Trong nghiên cứu này, chúng toi đã tiến hành khảo sốt câc yếu tổ ảnh hưởng đến quy trình bán tổng hợp Troxerutin từ Rutin với tác nhân alkyl hóa là etylen-oxid để đưa ra qu[r]
(1)luận viên nén amoxicỉlin giải phóng kéo dài USP 36 lựa chọn công thức cuối Thành phần Cống thức vi cầu mẫu F13 cho ỊQOml dịch: _* _'
Amoxiciỉin trihydrat 5,0 gam HPMC K100M 0,1 qam
Aerosil 0,4 gam PEO 0,05 qam Natri alqinat 1,3 gam Nước vừa đủ 100 ml
Tiên hành nhỏ giọt hôn hợp vào:
Môi trường nhỏ giọt: dung dich calci clorid 10% phối hợp chitosan 0,1% Thời gian ngâm vi cầu: 15 phút
Nhiệt đô say: 45 C, sấy đến độ ẩm < 3%
“Can Helicobacter pylori Invade human gastric mucosa: an in vivo study using electron microscopy, immunohistochemical methods, and real-time polymerase chain reaction”, J Clin Gastroenterol, 44(6), pp 416-422
4 Nailasamy V., Ramanathan s (2012), "Role of novel drug delivery systems in stomach specific anti Helicobacter pylori therapy" Journal o f Phamarcy research, (2), pp 1165-1168.
5 Lin YH, Chung CK, Chen CT, Liang HF, Chen SC, Sung HW (2009), “ Development of pH-responsive chitosan/heparin nanoparticles for stomach-specific anti-Helicobacter pylon therapy", Biomaterials, 30, pp 3332-3342
6 Patroneiia CK, Vanek i, Bowen JC (1988), “in vivo measurement of gastric mucus pH in canines: effect of high luminal acidity and prostaglandin E2", Gastroentemlogy, 95(3), pp.612-618.
7 Turnberg LA, Ross IN (1984), “Studies of the pH gradient across gastric mucus”, Scand J Gastroenterol Suppl, 92, pp 48-50.
8 USp 36, pp 711-712
NGHIÊN CỨU BÁN TỎNG HỢP TROXERUTIN TỪ RUTIN Ở QUY MỘ PHÒNG THÍ NGHIỆM
Tác giả: Nguyễn Thị Hồng Anh (Khoa D ược - T rường Cao đẳng Y tế Thái Bình) Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Đinh Luyện (BM Công nghiệp d ợ c- Trường ĐH D ược Hà Nội)'
Ths Giang Thị Thu Hà (Phòng Đào tạo NCKH-Trư n g CĐ Y tế Thái Bình) TĨM TẮT
Troxemtin có ý nghĩa quan trọng điều trị suy tĩnh mạch mãn tính - bệnh lý nguy hiềm ngày trở nên phổ biến nước ta giới Troxemtin hỗn hợp dẫn xuất mtin hydroxỳéthyl hóa có chứa tối thiểu 80% trí-(hydroxyethyl) rutin, ngồi cịn có ơẫn xuất mono, bis, tetra-(hydroxyethyl) rutin Trong nghiên cứu này, chúng toi tiến hành khảo sốt câc yếu tổ ảnh hưởng đến quy trình bán tổng hợp Troxerutin từ Rutin với tác nhân alkyl hóa etylen-oxid để đưa quy trình bốn tổng hợp Troxerutin quỳ mồ phịng thí nghiệm Sản phẩm tổng hợp từ quy trình tiến hành kiểm nghiệm xác định tỉ lệ thành phần HPLC, khẳng định cẩu trúc hóa học phương pháp phổ, định lượng sản phẩm phương phốp đo quang Ket quà kiểm nghiệm cho thấy sản phầm từ quy trình cơ: hàm lượng troxerutin mẫu đạt 97,42 tính theo khối lượng làm khơ; tỉ lệ trì-(hydroxyethyl)-njtin: 97,25% đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 2010 Nhóm nghiên cứu h i vọng kết ban đầu để tiếp tục nghiên cứu triển khai quy mơ lớn để đưa vào sản xuất Troxerutin Việt Nam.
