Nghiên cứu thu nhận β glucan thô từ sinh khối nấm men saccharomyces cerevisiae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Lê Ngọc Anh NGHIÊN CỨU THU NHẬN β-GLUCAN THÔ TỪ SINH KHỐI NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Cán hướng dẫn: PGS TS Vũ Ngọc Bội KHÁNH HÒA - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Lê Ngọc Anh NGHIÊN CỨU THU NHẬN β-GLUCAN THÔ TỪ SINH KHỐI NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã số sinh viên : 56136386 Lớp : 56TP1 Cán hướng dẫn : PGS TS Vũ Ngọc Bội Khánh Hòa - 2018 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân, hoàn thành hướng dẫn khoa học PGS.TS Vũ Ngọc Bội Các số liệu, kết nêu đề tài trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Khánh Hòa, ngày tháng năm 2018 Sinh viên Lê Ngọc Anh i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp này, Trước tiên, Em xin trân trọng gửi đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, quý thầy cô khoa Công nghệ Thực phẩm kính trọng, niềm tự hào học tập trường, q thầy tận tình giảng dạy, hướng dẫn thời gian theo học Trường Em xin chân thành cảm ơn thầy PGS.TS Vũ Ngọc Bội cô Đỗ Thị Ánh Hịa tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thiện đồ án tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô khoa Công nghệ Thực phẩm, Trung tâm Thí nghiệm - Thực hành tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị, sở vật chất giúp em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ, động viên em suốt trình thực đồ án tốt nghiệp Nha Trang, ngày tháng năm 2018 Sinh viên thực Lê Ngọc Anh ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ NẤM MEN S CEREVISIAE 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái, kích thước cấu tạo nấm men 1.1.2.1 Hình thái 1.1.2.2 Kích thước 1.1.2.3 Cấu tạo 1.1.3 Thành phần hóa học nấm men 1.1.4 Nấm men Saccharomyces cerevisiae 1.2 TỔNG QUAN VỀ β-GLUCAN 1.2.1 Cấu trúc β-glucan 1.2.2 Tính chất β-glucan 1.2.3 Nguồn nguyên liệu chứa β-glucan 1.2.4 Tác dụng β-glucan 1.2.5 Ứng dụng β-glucan 10 1.2.5.1 Ứng dụng thực phẩm 10 iii 1.2.5.2 Ứng dụng y dược phẩm mỹ phẩm 11 1.2.6 Phá vỡ thành tế bào nấm men phương pháp tự phân 12 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU β-GLUCAN TỪ SINH KHỐI NẤM MEN TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 13 1.3.1 Tình hình nghiên cứu β-glucan từ sinh khối nấm men giới 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu β-glucan từ sinh khối nấm men Việt Nam 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 15 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.2.1 Nghiên cứu xử lý bã thải men bia thu nhận sinh khối nấm men 15 2.2.2 Nghiên cứu tự phân sinh khối nấm men thu nhận β-glucan thô 16 2.2.2.1 Bố trí thí nghiệm thu nhận β-glucan thô từ thành tế bào nấm men theo phương pháp tự phân 16 2.2.2.2 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia theo phương pháp tự phân 20 2.2.2.3 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia theo phương pháp tự phân 22 2.2.2.4 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia theo phương pháp tự phân 24 2.2.2.5 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia theo phương pháp tự phân 246 2.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 27 2.3.1 Phương pháp phân tích hàm lượng protein thô 27 iv 2.3.2 Phương pháp phân tích hàm lượng carbohydrate 27 2.4 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ CHỦ YẾU SỬ DỤNG TRONG ĐỒ ÁN 28 2.5 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM 28 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 THU NHẬN SINH KHỐI NẤM MEN S CEREVISIAE TỪ BÃ THẢI MEN BIA 29 3.2 NGHIÊN CỨU TỰ PHÂN SINH KHỐI NẤM MEN THU NHẬN β-GLUCAN THÔ 29 3.2.1 Nghiên cứu tự phân sinh khối nấm men 29 3.2.2 Nghiên cứu thu nhận β-glucan thô từ thành tế bào nấm men 30 3.2.2.1 Ảnh hưởng nồng độ dung dịch NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô 30 3.2.2.2 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung dịch NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô 33 3.2.