thuỳ có mơi (trong ngồi) Cánh hoa hình trứng thn dài hẹp hai đầu, đầu tồn viền trịn Tràng hoa có chiều dài 2,5−3 cm [22]

+ Bộ nhị

+ Bộ nhuỵ

Bộ nhuỵ gồm noãn kép vượt trội, khoang, chiều dài 0,3−0,4cm, đường kính 0,2−0,3 cm, vị trí có tiểu nỗn gắn vào bầu nhuỵ, tiểu nỗn hướng trục Vịi nhuỵ dài 2,5−3 cm, đường kính 0,4−0,5 cm Đầu nhuỵ khơng phân nhánh, không nhú [22]

+ Công thức hoa

∙ | ∙ ,⚥ , K5 , [C5 A4(3:2)] , G(2)

1.2.2 Đặc điểm bột dược liệu loài S nobilis

1.2.2.1 Bột cuống

Tinh thể calci carbonat Xơ trụ bì Biểu bì (dưới) Xơ mạch libe

Lơng che chở Biểu bì (trên) Mạch gỗ Quản bào

Nhu mơ bần

Mô giậu Nhu mô mỏng

Tinh thể calci oxalat

Mô xốp

Hạt tinh bột

Lơng tiết Biểu bì cuống

1.2.2.2 Bột thân

Tinh thể calci carbonat Xơ trụ bì Xơ bần Lơng che chở

Mạch gỗ Biểu bì thân Xơ mạch libe Quản bào Ống quản bào

Tinh thể calci oxalat Hạt tinh bột Mơ bần Nhu mơ bần Hình 1.5 Thành phần bột thân S nobilis [22]

1.2.3 Thành phần hoá học loài S nobilis

Năm 2013, Ahmed E.A.E cộng tiến hành nghiên cứu phần mặt đất (thân lá) S nobilis Ai Cập (2003) Từ cao MeOH tổng, nhóm nghiên cứu phân lập hợp chất, bao gồm:

1 hợp chất matsutake alcohol: 1-octen-3-ol (1) hợp chất matsutake alcohol glycosid:

+ 3-O--glucopyranosyl-1-octen-3-ol (2)

+ 3-O--glucopyranosyl-(1→6)--glucopyranosyl-1-octen-3-ol (3)

+ 3-O--arabinopyranosyl-(1→6)--glucopyranosyl-1-octen-3-ol (4)

-Trong hợp chất 1−4 lần phân lập từ họ Acanthaceae, hợp chất 5 lần phân lập từ tự nhiên [23]

Năm 2014, nhóm nghiên cứu Ahmed E.A.E tiếp tục nghiên cứu mẫu S nobilis Ai Cập (2003) phân lập hợp chất từ cao MeOH thân lá, hợp chất từ cao MeOH hoa hợp chất bao gồm: hợp chất cinnamyl alcohol glycosid:

+ 9-O--glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol (6)

+ 9-O--xylopyranosyl-(1→6)-O--glucopyranosyl-(1→6)-O- -glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol (7)

+ Syringin (8)

1 hợp chất neolignan glucosid: 4-O--glucopyranosyl dehydrodiconiferyl alcohol (9)

2 hợp chất benzyl alcohol glycosid:

+ 7-O--glucopyranosyl benzyl alcohol (10)

+ 7-O--apiofuranosyl-(1→6)-O--glucopyranosyl benzyl alcohol (11) hợp chất flavonoid glycosid:

+ Apigenin-7-O--glucopyranosid (12)

+ Apigenin-7-O-gentiobiosid (13)

+ Apigenin-7-O--glucuronopyranosid (14)

Trong hợp chất 7 lần phân lập từ tự nhiên, hợp chất 6, 8, 9, 13 lần phân lập từ họ Acanthaceae, hợp chất 10−12 14 lần báo cáo từ chi Sanchezia [24]

Ở Việt Nam, năm 2018, B.T Xuân cộng nghiên cứu mẫu

cây S nobilis thu hái Nam Định phân lập hợp chất từ phân đoạn

dịch chiết ethyl acetat:

+ 9-methoxycanthin-6-on (15)

+ O-methyl furodysinin lacton (17)

Cả hợp chất phân lập lần từ S nobilis [6] Năm 2019, B.T Xuân cộng tiếp tục nghiên cứu mẫu S

nobilis Nam Định phân lập thêm hợp chất từ phân đoạn dịch

chiết n−hexan:

+ Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (18)

+ Stigmasterol (19)

Đây lần hợp chất phân lập từ S nobilis [5]

Cùng năm 2019, N.T Hiền nghiên cứu phân lập số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết nước S nobilis Nam Định:

+ 4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavon (20)

+ Kaempferol-3-O--L-arabinofuranosid (21)

+ Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid (22)

Cả hợp chất phân lập lần từ S nobilis

chi Sanchezia [3]

1: R = H 2: R = Glc

3: R = Glc-(6→1)-Glc 4: R = Glc-(6→1)-Ara

5: R = Glc-(6→1)-Glc-(6→1)-Ara

6: R = Glc

7: R = Glc-(6→1)-Glc-(6→1)-Xyl

10: R = Glc

11: R = Glc-(6→1)-Api 12: R = Glc

13: R = Glc-(1→6)-Glc 14: R = Glr

15 16

17

18

21

22

Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 1−22 1.2.4 Tác dụng dược lý

1.2.5.1 Chống viêm

Năm 2016, Tung B.T cộng phân lập hợp chất từ dịch chiết EtOH lá S speciosa nghiên cứu tác dụng chống viêm thử nghiệm ức chế biến tính albumin, kết quả: 3-methyl-1H-benz[f]indole-4,9-dion (IC50 = 193,7 ± 5,24 μg/mL) > sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid

(daucosterol) > quercetin 3-O-β-d-galactopyranosid (hyperosid) > quercetin 3-O-α-l-rhamnopyranosid (quercitrin) [14] Cùng năm 2016, Loi V.D cộng thử tác dụng dịch chiết EtOH lá S speciosa liều 1,5 g/kg, làm giảm phù đáng kể triệu chứng phù bàn chân chuột bị kích thích 0,05 mL muối Carrageenan 1% [48]

1.2.5.2 Chống oxi hoá

Năm 2013, Mohammadjavad P cộng xác định khả dọn dẹp gốc tự phân đoạn MeOH dịch chiết S speciosa thử nghiệm ORAC cho kết tương đương quercetin, cho thấy tiềm chất chống oxi hoá từ thiên nhiên [39] Năm 2016, nghiên cứu Tung B.T cộng sự, dịch chiết EtOH lá S speciosa có tác dụng chống oxi hố phương pháp DPPH: hyperosid (IC50 = 20,83 ± 1,29 μg/mL) >