TừkhóaiTroxerin SUMMARY
THE SYNTHESIS OF TROXERUTIN FROM RUTIN IN A LABORATORY SCALE Author: Nguyen Thi Hoang Anh (Department of Pharmacy - Thai Binh medical college)
Associate Professor Nguyen Dinh Luyen (Pharmaceutical Department - Ha Noi university of Pharmacy); Master Giang Thi Thu Ha (Thai Binh medical college)
Troxerutin is a standard mixture o f hydroxyethylated rutin derivatives (Hydroxyethylrutosides are comprised of the mono-, dh, trì- and tetrahydroxyethyl derivatives o f rutin) which contains not less than 80.0 % of trihydroxyethylrutoside The purpose o f this paper consists on develop and detail a methodology used to produce Troxerutin from Rutin, that can be applied in a laboratory scale.
KẾT LUẬN
Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế vi cầu AMOX kết dính sinh học dày Việc kết hợp polyme KDSH gồm nairi aiginat 1,3% - HPMC K100M 0,1% - PEO 0,05% bao chitosan giúp cải thiện Khả KDSH (lực KDSH ỉn vitro đạt 0,17 N khả KDSH in vivo cao (írên 88% vi cầu bám dính dày sau giờ)) độ ổn định dược chất (cáo 1,21 lần so với AMOX nguyên liệu) môi trường dịch dày Mâu vi cầu bào chế ỉheo cơng thức lựa chọn cịn có khả kiểm sốt giải phóng dược chất Kéo dài (sau có 87,43% íượng dược chấỉ giải phóng)
TAI L1ẸU THAM KHẠO
1 Arora s., Bisen G., and Budhiraja R (2012), "Mucoadhesive and muco-peneỉrating delivery systems for eradication of Helicobacter pylori", Asian J Pharmaceutics, 6(1), vol.6, pp.18-30.
2 De Boer W.A and Tytgat G.N (2000), “Regular review: treatment of Helicobacter pylori infection", BMJ, 320(7226), pp 31-34
3 Ozbek A., Ozbek E „ Dursun H., et al (2010),
(2)-Troxerutin was synthesized by the reaction o f rutin with alkylated reagents such as ethylene oxide Determining the compositions o f the obtained mixture by HPLC showed that the principal peak (trjhydroxyethylrutoside) in the test solution's chromatogram is 97,25% The structure o f the main component: trihydroxyethylrutoside was confirmed by IR, MS, 1H-NMR, ™C-NMR spectroscopy The product obtained from the described process was analyzed, tested and certified The specifications indicated that it has reached the standard content required by BP 2010 We hope that the results o f this research will support an industrial production scale process in Viet Nam that could warrant the pharmaceutical grade specification o f the product,
according the iniemaiionai required standards. Keyw ords: Troxerutin
ĐẶT VÁN ĐỀ
Nghiên cứu triển khai tổng hợp hóa dược nhằm bước tự túc nguồn nguyên liệu phục vụ cho sản xuất thuốc nước mục tiêu ỉớn Chương trình trọng điểm cơng nghiệp hóa dược mà Thủ ỉũ-ơng phù phê duyệt
Troxerin có ý nghĩa quan trọng điều trị suy tĩnh mạch mãn tính - bệnh iý nguy hiềm ngày trở nên phỗ biến nước ta giới Việc bán tổng hợp troxerutin từ rutín thực nhiều quốc gia thể giới Anh" Mĩ, Trung Quoc, Nhật Bản
