Nghiên cứu phản ứng thủy phân bằng enzyme định hướng tổng hợp taxol

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - NGÔ THỊ MỸ HUỆ NGHIÊN CỨU PHẢN ỨNG THUỶ PHÂN BẰNG ENZYME ĐỊNH HƢỚNG TỔNG HỢP TAXOL Chuyên ngành: Cơng nghệ hố học Mã số: 60 52 75 LUẬN VĂN THẠC SĨ Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - NGÔ THỊ MỸ HUỆ NGHIÊN CỨU PHẢN ỨNG THUỶ PHÂN BẰNG ENZYME ĐỊNH HƢỚNG TỔNG HỢP TAXOL Chun ngành: Cơng nghệ hố học Mã số: 60 52 75 LUẬN VĂN THẠC SĨ Hƣớng dẫn chính: TS TỐNG THANH DANH Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2014 Thành phố Hồ Chí tháng 2014 Cơng trình hoàn thành tại: Minh, Trường Đại 07 họcnăm Bách Khoa – ĐHQG-HCM Cán hướng dẫn khoa học : T.S Tống Thanh Danh Cán chấm nhận xét : PGS.TS Phạm Thành Quân Cán chấm nhận xét : T.S Phan Ngọc Hòa Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 14 tháng 08 năm 2014 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) T.S PGs.TS Phạm Thành Quân – GV Phản biện T.S Phan Ngọc Hòa – GV Phản biện T.S Tống Thanh Danh - Ủy viên hội đồng T.S Trương Vũ Thanh – Thư ký hội đồng Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA………… ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập – Tự – Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGÔ THỊ MỸ HUỆ MSHV: 12924381 Ngày, tháng, năm sinh: 26/05/1984 Nơi sinh: Phú Yên Chuyên ngành: cơng nghệ hóa học Mã số: 605275 I TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHẢN ỨNG THỦY PHÂN BẰNG ENZYME ĐỊNH HƢỚNG TỔNG HỢP TAXOL -NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: -II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: - III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: IV CÁN BỘ HƢỚNG DẪN: -TS TỐNG THANH DANH Tp HCM, ngày ……… tháng ……năm 20… CÁN BỘ HƢỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƢỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC (Họ tên chữ ký) LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: NGÔ THỊ MỸ HUỆ Ngày, tháng, năm sinh: 26/05/1984 Nơi sinh: Phú Yên Địa liên lạc: A7/27/1A, tổ 11, Ấp 1A, xã Vĩnh Lộc B, Huyện Bình Chánh, Tp.HCM QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: - Từ 2002 đến 2006: ĐẠI HỌC QUY NHƠN – 170 An Dƣơng Vƣơng, Tp Quy Nhơn, tỉnh Bình Định - Từ 2012 đến 2014: ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TP HCM – 268 Lý Thƣờng Kiệt, Q.10, Tp.HCM Q TRÌNH CƠNG TÁC: - Từ 2006 đến nay: CƠNG TY TNHH PHỐT PHÁT – Lơ A4a, KCN Hiệp Phƣớc, H.Nhà Bè, Tp HCM LỜI CẢM ƠN Con xin chân thành cảm ơn Cha, Mẹ, gia đình ln ln động viên, sát cánh bên lúc khó khăn, ln tạo điều kiện thuận lợi cho học tập Với tình u thƣơng, tơi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến chồng nguồn động lực hỗ trợ tinh thần kinh phí để tơi hồn thành nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành Quý thầy mơn Kỹ thuật Hóa Hữu Cơ giúp trang bị tri thức, tạo môi trƣờng điều kiện thuận lợi suốt trình học tập thực luận văn Với lịng kính trọng biết ơn, tơi xin đƣợc bày tỏ lịng cảm ơn tới Tiến sĩ Tống Thanh Danh khuyến khích, dẫn tận tình, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực nghiên cứu Tôi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc đồng nghiệp Công ty TNHH Phốt Phát giúp đỡ nhiều thời gian để tơi hồn thành nghiên cứu Tơi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến bạn Nguyễn Lê Mỹ Tiên động viên, hỗ trợ nhiều suốt q trình làm việc hồn thành