Kcl tinh I.II quercetin trong hồn hợp etanol-nước... Phân đoạn tiếp theo (toluen-axeton.. Kliim 1’rir.[r]
(1)ĐẠI HỌC Q U Ố C GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *
T Ê N Đ Ê TÀI
G Ó P P H Ẩ N N G H I Ê N c ứ u H O Ả H Ọ C C Ắ C H Ọ P C H Ả I P H E N O L T Ừ M Ộ T s ỏ C Â Y T H I ( X V I Ệ T N A M
MẢ s ố : Q T 0 - 2
N" DTU0<3
CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI :
TS N ( ỉ l V Ẻ N V A N Đ Ạ I
(2)T Ê N Đ Ể TÀI
GÓP PHẦN NGHIÊN c ú u HOẢ HỌC CÁC HỢP CHẤT PHENOL TỪ MỘT s ổ CÂY TH UỐC VIỆT NAM
MÃ S ố : Ọ T 0 - 2
C H Ú TRÌ Đ Ề TÀI : TS \ < ; i Y K \ Y A \ Đ Ậ l
C Á N BỘ PHỐI HÓP:
(3)1 BÁO CÁO TÓM TẮT ĐỂ TÀI
a TÊN ĐỂ TÀI:
GÓP PHẦN NGHIÊN CỬI HOA HỌC CÁC HỢP CHAT PHENOL T MỘT SỐ CẢYTHVỐC MỆT NAM
MẢ SỐ: Q T 00-12
b CHU TRI ĐE TAI : TS NiỊiivễn vãn Dạn
c c AN BỌ THAM GIA: c N NiỊitxcn Đúhìị Kliiícni>
d MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN d ì
(l.l Gi ('rí tliiện (ỉẽ tài
Các hợp chái phenol có mặt phổ bién Ihc Chúng co hoạt linh kháng khuán kháng viêm, chóng dị ứng loại cát’ goc tự (lo kim hãm sư phát triCn ung tlnr khôi 11 Nu câv hoa hoè (Sopliora ị(ip<>nii (1 L ho ( a n h bướm I iih(H cac) dã iltrơc nhân dân sử dụng từ láu loại vitamin p có lác (lung tang cưíttm sức chui ilưim mao mạch đieu trị chứng hệnh cao huvót áp làm Iliuóc cám máu Ironi! cúc honh ho máu tiêu tiện huyết
Kháo sát thành phấn hoá học cùa hoa hoè cho thãv IU) chưa nhicu ciic Havonoit rulin chiêm hàm lượiiii lớn Do viõc nghicii cứu phần hố học phân lích chúng có V nghĩa ca khoa học tlnrc tô
(1.2 Mục tiêu cua ilớ lủi
(a) Phân lập phán tích rutin
(h) Phàn tích phân lập llavonoKÌ khác có nụ hoa h (c) Thừ sỏ hoạt lính sinh học cùa chai phan lap
d.3 N ộ i (huii> nạlìiên cứu
(a) N o h i e n cứu môt qui trình đơn gian dê phân láp rutin - thành phán ch inh cua nu hoa hoè
(h) Nghiên cứu điều kiện phàn tích phán láp flavonoit khác (aglvcon o |v c o / i n có tron2 nu hoa h băng phương pháp sãc kí cột
(c) Điều chế quercetm lừ mun
(ti) Dinh lương rutm hang phương pháp HPLC
( d í Nhàn dang Aavonoit phân lập ilirợc hang phương phap SKLM so sánh với mầu chuan
(4)CÁC KẾT QUA DAT Đ ợ c
'./ C ác kết quà khoa học đ ã dạt dược:
(a) Đã thực qui trinh chiết rutin từ hoa hòe đé xác đinh qui trinh thích hơp hiệu suất thu rutin dẻ dàng tinh chẽ
(b) Đã điều chếquercetin hãng thuý phân rutin
(c) Đã phán tích háng SKLM hỗn hơp ílavonoid sau loai rutin (d) Đã phán tích hỗn hơp ílavonoid hăng phuơnc pháp HPLC
(e) Phán lập hai flavonoid hãng phương pháp săc kí CỘI
(f) Nghiên cứu phổ hổng ngoại phổ tư ngoại xác định cáu tạo cua flavonoid phán tách
(g) Đã thứ hoạt tính kháng khuân kháng ung thư cua quercetin ?.2 Sán phẩm khoa học (tã hồn thành
Đã đăng báo “Đóng góp vào việc nghiên cứu llavonoui MU hoa liòc [Sophtiui ịaponica L.) Tạp chí Dược học No X ! 3-14 <2001 I
e.3 Kết q u tạo
Cử nhân: Nguyền Đãng Khương
f TÌNH HÌNH KINH PHÍ CĨ A ĐH TAI
(a) Kinh phí hỗ trợ t h o dế tài là: 7.000.000 tl
(b) Kinh plií Cịuvơt tốn cho các khoitn chi Siiu:
th nhân cơng
Mua hố chái clụiiii cụ thí nghióm Mua mầu \ cơng tác phí
Ghi phổ thú hoạt tính sinh học
Các chi phí khác (văn phịng, nghiệm thu tìm tài liệu_>
XÁC NHẬN CỦA BAN CHỦ NHIỆM KHOA HOA CHI TRI ĐE TAI
(5)2 S U M M A R Y O F T H E P R O J E C T A THE PROJECT T1TLE
THE CONTRỈBVTỈON TO THE CHEMICAL ISVESTIGATIOS OF
PHENOL/C COMPOLỈNDS FROM SOMEVIETSAM Ml.DICI\Al r i A M S
B PROJECT LEADER Dr N guyễn Văn Đậu c PARTICIPANT
BS N guyễn Đăng Khương
D OBJECTIVES AND DESCRIPTION F THE PROJ[-;CI
(l.l Introihu lion
T h e p h e n o l i c c o m p o u n d s OCX'UI' c o m m o n l v III the inccliciii.ll plants T h c v po s sc ss a variety ol hioactivities such as anlihactcrial anti-inllammatorv anh-allcrgK Ircc-r;idIC;iI scavenge, tumor and canccr mhibition Thc buils ol Sopliora Itiponua I (I.imih i u b a c e a e ) has long been Iised III the lolkloric međicinc as a Mianiin l’l \ posscsMHỊỉ s p as m o l y t i c and coronary vasodilatorv e l l e ct s III tho Iivatmont o! hvỊXMtensinn; tiscd ;is remedies for trealmeni of somc discascs mvolvinn \Mth hloctiilìii_