1.2.5.3 Chống ung thư

Năm 2013, nghiên cứu Mohammadjavad P cộng sự, họ xác định tác dụng gây độc tế bào phân đoạn MeOH dịch chiết S

speciosa tế bào MCF−7, SK−MEL−5 HUVEC thử nghiệm MTT,

quan sát tác dụng ức chế tăng trưởng tế bào mạnh MCF−7, sau đến SK−MEL−5 thấp HUVEC, thể ức chế chọn lọc tốt doxorubicin [39] Năm 2015, nhóm nghiên cứu Abu S.R tiến hành thử nghiệm gây độc tế bào lồi tơm nước mặn Artemia salina so sánh LC50 phân đoạn n−hexan (19,95 μg/mL) ethyl acetat (12,88 μg/mL)

dịch chiết S speciosa với vincristin suphat (10,96 μg/mL), cho thấy tiềm kiểm soát ung thư S speciosa [44]

1.2.5.4 Giảm đau

Năm 2018, B.T Xuân cộng đánh giá tác dụng giảm đau trung ương với mơ hình thực nghiệm phương pháp mâm nóng phương pháp rê kim chuột nhắt trắng phân đoạn dịch chiết n-hexan ethyl acetat S nobilis Kết quả: Liều 16 mg/kg/ngày, 48 mg/kg/ngày phân đoạn ethyl acetat cho tác dụng rõ rệt so với liều 64 mg/kg/ngày, 192 mg/kg/ngày phân đoạn n-hexan, dùng đường uống ngày liên tục [7]

1.2.5.5 Kháng axit

Năm 2019, Loi V.D cộng tiến hành nghiên cứu tác dụng kháng axit phân đoạn dịch chiết S nobilis, cho thấy tác dụng phân đoạn nước tốt phân đoạn n−hexan ethyl acetat, tác dụng thuốc Antigas [49]

1.2.5.6 Chống loét dày − tá tràng

Năm 2019, Loi V.D cộng đánh giá hiệu chống loét dày − tá tràng kích thích 400 mg/kg cyteamin dịch chiết ethyl acetat từ S

nobilis chuột Wistar bạch tạng, kết luận dịch chiết 11,52 mg/kg có tác

1.2.5 Cơng dụng lồi S nobilis theo Y học cổ truyền

Theo báo Khoa học Đời sống năm 2019, Khơi đốm có tác dụng kháng viêm, liền vết loét trường hợp bị viêm loét dày, tá tràng vi khuẩn Helicobacter pylori: Nhai sống vài tươi với hạt muối cắt đau lập tức, dùng thời gian khỏi hẳn, sắc khơ thay nước chè uống ngày [2] Bài báo trích lời ThS Ngô Đức Phương – Viện trưởng viện thuốc Nam, không nêu rõ tên khoa học

Một số trang web khác khẳng định khả điều trị bệnh đau dày Xăng sê, cịn gọi Ngũ sắc, Khơi đốm với tên khoa học

Sanchezia nobilis Hook.f hay Sanchezia speciosa Leonard Các công dụng

CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng

2.1.1 Nguyên vật liệu

Lá Khôi đốm thu hái Thị trấn Cổ Lễ, huyện Trực Ninh, tỉnh Nam Định ngày 15/01/2018 Mẫu sau thu hái xử lý, phơi sấy, bảo quản túi nilon kín giám định tên khoa học Viện Dược liệu ThS Nguyễn Quỳnh Nga, kết luận: Sanchezia nobilis Hook.f họ Acanthaceae (họ Ô rô) với tên Việt Nam Khôi đốm Xăng xê Lá ngũ sắc Mẫu lưu tại: Phòng Tiêu bản, Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu (số hiệu: DL−150118) (Phụ lục 1)

2.1.2 Hoá chất, thiết bị

2.1.2.1 Hoá chất

+ Dung môi chiết xuất phân lập: ethanol (EtOH) 70%, n−hexan, ethyl acetat (EtOAc), methanol (MeOH), dichloromethan (CH2Cl2)…; tất

đều đạt tiêu chuẩn phân tích

+ Hóa chất định tính: FeCl3, NaOH, H2SO4, HCl, phenolphtalein, thuốc

thử Fehling,…

2.1.2.2 Thiết bị

+ Đo nhiệt độ nóng chảy: Máy Mikroskopheiztisch PHMK−50 (VEB Wagetechnik Rapido, Đức)

+ Ghi phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR (500 MHz), 13C-NMR (125 MHz), DEPT−90 135 MHz): Quang phổ kế AVANCE AV 500 (Brucker, Đức) Viện Hoá học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam (VAST)

+ Ghi phổ khối tia điện ion hoá (ESI−MS): Khối phổ kế Varian Agilent 1100 LC/MSD

+ Sắc ký mỏng (TLC): Bản mỏng Kieselgel 60 F254 (Merck)

(silicagel, độ dày 0,25 mm) RP−18 F254 (Merck) (silicagel, độ dày

+ Sắc ký cột (CC): Silicagel pha thường cỡ hạt 70−230 230−400 mesh (Merck) cột sắc ký có kích cỡ khác

+ Dụng cụ thí nghiệm: pipet, ống nghiệm, bình chiết, cốc có mỏ, bình gạn…

+ Các thiết bị khác: tủ sấy, tủ hotte, cân phân tích, máy quay, đèn UV…

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất

Mẫu S nobilis Hook.f sau rửa sạch, phơi khô, làm nhỏ ngâm chiết dung mơi EtOH 70% nhiệt độ phịng ngày, rút dịch chiết lần Bổ sung dung môi ngập dược liệu 2−3 cm, rút dịch chiết lần lần Gộp dịch chiết lần, lọc qua giấy lọc, cất loại dung môi áp suất giảm, thu cao tổng EtOH

Phân tán cao tổng EtOH nước cất chiết phân bố n-hexan ethyl acetat Các phân đoạn n−hexan, ethyl acetat cất loại dung môi áp suất giảm, thu cắn: n−hexan (H), ethyl acetat (E) Phần dịch nước lại cô cạn, thu cắn nước (N)

Tiến hành xử lý phân lập hợp chất từ cắn n-hexan phương pháp sắc ký cột Các phân đoạn thu trình phân lập theo dõi TLC

+ Sắc ký cột: Thực với chất hấp phụ silicagel pha thường cỡ hạt 70−230 230−400 mesh (Merck) loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau, lựa chọn hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần

+ Sắc ký mỏng: Thực mỏng nhôm tráng sẵn silicagel 60 F254 (Merck), độ dày 0,25 mm RP−18 F254, độ dày 0,25 mm (Merck)

2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất

2.2.2.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập qua bước

+ Bước 1: Thực đo nhiệt độ nóng chảy, phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H−NMR, 13C−NMR, DEPT), phổ khối (MS), thiết lập liệu

các chất phân lập

+ Bước 2: So sánh liệu chất phân lập với liệu chất công bố

2.2.2.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (phổ NMR)

Với kỹ thuật phổ NMR, ta biết mối liên hệ proton carbon phân tử, kết hợp với phổ khối thơng tin khác, NMR xây đựng cấu trúc phân tử hợp chất Do có nhiều thơng tin đặc trưng cấu trúc phân tử, việc so sánh phổ proton hay carbon chiều chất cần phân tích với chất biết cho phép xác định chất cách đáng tin cậy