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô 37 3.2.2.4 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô 40 3.3 ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH THU NHẬN β-GLUCAN THÔ TỪ SINH KHỐI NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 50 PHỤ LỤC 1: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 50 PHỤ LỤC 2: BẢNG SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM 54 PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ XỬ LÝ SPSS 59 v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết sau rửa bã thải men bia thu nhận sinh khối nấm men 29 Bảng 3.2 Hàm lượng carbohydrate protein thô sinh khối men bia hỗn hợp thành tế bào nấm men 30 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu tạo tế bào nấm men Hình 1.2 Cấu trúc vỏ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình 1.3 Nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình 1.4 Cấu trúc hóa học β-glucan nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình 1.5 Cơ chế tăng cường hệ miễn dịch β-glucan 10 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xử lý bã men bia thu nhận sinh khối nấm men 15 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm thu nhận β-glucan thơ từ sinh khối nấm men bia phương pháp tự phân 17 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate 20 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng tỷ lệ thành tế bào nấm men/ dung dịch NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate 22 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate 24 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate 26 Hình 3.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng protein thô cịn lại β-glucan thơ 31 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thơ 31 Hình 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ thành tế bào nấm men/ dung dịch NaOH đến hàm lượng protein thơ cịn lại β-glucan thơ 34 Hình 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ thành tế bào nấm men/ dung dịch NaOH đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thô 34 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thơ cịn lại β-glucan thơ 37 Hình 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thơ 38 Hình 3.7 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thơ cịn lại β-glucan thơ 40 Hình 3.8 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thơ 41 vii Hình 3.9 Quy trình thu nhận β-glucan thô từ thành tế bào nấm men bia phương pháp tự phân 44 Hình P1.1 Phương trình đường chuẩn 52 viii b Đo mẫu thực Cân xác 0.25 gam β-glucan sau ly tâm hòa tan định mức thành 25 ml nước cất, nồng độ β-glucan 10 mg/ml (10000 μg/ml) Lấy 7.5 ml dung dịch pha thành 100 ml, nồng độ 75 μg/ml Lấy ml dung dịch cho vào ống nghiệm có nút đậy, thêm ml dung dịch phenol 5%, ml H2SO4 đậm đặc, lắc ống nghiệm Đặt ống nghiệm vào nồi nước đun cách thuỷ 10 phút làm lạnh nhiệt độ 25 - 30oC 15 phút Đo mật độ quang dung dịch bước sóng 490 nm Dựa vào phương trình đường chuẩn, suy hàm lượng carbohydrate có mẫu β-glucan thí nghiệm M (μg/ml) c Tính tốn phần trăm hàm lượng tổng carbohydrate Như 1ml dung dịch mẫu đem đo có M (μg/ml) Vậy 100ml dung dịch mẫu đem đo = % tổng lượng carbohydrate = M x 100 Như vậy, dựa vào phương trình đường chuẩn ta tính phần trăm hàm lượng đường tổng có mẫu thí nghiệm theo cơng thức sau: C%  Mxf m Trong đó: C: phần trăm hàm lượng tổng