C he mi cal investigation ot Sophora ịaponica buds slunvcil that Il conliims a numbe r o f Aavonoids among \vhich rutin IS lĩi eonsidcruble umoimis The c h e m i u i l siikh in depth on Sophora ịapoiiica. thcrclorc \vill have both scientIfic and practical s i g n ií ic a nc e
(1.2 Pvoịect obịectives
(a) Isolation and quantitative detcrmmation ol rutin
(h) Determination and soparation ol llavonoids Irom Sophora ịaponu a huđs (c) Bioactive assavs III viíro for antibmicrobial and antitucanceous activitvilies
d.3 Description <>f the proịect
(a) D e v e l o p m e n t oí the simple procednrc tor isolation ol rutm- the main constituent o f Sophorư ịíipoiiim buds
(h) StudÝ on mcthods for scparation ol others llavonoids (a gl yc ons g l y c o s i d e s ) hcing present in Sophoru ịiiponicu huils hy mcans ()f co lumn chmma togra ph)
(6)(d) Quantitative determination of rutin hy HPLC
(e) Identification of separated ílavonoids b\ means of spectroscopN and TLC
comparison vvith authentic samplcs
(f) Bioassay of quercetin for antimicrobial and anticanceous acúviúes
RESULTS
/ Scientific results
(a) Three procedures for rutin isolation from Sophora ịuponicd buds \vere devclopod in ordcr to find the best onc in terms of yicld and simplicity for puriticaúon
(h) Preparation of quercetin \vas donc hy hydrolylis of rutin
(c) Composition of thc residuc aftcr thc rutin removal \vas examincđ hy TLC (d) Mixturc of ílavonoids \vas cxamincd b\ HPLC
(e) Tvvo ílavonoids \vere isolaled b\ mcans of c c
(f) Study on UV- and IR spcctroscop\ and idcntilication ol thc isolatcs (g) Bioassav of qucrcctin lor antimicrobial and anticanccous acliMlics
2 Scientiịic \\'(>rk
A p a p e r : “ C o n l r i b u t i o n t o t h e s t u d y C)I1 H a v o n o u l s I r o m S c p h c i d l a p o i in ii I b i u l s
w as publishcd in thc ịournal PhanmH x. NoS 13-14 ( 0 11 3 E d u c a tio tìíil rcsnlt
(7)NỘI DƯNG BÁO CÁO
1 Lời I11Ớ đ a u Nội d u n g đe tài
2.1 K háo sút điéu kiện chiết nitin
2.1.1 Các phương án chiết rutin từ nu hoa hoa hoè 2.1.2 Nhặn biết rutin phán lập
2.2 Xúc định Iiứ/HIỊ rniin bàn phư<fni> pháp lìPỈẲ
2.2.1 Điều kiện phân tích HPLC 2.2.2 Xây dựng thị chn
2.2.3 Qui trình phân lích định lượng rutin nu hoa hoa hoè
2.3 Điêu chê quercetin
2 N ị ị h i ê n cứu cức ( l a v o n o i i k i n h c ó t r o n g n ụ l i o a hoi
2.4.1 Chiết “tổng llavonoit" 2.4.2 Phân lập nhận dạng ĩlavonoii
2.5 K h o s ú t h o i l i n l i k l i i t Ị ’ v i s i n l i v ụ t v ù Ị i ã y i l ộ c l e h o c í n i (/ II(T< (
3 Ket lu ận
(8)1 Lời mớ đáu
k ' k ru** ca^ í UOC ^ arn đóng vai trị to lớn chăm sóc sức khoe diều trị r ^ n h uns chiem ti lớn thuốc sứ dung Viét Nam ac Ợp chat phenol phân bỏ phổ biên cãv thuóc Chúns cỏ hoạt tính khanti
kh a n ễ viêm, chong dị ứng loại gốc tư kìm hãm phai tim une lỉur OI u, Nụ cay hoa h (Sophora ịapoiìica L họ Cánh hirớm Fabací\H’) dã nhàn dan sư dụng từ láu loại vitamin p có tác dụng tăng cường sức chiu dưng cua mao mạch điẽu tri chứng bệnh cao huyết áp làm th u ố c cám máu tron SI bệnh h o máu, tiêu tiện huyết /1/
Khao sát thành phần hoá học cãv hoa hoè cho thây Aavonoit phó biên: 14 ílavonoit phát có hoa I I tlavonoit- qua n.ivoiioit- trone rutin luồn chiếm ưu thê : nụ hoa đèn 28r r lá- 5.7r r rễ thăn cây- 0.2r f lượng khô /2/
ơ Việt Nam nghiên cứu hoá học hoa hoè láp trunc chu võu vào việc phàn lập rutin, mà không ý đến llavonoit sinh hoc khác
Đê tài này, Do khơng góp phan vào việc nshièn cứu hán vé thành phân hố học nụ hoa hịe Việt Nam mà cu nu cáp nhĩrns thõntĩ ti II bo ích vị hoại tính c ú a f l a v o n o i t t ạo c s c h o ứng d u n g vào m u c đích \ hoe phục MI b a o vó sức Hioé người
2 Nội d u n g de tài
2.1 K h ảo sát điéu kieiì chiet riitin