luận văn Trân trọng! i ABSTRACT Lipases Amano PS from Pseudomonas cepacia and Lipase Amano AK from Pseudomonas fluorescens have been catalyzed enantioselective hydrolyses and transesterifications of racemic esters – hydroxy – – phenyl – beta – lactam derivatives of the taxol side chain We have performed synthesized reactions to obtain taxol side chain e.g () – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one, (+) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one, (-) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – hydroxyl – – phenylazetidin – – one, (-) – cis – 3(R) – acetoxy – 4(S) – phenylazetidin – – one, (+) – cis – 3(R) – hydroxyl – 4(S) – phenylazetidin – – one, cis – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one, cis–1 – benzoyl – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one The results show that enzymes lipase Amano PS from Pseudomonas cepacia are more capable of synthesis in enantiomeric excess than the others lipase Amano AK from Pseudomonas fluorescens due to its associated specificities The resolved enantiomera are important intermediates in the synthesis of the C – 13 side chain of taxol ii TÓM TẮT Xúc tác sinh học Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens đƣợc chọn làm xúc tác chọn lọc đối phân phân giải hỗn hợp racemic ester dẫn xuất đối phân – hydroxy – – phenyl vòng beta – lactam qua trình thủy phân chọn lọc đối phân Quá trình nghiên cứu thực phản ứng tổng hợp hợp chất cần thiết để thu nhận mạch nhánh chuỗi taxol side chain, cụ thể (+) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one, (+) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one, (-) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – hydroxyl – – phenylazetidin – – one, (-) – cis – 3(R) – acetoxy – 4(S) – phenylazetidin – – one, (+) – cis – 3(R) – hydroxyl – 4(S) – phenylazetidin – – one, cis – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one, cis–1 – benzoyl – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one Kết cho thấy tính đặc hiệu liên kết, enzyme Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia có khả tổng hợp chất cao enzyme Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens Sự phân tách chọn lọc đối phân bƣớc trung gian quan trọng tổng hợp mạch nhánh chuỗi side chain C – 13 định hƣớng tổng hợp nên paclitaxel iii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Ngơ Thị Mỹ Huệ iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .i ABSTRACT ii TÓM TẮT iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC BẢNG BIỂU viii DANH MỤC HÌNH ẢNH MINH HỌA .ix DANH MỤC SƠ ĐỒ PHẢN ỨNG x DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ TỪ VIẾT TẮT xi GIỚI THIỆU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỢP CHẤT PACLITAXEL 1.2 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP TỔNG HỢP TAXOL TỪ 10 – DAB 1.2.1 Tổng hợp toàn phần 1.2.2 Bán tổng hợp 1.2.2.1 Bán tổng hợp Taxol từ 10 – DAB 1.2.2.2 Một số phương pháp bán tổng hợp mạch nhánh taxol side chain 11 1.2.3 Phản ứng thuỷ phân enzyme bán tổng hợp taxol .14 1.2.3.1 Giới thiệu chung lipase: 14 1.2.3.2 Giới thiệu lipase PCL, PFL 15 1.2.3.3 Cấu trúc chế phản ứng lipase: 15 1.2.3.4 Phân giải động học với PCL, PFL 19 1.2.3.5 Một số phản ứng tổng hợp mạch nhánh có sử dụng enzyme lipase 20 1.2.4 Sinh tổng hợp taxol: 24 Chƣơng NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 