Troxerutin là-hỗn hợp dẫn xuất ruỉin hydroxyethyl hóa có chứa tối thiểu 80% tri-(hydroxyethyl) rin, ngồi cịn cỏ dẫn xuầt mono, bis, tetra-(hydroxyethyl) rutin
^ ^ O H
1 * "
H O
4 ' " H O O H
^ J ^ O C H j C H s O H H O H C H C ^ ^ ^ ^ ^ ^ 2J U ^ ; ^ J Ìặ'
O H o
5 “ o
4 " ' H O f O H
mono-(hydroxyethyl) rutin bis-(hydroxyethyl) rutin
O C H C H O H
H O H C H C O ^ L _ ^ - J J U '
Ỵ ^ Ỵ I P O C H C H O H
O H o \ - O
r 5" ® o
4 " ' H O ị Ỏ H
g ^ j t ^ j ^ O C H a C H z O H
H O H C H C O > - > - - - » J W
J l o c h c h o h " „ O H " sy 1°1h V o r ^ r - O H h o h c h c o ° ^ " * *
4 " ’ H O [ * O H
tri-(hydroxyethyí) rutin ỉetra -(hydroxyeihyl) rutin
troxerutin Việc sử dụng troxerutin cho sản xuất dược phẩm nước ià íừ nguồn nguyên liệu nhập khấu Trước nhu càu thực tế tình hình sản xuất dược phẩm nừớc, chúng tồi tiển hành nghiên cứu bán tổng hợp troxerutin từ rutin với mục tiêu:
1 Xây dựng quy trình bắn tổng hợp troxerutin từ rutin quy mơ phịng thí nghiệm. 2 Bẩn tổng hợp troxemtin đạt tiêu chuẩn hàm lượng theo dược điển Anh 2010. NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Nguyên liệu: rutin chiết xuất từ nụ hoa hòe (Sophora japonica.L - họ đậu (Fabaceae)) phân bố Thái Bìph - Việt Nam
- Hóa chất: Troxerutin đối chiếu -Trung Quốc (tri-(hydroxyethyl) rutin -82,47%); NaOH (Trung Quốc), Eíhyien oxyd (EO-Trung Quốc), MeOH (Merck), EtOH (Việt Nam)
- Phương pháp nghiên cứu:
+Bán ỉổng hợp troxerutỉn íừ rutirt phản ứng alkyl hóa với tốc nhân EO
+Xác định thành phần có ỉrong sản phẩm sắc kí lỏng hiệu caoí1ỉ máy HPLC Shimadzu SPD-M10AVP; Xác định cấu trúc sản phẩm phương pháp phân tích phổ: Phổ hồng ngoại ()R) ghi máy đo hồng ngoại biến đổi Fourier hiệu FTIR Impact - 410 phường pháp nén KBr; phổ khối iượng (MS) đo phương pháp ESI máy Agilent 6310 ion Trap MS; phổ cộng hưởng từ hạt nhân đo máy Bruker AM 500 FT-NMR Spectrometer
(3)THựC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ
1 Bán tồng hợp troxerutin từ rutin vớ i tác nhân alkyl hóa ethylen o x y d í2' 5j
O-rutinose
OH o
o N a O H + Ẩ,.,.\
O-rutinose OH ò
Cân 6,10 gam (10 mmol) rutỉn cho vào bỉnh cầu cổ, thêm vào 20 m! nước, khuấy tạo huyền phu sục khí N2 để đuổi hết khơng khí binh Sau cho vào hỗn hợp phản ứng 0,12 gam (3 mmol) NaOH nâng nhiệt độ khối phản ứng đến nhiệt độ khảo sát Sục từ íừ 2,44 lít khỉ EO (100 mmoi Eỏ) vào hỗn hợp phản ứng nhiệt độ khảo sát Thời gian sục khí EO vịng 6h
- Kết thúc phản ứng: Sau kết thúc thời gian sục khí (6h), iàm !ạnh khoi phản ứng nước đá
■í h r» a h  n h r v n n h ả n I'lin r t K ằ n n u r * l -iCiOA A Ấ n n U - c
lạnh 24 lọc để loại rutin chưa phản ứng Cất quay chân không dịch lọc áp suấỉ giảm thu cặn troxerutin thơ Hịa tan cặn troxerutin íhơ thu khoảng 80 mi methanol sơi iọc nóng để loạj muối vơ Dịch lọc (T) thu đem cất quay chân không hỗn hợp thu khoảng 40 ml, lọc lấy dung dịch, để kết tinh 48h ngăn mát tủ lạnh Sau tiến hành lọc thu lấy tinh thể, sấy khô °c thu đươc sản phẩm troxerutin