Hoa hoè chứa lượng lớn llavonoii nlm rulm lịucicetm isoiluimncim kaempferol sophoricozil /3/ Trong rutm thành phân chinh, ilac hiọt có hàm lượng cao nụ hoa giao dộng khoang 15-30'’í /I/ Sự phân láp ruim tinh kli đe điều c h ế thuốc thực theo C|III trình khác Tu\ nhiên việc ticn hanh nghiên cứu so sánh qui trình dã hiét dó tư xâv dirnu nên C|LII trình phân l ậ p rutin đ ơn g iả n c ó hiệu suál kh d ê tinh c c ó mộ t V nsihĩa rãl q u a n trontỉ
2.1.1 C ác phương ÚI1 chiết nitiiì lừ nụ hoa hoa hoè
Nụ hoa hoè (mua phơ Lãn One Hà nói tháng 3/2000) dirực sá\ khó Õ0"C) xay thành bột mịn Qui trình chiết ctirơc tiến hành theo phương án:
( a ) Bỏ t h o a h o è ( ° ) đ ợ c c hi ết b ă ng c c h đun hói lưu VỚI c t a n o l ' c lãn m ỏ i lãn
2 Gộp dịch chiết cất loại bứt etanol áp suãt giam, sau dó tinh chõ sơ bỏ dich cô bầng cách chiết \ái dictyl ete (3 lán) đe loại tap chát d o r o p t ụ l sterol lipit Dịch cò ctanol-nirớc "lữ tu lanh, cho rutin két tua màu v àn ‘’ Loc rutin thỏ kết tinh lại metanol-nước
( h ) Bot h e n h o è ( *’ ) đirợc chiói h ă ng c c h CỈLII1 hói kru VỚI d u n g d ị c h C a ( C ) H ) : h ã o
hoa Hn moi lán - gKt Gộp dịch cliK-1 axit hoa vcVi MCI 15'; liên pll=5-6 Dich chiet ‘Uĩr tu lanh, cho rutin kẽt tua màu vàng Loe rutm thó \ a kõt tinh lại metanol-nướe
(9)oa hoe (10 g) chiêt cách đun hổi lưu với etanol r f có mặt cua ung dịch KOH lán mói lán Góp dịch chiết cất loại bớt etanol ap suat giam, sau tinh chê sơ bỏ dịch cỏ bàng cách chiết VỚI dietvl ete (3 lán) dô loại cac tạp chát clorophvl, sterol lipit Dịch có, sau axil hoá VỚI
HC1 15% đên pH=5-6 giữ tu lanh, cho rutin kêi tua màu vàng Lọc rutin tho két tinh lại metanol-nước
Kct qua cua phương án chiẻt đươc ch báng sauc
Phương án a Phương án l> Phương án c
lơg hột nu hoa hoè 1.59 g 1.24 g 1.97 g
% tronp lương khô f/r r r r f
R f cúa rutin dm 0.82 0.76 - 0.82 0.80 - 0.82
2.1.2 N hận biết ruliiì phán lập
Pltủii lích SUI kx lớp móm> ( S K L M )
Rutin thu từ phương án trơn dược phân lích hãng phươiiì! pháp SK1.M trõ 11 silica gel hệ dung mói I etylaxetal-axit ĩocmic-metal (7:1:1 v/v) so sánh VỚI mím
c h u ẩ n R u t i n phát q u a n g m u nâu s ẫ m dưới ánh s n g tư n go i ( n ni ) c ò n kin phi m VỚI
dung dịch 1% vanilin axil ll.SOị sau dỏ hơ 1101112 cho I11ĨI \ƠI màu vàng sầm
Kết khao sát cho thấy rutin lim từ plurơnt: án chiól (c) cho hicii siiãi mím cao nhát, có độ tinh khiết sovới plunmtỉ án chict la)
P lu in ứII (lịnli tín h rIIIin
Khi đun nóng \’ới hổn hợp Mg+IICl troiiii mctanol lUtm tham gia phiin ưnu xianidin chuyển dung dịch từ màu vàng nhạt sang chứng lo tláv dãn \iuil Havonol
Rutin cho vệt màu xanh sảm trôn SKLM phun với dung dịch y< l cCl tạo thành phức ĩenolat săl (III)
QíianíỊ phơ hấp phụ
Phổ hổn° n°oại (cm 1) cua rutin có dai hàp thu cua nhóm hiđroxy -Oll (3428) nhóm cacbonyl > 0 liên hợp cua khung chroman (1656) võng hcn/en thó ( 9 , )
Phổ tứ no oại (nm) cua rutin có cực đai háp thu 256.S (dai II) 357 (dai I)
đặc trưng cho ílavonol
Tri sò đinh cực đại cường độ hãp thu hình dang cua ur ngoai tương tư phổ tư ngoại chuàn cua rutin /4
(10)Ma Yangmin thòng háo sư xác định rutin phưitne pháp HPLC trôn cột MicroBondapak RP-18 10 |im /5/ Chúng tói thưc phân tích rutin trơn thiẽt bị HPLC (ME RCK & HITACHI) với L-600 Pump L-4000 u v Detecior: tiền cột Hibar' RT-250-4 nối với cột Lichrosorb' RP-18 10 um 250 X 111111 I D (MERCK); pha động: CH,C>H/0,4% CH,COOH (60:40 v/v: Chromanorm™ pour CLHP Prolaho); detector hước sóng 254 nm; tích bơm mẫu: 20f.ll; tóc dịng: 1.0 ml/phút: nhicl dó 20-23 C; độ nhạy 0.05 a.u.í.s tốc dộ giâv mm/phút
2.2.2 Xúy dựng đồ thi chuẩn
Rutin két tinh lại mctanol luyột đỏi cho tinh thó hình kim màu vàng nhat, đnc 196-198"c (UV: / McOH256 vù ^ niir IR m <1X 16S6 1599 1504 cm ')
P h a c c d u n g dị c h c h uá n chứa h m l ợ n s rutin l 1.0 Ị.12 đôn 10.0 LIii/2(\n bơ m mầu đạt pic đong đêu vê chiều cao trôn sac ki đỏ Các iliịn lích pic 1/2(DTP) tính tốn giá In UIIIIÍI hình cua chúng chriK' hicu diễn hang (lo Ihi phụ thuộc vào nồng độ rutin Sư dụng chương trình Staeraphies phương trình hói qui tun tính có dạng:
V = 3, Ố69 \ - 1 , 3 6 ( r = 9 )
trong đó: X- 1/2 DTP lương ứiiỉỉ cịn V- la Iiõim dó ruiin ( Ịiií/2()Ị.il).