27 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU: 27 2.2 NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ: 28 2.2.1 Nguyên liệu hố chất dung mơi 28 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 30 2.2.2.1 Dụng cụ: 30 v Nhiệt độ nóng chảy: t50A = 184 – 1860C t50C = 187 – 1880C Phổ IR (KBr), νmax cm-1: 1710 (-C=O), 3350 (-OH), 2920 (-NH) (Hình 4.12) 7.00E+01 6.00E+01 5.00E+01 4.00E+01 3.00E+01 2.00E+01 1.00E+01 0.00E+00 4.00E+03 3.60E+03 3.20E+03 2.80E+03 2.40E+03 2.00E+03 1.60E+03 1.20E+03 8.00E+02 4.00E+02 Hình 4.12: Phổ IR hợp chất beta – lactam 3A 51A Kiểm tra sản phẩm TLC, HPLC: Rf = 0, 45 (hệ D) (Hình 4.13), (PL – 19) Hình 4.13: TLC phản ứng tạo beta – lactam 3A 51A Phổ khối MS ( ESI ) có mũi ion phân tử với m/z: 163,07 MNa+ dự kiến: 186,06 Thƣ viện máy cho biết công thức phân tử là: C9H9NO2 (PL - 20) 62 Phổ 1H NMR (DMSO, 500MHz): ppm: 4,689 (d, J=5Hz, 1H, CH – Ph); 4,924 (dd, J = 7Hz, 1H, CH – OH); 5,788(d, J= 7,5Hz, 1H, OH); 7,226 – 7,364 (m, J = 4,5 – 5Hz, 5H, H – Aromatic); 8,427 (s, 1H, NH) (PL – 21) Kết luận: Phổ IR, phổ khối MS, phổ 1H NMR phù hợp với cấu trúc (+) - cis – (R) – hydroxyl – (S) – phenylazetidin – – one CTPT: C9H9NO2 KLPT: 163,17 Góc quay cực riêng: = +28,4° (c 0,35, CH3OH) = +4,12° (c 0,7, CH3OH) Định danh cấu hình 51A, 51C: góc quay cực sản phẩm sau tách sắc ký cột đo đƣợc triền quang kế +28,40 +4,120 So sánh với giá trị chuẩn 51A (năng suất triền quang (+) 51A + 198,80 (-)51A – 198,80) [42] Dấu sản phẩm trùng với dấu đối phân (+) hay đối phân chiếm ƣu hỗn hợp sau phản ứng Độ tinh khiết quang học sản phẩm 51A, 51C: 63 Bàn luận: Nếu thay dung dịch KOH MeOH dung dịch KOH thấy phản ứng xảy nhanh hiệu suất cao nên nƣớc có vai trị quan trọng phản ứng 4.7 PHẢN ỨNG TỔNG HỢP CIS – 3– (1 – ETHOXYETHOXY) – – PHENYLLAZETIDIN – – ONE (BETA – LACTAM 4A) Kết quả: Tổng hợp: Tiến hành theo Thí nghiệm mục 3.7 thu đƣợc 0,62g 52A dịch lỏng màu vàng nhạt, đạt hiệu suất 97,77 % Tính chất: dịch lỏng màu vàng nhạt tan ethylacetat, aceton, methanol, DCM, CHCl3, tan n – hexan Kiểm tra sản phẩm TLC: Rf = 0, 65 (hệ D) (Hình 4.14) Hình 4.14: TLC phản ứng tạo beta – lactam 4A 52A Phổ khối MS ( ESI ) có mũi ion phân tử với m/z: 235,12 MNa+ dự kiến: 258,11 Thƣ viện máy cho biết công thức phân tử phù hợp: C13H17NO3 (PL - 24) Phổ 1H NMR (DMSO, 500MHz): ppm: 0,861 – 0,889 (t, J=6,5Hz, 6H, CH3); 4,119 – 4, 4478( m, J= 5Hz, 2H, CH2 ); 5,053 (m, J = 5Hz, 1H, CH – Ph); 5,975 (dd, J=5Hz, 1H, CH – OAc ); 6,461 (d, J = 8Hz, 1H, CH), 8,101 (s, 1H, NH); 7,4 – 7,7 (m, J = 11,5Hz, 5H, H – Aromatic) (PL – 25) 64 Kết luận: Phổ IR, phổ khối, 1H NMR phù hợp với cấu trúc cis – 3– (1 – ethoxyethoxy) – –phenyllazetidin – – one CTPT: C13H17NO3 KLPT: 235,12 Bàn luận: Xúc tác acid methan sulfonic axit mạnh, có tính oxy hố cao nên thƣờng đƣợc sử dụng phản ứng tạo ether với ethylvinylether làm nhóm bảo vệ cần sử dụng lƣợng nhỏ vừa đủ mơi trƣờng khan nƣớc, phải làm khan tinh thể rắn toluen trƣớc tiến hành phản ứng Vì chất có tính oxy hố mạnh nên sử dụng lƣợng dƣ acid methan sulfonic làm phản ứng nhanh, sinh nhiều sản phẩm phụ khơng mong muốn, dự đốn sản phẩm mở vòng β-lactam sản phẩm oxy hóa Dung dịch phản ứng có tính axit, pH khoảng – nên sử dụng natri acetat để trung hịa lƣợng acid methan sulfonic dƣ Vì acetate natri có tính axit yếu, yếu natri hydrocarbonate nên thay trung hồ NaHCO3 thay cho CH3COONa