Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng và thẩm định quy trình ớịnh lượng đồng thời một sổ acid amin có trong viên nang Doragon bằng phương pháp HPLC-PDA.. Đối tượng và phương phâp nghiên cứu:[r]
(1)NGHIÊN Cứu CHIÉT XUÁT CURCUMIN VÀ BÀO CHÉ PHYTOSOME CURCUMIN NHẰM TĂNG SINH KHẢ DỤNG TỪ c ủ NGHỆ
Phan Kê Sơn (Sinh viên D4, Khoa YDược, Đại học Quốc gia Hà Nội), Nguyễn Bích Hạnh (Sinh viên D4, Khoa Y Dược, Đ ại h ọ c Q uốc gia Hà Nọí), TS Bùi Thanh Tùng (Khoa Y D ược, Đ ại h ọ c Quốc g ia Hà Nội), PGS.TS Nguyễn Thanh Hal (Khoa Y Dược, Đ i họ c Quốc gia Hà Nội)
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Curcumin có nhiều tấc dụng sinh học đa dạng sinh khà dụng thấp nên chưa sử dụng nhiều phòng ngừa hỗ trự điều trị số bịnh.
Mục tiễu: Nghiên cứu phương pháp chiểt xuất curcumin bào chế phytosome curcumin nhằm tăng sinh khả dụng từ củ Nghệ.
Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Tiến hành chiết xuất curcumin từ củ Nghệ, sử dụng phương pháp sắc ký cột kết tinh Sư dụng phương pháp bào chế phytosome để tổng hợp phytosome curcumin từ curcumín được chiết từ củ Nghệ phospholipid với tỷ lệ khắc Đánh giá càc đặc tính cửa phức hợp phytosome curcumín tổng hợp dựa vào phương pháp phân tích quang phổ: đo phổ hồng ngoại IR phân tích quét nhiệt vi sai DSC.
Kết quả: Đã chiết xuất kết tinh curcumin có độ tinh khiết cao Phosome curcumin tổng hợp từ curcumin phospholipid, sau đảnh già đặc tính phức hợp tạo thành theo tỷ lệ 1:1 có hàm lượng curcumin cao (6 %) Trên phổ IR cùa phức hợp phytosome curcumin quan sát thấy đỉnh (peak) 3745.76 cm'1 chứng tỏ có hinh thành liên Hết hydro curcumin phospholipid Phổ DSC chó thấy đ n h cực tiểu 84.84°c đnh khác 397.38?c Đỉnh thu nhiệt 84.84 c chuyển động nhiệt đầu phân cực phospholipid gây ra, đ n h 397.33?c thay đỗi từ trạng thái gel sang lỏng cửa phytosome curcumin đầu hydrocarbon khống phân cực phospholipid bị nóng chảy.
Kết luận: Đã xây dựng quy trình chiết xuất curcumin có độ tinh khiết cao Tồng hợp thành công đánh giá phức hợp phytosome cúrcumin bào chế.
Từ khóa: Curcumin
SUMMARY
EXTRACTION CURCUMỈN AND PREPARING PHYTOSOME CURCUMIN FOR IMPROVE
BIOAVAiLABILITY OF CURCUMIN FROM TURMERIC
Phan Ke Sơn (Student D4, School of Medicine and Pharmacy, Vietnam National University, Ha Noi) Nguyen Bich Hanh (Student D4, School of Medicine and Pharmacy, Vietnam National University, Ha Noi) Bui Thanh Tung (PhD, School of Medicine and Pharmacy, Vietnam National University, Ha Noi)
Nguyen Thanh Hai (Assoc Prof School of Medicine and Pharmacy, Vietnam National University, Ha Noi)
Background: Curcumin has low bioavailability and therefore it has been limited in using for treatment o f some diseases This research aimed to study the extraction method and prepare phytosome curcumirĩ ỈO increase bioavailability o f curcumin from turmeric.
Materials and method: Extracting curcumin from turmeric using column chromatography and crystallization Synthesize phytosome curcumin from tumeric-extracted curcumin and phospholipid with different ratios Evaluating the characteristics o f the compound phytosome curcumin based on spectral analysis method: IR spectrometry and Differential scanning calorimetry.