2.2.2.3 Phổ khối tia điện ion hoá (ESI−MS)

CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết

3.1.1 Kết chiết xuất

Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất S nobilis phân đoạn n−hexan

Lá Sanchezia nobilis Hook.f (3,0 kg) sau rửa sạch, làm nhỏ,

phơi khô, sấy (80°C tiếng) ngâm chiết 12 L dung mơi ethanol 70% nhiệt độ phịng (ngập dược liệu 2−3 cm) ngày Rút lấy dịch chiết lần 1, bổ sung dung môi ngập dược liệu 2−3 cm (khoảng 10 L)

3,0 kg

lá S nobilis

251,2 g cao chiết tổng

EtOH 150 g cao chiết tổng

EtOH

Cao chiết tổng pha loãng

Pha nước Pha hữu

28,6 g cắn n−hexan (H)

32 L EtOH 70% Cô quay thu

hồi dung môi

Cô quay thu hồi dung môi 150 mL nước cất

Dịch chiết EtOH lần gộp lại, lọc qua giấy lọc, sau cất thu hồi dung mơi EtOH áp suất giảm, thu 251,2 g cao chiết tổng EtOH

150 g cao chiết tổng EtOH phân tán 150 mL nước cất (tỷ lệ 1:1; m/v) Dịch thu đem chiết phân bố với dung môi n−hexan lần, lần 900 mL n−hexan 30 phút, thu phân đoạn dịch chiết n−hexan (pha hữu cơ) pha nước Phân đoạn n−hexan cất loại dung môi áp suất giảm thu cắn n−hexan (28,6 g) ký hiệu H Pha nước tiếp tục đem chiết phân bố với dung môi ethyl acetat

3.1.2 Kết phân lập

3.1.2.1 Phân lập giai đoạn

Áp dụng phương pháp sắc ký cột hấp phụ với chất nhồi cột silicagel pha thường cỡ hạt 70−230 230−400 mesh (Merck) dung môi sắc ký n−hexan : dichloromethan (14:1; v/v)

Chất nhồi cột: Silicagel hoạt hoá 100°C/2h tủ sấy để nguội bình hút ẩm

Chuẩn bị cột:

+ Cột sắc ký đường kính cm, có lớp lọc frit, lắp thẳng đứng giá, tráng EtOH

+ Khố van cột, đổ 40 mL dung mơi sắc ký vào cột, mở van cho dung môi chảy từ từ để tráng cột đồng thời đẩy hết bọt khí lớp lọc frit ngồi Khố van cột bề mặt dung mơi cịn cách lớp lọc khoảng cm

+ Khoá van cột, đảm bảo cột vị trí thẳng đứng, dùng bóp cao su gõ nhẹ, đều, đối xứng xung quanh thân cột tới khơng cịn bọt khí cột, để cột ổn định 10 phút Chú ý dung mơi ln phải cách bề mặt silicagel khoảng cm, không để dung môi bay nhiều

Tiến hành sắc ký:

+ Mở van cột cho dung môi sắc ký chảy đến sát bề mặt silicagel, khóa van cột

+ 18 g cắn n-hexan (H) phân lập cột sắc ký với chất hấp phụ silicagel pha thường, sử dụng hệ dung môi rửa giải n−hexan : dichloromethan (14:1; v/v) Điều chỉnh tốc độ rửa giải mL/phút

+ Hứng dịch rửa giải vào ống kiểm tra TLC, gộp ống có tương đồng: Gộp ống 2−16 thu phân đoạn H1 (8 g), gộp ống 17−20 thu phân đoạn H2 (5 g), gộp ống 21−22 thu phân đoạn H3 (4 g)

3.1.2.2 Phân lập giai đoạn

Áp dụng phương pháp sắc ký cột hấp phụ với chất nhồi cột silicagel pha thường cỡ hạt 70−230 230−400 mesh (Merck)

Tiến hành chuẩn bị cột chất nhồi cột tương tự giai đoạn với cột sắc ký đường kính cm

Tiến hành sắc ký cột cắn phân đoạn H1 với chất hấp phụ silicagel, hệ dung môi rửa giải n−hexan : dichloromethan (10:1; v/v), hứng dịch rửa giải vào ống kiểm tra TLC, gộp ống có thành phần bốc dung môi thu phân đoạn nhỏ gồm H1.1, H1.2, H1.3, H1.4

Tiến hành sắc ký cột cắn phân đoạn H2 với chất hấp phụ silicagel, hệ dung môi rửa giải n−hexan : ethyl acetat (10:1, 5:1; v/v), hứng dịch rửa giải vào ống kiểm tra TLC, gộp ống có thành phần bốc dung mơi thu phân đoạn nhỏ gồm H2.1, H2.2

Phân đoạn H2.1 (1,8 g) tiếp tục phân tách cột sắc ký silicagel, rửa giải hệ dung môi n−hexan : dichloromethan (4:1; v/v) thu hợp chất ký hiệu S5 (29 mg)

3.1.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập

+ Hợp chất S3: Hexadecanoic acid (axit palmitic) Tinh thể màu trắng đến vàng, t°nc = 43–44°C

Phổ ESI−MS: m/z 257,0 [M+H]+, m/z 255,0 [M−H]− CTPT: C

16H32O2

(M=256) (Phụ lục 2)

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S3 hợp chất tham khảo [28]

Hợp chất S3 Hợp chất tham khảo [28] Vị trí

C DEPT C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz) C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz)

1 C 179,7 − 180,64 −

2 CH2 34,0 2,34 (t; 7,0) 34,3 2,33 (t; 7,35)

3 CH2 24,7 1,63 (m; 7,5) 24,85 1,62 (m; 7,35)

4 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

5 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

6 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

7 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

8 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

10 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

11 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

12 CH2 29,1−29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

13 CH2 29,1-29,7 1,26 (m) 29,25−29,89 1,24−1,28 (m)

14 CH2 31,9 1,26 (m) 32,12 1,28−1,29 (m)

15 CH2 22,7 1,26 (m) 22,88 1,31−1,33 (m)

16 CH3 14,1 0,88 (t; 7,0) 14,31 0,87 (t; 6,7)

OH − − − 3,75 (s)

a Đo CDCl3; b Đo 125 MHz; c Đo 500 MHz

Dữ liệu phổ ESI−MS hợp chất S3 cho thấy pic ion phân tử m/z 257,0 [M+H]+, m/z 255,0 [M−H]− tương ứng với khối lượng phân tử M = 256 Dữ liệu phổ 13C−NMR DEPT cho thấy hợp chất S3 có 16 carbon, bao gồm

tín hiệu sau: Tín hiệu δC 179,7 (C-1) với dịch chuyển hoá học xa thể

carbon nhóm carboxyl; tín hiệu δC 34,0 (C-2) 31,9 (C-14); có carbon

vị trí đối xứng C-7, C-8, C-9, C-10, C-11 tạo tín hiệu với cường độ cao δC 29,7; có nhiều tín hiệu xuất gần nhau: δC 29,4 (C-4),

29,6 (C-5), 29,4 (C-13), 29,3 (C-6), 29,1 (C-12); tín hiệu δC 24,7 (C-3), 22,7

(C-15) 14,1 (C-16) Dữ liệu phổ 1H−NMR cho thấy hợp chất S3 có 32 hydro, bao gồm tín hiệu sau: δH 2,34 (2H, t, Ј=7,0, H-2); tín hiệu δH 1,63

(2H, m, J=7,5, H-3); tín hiệu δH 1,26 (24H, m) thể 24 hydro H-4, H-5,

H-6, H-7, H-8, H-9, H-10, H-11, H-12, H-13, H-14 H-15; tín hiệu δH 0,88

Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất S3

+ Hợp chất S4: (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoic acid (axit linoleic) Chất lỏng, sánh, không màu

Phổ ESI−MS: m/z 281,0 [M+H]+ CTPT: C18H32O2 (M=280) (Phụ lục

3)

Bảng 3.2 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S4 hợp

chất tham khảo [16]

Hợp chất S4 Hợp chất tham khảo [16] Vị trí

C DEPT C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz) C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz)

1 C 179,6 − 180,09 −

2 CH2 34,0 2,34 (t) 34,06 2,34 (t; 7,5)

3 CH2 24,7 1,63 (m) 24,69 1,63 (m)

4 CH2 29,1 1,27−1,37 (m) 29,07 1,26−1,34 (m) CH2 29,0 1,27−1,37 (m) 29,14 1,26−1,34 (m) CH2 29,0 1,27−1,37 (m) 29,35 1,26−1,34 (m) CH2 29,6 1,27−1,37 (m) 29,69 1,26−1,34 (m)

8 CH2 27,2 2,05 (m) 27,18 2,04 (m)

11 CH2 25,6 2,77 (t) 25,63 2,77 (t; 7,0)

12 CH 127,9 5,31−5,40 (m) 127,91 5,32−5,39 (m) 13 CH 130,2 5,31−5,40 (m) 130,21 5,32−5,39 (m)

14 CH2 27,2 2,05 (m) 27,21 2,04 (m)

15 CH2 29,3 1,27−1,37 (m) 29,24 1,26−1,34 (m) 16 CH2 31,6 1,27−1,37 (m) 31,92 1,26−1,34 (m) 17 CH2 22,6 1,27−1,37 (m) 22,68 1,26−1,34 (m)

18 CH3 14,0 0,89 (t) 14,09 0,88 (t; 7,0)

a Đo CDCl3; b Đo 125 MHz; c Đo 500 MHz

Dữ liệu phổ ESI−MS hợp chất S4 cho thấy pic ion phân tử m/z 281,0 [M+H]+ tương ứng với khối lượng phân tử M = 280 Hợp chất S4 dự đốn axit béo khơng bão hoà mạch thẳng Dữ liệu phổ 13C–NMR

DEPT cho thấy hợp chất S4 có 18 carbon, bao gồm tín hiệu sau: nhóm carboxyl tín hiệu C 179,6 (C-1); methin olefinic carbon tín hiệu C 130,0

(C-9), 128,1 (C-10), 127,9 (C-12), 130,2 (C-13); nhóm methyl C 14,0

(C-18); tín hiệu C 22,6−34,0 nhóm methylen Dữ liệu phổ 1H–NMR

cho thấy hợp chất S4 có 32 hydro, bao gồm tín hiệu sau: olefinic proton tín hiệu δH 5,31−5,40 (4H, m, H-9, H-10, H-12, H-13); proton gắn với

bis−allylic carbon tín hiệu δH 2,77 (2H, t, J=7,0, H-11); proton nhóm

methylen vị trí α nhóm carboxyl tín hiệu δH 2,34 (2H, t, H-2); proton

gắn với allylic carbon tín hiệu δH 2,05 (4H, m, H-8, H-14); nhóm methyl tận

cùng tín hiệu δH 0,89 (3H, t, H-18) Các số ghép thấp thể cấu hình

Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất S4

+ Hợp chất S5: (Z)-octadec-9-enoic acid (axit oleic) Chất lỏng, sánh, không màu

Phổ ESI−MS: m/z 283,0 [M+H]+, m/z 281,0 [M–H]– CTPT: C18H34O2

(M=282) (Phụ lục 4)

Bảng 3.3 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S5 hợp

chất tham khảo [8]

Hợp chất S5 Hợp chất tham khảo [8] Vị trí

C DEPT C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz) C

ab ppm δH

ac ppm

(Mult; J=Hz)

1 C 180,3 − 179,7 −

2 CH2 34,1 2,34 (t) 34,0 2,35 (t; 7,5)

3 CH2 29,6 1,26−1,37 (m) 29,8 1,63 (m)

4 CH2 29,3 1,26−1,37 (m) 29,5 1,2−1,4

5 CH2 29,2 1,26−1,37 (m) 29,3 1,2−1,4

6 CH2 29,1 1,26−1,37 (m) 29,14 1,2−1,4

7 CH2 29,0 1,26−1,37 (m) 29,06 1,2−1,4

9 CH 130,0 5,34 (m) 130,0 5,34 (m)

10 CH 129,7 5,34 (m) 129,7 5,34 (m)

11 CH2 28,8 2,04 (m) − 2,01 (m)

12 CH2 29,4 1,26−1,37 (m) 29,7 1,2−1,4

13 CH2 29,0 1,26−1,37 (m) 29,03 1,2−1,4

14 CH2 27,2 1,26−1,37 (m) 27,2 1,2−1,4

15 CH2 27,1 1,26−1,37 (m) 27,1 1,2−1,4

16 CH2 24,7 1,26−1,37 (m) 24,7 1,2−1,4

17 CH2 22,7 1,26−1,37 (m) 22,7 1,2−1,4

18 CH3 14,1 0,89 (t; 7,0) 14,1 0,88 (t; 7,0)

a Đo CDCl3; b Đo 125 MHz; c Đo 500 MHz

Dữ liệu phổ ESI−MS hợp chất S5 cho thấy pic ion phân tử m/z 283,0 [M+H]+, m/z 281,0 [M–H]– tương ứng với khối lượng phân tử M = 282 Dữ liệu phổ 13C–NMR DEPT cho thấy hợp chất S5 có 18 carbon, bao gồm

tín hiệu sau: tín hiệu C 130,0 (C-9) 129,7 (C-10) carbon chưa bão

hồ; tín hiệu C 180,3 (C-1) nhóm carboxyl; tín hiệu C 14,1 (C-18)