Sản phẩm tạo thành dạng tinh thể hình kim màu trắng tinh khiết mặt SKLM Hỗn hợp sản phẩm 52A gồm đồng phân diaster isomery với tỷ lệ 1: 2,1 Mặc dù phổ 1H – NMR không thu đƣợc tinh khiết nhƣng kết phổ MS cho biết kết phù hợp 65 4.8 PHẢN ỨNG TỔNG HỢP CIS – –BENZOYL – – (1 – ETHOXYETHOXY) – – PHENYLAZETIDIN – – ONE (BETA – LACTAM 5A) Kết quả: Tổng hợp: Tiến hành theo Thí nghiệm mục 3.8 thu đƣợc 0,8g tinh thể rắn ánh kim vàng nhạt, đạt hiệu suất 75,96 % Tính chất: tinh thể ánh kim vàng nhạt, tan ethylacetat, aceton, methanol, DCM, chloroform, tan n – hexan Kiểm tra sản phẩm TLC: Rf = 0, 74 (hệ C); Rf = 0, 74 (hệ B) (Hình 4.15) Hình 4.15: TLC phản ứng tạo beta – lactam 5A 53A 66 Phổ khối MS ( ESI ) có mũi ion phân tử với m/z: 339,15 MNa+ dự kiến: 362,14 Thƣ viện máy cho biết công thức phân tử là: C20H21NO4 (PL - 26) Phổ 1H NMR (DMSO, 500MHz): ppm: 1,265 – 1,294 (t, J=3Hz, 6H, CH3); 4,00 – 4,15 (m, J = 11,5Hz, 2H, CH2); 5,58 (dd, J = 14Hz, 1H, CH - Ar); 6,143 (d, J= 5Hz, 1H, CH – OAc); 6,461 (d, J = 8Hz, 1H, CH); 7,45 – 7,95 (m, J = 8Hz, 10H, H – Aromatic) (PL – 27) Kết luận: Phổ khối, phổ 1H NMR phù hợp với cấu trúc cis – –benzoyl – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenylazetidin – – one CTPT: C20H21NO4 KLPT: 339,15 Bàn luận: Hỗn hợp 52A sau phản ứng tiếp tục đƣợc khảo sát với benzoyl clorid với xúc tác DMAP CHCl3 THF nhằm mục tiêu hỗn hợp sau phản ứng đƣợc phân tách tinh khiết cho phổ 1H – NMR tốt Tuy nhiên kết th đƣợc phổ NMR không tinh khiết phổ MS cho kết phù hợp Điều sản phẩm tạo thành không bền điều kiện bảo quản thông thƣờng 67 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ MỘT SỐ HƢỚNG MỞ RỘNG ĐỀ TÀI Sau thời gian thực đề tài “Nghiên cứu phản ứng thuỷ phân enzyme định hướng tổng hợp taxol”, đạt đƣợc mục tiêu đề tài đặt nhƣ sau: Đã tổng hợp đƣợc dẫn chất trung gian để tổng hợp nên mạch nhánh paclitaxel: N – Benzyliden – p – methoxy aniline () – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one (+) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – acetoxy – – phenylazetidin – – one (-) – cis – – (p – methoxyphenyl) – – hydroxyl – – phenylazetidin – – one (-) – cis – 3(R) – acetoxy – 4(S) – phenylazetidin – – one (+) – cis – 3(R) – hydroxyl – 4(S) – phenylazetidin – – one cis – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one cis–1 – benzoyl – – (1 – ethoxyethoxy) – – phenyllazetidin – – one Đã xác định đƣợc cấu trúc độ tinh khiết chất tổng hợp đƣợc phƣơng pháp phân tích hóa lý đại nhƣ xác định nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực, phổ hồng ngoại IR, phổ khối MS, phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H NMR, HPLC cho kết phù hợp với chuỗi phản ứng dự kiến Sử dụng xúc tác enzyme Amano PS cho phản ứng thủy phân với beta – lactam nhanh enzyme Amano AK định hƣớng tổng hợp mạch nhánh Taxol side chain Hạn chế luận văn: Muốn tính đƣợc độ tinh khiết quang học cao phải dùng phƣơng pháp HPLC cột chiral Do điều kiện cột để phân tích nên tơi phải sử dụng phƣơng pháp đo góc quay cực riêng để tính ee Tuy nhiên, độ quay cực  đo đƣợc 68 lại nhỏ, xấp xỉ nên dẫn đến có hai khả năng: phản ứng có độ chọn lọc thấp thiết bị máy đo khơng xác Để khắc phục hạn chế trên, thử dùng phƣơng pháp chuyển dịch proton 1H – NMR cách sử dụng thêm chất dịch chuyển hóa học vào Tuy nhiên, mẫu đo đƣợc không thấy dịch chuyển proton nên không xác định đƣợc ee Từ kết nghiên cứu đạt hạn chế luận văn này, xin nêu số ý kiến hướng mở rộng đề tài tương lai sau: Tiếp tục khảo sát phản ứng tổng hợp mạch nhánh phân tử paclitaxel nhằm tìm điều kiện tối ƣu để nâng cao hiệu suất, tính ổn định phản ứng độ tinh khiết sản phẩm Tiếp tục khảo sát điều kiện tối ƣu phản ứng thủy phân enzyme để nâng cao hiệu suất, tính ổn định phản ứng Đồng thời khảo sát điều kiện phản ứng thủy phân xúc tác enzyme khác nhằm đạt hiệu suất tối ƣu Tiếp tục nghiên cứu phản ứng tổng hợp sản phẩm alcol có cấu hình S đƣợc tách từ phản ứng thủy phân để chuyển sản phẩm không mong muốn thành sản phẩm hữu dụng chuỗi nghiên cứu paclitaxel Nếu nghiên cứu tƣơng lai theo hƣớng này, nên có cột chiral HPLC cần nghiên cứu sâu với việc sử dụng cột Chiral HPLC để xác định độ tinh khiết quang học 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Vƣơng Chí Hùng, Nguyễn Tiến Hùng, Trần Công Luận, and Nguyễn Ngọc Vinh, “Thuần hố thơng đỏ dài (taxol wallichiana Zucc) tạo nguồn nguyên liệu chiết tách hoạt chất làm thuốc chống ung thƣ,” in Hội thảo Quốc tế KH&CN 2013, 2013 [2] E K Rowinsky and R C Donehower, “Paclitaxel (Taxol),” N Engl J Med., vol 332, no 15, pp 1004–1014, 1995 [3] Robert A Holton and Phong Vu, “Enzymatic process for the resolution of enantiomeric mixtures of beta-lactams.” 2000 [4] M C Wani, H L Taylor, M E Wall, P Coggon, and A T McPhail, “Plant antitumor agents VI The isolation and structure of taxol, a novel antileukemic and antitumor agent from Taxus brevifolia.,” J Am Chem Soc., 1971 [5] B.H Guo, G.Y Kai, H.B Jin, and K.X Tang, “Taxol synthesis,” African J Biotechnol., vol 5, no 1, pp 15–20, 2006 [6] D G Kingston, “Taxol: the chemistry and structure-activity relationships of a novel anticancer agent.,” Trends Biotechnol., vol 12, no 6, pp 222–227, Jun 1994 [7] R A Holton, “Method for preparation of taxol using β-lactam.” 1992 [8] T Nguyen, “Paclitaxel: The Billion Dollar Natural Product,” Chem 150, 2008 [9] E Baloglu and D G Kingston, “A new semisynthesis of paclitaxel from baccatin III.,” J Nat Prod., vol 62, no 7, pp 1068–71, Jul 1999 [10] J Molè-Bajer and A S Bajer, “Action of taxol on mitosis: modification of microtubule arrangements and function of the mitotic spindle in Haemanthus endosperm.,” J Cell Biol., vol 96, pp 527–540, 1983 [11] E K Rowinsky and R C Donehower, “Drug Therapy: Paclitaxel (Taxol),” N Engl J Med., vol 332, pp 1004–1015, 1995 [12] N Hayashi, S Tsuboi, V A Mamedov, H Hamamoto, and M Kitamoto, “Chemoenzymatic synthesis of the C-13 side chain of paclitaxel (Taxol) and docetaxel (Taxotere),” Tetrahedron: Asymmetry, vol 11 pp 4485–4497, 2000 70 [13] D Goswami, J K Basu, and S De, “Lipase applications in oil hydrolysis with a case study on castor oil: a review.,” Crit Rev Biotechnol., vol 33, no 1, pp 81–96, Mar 2013 [14] M Suffness, “Overview of paclitaxel research: progress on many fronts,” ACS Symp Ser., 1995 [15] J Lee, Studies Toward the Diastereoselective Semisynthesis of Taxol 2008 [16] L Guo-Qiang, L Yue-Ming, and C Albert S., Principles and Applications of Asymmetric Synthesis Wiley, 2001, p 536 [17] R A Holton, H B Kim, C Somoza, F Liang, R J Biediger, P D Boatman, M Shindo, C C Smith, and S Kim, “First total synthesis of taxol Completion of the C and D rings,” J Am Chem Soc., vol 116, no 4, pp 1599–1600, 1994 [18] K C Nicolaou, Z Yang, J J Liu, H Ueno, P G Nantermet, R