Results: We successfully extracted and crystallized curcumin with high purity Phytosome curcumin was synthesized from curcumin and phospholipid The evaluating process showed that the characteristics o f the compound formed at the ratio o f 1: had the highest concentration ofcurcumin (6%) The peak at 3745.76 cm'1
was observed on the IR spectrum o f phytosome curcum ifi, demonstrating a hydrogen bond formation between
curcumin and phospholipid DSC spectrum showed a minimum peak in 84.8‘f c and another peak in 397.3Ổ°C Endothermic peak in 84.84°c due to thermal motion o f the first polarization phospholipids induced, peak in 397.38?c by change from gel to a liquid state o f Phytosome curcumin and head nonpolar hydrocarbon of phospholipid melted.
Conclusion: We have extracted curcumin with high purity We also synthesized and evaluated prepared phytosome curcumin complex.
Keyw ords: Curcumin, phospholipid, phytosome, phytosome curcumin.
ĐẶT VÂN ĐÈ VÀ MỤC TIÊU chế phẩm dược liệu [1], Curcumin sử dụng
CÙrcumin dẫn xuất từ nghệ, loại thảo mục đích phịng ngừa hỗ trự điều trị bẹnh khác dược có nguồn gốc Đơng Nam Á sử dụng rộng bao gồm đục thủy tinh thề, vểt thương, sỏỉ mật, rãi gia vị ăn địa dị ứng, viêm tụy, viêm loét dày, viêm ruọt, sốt, hội
(2)-chứng suy giảm miễn dịch mắc phải, bệnh vầy nến, bệnh Alzheimer, suy giốp, xơ nang, xơ vữa động mạch, nhồi máu tim, ioãng xương, bệnh phổi, sốt rét, viêm khớp, bệnh Leishmania, đái tháo đương, bệnh đa xơ cứng, bệnh động kỉnh, bệnh Parkinson bệnh ung thư [2] v ề mặt hóa học, curcumin diferuloylmethane, có hai vịng aryl với nhóm methoxý nhóm hydroxyl mơi vịng Tuy nhiên, curcumin mang đặc điểm dược động học như: hấp thu, chuyển hoá nhanh thai trừ khỏi thể nhanh nên sinh khả dụng thấp Phytosome công thưc chứng minh có tác dụng làm tăng hiệu điều trị số phân tử có sinh khả dụng thấp khả hấp thụ [3] Việt Nam, phytosome kỹ thuật bắt đầu nghiên cứu írên giới kể íừ năm 1980 VI vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm mục đích để chiết xuáí curcumin tổng hợp phức hợp đánh giá phytosome curcumin từ Nghệ
ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u Chiết curcum in từ Nghệ
Cân 500g nqhệ vàng, tán nhỏ sau chiết 5L methanol (X lan) Thu toàn dịch chiết đem quay Cao đặc thú có khối lượng 68g Phần cao đặc chiết phân đoạn iần íượt với n-hexene, EtOAc BuOH Phân đoan EtOAc thu (25 g) chạy sắc ký cột silicagei, với dung mơi n-Hexane- EtOAc (10:1 đến 0:1), íhu 10 phân đoạn, từ F1 đển F10 Phân đoạn F5 chấm TLC thấy vết, đem kết tỉnh, thu g Sau dùng HPLC kiểm tra có íhấy hợp chất curcumin, demethoxycurcumin bis- demethoxycurcumin
Phức hợp phyíosome curcumin (curucmin - phosphoiipid) tổng hợp nhờ phản ứng curcumin PEG - phospholipid tỉ lệ moi khác nhau: :1 ,1 :2 ,1 ; 4, mơi tỷ lệ lặp lặp íại hai lần Một lượng bộỉ curcurriin phospholipid cân cho vào COC có mỏ dung tích 100 ml, sau đổ thêm
30 ml dichloromethane Hỗn hợp nảy đun hồi lưu nhiệt độ không vượt 40°Ò Làm bay dung dịch thu để ioại bô dichloromethane thêm vào dung dịch 50 mi n - hexan Phức hợp
curucmin - phospholipid kết tủa đem iọc
iàm khơ chân khơng để thu phytosome curcumin íhơT Để loại bo dấu vết chất curcumin tự phospholipid, khoảng 500 mg bột thơ hịa tan acetone 2 sau lọc để thu phức hợp íinh khiết
Xác định hàm ỉipợng curcum in phức hợp
Đường chuẩn nồng độ curcumin Khoảng 100
mg bột curcuminoid hịa tan methanol bình định mức 25 ml Dung dịch pha loãng 500 - 1000 lần để xác định hấp thu bước sóng 425 nm quang phổ ùv Vi's.