Đồ thị luvến tính: Y = A + B * X sau
2H ■
—Ị - -T T ’ I ■ T * I -
05 10 15 20 25 30 35
X axis title
(11)Thống số Giá trị
Sai số
A -1.33565
0.08686
B 3.66858 0.04565
R SD N p
0.99961 0.10042 7 <0.000]
2.2.3 Qui ti ình phân tích cíịnlì lượng rutin nụ hoa lioa hoè
5,0 g nụ hoa hoè khơ xay nhó chiết Soxhlet với etanol 96r( cho đôn kin nhạt mau Etanol loại áp suảt giam cân khó hoa tan 5.0 1111
metanol Dung dich lọc qua hộ lọc Milliporc dượt phàn lieh IIIMẨ' Iihióu lan dươi cac điêu kiện nêu de laV giá trị trung hình Việc xác định hàm lượnc dược dựa vào phương trình hồi qui xác lập trơn
Diện tích pic rutin sắc kí đổ 182 m n r ứng V Ớ I hàm lương rutin 5.34 |.ig/2()Ị.il
Hàm lượng rutin tính theo lượng mẫu hoa hoò khỏ sau:
% Rutin = 5.34 ng X (5000 ul/2()f.il) X ( l(K)g/5g) = 26.7
2.3 Điều chếíỊuercetin
Rutin thuv phân hãng cách (lun hối lưu vói (lung ilich I MCI Iroim thơi 'JI.U1 giờ, cho quercetin két lúa màu vàng (> ilạna lmli.ll !ZIỮ lanh ()'(' Kcl tinh I.II quercetin hồn hợp etanol-nước (UV: / Mc()M 257 375 lim: IK MOS 1665 161 I
' l ì i ax
1 c m ') Q u e r c e t i n thu c ũ n g d õ n g nhát VỚI queruMin c h n n ( lasscii ) t h e o S KI M.
2.4 N ghiên cứu Ịlavonoit khác có troiiỊi 1111 Ikhi hoi 2.4.1 C hiết "tống c c /la v o n o it”
Bột nụ hoa hoè chiết theo plnrơng án (a) Sau lọc ho rutin phán nước lọc loai dung môi đên thu cặn khò ký hiọu tỏng cát' ílavonoit ( A 'r so với
nguyên liệu khơ) Phàn tích cặn "tổng Aavonoit" hãng SKLM trịn silica gcl he dunịi mơi toluen-axeton-nước (10:20:1 v/\') cho thây mót hỏn hơp phức tap có nhát thành phiin hiên màu phun với ihuòc thư \aniluiAi\ii simtuiic
2.4.2 Phún lộp vù nhún dọtìg/lavonoit
(12)Phân đoạn (toluen-axeton 8:2: v/v) cho mỏt chất kí h.ẽu S.Ỉ-2 (Kt- U,Õ9; hẹ dung mói trên)
C hat SJ-Ị' k ế t tịnh hình kim màu vàng, nóng chày 280"c Chất hấp thu ur
ngoại : 255, 270v 328v 372 nm đặc trưng cho ílavonol /4/ Khi có mặt cua
llldA c
AICI3/HCI làm chuyến dịch batochrom dải I (?.m v 262 428 nm) chứng tò cỏ mát cua nhóm 5-OH Khi có mật cua CH.COONa ca hai dai I II đêu có sư chuyến dịch batochrom la có mặt cua nhóm hidroxy có tính axit cao vị trí \ Ngồi
ra, VỊ trí cua dinh cực đại háu khỏng thay dối cho thêm H;BO; chứng to SƯ
vang mạt cua cac nhóm octo-OH Phổ hống ngoại cùa SJ-1 tronc KBr cho thàv SƯ cỏ mặt cua nhóm -OH phenol (3225 cm ') nhóm >c =() ơ.p-khịns no (1657 1616 cni 1) Kơt q u a k h a o sat t r ê n phù hơp với d ữ liệu phổ th a m k h ao c ù a k a e m p f e r o l / / ng phương phap SKLM dã khăng định thêm sư đỏng nhát cùa SJ-1 VỚI kaciìiptcrol cluián (Jassen)
C hát SJ-2 két tinh hình kim màu vàng, nóng chàv 310"c (phàn luiv) Chat nàv
hấp thụ tử ngoại ỏ 257 268v 304v 375 nm clạc trưng cho llavonol /4/ Phò tư
n g o i c ủ a n ó c ũ n g đ ợ c k h a o sát c ỏ mặt c ũa c c tác nhân g â v c h u v c n d ị c h h a l o c h r o m
Ví dụ, có mặt cua AlCli/HCl dái I tàng 58 nm ( Â, 269 433) chirns to Mí có mặt cùa nhóm 5-OH Sự chuyến dịch dái I có mạt cua CH;C<)<)Na+H.H(>, (Ànux 260 3KS nm) khắng định có nhóm o-hi(Jro\y trong phán tư Pho hỏim ngoai cua SJ-2 KBr cho tháy có mật cua nhóm -()l I phenol ( M07 cm 1) nhóm >(.’=() (/.ị^-khòiiiỉ no (1655, 1611 cm ') Kêt qua khao sál trẽn phù hợp VỚI licu phó ihani kháo CII.I quercetin /5/ chất SJ-1 dược dỏng nhát với quoicctm chiiãiì hanti phương pliiip SKLM
2.5 Kháo sát hoại tính khám’ vi sinh vật Ị>ãy d<)( lừ hào cùa i/itcrccim
Các chúng vi khuẩn Giam (-) (/•- coli vù p Iicrnosii) Cìram ( + ) (li su h iilh s va
s aitreus) vi nấm (nấm mốc: Asp lìÌỊỊcr / o.xxsponinr Iiãm mcn: t a lh in m s) lia