methyl carbon; tín hiệu cịn lại C 22,7 (C-17), 24,7 (C-16), 27,1 (C-15),

27,2 (C-14), 28,8 (C-11), 29,0 (C-7), 29,0 (C-13), 29,1 (C-6), 29,2 (C-5), 29,3 (C-4), 29,4 (C-12), 29,6 (C-3), 31,9 (C-8) 34,1 (C-2) methylen carbon Dữ liệu phổ 1H–NMR cho thấy hợp chất S5 có 34 hydro, bao gồm tín hiệu sau: tín hiệu δH 0,89 (3H, t, J=7,0, H-18) thể nhóm methyl tận

cùng; dải tín hiệu δH 1,26−1,37 (22H, m) methylen proton; tín hiệu δH

2,04 (4H, m, H-8, H-11) nhóm methylen vị trí α nhóm C=C; δH

2,34 (2H, t, H-2) nhóm methylen vị trí α nhóm carboxyl; tín hiệu δH

Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất S5 3.2 Bàn luận

Kết đề tài: Đã phân lập axit béo từ phân đoạn n−hexan S nobilis axit palmitic (hexadecanoic acid), axit linoleic ((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoic acid) axit oleic ((Z)-octadec-9-enoic acid) phương pháp ngâm chiết với dung môi EtOH sau tách phân đoạn n−hexan, xác định cấu trúc hợp chất kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối cộng hưởng từ hạt nhân, so sánh với liệu công bố chất

Bảng 3.4 Liên quan cấu trúc axit béo với tác dụng kháng khuẩn [35]

Cấu trúc axit béo Độc tính vi khuẩn

Chuỗi ngắn (< 6C) Nồng độ cao vi khuẩn Gram (−), phụ thuộc pH

Chuỗi dài Nồng độ thấp vi khuẩn Gram (+), không phụ thuộc pH

Cấu hình khơng gian Đồng phân cis- hoạt động mạnh đồng phân

trans-Mức độ bão hoà Giảm mức bão hoà làm tăng tác dụng vi khuẩn Gram (+)

Bảng 3.5 Tác dụng axit béo lên enoyl reductase vi khuẩn Gram (+) [32]

Axit béo

IC50 (mM) MIC (mM)

Staphylococcus

aureus FabI

Staphylococcus aureus

Streptococcus pyogenes

Axit palmitic (C16:0)* >2 >2 >2

Axit oleic (C18:1) 0,020 0,4 0,1

Axit linoleic (C18:2) 0,035 0,2 0,05

*Axit palmitic khơng có tác dụng dù nồng độ >2 mM [32]

Bảng 3.6 Nồng độ ức chế tối thiểu axit béo (đơn vị: mM)* [30] Vi sinh vật Axit palmitic Axit oleic Axit linoleic

Streptococcus nhóm A 3,9 1,77 0,089

Streptococcus nhóm D NI NI NI

Streptococcus

beta−hemolytic non−A 3,9 NI 0,089

Streptococcus

Staphylococcus

epidermidis 3,9 NI NI

Candida NI NI 0,455

Corynebacterium 1,9 NI 0,044

Micrococcus 1,9 NI 0,089

Nocardia asteroides NI NI 0,089

*NI = không ức chế nồng độ thử nghiệm (1,0 mg/mL 3,0−6,0 mM) Với axit khơng bão hồ, cấu hình cis- có tác dụng [30]

Vi khuẩn Helicobacter pylori nguyên nhân gây làm trầm trọng bệnh viêm loét dày tá tràng Nghiên cứu Bo K.Y cộng năm 2018 tổng hợp được: axit lauric diệt H pylori nồng độ mM [15], monoglycerid chuỗi 10−14 carbon axit lauric (GML) diệt H

pylori nồng độ 0,5 mM [18], hình thành đề kháng; axit béo bão hoà

monoglycerid chuỗi 10−14 carbon chúng axit béo đa khơng bão hồ (như axit linolenic) có hiệu diệt H pylori [33]

+ Axit palmitic (hexadecanoic acid)

Axit palmitic (C16:0) axit béo bão hoà phổ biến thể, chiếm 20−30% tổng axit béo màng phospholipid triacylglycerol mô mỡ Axit palmitic chiếm lượng lớn tổng chất béo số sản phẩm thiên nhiên: dầu cọ (44%), thịt sữa (50−60%), bơ ca cao (26%), dầu ô liu (8−20%) sữa mẹ (20−30%) Lượng axit palmitic dung nạp ngày người khoảng 20−30 g, có thay đổi thường không ảnh hưởng đáng kể đến nồng độ mô [17]

Axit palmitic chứng minh có khả chống viêm cách ức chế cạnh tranh enzym phospholipase A2 với số ức chế Ki = 1,58

× 10−5 M, giá trị IC50 = 43,26 × 10−5 M lượng gắn ΔG = −8,69

Nghiên cứu Chifu B.H cộng năm 2011 cho thấy số vi khuẩn Gram (−) bị tiêu diệt hiệu axit palmitic (bảng 3.7) axit béo khác Tuy tác dụng kìm khuẩn/diệt khuẩn axit béo tăng cường ethanol, vốn khơng thể bị loại bỏ hoàn toàn nghiên cứu, điều khơng làm giảm tầm quan trọng tác dụng axit béo [13]

Bảng 3.7 Tỷ lệ ức chế (%) axit palmitic so với đối chứng âm [13]

Candida albicans

Aggrega-tibacter

actinomy- cetemco-mitans

Porphyr-omonas gingivalis

Fusobac-terium

nucleatu-m

Streptoc-occus mutans

Streptoc-occus gordonii

Gram (−) (−) (−) (+) (+)

Tỷ lệ

ức chế* 10 42 92 70 84 100

*Dựa tỷ lệ CFU 24 đĩa có 25 μg/mL axit palmitic so với đối chứng âm [13]

Nghiên cứu Eva J cộng năm 2013 cho thấy axit palmitic có tác dụng Escherichia coli: kìm khuẩn nồng độ 10−20 ppm, diệt khuẩn nồng độ 30 ppm (bảng 3.8) [28]

Bảng 3.8 Đường kính vùng ức chế (mm) vi khuẩn E coli chất [28] Chất sử dụng Vùng ức chế sau 24 Vùng ức chế sau 48

Axit palmitic 10 ppm 18,00 14,50

Axit palmitic 20 ppm 19,00 17,00

Axit palmitic 30 ppm 13,00 16,50

Đối chứng âm (DMSO) 0,00 0,00

Đối chứng dương

+ Axit linoleic ((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoic acid) axit oleic ((Z)-octadec-9-enoic acid)

Axit linoleic (C18:2, n−6) axit béo đa khơng bão hồ phổ biến thể sinh vật, sử dụng để sinh tổng hợp prostaglandin, màng tế bào axit arachidonic [41] Hỗn hợp đồng phân C18:2 có nhiều lợi ích với sức khoẻ: chống ung thư, chống tiểu đường, chống viêm, chống béo phì chống xơ vữa động mạch, tất chứng minh thực nghiệm in vitro in vivo Tuy nhiên, tác dụng đồng phân khác khác nhau, số cịn có hại với sức khoẻ số điều kiện định [51]