Xác định hàm lượng curcumin phức hợp
Khoảng 30 mg phức hợp curcumirj - phospholipid hòa tan methanol binh định mức 25 ml Dung dịch pha loãng 10 lần đo độ hấp thụ dung* địch 425 nm quan sát quang phổ u v VIS
Đo quang phổ hồng ngoại IR
Trong nghiên cứu này, phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FITR) sử dụng để thu thạp phổ hồng ngoại curcumin, phosphoiipid phytosome curcumin tỉnh khiết tỷ lệ 1:1
Phân tích quét n hiệt vi sai DSC
Sừ dụng DSC cho phức hợp curcumin - phospholipid (1:1) thơ tinh khiết Các mẫu đậy kín đĩa nhơm đun nóng với tốc độ 10°c/phúí từ 0°c đến 800°c khí nitơ (60 mỉ/phút) Nhiệí độ khời đầu chuyển tiếp đỉnh cùa phức hợp thú đẩ xác định so sánh với giúp đỡ Metíler DSC 30S (Mettỉer Toledo, Mỹ)
Đánh giá độ hòa ỉan
Xác đĩnh độ hòa tan curcumin, phức hợp phytosome curcumin, hỗn hợp vật lý cùa cùrcumin va phospholipid cách thêm lượng dư mẫu vào 20 ml nước bỉnh thủy tinh kín nhiệt độ phịng Các mẫu lắc 24 h ly tâm 500Ỏ rpm 10 phút Đem dịch thu đo độ hấp thụ dung dịch 425 nm quan sát quang phồ UVVIS
KÊT QUÀ VÀ BÀN LUẬN
Đặc tính vật lý phức hợp curcumin -
pho sp h o lip id
Các phưc hợp thu sau sấy khô chân không giữ đĩa petri (Hỉnh 1) quan sát tính chất vật lý Mâu 1.1 1.2 phức hợp curcumin vá phospholipd với tỷ lệ 1:1, mẫu 2.1 2.2
là tỷ lệ 1: mẫu 3.1 3.2 1: Tất phức hợp có màu vàng cam, nhiên mẫu 1.1 1.2 mềm mượt bốn mẫu khác dính dẻo Điều mẫu 1.1 vả 1.2 có nhiều phospholipid
ao ao 210 »0 <0.0 ÍUÍI 58.3 _ KWS* _ _
■t oO- ny! ; - r , - f i »
(3)Đường chuần curcumin
Nồng độ curcumin (g/l)
Hình Các đặc tính vật lý phức hợp curcumin phospholipid tỷ lệ khác nhau.