dược sử dụng Giá trị ức chê tối thiêu (MIC) cho tháy q uc ac tin có phị khánu lo n g ca với vi khuẩn nấm kháng mạnh với vi khuân Giam ( + ) (12.5 Ịig/ml)
Khảo sát gây độc cua quercetin lên dòng tê hào ung thư người, Hep-G2 (ung thư gan) F1 (ung thư màng tư cung) RD (ung thư màng tim) liên ung thư thận khí (VR) cho kết qua âm tính (nóng độ ức chó IC\ >5 Ltg/ml)
3 K ết lu ậ n
(a) Đã thưc hiên phương án chiết rutin từ nu hoa hòe dê xã> dựng qui trinh đơn oiản cho rutin \'ới hiệu suất dặc biệt tlc dang tinh che
(b) Đa phan tích hàm lương rutm băng phương pháp HPLC chicm khoang 26.7', nụ hoa hoè khao sát
(13)^ thui tòng navonoit” sau loại ruiin phân tích thành phan cua băng phương pháp SKLM
(e) Băng phương pháp sắc kí cột từ cãn “tổng tlavonoit" phân láp hai navonoit
(f) Dựa tren đicm nóng cháy, so sánh phó hổng ngoại phổ tu ngoại SKLM cung VƠI cac máu chuân điéu kiện ílavonoit phân lãp lỉii dược xác định quercetin kaempíerol
(g) Đa thư hoạt tinh kháng với chúng vi khuân chuns vi nám kháiiii với đòng ung thư cùa quercetin
Tóm lại, đê tài đóng góp vào việc nghiên cứu mõt phươnc pháp hicn il.il
x c đ ê x c đ i n h rutin m ẫ u thực vật: qui trình c u c h ê q u e r c e t m v p hà n lúp m ó i su Aavonoit khác, khảo sát hoại lính cùa quercetin nhâm đinh hướnc cho viỘL' Mĩ
dụng chúng mục đích y dược hoc
4 T ài liệu t h a m k hao
1 Đô Tất Lợi Những thuốc vi ilìiKH \ iẹt \ \iiii ir.343-45 NXR Khoa hoe KỸ
thuật Hà Nội 1991
2 A b d u l l a b e k o v a V N Kamilov Kh I L Pak I /V I ':hi()l / li | WI tr 60-61 3 Latypov A.D : Sh mutdu inov M.I.: Shakirm I I : Khíiiii M s Kliim 1’rir
Soedin 1975 11(3) 427-28.
4 Marby T J.: Markham K R I honias M B The S\stcinatic inilcniilkatioiì ol Flavonoids Sprineer Vcrlaa Iìerlin-llciclcnhcrii-\c\\ York l c)7()
5 Ma Yangmin: Wu Yụja: Ya Mcnajic: l i I iancliao I cnxi I/IICIXIU’ Iyv>3 21(3) 368
I r , \ \1
(14)Dươc hoc So 13-14 Ị2001 /
ĐONG GOP VAO YIẸC NGHIÊN CÚI’ CÁC FLA\ ONOIT TRONG M HOA HOÈ
(SOPHORA ỈAPOXICA L FABACEAE)
CONTRIBL TION TO THE STL DYON FLAVONOIDS FROM THE BL'DS OF
SOPIỈORA IAPONICA L FABACF \F SOPHORA ỈAPOMCA L FABACEAE
Nguyễn Vãn Đâu Nguyên Văn Đâu
Khoa Hoá học Trường Đai hoc Khoa học Tự nhiên ĐHỌC Hà nội
and RI) I GIÓI THI ỆU
Cây hoa hoè (Sophora laponica L.) thuộc ho Cánh bướm {I (ihiu (’(IC) mọc hoanc trồng khãp nơi nước la Nu hoa có tính nhiội nhãn clãn ilùim làm tluioc cầm máu bệnh ho máu máu cam tióu tiện luivêt Nhinii! quan troiiii hoa hoè dùng làm nguồn nguyên liệu dó phan láp rutin moi loại viiamm I* Rutin có tác dụng tăng cường sức chịu dựng cùa mao mạch, thuơiii! ilưiíL ilìnm cho bệnh nhân bị cao huyết áp/1/
Khảo sát thành phán hố học cùa cáy hoa h cho Ih.iv lluvonoil kha phó hicn:
14 i l a v o n o i t đ ợ c phát hi ện c ó hoa I I ỉ l a v o n o i i - troim (|iia \ ii Í1 Ikivonoit- l a trong rutin ln chiếm ưu thê : nụ hoa đèn 2N' í lá- 5.7'< IV Ihán ca\ - 0.2'/ iron*! lượng khô /2/
ớ Việt Nam nghiên cứu hố học hoa h táp tnme chu >c 11 van \ ICC plián liip III11II Bài báo nêu phương pháp định lượníi rutin hăng sãc ki long hiõu nâng cao (IIIM.C) >ỊI phân lập số ílavonoit nụ hoa hoè Vlột Nam đanh gui sơ bo hoat
ính sinh học quercetin
ỉ THỰC NG H I Ệ M VÀ KÊT QUẢ M C hiết "íổ n g /la vo n o ií"
Nu hoa hoè (mua phố Lãn ô n g Hà nội tháng 3/2000) dược sây kho <50 o va UIV thành bọt Chiết bột hoa hoè hãng cách đun hối lưu vài lãn với etanol w , Dịch
hiết đìrơc lo a i eta n o l áp suất giam đơn khoang 100 ml sau đ ó dược \Ư lí VỚI liètyl ete Đ e dich chiết etanol tu lanh, rutin kết tua dirứi dang chiu răn màu vàng
19 % s o VƠI mau khố khao sát) Lọc lấy rutin phân nước lọc đirơc co đôn thu clirơc ặn khơ gọi ‘7dngỊlaxonoit (7.43rí ).