carbohydrate (%) M: hàm lượng tổng carbohydrate đo (μg/ml) m: lượng mẫu làm thí nghiệm (1ml) f: hệ số phần trăm d Phương trình đường chuẩn Bảng P1.1 Giá trị đo dãy đường chuẩn bước sóng 490 nm Nồng độ glucose (µg/ml) Abs 490nm 20 40 60 80 100 0.1917 0.3937 0.5957 0.7977 0.9997 51 1.2 y = 0.0101x - 0.0103 R² =0.9992 Abs 490nm 0.8 0.6 0.4 0.2 0 20 40 60 80 Glucose (µg/ml) 100 120 Hình P1.1 Phương trình đường chuẩn Định lượng nitơ tổng số protein thô phương pháp Kjeldahl (Nguyễn Văn Mùi, 2001) Xác định nitơ tổng số theo phương pháp Kjeldahl  Ngun lý: Vơ hóa thực phẩm H2SO4 đậm đặc có chất xúc tác đặc biệt, dùng kiềm đặc mạnh: NaOH KOH đẩy NH3 từ muối (NH4)2SO4 thể tự NH3 hấp thụ H2SO4 tiêu chuẩn Sau định lượng H2SO4 tiêu chuẩn dư NaOH tiêu chuẩn Trước tiên mẫu vô hóa H2SO4 đặc nhiệt độ cao có chất xúc tác Các phản ửng q trình vơ hóa xảy sau: 2H2SO4  2H2O  2SO  O2 Oxy tạo thành phản ứng lại oxy hóa nguyên tố khác Các phân tử chứa nitơ tác dụng H2SO4 tạo thành HN3 Các protein bị thuỷ phân thành acid amin, cacbon hydro acid amin tạo thành CO2 nước, cịn nitơ giải phóng dạng NH3 kết hợp với H2SO4 dư tạo thành (NH4)2SO4 tan dung dịch 2NH3  H2SO4  (NH4 )2 SO4 Các nguyên tố P, K, Ca, Mg…chuyển thành dạng oxit: P2O5, K2O, CaO, MgO… Đuổi amoniac khỏi dung dịch NaOH: 52 (NH4 )2 SO4  2NaOH  Na2SO4  H2O  2NH3 NH3 bay với nước sang bình hứng chứa H2SO4, phản ứng xảy sau: 2NH3  H2SO4dd/tieuchuan  (NH4 )2 SO4 2NaOHtieuchuan  H2SO4tieuchuan/ du  Na2SO4  H2O  Hóa chất: - Xúc tác: CuSO4 K2SO4 (1/10) - Phenolphtalein 1% - H2SO4 đậm đặc - NaOH 30% - H2SO4 0,1N - NaOH 0,1N - Metyl đỏ 0,1% - Giấy đo pH  Tiến hành: Vơ hóa mẫu: Lấy xác g mẫu, cho cẩn thận vào đáy bình Kjeldahl, thêm 2g hỗn hợp xúc tác CuSO4 K2SO4 + 10ml H2SO4 đậm đặc Đặt nghiêng góc 450 bếp điện tủ Host tiến hành vô cơ, vô màu sắc chuyển từ màu nâu đen  vàng  xanh  xanh không màu được, sau vô xong, để nguội mẫu Chú ý: - Trong q trình vơ mẫu chưa đạt đến màu xanh mà dung dịch bị cạn lấy bình để nguội thêm vào 5ml dung dịch H2SO4 đậm đặc tiếp tục vô - Khi vơ hóa mẫu, tránh tượng mẫu sơi q mạnh bị bắn ngồi gây sai số, phải vơ triệt để hồn tồn - Trong vơ hóa mẫu tiến hành sục rửa thiết bị chưng cất đạm, kiểm tra độ kín Yêu cầu thiết bị phải kín Chuẩn bị cốc hứng: Lấy cốc thủy tinh 250ml cho vào cốc 20ml H2SO4 0,1N vài giọt mêtyl đỏ 0,1% Đặt cốc đầu ống sinh hàn thiết bị chưng cất đạm Đầu ống sinh hàn phải ngập vào dung dịch cốc Chưng cất: Sau vơ hóa mẫu xong để nguội đổ từ từ dung dịch bình Kjeldahl vào bình chưng cất, dùng nước cất tráng tráng lại bình vài lần, nước tráng chuyển 53 vào bình chưng cất sau cho vào vài giọt phenolphtalein 1% dung dịch NaOH 30% vào bình chưng cất dung dịch bình có màu đỏ tím đỏ Dùng nước cất tráng đường ống dẫn vào bình chưng cất Lắp kín thiết bị, cho nước chảy vào ống sinh hàn bắt đầu chưng cất, chưng cất khoảng 20 phút kể từ dung dịch bình bắt đầu sơi, sau tiến hành thử để xác định xem mẫu thử hết đạm chưa Cách thử sau: nâng đầu ống sinh hàn lên khỏi cốc hứng (cốc hứng đặt đầu ống sinh hàn) Dùng bình tia rửa xung quanh ống sinh hàn Nước rửa tiếp tục hứng vào cốc hứng Chưng cất khoảng – phút, dùng giấy quỳ giấy đo pH để thử Nếu pH = trình chưng cất kết thúc Nếu pH > tiếp tục chưng cất Chuẩn độ: Lấy cốc hứng đem chuẩn độ NaOH 0,1N có màu vàng dừng lại Đọc thể tích NaOH 0,1N tiêu tốn Tính kết quả: Đạm tổng quát nước mắm tính cơng thức sau: NTQ = (V1 − V2 ) 0.0014 m 0.0014: số gam nitơ tương đương với 1ml H2SO4 0,1N V1: số ml H2 SO4 0,1N cho vào bình hứng V2: số ml NaOH 0,1N tiêu tốn chuẩn độ acid dư bình hứng m: số gam mẫu đem làm thí nghiệm Định lượng protein thơ: Protein thô = NTQ x 6.25 PHỤ LỤC 2: BẢNG SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia phương pháp tự phân 54 Bảng P2.1: Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng protein thô βglucan thô NỒNG ĐỘ NaOH (M) Lần Hàm lượng protein thô (%) GTTB 4.113 4.156 4.136 ± 0.0215a 4.138 0.463 0.25 0.438 0.461 ± 0.0216b 0.481 0.394 0.5 0.375 0.388 ± 0.0109c 0.394 0.375 0.75 0.35 0.358 ± 0.0144cd 0.35 0.35 0.331 0.344 ± 0.0109d 0.35 Bảng P2.2: Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng carbohydrate βglucan thô NỒNG ĐỘ NaOH (M) 0.25 0.50 0.75 Lần 3 3 Hàm lượng carbohydrate (%) 20.624 19.535 20.228 17.95 18.446 17.752 17.257 16.564 17.554 15.871 16.366 16.762 14.584 14.782 15.178 55 GTTB 20.129 ± 0.5512a 18.05 ±0.3569b 17.125 ± 0.5081c 16.333 ± 0.4464c 14.848 ±0.3025d Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia phương pháp tự phân Bảng P2.3: Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ NaOH đến hàm lượng protein thô β-glucan thô TỶ LỆ NL/ NaOH (g/ml) 1∕20 2∕20 3∕20 4∕20 Lần Hàm lượng protein thô (%) 3 3 0.306 0.306 0.331 0.413 0.394 0.375 0.438 0.463 0.481 0.438 0.438 0.481 GTTB 0.314 ± 0.0144a 0.394 ±0.019b 0.461± 0.0215c 0.452 ± 0.0248c Bảng P2.4: Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ NaOH đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thô TỶ LỆ NL/ NaOH (g/ml) 1∕20 2∕20 3∕20 4∕20 Lần 3 3 Hàm lượng carbohydrate (%) 14.485 14.782 15.277 16.267 15.97 16.96 17.752 17.059 16.267 17.95 17.752 17.257 56 GTTB 14.848 ± 0.4001a 16.399 ± 0.5081b 17.026 ± 0.7431bc 17.653 ± 0.357c Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia phương pháp tự phân Bảng P2.5: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô β-glucan thô NHIỆT ĐỘ (°C) Lần Hàm lượng protein thô (%) GTTB 0.331 80 0.350 0.344 ± 0.0109a 0.350 0.306 85 0.35 0.321 ± 0.0254ab 0.306 0.281 90 0.263 0.283 ± 0.0215b 0.306 0.263 95 0.200 0.221 ± 0.0363c 0.200 0.219 100 0.219 0.204 ± 0.0221c 0.175 Bảng P2.6: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thô NHIỆT ĐỘ (°C) 80 85 90 95 100 Lần Hàm lượng carbohydrate (%) 3 3 19.139 18.446 19.535 17.752 17.950 17.257 16.366 16.762 15.970 14.881 14.386 15.574 15.673 14.980 15.970 57 GTTB 19.04 ± 0.5513a 17.653 ± 0.357b 16.366 ± 0.3619c 15.541 ± 0.5981cd 14.947 ± 0.5968d Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào bã thải men bia Bảng P2.7: Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô β-glucan thô Hàm lượng GTTB protein thô (%) 0.281 1.0 0.281 0.275 ± 0.0104a 0.263 0.219 1.5 0.244 0.236 ± 0.0144b 0.244 0.219 2.0 0.200 0.198 ± 0.0220c 0.175 0.200 2.5 0.200 0.192 ± 0.0124c 0.175 0.200 3.0 0.175 0.183 ± 0.0144c 0.175 Bảng P2.8: Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng carbohydrate β-glucan thô THỜI GIAN (giờ) Lần THỜI GIAN (giờ) Lần Hàm lượng carbohydrate (%) 3 3 19.634 20.029 18.248 17.851 17.653 18.743 17.158 16.564 17.356 17.158 16.564 16.961 16.267 16.861 16.762 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 58 GTTB 19.304 ± 0.5358a 18.083 ± 0.5801b 17.026 ± 0.4121c 16.894 ± 0.3024c 16.63 ± 0.3183c PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ XỬ LÝ SPSS Test of Homogeneity of Variances Levene df1 df2 Statistic Ảnh hưởng nồng độ NaOH Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ NaOH Ảnh hưởng nhiệt độ Ảnh hưởng thời gian Sig Hàm lượng Protein thô 730 10 591 Hàm lượng carbohydrate 376 10 821 Hàm lượng Protein thô 435 734 Hàm lượng carbohydrate 523 678 Hàm lượng Protein thô 1.793 10 207 Hàm lượng carbohydrate 287 10 880 Hàm lượng Protein thô 0.474 10 0.754 Hàm lượng carbohydrate 2.494 10 0.110 59 ANOVA Hàm lượng Protein thô Ảnh hưởng nồng độ NaOH Hàm lượng carbohydrate Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ NaOH Hàm lượng Protein thô Hàm lượng