K Guy, C F Claiborne, J Renaud, E A Couladouros, and K Paulvannan, “Total synthesis of taxol.,” Nature, vol 367, pp 630–634, 1994 [19] J J Masters, J T Link, L B Snyder, W B Young, and S J Danishefsky, “A total synthesis of taxol.,” Angew Chemie, Int Ed English, vol 34, pp 1723–1726, 1995 [20] P A Wender, N F Badham, S P Conway, P E Floreancig, T E Glass, J B Houze, N E Krauss, D Lee, D G Marquess, P L McGrane, W Meng, M G Natchus, A J Shuker, J C Sutton, and R E Taylor, “The Pinene Path to Taxanes A Concise Stereocontrolled Synthesis of Taxol,” J Am Chem Soc., vol 119, no 11, pp 2757–2758, Mar 1997 [21] T Mukaiyama, I Shiina, H Iwadare, H Sakoh, Y Tani, M Hasegawa, and K Saitoh, “Asymmetric total synthesis of Taxol,” Proc Japan Acad., Ser B., vol 73, pp 95–100, Jun 1997 [22] H Kusama, R Hara, S Kawahara, T Nishimori, H Kashima, N Nakamura, K Morihira, and I Kuwajima, “Enantioselective Total Synthesis of (−)Taxol,” J Am Chem Soc., vol 122, no 16, pp 3811–3820, Apr 2000 [23] T Doi, S Fuse, S Miyamoto, K Nakai, D Sasuga, and T Takahashi, “A formal total synthesis of taxol aided by an automated synthesizer.,” Chem Asian J., vol 1, no 3, pp 370–383, Sep 2006 [24] K Walker and R Croteau, “Taxol biosynthesis: Molecular cloning of a benzoyl- CoA:taxane 2α-O-benzoyltransferase cDNA from Taxus and 71 functional expression in Escherichia coli,” Proc Natl Acad Sci U S A., vol 97, pp 13591–13596, 2000 [25] N C Institute, “Cancer Drug Information,” 2013 [26] S C O Qun Y Zheng and B C O Christopher K Murray, “Preparation of 10-deacetylbaccatin III and 7-protected-10-deacetylbaccatin III derivatives from 10-deacetyl taxol A, 10-deacetyl taxol B, and 10-deacetyl taxol C,” vol 08224005, no US 5449790 US 4857653 (Aug, 1989) Colin et al 549/511; US 4924011 (May, 1990) Denis et al 549/510; US 4960790 (Oct, 1990) Stella et al 514/449; US 5015744 (May, 1991) Holton 549/510; US 5019504 (May, 1991) Christen et al 435/123; US 5202448 (Apr, 1993) Carver et, US, Sep-1995 [27] K Eisuke, I Akira, and Z Shonosuke, “The synthetic reactions of aliphatic nitro compounds XI The synthesis of BETA.-amino-.ALPHA.hydroxycarboxylic acids and GAMMA.-aminocarboxylic acids,” Bull Chem Soc Jpn., vol 49, no 11, pp 3181–3184, 1976 [28] R Muchiri and K D Walker, “Taxol biosynthesis: tyrocidine synthetase A catalyzes the production of phenylisoserinyl CoA and other amino phenylpropanoyl thioesters.,” Chem Biol., vol 19, no 6, pp 679–685, Jun 2012 [29] I Banik, F F Becker, and B K Banik, “Stereoselective synthesis of betalactams with polyaromatic imines: entry to new and novel anticancer agents.,” J Med Chem., vol 46, no 1, pp 12–15, Jan 2003 [30] Y Yang, F Wang, F D Rochon, and M M Kayser, “Synthesis of novel optically pure β-lactams,” Can J Chem., vol 83, no 1, pp 28–36, Jan 2005 [31] T Mandai, A Kuroda, H Okumoto, K Nakanishi, K Mikuni, K Hara, and K Hara, “A semisynthesis of paclitaxel via a 10-deacetylbaccatin {III} derivative bearing a β-keto ester appendage,” Tetrahedron Lett., vol 41, no 2, pp 243–246, 2000 [32] H.-J Ha, G.-S Park, Y.-G Ahn, and G S Lee, “Practical synthesis of Taxol side chain,” Bioorg Med Chem Lett., vol 8, no 13, pp 1619–1622, Jul 1998 [33] S Hanessian and J.-Y Sancéau, “Asymmetric synthesis of taxol arid taxotère side chains by enolate hydroxylation,” Can J Chem., vol 74, no 4, pp 621– 624, Apr 1996 72 [34] M Hodge, Q.