.2 Xúc định hàm lượiìỊi rutin hủnỊi phưonị! pháp UPlẨ
.2.1 Điều kiện phừn tích t ỉ P L t
(15)(MERCK & HITACHI) với L-6CX) Pump L-40(X) u v Detector: tién cột llibar RT- 2 - nối với cột Lichrosorb1 RP-18 10 Lim X mm I D (ME RCK) ; pha động: C H 3OH/0,4% CH,COOH (60:40 v/v; Chromanorm™ pour CLHP Prolabo); detector bước sóng 254 nm: thê tích bơm mẫu: 20|il; tốc đị dịng: 1.0 ml/phút: nhiệt dơ 20-23 C; đọ nhạy 0.05 a.u.í.s tốc dỏ giáv mm/phút
2.2.2 X ả y dựng thị chuẩn
Rutin két tinh lại metanol tuvct đòi cho tinh the hình kim màu xàng nhạt, đnc 196-198"c (UV: I McOH256 357nm: IR: 3423 1656 1599 1504 a n ').
Pha cac dung dich chuán chứa hàm !ươnII rutin từ 1.0 USI địn 10.0 im/20ul VÌI httm máu cho đẻn đạt pic đỏng đéu vê chiều cao trịn sàc ki dó Các diên tk'h pic 1/2(DTP) dược tính tốn giá tri trung bình cua chiint! dược bièu iliỏiì bãim tiu phu thuộc vào nơng độ rutin Sử dụng chương trình Stagraphics phươns trình hịi qui luvịn tính có dạng: y = 3.669x - 1.336 (r=0.99963)
trong đó: X- 1/2 DTP tương ứng cịn V- nơng độ rulin (Ị.12/20Ị.IỈ) 2 2.3 Q u i trình p h n tích đinh lương rutin Ĩ1U hoa hoa hoè
5.0 g nụ hoa hoè khỏ xav nhó chiòt Soxhlet \<ti clanol I cho tlõn kin
nhạt màu Etanol loại áp suãl giam kho hoà tan Iionu 5.0 ml metanol Dung dịch lọc qua hộ lọc Millipore dươc phân tích IIIM.C nhiêu lan
dưới điều kiện nêu trơn lây giá trị trunií bình Viẽc xác dinh hàm lương iluơe dưa
vào phương trình hỏi qui xác lập trón
Diện tích pic rutin trẽn sảc kí tlổ la IS2 111111 ứim VỚI hàm lưinii! IIỈIIII 5.^4 f.iiz/2(11 Hàm lượng rutin lính theo lượng mau hoa hoè kho sau
% Rutin = 5.34 fig X (5000 Lil/2(>ul I X ( l()()g/5g) = 2h,7 2.3 Điêu chê lỊiierxetin
Rutin thuy phân băníi cách đun hỏi lưu VỚI ciung dịch 5( ( MCI trorm thời gi.m
I giờ, cho quercetin kết tua màu vùng da I1£ Imliat iiiìr lanh (>(' Két tinh lai quercetin hỏn hợp etanol-nước (UV: / NKllH 257 375 lim; IR 3408 1665 1611
1521 c m ' 1) Quercetin thu dược ctỏnsi nhãt u n qucrcctin clniun (.lusscrn theo SKI.M
2.4 Phân lập nhận clạni’ Ịlavonoit
Phần “tổns navonoit” phan tách hẽ sac kí cót nhanh BACKSTROM SEPARO-AB (silica ơel 0.063-0.1 lim/ tổn2 llaumoit 10:1) rửa giai VỚI hỏn hơp toluen-axeton theo ti lệ tàng dán axeton Từ phán doan nhan (.lược kin rưa giai vcVi lolucn- axeton (9:1 v/v) thu chai, ki hiệu la SJ-1 (R,= 0.79; tolucn-axcton-nirớc 10-20'1 v/v) Phân đoạn (toluen-axeton 8:2: v/v) cho chất kí hiẽu S.I-2 (Rị= 0.69; hệ đu I1£ môi trên)
Cliỡỉ S./-I kết tinh hình kim màu vàng, nóng chay 280"c Chat nà> liảp thu lư
ngoai u v / NUOH "'55 270v 2S \ 372 nm đặc trưng cho Havonol /4/ Khi có mát cua A1C1,/HC1 lam chuyến dịch hatochrom dai I 262 42N nmi chứng lo SƯ có mat cua nhóm 5-OH Khi có mặt cua CM,C()()Na ca hai dái I va II clóu có sư chuyên dicli