carbohydrate Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 33.755 8.439 3.122E4 000 Within Groups 003 10 000 Total 33.758 14 Between Groups 46.628 11.657 59.445 000 Within Groups 1.961 10 196 Total 48.589 14 Between Groups 041 014 33.124 000 Within Groups 003 000 Total 044 11 Between Groups 13.032 4.344 15.829 001 Within Groups 2.195 274 Total 15.227 11 60 ANOVA Hàm lượng Protein thô Ảnh hưởng nhiệt độ Hàm lượng carbohydrate Hàm lượng Protein thô Ảnh hưởng thời gian Hàm lượng carbohydrate Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 044 011 17.317 000 Within Groups 006 10 001 Total 050 14 Between Groups 32.734 8.183 34.034 000 Within Groups 2.405 10 240 Total 35.138 14 Between Groups 018 004 17.976 000 Within Groups 002 10 000 Total 020 14 Between Groups 14.708 3.677 11.675 001 Within Groups 3.149 10 315 Total 17.857 14 61  Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào nấm men phương pháp tự phân - Hàm lượng protein thô PPsay Duncana Nồng độ NaOH 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 Sig N 3 3 34367 35833 Subset for alpha = 0.05 35833 38433 46067 300 082 1.000 4.13567 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 - Hàm lượng carbohydrate PPsay Duncana Nồng độ NaOH 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 Sig N 3 3 14.848 Subset for alpha = 0.05 16.333 17.125 18.049 1.000 053 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 62 1.000 20.129 1.000  Ảnh hưởng tỷ lệ thành tế bào nấm men/ dung dịch NaOH đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế nấm men phương pháp tự phân - Hàm lượng protein thô PPsay Duncana TL NL/ DD NaOH 1/20 2/20 4/20 3/20 Sig N 3 3 Subset for alpha = 0.05 31433 39400 45233 46067 1.000 1.000 629 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 - Hàm lượng carbohydrate PPsay Duncana TL NL/ DD NaOH 1/20 2/20 3/20 4/20 Sig N 3 3 Subset for alpha = 0.05 14.848 16.399 17.026 17.026 17.653 1.000 181 181 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 63  Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào nấm men phương pháp tự phân - Hàm lượng protein thô PPsay Nhiệt độ N Duncana 100 95 90 85 80 Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 20433 22100 28333 32900 32067 32067 34367 439 101 292 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 - Hàm lượng carbohydrate PPsay Duncana Nhiệt độ 100 95 90 85 80 Sig N 3 3 14.947 15.541 Subset for alpha = 0.05 15.541 16.366 17.653 169 066 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 64 1.000 19.040 1.000  Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng protein thô hàm lượng carbohydrate β-glucan thô thu từ thành tế bào nấm men phương pháp tự phân - Hàm lượng protein thô PPsay Thời gian N Duncana 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 18333 19167 19800 23567 27500 298 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 - Hàm lượng carbohydrate PPsay Thời gian N Duncana 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 Sig 3 3 Subset for alpha = 0.05 16.660 16.894 17.026 18.082 19.303 429 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000 65 ... cerevisiae từ bã thải men bia Nghiên cứu thu nhận β- glucan thô từ sinh khối nấm men Saccharomyces cerevisiae phương pháp tự phân Đề xuất quy trình thu nhận β- glucan thơ từ sinh khối nấm men Saccharomyces. .. Kết thu sinh khối cho thấy hiệu suất thu sinh khối nấm men từ bã thải bia trung bình 82.75% 3.2 NGHIÊN CỨU TỰ PHÂN SINH KHỐI NẤM MEN THU NHẬN ? ?GLUCAN THÔ 3.2.1 Nghiên cứu tự phân sinh khối nấm men. .. thải men bia thu nhận sinh khối nấm men 15 2.2.2 Nghiên cứu tự phân sinh khối nấm men thu nhận β- glucan thô 16 2.2.2.1 Bố trí thí nghiệm thu nhận β- glucan thô từ thành tế bào nấm men theo