-H Chen, S Bane, S Sharma, M Loew, A Banerjee, A A Alcaraz, J P Snyder, and D G I Kingston, “Synthesis and bioactivity of a side chain bridged paclitaxel: A test of the T-Taxol conformation.,” Bioorg Med Chem Lett., vol 19, no 10, pp 2884–2887, May 2009 [35] J N Denis, A E Greene, A A Serra, and M J Luche, “An efficient, enantioselective synthesis of the taxol side chain,” J Org Chem., vol 51, no 1, pp 46–50, Jan 1986 [36] D Bonnaffé and H Simon, “5-methoxy-pentono-1,4-lactones from (R)-2hydroxy-5-methoxy-3-pentenoic acid obtained by bioreduction of the 2-oxo acid,” Tetrahedron, vol 48, no 44, pp 9695–9706, Jan 1992 [37] S Py, J.-W Pan, and F Khuong-Huu, “Cleavage reactions of 10deacetylbaccatin III Retrosynthetic approach to the total synthesis of taxol derivatives.,” Tetrahedron, vol 50, no 23, pp 6881–6890, Jan 1994 [38] D Goswami, J K Basu, and S De, “Lipase applications in oil hydrolysis with a case study on castor oil: a review,” Critical Reviews in Biotechnology pp 1–16, 2012 [39] K Romas J and B Uwe T., “Biotransformations with Lipases,” in Biotechnology Set, H.-J Rehm and G Reed, Eds Weinheim, Germany: Wiley-VCH Verlag GmbH, 2001, pp 37–191 [40] G P Horsman, A M F Liu, E Henke, U T Bornscheuer, and R J Kazlauskas, “Mutations in distant residues moderately increase the enantioselectivity of Pseudomonas fluorescens esterase towards methyl 3bromo-2-methylpropanoate and ethyl 3phenylbutyrate.,” Chemistry, vol 9, no 9, pp 1933–1939, May 2003 [41] R J Kazlauskas, “Elucidating structure-mechanism relationships in lipases: prospects for predicting and engineering catalytic properties.,” Trends Biotechnol., vol 12, no 11, pp 464–472, Nov 1994 [42] R Brieva, J Z Crich, and C J Sih, “Chemoenzymic synthesis of the C-13 side chain of taxol: optically active 3-hydroxy-4-phenyl beta.-lactam derivatives,” J Org Chem., vol 58, no 5, pp 1068–1075, 1993 [43] Kouji Daiichi Pharmaceutical Co Ltd SATO, Tsutomu Daiichi Pharmaceutical Co Ltd YAGI, Yutaka Daiichi Pharmaceutical Co Ltd KITAGAWA, Shigeru Daiichi Pharmaceutical Co Ltd ICHIKAWA, and Akihiro Daiichi Pharmaceutical Co Ltd IMURA, “Method for producing 2azetidinone derivative.” 2002 73 [44] E Forró and F Fülöp, “Lipase-catalyzed enantioselective ring opening of unactivated alicyclic-fused beta-lactams in an organic solvent.,” Org Lett., vol 5, pp 1209–1212, 2003 [45] R Sharma, Y Chisti, and U C Banerjee, “Production, purification, characterization, and applications of lipases.,” Biotechnol Adv., vol 19, no 8, pp 627–662, Dec 2001 [46] D L Ollis, E Cheah, M Cygler, B Dijkstra, F Frolow, S M Franken, M Harel, S J Remington, I Silman, and J Schrag, “The alpha/beta hydrolase fold.,” Protein Eng., vol 5, no 3, pp 197–211, Apr 1992 [47] R D Schmid and R Verger, “Lipases: Interfacial Enzymes with Attractive Applications,” Angew Chemie Int Ed., vol 37, no 12, pp 1608–1633, Jul 1998 [48] H Hermansyah, A Wijanarko, D., M Gozan, P Wulan, R Arbianti, R Soemantojo, T Utami, Y., M Kubo, N Shibasaki-Kitakawa, and T Yonemoto, “KINETIC MODEL FOR TRIGLYCERIDE HYDROLYSIS USING LIPASE: REVIEW,” Makara J Technol., vol 11, no 1, pp 30–35, Apr 2007 [49] R Liu, “Enzymes as catalysts in synthesis of enantiomerically pure building blocks: secondary alcohols bearing two vicinal stereocenters,” KTH,, 2005 [50] L Xiang-Guo, “Chemoenzymatic Enantioselective Synthesis of beta-amino acid