Hình Đường chuẩn nồng độ curcumin
Hiệu suất trình tồng họp phytosome curcumin
Hiệu suất cùa tất trinh tổng hợp phytosome curcumin tính dựa cơng thức sau kết
\ /3< ị i * ì m U k A i i >4
quả trình bày bảng 1
H
Khối krcm g p h ứ c h ợ p thô
Khối l w n g p h ứ c h ợ p th ô _ Khỗi lư ợ n g p h ứ c h ọ p tinh k h ỉế t
Khối lượng curcunún T Khối lượng phosphoiipiđ' Khối lượng phức họp thô (đem tỉnh chê)
Bảng ■ Hiệu suết tổng trình tổng hợp phức hợp phytosome curcumỉn _ I Khối lượng I Khối lượng rZ T T T Khối ỉướna I Tinh chếDhứchơD Mẫu Khôi lượng curcumin
(C)(g)
Khối lượng phospho-Iipid
(P)(g)
Tỷ lệ moỉ
Khối lượng phức hợp
thô (g)
Tinh chễ Dhức hợp
Hiệu suấtíồng (w/w,%) Khối lượng phức
hợp thơ (q)
Khối lượng phức hợp tinh khiet(g)
1.1 0.404 2.804 1 1 2.808 0.500 0.468 81.93
1.2 0.421 2.802 !1 3.044 0.507 0.471 87.74
2.1 0.411 5.650 1 2 5.730 0,517 0.591 91.61
2.2 0.404 ■ 5.568 1 2 5.771 0.510 0.496 93.98
3.1 0.204 5.736 5.815 0.512 0.495 94.64 •
3.2 0.208 5.619 5.806 0.508 0.491 96.30
Khi lượng phospholipid phức hợp cao hiệu suất tồng hợp iớn, phức hợp curcumin - phosphoiỉpd với tỷ lệ 1:2 1:4 cao tỷ lệ 1:1 Do lượng phospholipid !ớn nen khả tương tác curcumin phosphol.ipd cao, nên dễ hình thành phức hợp Cũng co thể chưa loại bỏ hết phospholipid từ mau curcumin - phospholipd thô
Xác định hàm lượng cùa curcumin phức họp
Tiến hành xây dựng đường chuẩn nồng độ curcumiri
Hàm lượng curcumln phức hợp phytosome curcumin tính theo công thức:
(A- 0.061) X 0.025 < J
% cur cumin = — -— -X 100
7 X K h ô i h c ợ n £ p h ứ c h ợ p
%curcumin: hàm lượng curcumỉn phức hợp A: độ hấp thụ dung dịch curcumin,
f: hệ số pha ioãng
Bảng Hàm lượnq curcumin tronq phức hơp curcumin - phos ohoiipid
Mâu 1.1 1.2 2.1 2.2 3.1 3.2
Hàm lươnq Curcumin (%) 5.52 6.46 3.38 4.24 2.99 3.00
curcumin đạt 5.5 - 6.5 %) so với mẫu !ại (hàm lượng curcumin đạt - %)
Đo quang phổ hồng ngoại IR
(4)Curcumin
A.4 í
p t , !
ằ
1 "iip j
Ị&i- -(5* S
.âj| ị , ỉ
Phospholipid I 'tó i
i w II Ầ I
sl
Phytosome tinh khiết
Hình Phổ IR cùa curcumin, phospholipid phytosome tinh khiết
Phân tích quét nhiệt vi sai DSC
Hỉnh trình bày nhiệt ký DSC phức hợp phytosome curcumin thô vả íinh khiết Nhiệt ký phức hợp cho thấy đỉnh: đỉnh cực tiểu 84.84°c và đình khác 397.38°c Đĩnh thu nhiệt ’84.84°c do chuyền động nhiệt đầu phân cực phospholipid gây ra, đỉnh 397.38°c do thay đổi từ trạng thái ge! sang lỏng phytosome curcumin đầu hydrocarbon không phân cực cùa phospholipid bị nóng chảy
Phytosome thồ Phytosome tịnh khiết
A—a<Wnni> »
ấ ìa i» m ìL fiyi
- «
7 t
-Hỉnh Nhiệt ký DSC cùa phức hợp phytosme thô phytosome tinh khiết
Đánh giá độ hòa tan
Độ hòã tan nước curcumin, hỗn hợp vật lý cùa phospholipid curcumin phức hợp phytosome curcumin thể bảng
Bảng Độ hòa tan nước curcumin, hỗn hợp vật lý phospholipid curcumin phức hợp phytosome curcumin
Mẫu Độ hòa tan tronq nước (mq/ml)
Curcumin 0.008
Phức hợp phytosome curcumin 0.087
Hôn hợp vật lý phospholipid curcumin 0.017
(5)các tỷ lệ khác 1:1,1: , 1:4 Kết cho với tỷ lệ curcumin : phospholipid = 1:1 có hàm lượng curcumin phức hợp cao Phức hợp phytosomé curcumin làm cải thiện đáng kể độ hòa tan nước curcumin, tăng gấp khoảng 10 iần, làm tăng khả hấp thu curcumin đường tiêu hóa, có íiềm mang iại hiệu cao điều trị !âm sàng [3 ,4Ị
KẾT LUẬN
Đã chiết xuất kết tinh curcumỉn có độ tinh khiết cao Phytosome curcumỉn tồng hợp từ curcumin phospholipid với tỷ lệ 1:1 có hàm lượng curcumin cao (6 %) đánh giá tạo thành phức hợp phytosome curcumin dựa theo kết cua phổ IR phổ DSC
TÀI LIẾU THAM KHẢO
1 Chattopadhyay, ( Biswas, K Bandyopadhyay, u & Banerjee, R K 2004 Turmeric and curcumìn: biological actions and medicinal applications Curr Sci; 87,44-53.