- Kếỉ khảo sốt phản ứng bán tổng hợp troxerutin vơi tác nhân alkyl hóa EO nhiệt đọ khác ỉrình bày bảng
stt Nhiệỉ độ (°C)
M sản phẩm
(gam)
Hiệu suất phản ứng
(%)
Tnc sản phẩm (°C)
1 65 2,74 36,93 147-149
2 70 3,92 52,83 162-164
3 75 5,80 78,17 169-170
4 80 5,82 78,44 168-169
5 90 5,79 78,03 168-170
stt Tỉ lệ EO/ rutin
msan
phẩm (g) phản ứng Hiệu suất (%)
T°nc sản phẩm (°C)
3/1 3,91 52,69 133-135
2 5/1 5,34 71,97 151-152
3 6/1 5,41 72,91 169-170
4 7/1 5,42 73,05 170-171
5 8/1 5,49 73,99 170-171
kiểm tra sản phầm phương pháp sắc ki lớp mỏng với hệ dung moi n-butanòl/methanol/nước (10/1/3) cho thấy khoảng nhiệt độ thực phản ứng tối ưu 75 - 80°c
- Tiếp tục tiến hành khảo sát ảnh hường tỉ lệ mol EO/rutin đến phản ứng bán tổng hợp troxerutin nhiệt khoảna nhieỉ đô 75-80 °c Ket trình nhiệt khoảng nhỉệỉ độ 75-80
bày bảng
Từ kết khảo sát trên, két hợp kiểm tra sản phẩm phương pháp sắc kí lớp mổng với hệ dung mơi n-butănol/methanol/nựớc (10/1/3), lựa chọn tĩ lệ mo! EO/rutin 7/1 đề thực phản ứng bán íồng hợp troxerỉn •
- Sau lựa chọn điều kiện tối ưu cho phản ứng tổng hợp troxerutin, tiến hành khảo sái số phương pháp tinh chế sản phẩm thô thu đươc để đề xuất phương pháp tinh chế toi ưu cho quy írlnh bán tổng hợp troxeruỉin với tác nhân alkyl hóa EO
- Thí nghiệm khảo sát phương pháp tinh chế tiến hành sau:
Cân 6,10 gam (10 mmoỉ) rutln cho vào bình cầu cồ, thêm vào 20 ml nước, khuấy tạo huyền phù sục khí N2 để đuồỉ hểỉ khơng khí bình Sau cho vào hỗn hợp phản ứna 0,12 gam (3 mmoi) NaOH nâng nhiệt độ khỗi phản ứng 75-80°C Sục dần vào khối phản ứng 1,71 lít (70 mmoi) khí EO Thời gian sục khí EO vòng 6h
- Kểt thúc phản ứng: Làm lạnh khối phản ứng nước đá, acid hóa dunp dịch thu HC110% đến pH = Sau đe lạnh 24 giờ, lọc hợp loại rutin chưa phản ứng thu dịch íọc, cất quay chân khơng kiệt Cắn troxerutin thơ íhu được hịa tan khoảng 80 ml methanol sơi ịọc nóng để loại muối vô thu dịch T \
+ PP1: Dịch iọc T cất quay chân không cho đến hỗn hợp thu khoảng 40 ml, để kêi tinh ngăn mát tủ lạnh Sau 24h, iọe thu lấy tinh ỉhể, sấy khô tủ sấy 70°c thu sản phẩm T1
+ p p 2: Dịch lọc T cất quay chân không cho đến hỗn hợp thu khoảng 40 mi, thêm khoảng 5-7 ml isopropanol, lọc nhanh thu lấy dung dịch, để kết tinh ngăn mát tủ iạnh Sau 24h, lọc thu láy tinh thể say khô irong tổ sấy 70°c thu sản phẩm T2
+ PP3: Dịch lọc T cất quay chân không đến kiệt thu đưực cặn troxerin thơ Hịa tan cặn khoảng 50 ml ethanoi nóng, lọc nhanh thu lầy dung dịch, rỗi đề kết tinh ngăn mát tủ lạnh 24h Lọc thu lấy tinh thể, sấy khô 70°c, thu sản phẩm T3
+ PP4: Dịch lọc T cất quay chân khơng thu đưực cặn íroxeruiin thơ; rửa cặn thồ irong ethyl acetat lần (mỗi lần 20 mỉ) Lọc lấy tủa, sấy khô 70°c thu sàn phẩm T4
- Các sản phẩm T1 - T4 tan tốt nước Tính chất sản phẩm Ihu đưực từ phương pháp tinh chế ỉrên thể bang