b a t o c h r o m d o c ó m ặ t c u a c c n h ó m l i i dr o xy c o tinh axit c a o n hư (í VI trí 4" N g o i
(16)ĩã- l ]lZ tCr l CãC đl;;h cưc ^ảu nliư khơng íhav địi cho thêm H-.BO; chứng tỏ
vắng ặt nhóm octo-OH Phơ hong ngoai cua SJ KBr cho thây sứ có mặt
của nhóm - H phenol (3225 c m 1) nhóm > c = Gt.p-khong no (1657 1616 c m ') Kôt ^ỉỉa ao ^ p u ợp yới liệu phổ tham kháo cùa kaempíerol /5/ hãng p ương p ap a khăng định thêm sư cùa SJ-1 \'ới kaempíerol chuán (J a ss en )
, C h t J-2 kếuinh hình kim màu vàng, nóng c hay ờ 310"c (phân huy) Chát hap
thụ tứ ngoại X 257, 268v 304v 375 nm đặc trưng cho ílavonol /4/ Phó tư ĩìgoai
c ua n o c u n g đ ợ c Khao sát c ó mặt cua c ác tác nhàn g \ c h u y ê n d ị c h b a t o c h r o m \ I
dụ, co mạt cua AlCK/HCl dai tăng 58 nm ( ) 269 433) chứng tó SƯ có mạt cùa nhóm 5-OH Sự chuyên dịch dái I có cùa CH,C()ONa+H,B(); (Àmjv 260 38N nm) cung khang đinh có nhóm o-hidroxv phán từ Phổ hồng ngoại cùa SJ-2 KBi cho thây có mật cùa nhóm -OH phcnol (3407 cm ) nhóm > c = ( ) a.p -k hơ n e no (1655, 1611 cm ') Két qmi khao sát trẽn phù hơp với liệu phổ tham khai) cua quercetin /5/ chất SJ-1 dã nhát VỚI quercetin chuan hãng phương pháp SKLM
2.5 Kháo sát hoại linh kliáiiỊ’ 17 sinlì vậi ạáy dọc li’ bào cua í/ncn cim
Các chủng vi khuán Gram (-) (/: (oh R aennỊÌnosu) Gram ( + ) (li siibiillis
s aureus) vi nấm (nâm mốc: Asp niíỊcr I oxyspontm: năm men: ( d lh im n s) ttã
được sử dụng Giá trị ức chê tói thiêu (MIC) cho thà\ qucrcctm co phó khang rịng cá VỚI
vi khuẩn nấm kháng mạnh VỚI VI khuàn Cìram ( + ) ( 12.5 n g / m l )
Khao sát kha gây độc cua qucrcctin len (.long lẽ hao 11111! thu Iiịurơi Iilur
Hcp-G2 (ung thư gan) Fl (ung línr màng nr cung) RI) (ung tínr mang III11) va IICIÌ miịi thư thận khí ( VR) cho kết qua âm tính (nỏníi dó ức chõ I(\,, >5 u g / m l )
III KẾT LUẬN
Từ nụ hoa hoè phán lặp dược Havonoit ruiin kaemplerol I|iicrtctm Chúng nhận dạng so sánh liộu phi) UN TN dong Iih.tt VỚI mẫu chuẩn SKLM Đã xây dưng phương pháp xác đinh hàm lượng rutm hang 1IPIX' với pha noược Lichrosorb' RP-18 tìm tháy rutin chiếm khoáng 2Ố.1( ( nụ hoa hoè kháo sát Kết qua thử hoạt tính cho thay quercctin có phạm VI kháng khuân kháng
n ấ m r ộ n g n h u n g k h ò n g thẻ hoụt tinh khung NƠI d o n g ung thư thư.
Tài liệu tham khảo
1 Đồ Tát Lợi Những cày thuốc vị thuốc \ iệĩ \ a m II 343-45 NXB Khoa học va Kỹ
thuật, Ha Nọi 1991 r
2 A bd u 11 a b e k0Va V N k am il in Kh I Pak I V L ihiol Zh. 1991 tr 60-61 3 Ma Yanemin: Wu Yụịa: Va Mengịie: Li I ianchao Fcnx, Hụaxue 1993 21(3) 368 4 H a r b o m e J B NVilliam c /V The Flavonoids. tr - t h a p m a n and llall.
London 1975 , „ TI í- , 1
5 Mabrv I J Markham K R V|I I homas M u The Sysiemaiic Im ilù -a iin n „1 F l a Z o i d s 'ch u c m g IV S p d n g e r-V c rla g Bcrlin-I lc id c lb c r g - N c « Y o rk 197.)