2 Moorthi c , Kiran K, Manavalan R, Kathiresan K Preparation and characterization of curcumin-piperine dual drug loaded nanoparticles Asian Pac J Trop Biomed 2012;2:841-8.
3 Chutima Jantarat , Bioavailabiiity enhancement techniques of herbal medicine: a' case example of curcumin, International Journal o f Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 2012
4 Kunỉai Maiti, Kakali Mukherjee, Arunava Ganiait, Bishnu Pada Saha, Puiok K Mukherjee Curcumin- phospholipid complex: Preparation, therapeuticevaluation and pharmacokinetic study in rats International Journal
o f Pharmaceutics 330 (2007) 155-163.
XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ ACID AM IN TRONG VIÊN NANG DÓRAGON BẢNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO
Ths Trần Diễm Phúc, DS.CKỈ Nguyễn Thị Kim Ngọc (Trường Cao đẳng Y tế Đồng Tháp) TS Nguyễn T hị Ngọc Vân (Đ ại học Y D ược Can Thơ) PGS.TS Võ Thị Bạch Huệ (Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh) TĨM TẤT
Đặt vấn đề: Trên thị trường có nhiều dược phẩm có thành phần dịch chiết Địa long (như viên nang Doragon) dùng để cung cấp acid amin cần thiết cho thể Tuy nhiên, công tác kiềm nghiệm chế phẩm chỉ dừng lại mức định tính acid amin định lượng nitơ tồn phản nen cần xây dựng quy trình định lượng đồng thời acid amin.
Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng thẩm định quy trình ớịnh lượng đồng thời sổ acid amin có viên nang Doragon phương pháp HPLC-PDA.
Đối tượng phương phâp nghiên cứu:
Đối tượng: acid amin, nguyên liệu Địa long, viên Doragon, 03 chế phầm chứa Địa long.
Phương phấp nghiên cứu: khảo sát điều kiện chiết tách acid amin, điều kiện sắc ký HPLC để định lượng đồng thời acid amin có Địa long.
Kết quà: nghiên cứu xác định phương pháp chiết tách điều kiện sắc ký HPLC, xây dựng quy trình định lượng đồng thời acid amin alanin, prolin, valin, leucin, lysin, tyrosin.
Kết luận: nghiên cứu xây dựng thầm định quy trình định lượng ổ acid amir) có viên Doragon ứng dụng quy trình 03 mẫu nguyên liệu 03 mẫu thành phẩm khâc.
Từ khoa: Địa long
SUMMARY
METHOD DEVELOPMENT OF SIMUTANEOUS ESTIMATION OF SOME AMINO ACIDS IN DORAGON CAPSULES BY REVERSE PHASE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Tran Diem Phuc, Nguyen Thi Kim Ngoc (Dong Thap medical college) Nguyen Thi Ngoc Van (Can Tho University of Medicine and Pharmacy) Vo Thỉ Bach Hue (Ho Chi Minh City Medicine and Pharmacy University)
Introduction: The quality control o f pharmaceutical products which have Pheretima aspergillum extract in their ingredients (such as Doragon capsules) is ju st the work o f amino acids qualitation o r total nitrogen quantitation As a results, there is a need to develop a method for simultaneous estimation o f some amino acids, main pharmaceutical ingredient in Doragon capsules by PDA-HPLC method
Objectives: To develop and validate a HPLC method for simultaneous evaluation some amino acids in Doragon capsules.
Materials and methods:
Object: Pheretima aspergillum material, semi-finished products Ragon, Doragon capsules and some other products containing Pheretima aspergillum.