Bảng Tính chất sản pham (T1-T4) thu sau tinh chế
(4)-stt Chất Cảm quan Khối lượng
(9)
Tnc (°C)
Hiệu suất (%)
Ghi T1 Bột mịn, màu
vàng
5,42 170-171
73,05 1 2 Bột mịn, màu
vàng đậm
4,93 154-156
66,44 Dễ húí ầm •3 T'i Bột mịn, màu
vàng nâu
5,22 ■iKA. 156
70,35 T4 Bột min, màu
vàng nâu
6,84 150-152
92,18 Dế hút ầm Sản phắm T4 có khối ỉượng lớn nhầt khoảng nhiệt độ nóng chảỵ thấp, khơng phù hợp với nhiệt độ nóng chảy cua chất dự kiến T1 có khối lứợng lớn nhat chất lại khoảng nhiệt độ nóng chảy phù hợp với chất dự kiến Kểt hợp với việc kiểm tra phương pháp sắc kỉ lớp mỏng với hệ dung môi n-butanoi/methanol/nước (10/1/3), nhận thấy phương pháp phương pháp tinh che đơn giản cho sàn phẩm có tỉ ỉẹ chất tri(hydroxyethyl) rutin cao nhất, !ựa chọn ià phương phảp đế tỉnh chế sản phẩm
- Chọn T1 sản phẩm có chấí lượng tốt nhát chúng tơi íiến hành kểt tinh lại sản phẩm T1 methanol lần íhu sắn phẩm T5 Sản phẩm T5 (3,49 gam) ỉbu có dạng bột màu vàng sáng có nhiệt độ nóng chầy'180 - 181°Ò
2 Xác định ỉhành phần ịó sản phẩm - Sử dụng sắc kí lỏng hiệu cao để xác định có mặt tì lệ thành phan mono, bis, tri, tetra(hydroxyethyl)- ruỉin có sản phầm tổng hợp [1] Điều kiến sac kí: Pha động: Acetonitrll/ dung dịch natri dihydrophosphat 15,6 g/í, điều chỉnh pH 4,4 acid phosphoric lỗng (15/85) Cột: C18 (150 X 4,6 mm, 5|im) Detector: UV 350 nm.Tốc độ dịng: 0,5 mỉ/phút Thề tích tiêm: Mi- _
l> a c k n W rrẫ ũ ĩh T 5
Mâu T5 tỉ lệ tri(hydroxyethyi)rutin đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 2010
Bảng Kết chạy HPLC mẫu T5 HER: (hydroxy eíhyi) ruỉin
Mẫu Thời flian lưu (phút)
Tetra-HER
Mono-HER
Tri-HER B s~ HER Troxerutin đôi
chiếu
15,034 23,898 32,738 34,678
T5 15,148 32,908 34,670
Mâu Diện tích pic (tì íệ %)
T5 222459 19347338
{1,11%) (97,25%)
323817 (1,64%) 3 Xác định cẩu trúc sàn phẳm T5
FT-IR (KBr) V max (cm *1): 3474 (OH); 2920 (CH); 1651 (C=0), 1693, 1498, 1457, 1319, 1212, 1041 ESI- MS (m/z): 741,10 ([M-Hj').1H-NMR (500 MHz, DMSO- Ơố):õ (ppm) 12,50 (1H, s, OH-5); 7,84 (1H, br s, H-2’); 7,69 (1H, dd, > ,5 ; 8,5 Hz, H-6'); 7,12 (1H, d, > ,5 Hz, H-5); 6,72 (1H, d, J=2,0 Hz, H-8); 6,37 (1H, d, J=2,0 Hz, H-6); 5,42 (1H, d, j = 7,5 Hz, H -T ); 5,37 (1H, d, J=4,5 Hz, OH); 5,16 (1H, d, J=4,5 Hz, OH); 5,12 (ÍH , d, J= 5,5 Hz, OH); 4,96 (1H, ỉ, J= 5,5 Hz, OH); 4,92 (2H, q, J= 5,5 Hz, X OH); 4,52 (1H, d, j= 5,0 Hz.OH); 4,43 (1H, d, J= 4,0 Hz, OH); 4,40 (1H, br s, H- 1'” ); 4,39 (1H, d, J= 5,0 Hz, ÓH); 4,11 (4H, t, J= 5,0 Hz, CH2-A' + CH2-A” ); 4,05 (2H, m, CH2-A); 3,75 (7H, m, CH2-B' + CH2-Bi'+CH2-B + H-6” a); 3,32 (2H, m, H- 3” ’ + H-6” b); 3,23 (4H, m, H-2’” + H-3” + H-5” + 3.06 (2H, m, H-4” + H-4” ), 0,96 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 -6 ).1 C-NMR (125 MHz, CDCU): õ (ppm) 177,5 (C-4);