(17)Dươc học \ n ì <-14.12001Ị
ra, vị trí đinh cực đại khơng thay địi cho thêm H BO chímo to Mí vắng mặt nhóm octo-OH Phố hỏng ngoại cùa SJ-1 KBr cho thã\ sư co mai nhóm -OH phenol (3225 cm' ), nhóm > c = cx.p-khơng no (1657 1616 cm ') Kẽt
qua k h a o s at t r en p h u h ợ p VƠI c a c l iệu p h ổ tham k h áo c ủ a k a e m p í e r o l / / h a n 1’
phương phap SKLM đa khang đinh thêm đòng cua SJ-I với kaemplerol chuan (Jassen)
Chat J -2 ket tinh hình kim màu vàng, nóng chảy 310 c (phán huv) Chat nàv háp
thụ tư ngoại X ^ 257, 268v, 304v, 375 nm đặc trưng cho navonol /4/ Phổ tir ĩiiioai cua no cung Khao sat co mặt cua tác nhãn gâv chuvèn dich biiiochrom \ dụ có mặt cùa AlCụ/HCl dải I tâng 58 nm ( ?.mjv 269 433) chứng to SƯ có mật cua nhóm 5-OH Sự chuyến dịch dải I có mặt cua CH,CO()Na+H B() 260 3SS nm) khảng đinh có nhóm o-hidroxv phán tư Phó hổn° nooiii cu;i S.I-2 KBr cho thấy có mặt nhóm -OH phenol (3407 cm 1) nhóm > c = ( ) a.p-khõng no (1655, 1611 cm ') Kết kháo sát phù hợp với liệu tham khao cua quercetin /5/ chất SJ-1 dược với quercetin chu 11 hans phươnc pliap SKLM
2.5 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật vù ,1’ây dộc ú’ bào cua 1/itcrci'iin
Các chủng vi khuẩn Gram (-) (E coli p (leriiỊỊÌnosa) Cìram ( + ) (li Mihnlli.s
s aureus) vi nấm (nấm mốc: Asp niạer /•' oxysporum: nám m en: (tlhudiis) (lã
dược sử dụng Giá trị ức chê tối thiểu (MIC) cho thấy quercetin có phó khang rịng UI với
vi khuẩn nám kháng mạnh với vi khuán Gram ( + ) ( 12.5 ULi/ml)
Kháo sát kha gây độc cúa quercetin lẽn dòng tò hào ung tlnr người Hep-G2 (ung thư gan), F1 (ung thư màng từ cung) RD (ung thư màng tun) MI Ik-n ung thư thận ( V R ) cho kết âm tính (nóng độ ức chẽ IC\,, >5 Ịiii/ml >
hoè khao sát Kêt qua thư hoạt tinn cno inav quciv.tuii t u pnụ t nấm rộng, hoạt tính kháng với dịng ung thư thư
Tài liệu tham khảo
1 Đồ Tất Lại N h ữ n g tlmóc ụ lim * Vi(< NXB Kh™ ' " ’1 vil K>
Ihuàt, Hà Nôi 1991 71 IOU1 I Ir AII M
2 Abdullabekova V.N Kamilov Kh u Pak I A iot. ? ' *■ ; ' j , ,
ỉ: Ma Yangmm: Wu ỲuỊa Ya Mengi.c: u I i n c //««»* ' 21«n ^
» Harbome J B William C Ả : The Ir 48-61 Chapman and llall London 1975 I hniivis M B The Svsicmarií /nc/enii/ìc ation nf
5 Mabry T J Mar kham K R X , ^ S i n I l c i i l h ó r g - N c « York 197»
(18)PHIÊU ĐẢNG KÝ
KET q u ả n g h i ê n Cứ u KH-CN
T én de tài
GÓP PHẦN NGHIÊN c ú HOA HOC CÁC HOP CHẤT PHENOL T MỘT s ố CÂY THI ố c VIỆT NAM
Mã so Q T 00-12
C quan chu trì đe tai Trường Đại học K hoa học Tự nhiên
Địa ch ì 334 N guycn Trãi Hà Nội
Tel 85X5277
C q u a n q u n lý đè tài Đại học Ọ uôc gia I ỉà Nội Đ ịa ch i 144 Đường Xuân Thuv Ila Nói
T el 8340564
T sị kinh phí í hực chi
7.000.000 VNĐ (kinh phí cua trường)
Thòi gian nghiên cứu:
T hòi gian băt đầu :
Thòi gian ke! thúc :
01 năm 11-200 11-20
Tén cán phoi hợp nghicn cứu
Nguyền Đãng Khương
Sô đ ă n s kv để tài S ò c h ứ n c n h ã n d ă n g k ý Bao mát:
Ngày: kết qua nehicn cứu a Pho biến rõng rãi X
h Pht> bicn han chó c Bao mát:
(19)T óm tát ket qua nghiên cứu
1 C ác kết khoa học ílã đại dược:
(a) Đ ã thực qui trình chiêt rutin từ hoa hộe đé xác định qui trinh nao la thích hợp hiệu suất thu rutin dẻ dàng tinh chê
(h) Đã điều chẻ qucrcelin bản2 thuy phân rutin
(c) Đã phân tích háng SKLM hồn tiơp navonoid sau loại ruiin (d) Đã phán tích hỗn hơp ílavonoid băng phương pháp HPLC
(e) Phán lập dược hai flavonoid báng phương pháp săc ki cột
(f) Nghiên cứu phổ hồng ngoại phổ tứ ngoai xác dinh cau tạo cua
flavonoid phân tách
(g) Đã thứ hoạt tính kháng khuân kháng ung thư cua quercetm 2 S n p h ẩ m k h o a h ọ c ilã h o n th n h
Đ ã đãng báo “Đóng góp vào việc n g h iê n C Ư U các (lavonoid nụ hoa oe
ịaponica L ) Tạp chí Dược học No s 13-14 (2001)
3 Kết đào tạo
Đ ã đào lạo dược 01 cư nhân hoa học
Ricn iiỊilii vẻ qui I11Ỏ doi tinmg á|) (liiiiịí
Có thê ứng dụng dê hào chõ dang thuóc làm hên chiic thành mạch ilióu trị bệnh cao huyẽl áp, chõ pham kháng viêm iliéu tn vót ihươnịỉ Chê phẩm chứa tổng Havonoil cĩuiii có thó áp dụng dó phong hộnh (lo góc lư gây nên lão hoá nguy uliu thư khỏi II
Chu nhiệm đề tài
Thu trương quan chu trì tài
Chu tích I loi đ ò ncr 2 đánh cr111 thức
Tgú trương Ị quan quan lí de lài
Họ tên Nguyền văn
Đâu
^ r Ị _J — °) Ị
-Đinh 'ỊẶừoỉp Ci\UìKjhfị(
Học hàm
hoc vi Tiên sĩ Ị / , M Tt \