Bảng 3.9 Nồng độ ức chế tối thiểu axit béo (đơn vị: mg/mL)* [26]

Vi khuẩn Gram Axit

linoleic

Axit oleic

Axit linoleic + axit oleic

Bacillus cereus (+) 0,01 NA

Bacillus pumilus (+) 1,0 NA

Bacillus subtilis (+) 0,01 1,0

Micrococcus kristinae (+) 1,0 1,0 0,05 axit

Staphylococcus aureus (+) 1,0 1,0 0,05 axit

Enterobacter cloacae; Escherichia coli; Klebsiella

pneumoniae; Pseudomonas aeruginosa; Serratia

marcescens

(−) NA NA

*NA = khơng có tác dụng

Các axit béo chiết xuất từ thiên nhiên, cụ thể axit palmitic, axit linoleic axit oleic có nhiều tiềm trở thành chất ức chế vi sinh vật, ứng dụng điều trị bệnh liên quan cho người động vật Với tác dụng tiêu diệt vi khuẩn H pylori viêm loét dày tá tràng lưu truyền dân gian loài Sanchezia nobilis, giới Việt Nam chưa có tài liệu chứng minh tác dụng này, không phủ nhận khả điều trị

Đề tài nghiên cứu phân lập hợp chất từ S nobilis

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Kết luận: Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài thu số kết quả:

+ Chiết xuất phân lập: Sử dụng phương pháp ngâm chiết với dung môi EtOH 70% để chiết xuất phương pháp sắc ký cột để phân lập, phân lập hợp chất từ phân đoạn n−hexan Sanchezia

noblis thu hái tỉnh Nam Định

+ Xác định cấu trúc hợp chất: Sử dụng kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân, so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan, hợp chất xác định là: axit palmitic (S3), axit linoleic (S4), axit oleic (S5)

Kiến nghị:

+ Tiếp tục nghiên cứu, chiết xuất phân lập thêm hợp chất từ phân đoạn n−hexan S nobilis

+ Thử nghiệm chiết xuất từ phận khác S nobilis (hoa, thân, rễ…) phân đoạn khác (ethyl acetat, nước…) để tìm kiếm thêm thành phần có hoạt tính

+ Dựa kết nghiên cứu thành phần hoá học, cần đánh giá tác dụng chống viêm, chống loét dày tác dụng sinh học khác, bao gồm tác dụng ức chế vi khuẩn H pylori dân gian S

TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt

1 Nguyễn Tiến Bân (2005), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Tập 3, Nhà

xuất Trẻ, tr 272-273

2 Phạm Hằng (2019), "Lá Khôi đốm chữa viêm dày", Khoa học & Đời

sống

3 Nguyễn Thị Hiền (2019), Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ

phân đoạn dịch chiết nước Khơi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f), Khố luận tốt nghiệp Dược sĩ, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội

4 Phạm Hoàng Hộ (2003), "Sanchezia speciosa Sàng-xê", Cây cỏ Việt Nam,

NXB Trẻ, tr 39

5 Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Phạm Thị Hà, cộng (2019), "Một số hợp

chất phân lập từ phân đoạn n-hexan Khôi đốm (Sanchezia nobilis

Hook.f.)", VNU Journal of Science: Medical and Pharmaceutical Sciences,

35(1), tr 61-66

6 Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Vũ Thị Mây, cộng (2018), "Một số hợp

chất phân lập từ Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.)", Tạp chí

Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, 34(1), tr 42-47

7 Bùi Thị Xuân, Vũ Đức Lợi, Trần Minh Ngọc, cộng (2018), "Nghiên

cứu tác dụng giảm đau phân đoạn dịch chiết từ Khơi Đốm (Sanchezia nobilis Hook.f.)", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y

Dược, 34(2), tr 26-30

Tài liệu tiếng Anh

8 Masayuki A., Yoshihiko I., Asahi S., et al (2009), "Isolation and

Pharmacological Characterization of Fatty Acids from Saw Palmetto

Extract", Analytical Sciences, 25(4), pp 553-557

9 Vasudevan A., Kalarickal V.D., Pradeep K.M., et al (2012),

"Anti-Inflammatory Property of n-Hexadecanoic Acid: Structural Evidence and

10 Debois A.P (2012), "Potential applications of antimicrobial fatty acids in

medicine, agriculture and other industries", Recent Patents on Anti-Infective

Drug Discovery, 7(2), pp 111-122

11 Desbois A.P and Smith V.J (2010), "Antibacterial free fatty acids:

Activities, mechanisms of action and biotechnological potential", Applied

Microbiology and Biotechnology, 85(6), pp 1629-1642

12 United States Department of Agriculture (2020), Sanchezia Ruiz & Pav -

sanchezia, USDA.gov (US)

13 Chifu B.H., Yelena A., Taylor M.M., et al (2011), "Short- and

medium-chain fatty acids exhibit antimicrobial activity for oral microorganisms",

Archives of Oral Biology, 56(7), pp 650-654

14 Tung B.T., Loi V.D., Hai N.T., et al (2016), "In vitro antioxidant and

anti-inflammatory activities of isolated compounds of ethanol extract from

Sanchezia speciosa Leonard’s leaves", Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, 28(1), pp 1-6

15 Petschow B.W., Batema R.P and Ford L.L (1996), "Susceptibility of

Helicobacter pylori to bactericidal properties of medium-chain

monoglycerides and free fatty acids", Antimicrobial Agents and

Chemotherapy, 40(2), pp 302-306

16 N.C Bao and P.V Ty (2017), "Long-chain compounds isolated from Lac

Tien (Passiflora foetida L.)", Hue University Journal of Science: Natural

Science, 126(1C), pp 101-106

17 Gianfranca C., Elisabetta M., Sabastiano B., et al (2017), "Palmitic Acid:

Physiological Role, Metabolism and Nutritional Implications", Frontiers in

Physiology, 8(902)

18 Sun C.Q., O'Connor C.J and Roberton A.M (2003), "Antibacterial actions

of fatty acids and monoglycerides against Helicobacter pylori", FEMS

Immunology and Medical Microbiology, 36(1-2), pp 9-17

19 Jorge D., Juan C.S.H and Marta L (2017), "Vermicomposting of

Winemaking By-Products", M.G., chủ biên, Handbook of Grape

Processing By-Products, Academic Press, pp 55-78

21 Tripp E.A and Koenemann D.M (2015), Sanchezia Ruiz & Pav.,

Nomenclatural synopsis of Sanchezia (Acanthaceae), fifty years since last

treated, Plants of the World Online, KewScience (UK)