164,7 (C-7); 160,9 (C-5); 156,6 (C-9); 156,5 (C-2); 150,9 (C-4’); 147,6 (C-3'); 133,7 (C-3); 122,6 (C-1 ’); 122,4 (C-6’); 114,5 (C-2 ); 112,8 (C-5’); 105,1 (C-10); 101,3 (C-1 ”); 100,9 (C-1’ ); 98,4 (C-6); 92,9 (C-8); 76,4 (C-3”); 76,0 (C-5” ); 74,2 (Ó~2” >; 71,8 (C-4” ’); 70,6 (C- 3’”); 70,6 (C-2” '); 70,5 (C-4”), 70,4 (CH2-A’ + CH2-A” ), 70,2 (CH2-A); 68,3 (C-5m); 67,2 (C-6” ); 59,6 (CH2-B'), 59.6 (CH2-B”), 59,3 (CH2-B); 17,7 (CH3-6” ') _ Tư liệu IR, phổ MS, phổ NMR với gỉá trị tài liệu tham khẩoí5! cho phép khẳng định T5 tri(hydroxyíeíhyl) rutin
3 Định iượng sản phẩm
Bằng Kết qua định iipợng T5 _ T5
At5thử Atõ Ihử „ A t5 thử
0,4857 0,4969 0,5128
0,4859 0,4977 0,5127
0,4883 0,4977 0,5130
Aĩ5 trunq bình 0,4866 0,4974 0,5128
KLcân (q) 0,2102 0,2104 0,2199
A 'i 250
ĐPL 10000
Ám 4,01
T% 96,47 98,55 97,18
T% trung bình 97,42
Ghi chú: A: độ hấp thụ; T%: hàm lượng phần trăm; KL: khối lương
- Tiến hành[<]:Hòa tan khoảng 0,200g mẫu định iượng 100ml nước cẩt bình định mức 100 Pha loãng 10m! dung dịch với nước cất thành 100ml Tiep tục pha loãng 10ml cùa dung dịch thu với nước cất thành 100 ml.Tiến hành đo phổ hấp thụ tử ngoại Ả 350 nm.So sánh với giá trị A i1 = 250 Mồi mẫu thử làm lần lấy giá trị trung bình Kết trình bày bảng
Kết quả: hàm lượng troxerutin mẫu T5 (97,42%) tính theo khối lượng làm khô nằm tiêu chuắn cho phép (95 - 105%) Dược điển Anh 201 (X
BÀN LUẬN
(5)dần tính nucleophỉn, giảm dần khả thế: 7> 4’> 3'> Do đỏ sản phẩm tạo thành ỉa dẫn chất hỗn hợp dẫn chất sau: 7-mono-0-(P- hydroxyethyl)-ruíin; 7,4'-bis-0-(p-hydroxyethyi)-ruíin; 7, 4’,3‘-triS'0-(P-hydroxyethyl)-rutin; 7,4',3’,5-tetra-O- (13-hydroxyethyl)- rutỉn Hỗn hợp với tĩ lệ thành phần khác cỏ nhiệt độ nóng chảy khác khoảng nhiệt độ nóng chày Tà: 156 - 181°c Kểỉ khảo sáí sơ sắc kí lớp mỏng cho thấy hợp có khoảng t°nc gần với í°nc tri- (hydroxyethyl)-ruỉin (181°C) có tl lệ dẫn chất cáo
- Phan ứng bán íổng hợp ỉhực môi trường N2vi rutin cỏ chưa nhóm -ỊM phenol nên dễ bị oxy hóa Sự có mặt khối phản ứng với kiềm nhiệt độ cao có íhể dẫn đến phản ứng phân hủy, chuyển hóa rin tạo nhiều tạp
- Nhiệt độ phản ứng tối ưu nhấỉ 75 - 80°c
nhiệt độ thấp ưu tiên tạo dẫn chát mono(hydroxylethyl) rutỉn, nhiệt độ cao cỏ thể tạo tetra (hydroxylethyl) rutin thủy phân sản phẩm
- Tỉ lệ moi tác nhân alkyi hóa/ruỉin: Với tác nhân EO, phản ứng bán ỉổng hợp ỉroxeruíin ià dị pha nên tỉ lệ mol tham gia phàn ứng cao so với tì iệ lý thuyết (3/1) có tượng thất tác nhân phản ứng Chúng tơi tiến hành khảo sát tì lệ mol tác nhânI kyl hóa/ ruíin, kết khâo sát cho thấy tỉ lệ EO/rutin tối ưu 7/1 (HS tạo sản phấm=73,05%)
về xấc định thành phần hỗn họp sản phẩm bằng HPLC: Kết chạy sắc kí đồ cua mẫu T5(EO) cho thấy cỏ tương đồng thời gian iưu cùa pỉc mẫu thử với thời gian iưu pic mẫu đối chiếu; sắc kí đồ T5 khơng co xuất pic mono(hydroxyeihyl)rutin Mâu T5 thành phần tri(hydroxyethyl)ruíosid chiếm 97,25%, kết chò thấy sàn phẩm tồng hợp từ quy trình đạt tiêu chuẩn tỉ lệ thành phấn theo Dược điển Anh 2010