derivatives using lipases,” Tủku, 2008 [51] H Fredrik and N Torbjorn, “Molecular Modelling of Lipase Catalysed Reactions Prediction of Enantioselectivities,” Chem Pharm Bull (Tokyo)., vol 47, no 5, pp 591–600, 1999 [52] U H Kahlow, R D Schmid, and J Pleiss, “A model of the pressure dependence of the enantioselectivity of Candida rugosalipase towards (+/-)menthol.,” Protein Sci., vol 10, no 10, pp 1942–1952, Oct 2001 [53] M Edin, “Ruthenium-catalyzed redox reactions and lipase-catalyzed asymmetric transformations of alcohols,” Institutionen for organisk kemi, 2005 [54] M Anders, “Rational redesign of Candida antarctica lipase B,” Royal Institute of Technology, 2005 [55] T Ema, “Mechanism of Enantioselectivity of Lipases and Other Synthetically Useful Hydrolases,” Curr Org Chem., vol 8, no 11, Jun 2014 74 [56] H Hönig, P Seufer-Wasserthal, and H Weber, “Chemo-enzymatic synthesis of all isomeric 3-phenylserines and -isoserines,” Tetrahedron, vol 46, no 11, pp 3841–3850, Jan 1990 [57] Nguyễn Thị Phi Phụng, Phổ NMR sử dụng phân tích hữu NXB Đại học Quốc gia TP HCM, 2005 [58] R N Patel, J Howell, R Chidambaram, S Benoit, and J Kant, “Enzymatic preparation of (3R)-cis-3-acetyloxy-4-(1,1-dimethylethyl)-2-azetidinone: a side-chain synthon for an orally active taxane,” Tetrahedron: Asymmetry, vol 14, no 23, pp 3673–3677, Nov 2003 [59] R N Patel, “Tour de paclitaxel: biocatalysis for semisynthesis.,” Annu Rev Microbiol., vol 52, pp 361–395, 1998 [60] K Walker, R Long, and R Croteau, “The final acylation step in taxol biosynthesis: cloning of the taxoid C13-side-chain N-benzoyltransferase from Taxus.,” Proc Natl Acad Sci U S A., vol 99, no 14, pp 9166–9171, Jul 2002 [61] S Jennewein and R Croteau, “Taxol: biosynthesis, molecular genetics, and biotechnological applications.,” Appl Microbiol Biotechnol., vol 57, no 1– 2, pp 13–19, Oct 2001 [62] F Han, L.-Z Kang, X.-L Zeng, Z.-W Ye, L.-Q Guo, and J.-F Lin, “Bioproduction of baccatin III, an advanced precursor of paclitaxol, with transgenic Flammulina velutipes expressing the 10-deacetylbaccatin III-10-Oacetyl transferase gene.,” J Sci Food Agric., Jan 2014 [63] R Kaspera and R Croteau, “Cytochrome P450 oxygenases of Taxol biosynthesis.,” Phytochem Rev., vol 5, no 2–3, pp 433–444, Jun 2006 [64] M D Manita, “Spectrophotometric determination of organic compounds,” Methods Determ Gaseous Pollut Atmos., vol -1, pp 61–75, 1979 [65] C Jonathan, G Nick, and W Stuart, Organic Chemistry, 2nd ed., vol 6, no Oxford University Press, 2012, p 1264 [66] Z C Gyarmati, A Liljeblad, G Argay, A Kálmán, G Bernáth, and L T Kanerva, “Chemoenzymatic Preparation of Enantiopure Homoadamantyl βAmino Acid and β-Lactam Derivatives,” Adv Synth Catal., vol 346, no 5, pp 566–572, 2004 75 PHỤ LỤC 76 ... chọn enzyme cho q trình phân tách hỗn hợp đồng phân đối quang hợp chất trung gian Beta – lactam hữu ích điều chế taxol, lý tơi chọn đề tài ? ?Nghiên cứu phản ứng thuỷ phân enzyme định hướng tổng hợp. .. hợp taxol? ?? Từ mục tiêu tổng quát nêu trên, đề mục tiêu nghiên cứu cụ thể nhƣ sau:  Nghiên cứu trình tổng hợp Imine làm nguyên liệu để tổng hợp hợp chất beta – lactam  Nghiên cứu trình tổng hợp. .. cepacia Dùng cho tổng hợp Acros Dùng cho tổng hợp Acros Dùng cho tổng hợp Sigma Aldrich Dùng cho tổng hợp Sigma Aldrich Dùng cho tổng hợp Trung Quốc Dùng cho tổng hợp Acros Dùng cho tổng hợp Trung quốc