22 Ahmed E.A.E., Khaled M.M., Enaam Y.B., et al (2006), "Macro-and

micromorphology of Sanchezia nobilis Hook cultivated in Egypt: Leaf,

stem and flower", Bulletin of Pharmaceutical Sciences (Assiut University),

29(2), pp 300-327

23 Ahmed E.A.E., Khaled M.M., Enaam Y.B., et al (2013), "Matsutake

alcohol glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of Natural

Compounds, 48(6), pp 930-933

24 Ahmed E.A.E., Khaled M.M., Enaam Y.B., et al (2014), "Cinnamyl

alcohol, benzyl alcohol, and flavonoid glycosides from Sanchezia nobilis",

Chemistry of Natural Compounds, 50(5), pp 823-826

25 Leonard E.C (1926), "Notes on the Genus Sanchezia", Journal of the

Washington Academy of Sciences, 16(18), pp 484-492

26 Dilika F., Bremner P.D and Meyer J.J.M (2000), "Antibacterial activity of

linoleic and oleic acids isolated from Helichrysum pedunculatum: a plant

used during circumcision rites", Fitoterpia, 71(4), pp 450-452

27 Thomar H., Issacs C.E., Brown H.R., et al (1987), "Inactivation of

enveloped viruses and killing of cells by fatty acids and monoglycerides",

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 31(1), pp 27-31

28 Eva J., Elly I., Hanapi U., et al (2013), "Effectiveness Of Extracted

Antibacterial Compound From Hydroid Aglaophenia Cupressina

Lamoureoux Against Bacterial Cell Of Escherichia Coli", International

Journal of Scientific & Technology Research, 2(2), pp 138-143

29 Harborne J.B and Baxter H (1993), Phytochemical Dictionary: A

Handbook of Bioactive Compounds from Plants, Taylor and Francis Ltd, London, pp 34-38

30 Jon J.K., Dennis M.S., Anthony J.C., et al (1972), "Fatty acids and

derivatives as antimicrobial agents", Antimicrobial Agents and

32 Chang J.Z., Jung S.Y., Tae G.L., et al (2005), "Fatty acid synthesis is a

target for antibacterial activity of unsaturated fatty acids", FEBS Letters,

579(23), pp 5157-5162

33 Bo K.Y., Joshua A.J., Elba R.V.G., et al (2018), "Antibacterial Free Fatty

Acids and Monoglycerides: Biological Activities, Experimental Testing, and

Therapeutic Applications", International Journal of Molecular Sciences,

19(4), pp 1114

34 Rohrer L., Winterhalter K., Eckert J., et al (1986), "Killing of Giardia

lamblia by human milk is mediated by unsaturated fatty acids",

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 30(2), pp 254-257

35 McGaw L.J., Jäger A.K and van Staden J (2002), "Antibacterial effects of

fatty acids and related compounds from plants", South African Journal of

Botany, 68(4), pp 417-423

36 Encyclopedia of Life (2020), Sanchezia oblonga Ruiz & Pav., National

Museum of Natural History, Smithsonian (US)

37 The Plant List (2020), Sanchezia, The Plant List 2013, KewScience (UK)

and Missouri Botanical Garden (US) and The New York Botanical Garden (US)

38 Farrington M., Brenwald N., Haines D., et al (1992), "Resistance to

desiccation and skin fatty acids in outbreak strains of methicillin-resistant

Staphylococcus aureus", Journal of Medical Microbiology, 36(1), pp 56-60

39 Mohammadjavad P., Yi L.W., Bushra A.M., et al (2013), "In vitro

anti-oxidant and anti-cancer activity of methanolic extract from Sanchezia

speciosa leaves", Pakistan Journal of Biological Sciences, 16(20), pp 1212-1215

40 ITIS Report (2020), Sanchezia oblonga Ruiz & Pav., The White House

Subcommittee on Biodiversity and Ecosystem Dynamics (US)