vể xác đ ịnh cấu trúc sản phẩm chính: Kết hợp
các liệu phổ IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, COSY, HSQC, HMBC, so sánh với tài liệu tham khảo cho phép xác định chất T5 2-[3,4-bis(2- hydroxyethoxy) phenyl]-5-hydroxy-7-(2-hydroxyethoxy)-4-oxo-4H-chromen-3-yi 6-0-(6-deoxy- (3-D-mannopyranosyl) -p-D-glucopyranoside
v ể xác định hàm lư ợ n g tro xe ru tin : Hàm ỉượng troxerutin có mẫu thư T5 xác định theo phương pháp đo quang phổ hấp íhụ tử ngoại bước sóng 350 nm [1|,Kết qua đo tổng hợp bảng cho thấy sản phẩm T5 có hấm lượng troxeruĩn tính theo chế phầm làm khô nằm tiêu chuẩn cho phép (95 -105% ) Dược điển Anh 2010
KẾT LUẬN
Chúng tổi xây dựng quy trình bán tổng hợp troxerutin từ rutin quy mơ phịng thí nghiệm thu sản phẩm từ quy trinh đạỉ tiêu chuẩn hàm lượng theo BP 2010: hàm lượng troxerutin mẫu T5 (97,42%) tính theo khối lượng làm khơ; tỉ lệ tri-(hýdroxyethyl)-rutin: 97,25% đạt íiêu chuẩn hàm iượng theo Dược điển Anh 2010
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 British Pharmacopoeia (2010), vo! 2, p 2169 De Carvalho Levy Rebelo F éỉ a! (2005), “The production of tri - hydroxyethylrutin (troxerutỉn) in a pilot plant", 2nd Mercosur Congress on Chemical Engineering, p.1-9.
3 Estanove c et al (2005), “Troxerutin with a high content of trihydroxyethylruioside and process for its preparation”, u s 6,855,697 B1
4 Frantisek Czech et al (1982), “Mixture of O- hydroxyethylated rutin derivative”, c s , 225440
5 Jian-Dong Xu et (2013), "Synthesis and antioxidant activities of flavonoids derivative, troxerutin and S’^ ’J-triacetoethoxyquercetin", Chinese Chemical Letters, 24, p 223-226.
6 Stevens A et al (1958), “A tri- (Hydroxyethyi) Ether of rutin and process for the production thereof, GB, 833174
NGHIÊN c ứ u CẢI TIẾN PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI CHẤT TẠO NGỌT SACCARIN, ASPARTAM VA CHẤT BAO QUAN
ACID BENZOIC, ACID SORBIC TRONG THỰC PHẨM
ThS Nguyên Thị Hồng Thúy1, TS Trần Quang Cảnh1, PGS TS Tạ Thị Thảo2
1 Trường Đ ại học Kỹ thuật Y tế Hài Dương 2 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nộị
TÓM TẮT
Nghiên cứu thực với mục đích cải tiến phương pháp xác định đồng thời chắt tạo nhấn tạo (saccarin, aspartam) chết bảo quản (acid benzoic, acid sorbic) thực phẩm hệ thống HPLC Các chất phân tích chiết khỏi màu MeOH nước qua quâ trình rung siêu âm, tiep định lượng hệ thống HPLC với bước sóng 210 nm cho saccharin, aspartam, 226 nm cho acid benzoic 254 nm cho acíd sorbic; cột tảch C18 (250mm X 4,6 nm X 5ụm); pha động gồm ACN KH2P tuân theo chế độ gradient Kết quả cho thấy: giới hạn phát saccharin 0,623-1,38ppm, aspartam 5,71-18,5pmm, acid benzoic 3,04-3,72pmm và acid sorbic 0,740-6,440pmm Hiệu suất thu hồi 91,4% -104,2% , độ lệch chuẩn tương đối < 5,61% Những kết phù hợp với AOẢC.