41 Mototada S., Yasukazy Y and Etsuo N (2014), "Unregulated Lipid

Peroxidation in Neurological Dysfunction", in R.W and D.M., editors,

42 Helioswliton S.C., Patrícia R.d.S., Bethânea C.P., et al (2013), "An

Overview of the Modulatory Effects of Oleic Acid in Health and Disease",

Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, 13(2), pp 201-210

43 Hazell S.L and Graham D.Y (1990), "Unsaturated fatty acids and viability

of Helicobacter (Campylobacter) pylori", Journal of Clinical Microbiology,

28(5), pp 1060-1061

44 Abu S.R., Shumaia P., Abdul K., et al (2015), "Preliminary phytochemical

screening and cytotoxic potentials from leaves of Sanchezia speciosa Hook

f", International Journal of Advances in Scientific Research 1(3), pp 145-150

45 Tropicos (2020), Sanchezia nobilis Hook., Missouri Botanical Garden (US)

46 Godofredo U.S.J (2015), Sanchezia, StuartXchange (PH)

47 Seidel V and Taylor P.W (2004), "In vitro activity of extracts and

constituents of Pelagonium against rapidly growing mycobacteria",

International Journal of Antimicrobial Agents, 23(6), pp 613-619

48 Loi V.D., Tung B.T., Ha V.H., et al (2016), "Phytochemical and

anti-inflammatory effect from the leaf of Sanchezia speciosa Leonard growing in

Vietnam", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 8(7), pp

309-315

49 Loi V.D., Xuan B.T and Ngoc T.M (2019), "Chemical constituents and

antacid activity of aquaeous extract of the leaves of Sanchezia nobilis

Hook.f from Vietnam", Research & Reviews: A Journal of Pharmacognosy,

6(2), pp 15-22

50 Loi V.D., Xuan B.T and Ngoc T.M (2019), "Chemical constituents and

anti-ulcer activity of ethylacetate extract of the leaves of Sanchezia nobilis

Hook.f.", Pharmacognosy Journal, 11(6), pp 1172-1180

51 Bo Y., Haiqin C., Catherine S., et al (2015), "Review of the roles of

conjugated linoleic acid in health and disease", Journal of Functional Foods,

15, pp 314-325

52 Huyền Linh (2019), Cây xăng sê chữa đau dày – Bài thuốc hay không

nên bỏ qua, Soytebackan (VN), truy cập ngày 9/3/2020, trang web

https://soytebackan.vn/cay-xang-se-chua-dau-da-day/

53 Võ Hoàng Yên (2019), Cây xăng sê chữa bệnh dày, lưu ý thuốc

chữa bệnh, Từ điển Cây thuốc (VN), truy cập ngày 9/3/2020, trang web

https://www.tudiencaythuoc.com/cay-xang-se/

54 BotanyVN (2020), Sanchezia nobilis Hook.f, Trung tâm Dữ liệu Thực vật

Việt Nam, truy cập ngày 8/6/2020, trang web

PHỤ LỤC

PHỤ LỤC PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH MẪU

PHỤ LỤC PHỔ MS, 1H− VÀ 13C−NMR, DEPT CỦA HỢP CHẤT S3

PHỤ LỤC PHỔ MS, 1H− VÀ 13C−NMR, DEPT CỦA HỢP CHẤT S4

0

.8

0

.9

1

.0

1

.1

1

.2

1

.3

1

.4

1

.5

1

.6

1

.7

1

.8

1

.9

2

.0

2

.1

2

.2

2

.3

2

.4

2

.5

0.866 0.880 0.894 1.257 1.602 1.617 1.632 1.647 1.662 2.328 2.344 2.358

3.00 24.84 2.09 2.07

S

3

-C

D

C

l

3

-1

2

8

.7

2

8

.8

2

8

.9

2

9

.0

2

9

.1

2

9

.2

2

9

.3

2

9

.4

2

9

.5

2

9

.6

2

9

.7

2

9

.8

2

9

.9

3

0

.0

3

0

.1

3

0

.2

3

0

.3

29.06 29.23 29.35 29.42 29.58 29.63 29.65 29.66 29.68

S

3

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

& D E P T S 3 -C D C l 3 -C 1 3 C P D D E P T 9 0 D E P T 1 3 5 C 1 3 C P D C H & C H 3 C H

2 21

-1 1 4 1 3 1 2 1 1 1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 p p

m -0.0000.875

1

.0

1

.5

2

.0

2

.5

3

.0

3

.5

4

.0

4

.5

5

.0

5

.5

6

.0

1.274 1.281 1.297 1.302 1.309 1.312 1.321 1.336 1.343 1.351 1.357 1.370 1.619 1.634 1.647 2.029 2.042 2.056 2.069 2.328 2.343 2.358 2.757 2.770 2.770 2.783 2.784 5.322 5.329 5.334 5.336 5.339 5.341 5.343 5.350 5.355 5.359 5.362 5.373 5.376 5.384 5.387 5.394

3.00 14.35 2.27 2.17 2.04 0.86 2.12

S

4

-C

D

C

l

3

-1

0

.8

0

.9

1

.0

1

.1

1

.2

1

.3

1

.4

1

.5

1

.6

1

.7

1

.8

1

.9

2

.0

2

.1

2

.2

2

.3

2

.4

2

.5

2

.6

2

.7

2

.8

2

.9

0.875 0.880 0.890 0.897 0.903 1.274 1.281 1.297 1.302 1.309 1.312 1.321 1.336 1.343 1.351 1.357 1.370 1.619 1.634 1.647 2.029 2.042 2.056 2.069 2.328 2.343 2.358 2.757 2.770 2.770 2.783 2.784

3.00 14.35 2.27 2.17 2.04 0.86

S

4

-C

D

C

l

3

-1

H

5

.3

5

.4

5

.5

p

p

m

5.334 5.336 5.339 5.341 5.343 5.350 5.355 5.359 5.362 5.373 5.376

1

9

0

1

8

0

1

7

0

1

6

0

1

5

0

1

4

0

1

3

0

1

2

0

1

1

0

1

0

0

9

0

8

0

7

0

6

0

5

0

4

0

3

0

2

0

1

0 14.03

22.55 24.66 25.63 27.17 27.20 29.02 29.06 29.12 29.33 29.57 31.52 33.97 76.75 77.00 77.25 127.91 128.07 130.01 130.21 179.57

S

4

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

1

2

5

1

2

6

1

2

7

1

2

8

1

2

9

1

3

0

1

3

1

1

3

2

1

3

3

1

3

4

127.91 128.07 130.01 130.21

S

4

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

1

4

1

5

1

6

1

7

1

8

1

9

2

0

2

1

2

2

2

3

2

4

2

5

2

6

2

7

2

8

2

9

3

0

3

1

3

2

3

3

3

4

3

5

3

6

3

7

14.03 22.55 24.66 25.63 27.17 27.20 29.02 29.06 29.12 29.33 29.57 31.52 33.97

S

4

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

& D E P T S 4 -C D C l 3 -C 1 3 C P D D E P T 9 0 D E P T 1 3 5 C 1 3 C P D C H & C H 3 C H

2 21

-1 1 4 1 3 1 2 1 1 1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 p p

m 0.8660.875

1

.0

1

.5

2

.0

2

.5

3

.0

3

.5

4

.0

4

.5

5

.0

5

.5

1.288 1.289 1.296 1.297 1.302 1.313 1.319 1.321 1.330 1.343 1.357 1.370 1.603 1.618 1.633 1.647 1.994 2.005 2.017 2.029 2.042 2.056 2.070 2.326 2.341 2.356 2.756 2.770 2.782 2.784 5.307 5.311 5.314 5.316 5.318 5.321 5.328 5.332 5.335 5.337 5.342 5.344 5.348 5.354 5.356 5.360 5.368 5.371 5.373

3.12 7.62 10.43 2.16 3.43 2.10 1.00 2.65

S

5

-C

D

C

l

3

-1

0

.9

1

.0

1

.1

1

.2

1

.3

1

.4

1

.5

1

.6

1

.7

1

.8

1

.9

2

.0

2

.1

2

.2

2

.3

2

.4

2

.5

2

.6

2

.7

2

.8

p 0.866

0.875 0.880 0.889 0.893 0.903 1.258 1.270 1.281 1.288 1.289 1.296 1.297 1.302 1.313 1.319 1.321 1.330 1.343 1.357 1.370 1.603 1.618 1.633 1.647 1.994 2.005 2.017 2.029 2.042 2.056 2.070 2.326 2.341 2.356 2.756 2.770 2.782 2.784

3.12 7.62 10.43 2.16 3.43 2.10 1.00

S

5

-C

D

C

l

3

-1

H

5

.4

5

.5

p

p

m 5.335

5.337 5.342 5.344 5.348 5.354 5.356 5.360 5.371

1

2

7

.5

1

2

8

.0

1

2

8

.5

1

2

9

.0

1

2

9

.5

1

3

0

.0

1

3

0

.5

1

3

1

.0

1

3

1

.5

p

127.91 128.07 129.70 129.99 130.18

S

5

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

1

5

1

6

1

7

1

8

1

9

2

0

2

1

2

2

2

3

2

4

2

5

2

6

2

7

2

8

2

9

3

0

3

1

3

2

3

3

3

4

3

5

22.56 22.67 24.65 25.63 27.15 27.17 27.20 29.02 29.06 29.13 29.23 29.31 29.34 29.42 29.52 29.58 29.63 29.67 29.76 31.52 31.90 31.92 34.08

S

5

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

2

7

.0

2

7

.5

2

8

.0

2

8

.5

2

9

.0

2

9

.5

3

0

.0

3

0

.5

3

1

.0

3

1

.5

3

2

.0

p

27.15 27.17 27.20 29.02 29.06 29.13 29.23 29.31 29.34 29.42 29.52 29.58 29.63 29.67 29.76 31.52 31.90 31.92

S

5

-C

D

C

l

3

-C

1

3

C

P

& D E P T S 5 -C D C l 3 -C 1 3 C P D D E P T 9 0 D E P T 1 3 5 C 1 3 C P D C H & C H 3 C H

2 21

https://soytebackan.vn/cay-xang-se-chua-dau-da-day/. https://www.tudiencaythuoc.com/cay-xang-se/. http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Sanchezia%20nobilis&list=species