Nghiên cứu xây dựng mô hình và đặc điểm hình thái ung thư gan người trên chuột thiếu hụt miễn dịch

Bài viết xây dựng mô hình tạo khối ung thư gan người trên chuột thiếu hụt miễn dịch; nghiên cứu đặc điểm hình thái mô u trên chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư gan người.

HOẠT ĐỘNG KH-CN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI UNG THƯ GAN NGƯỜI TRÊN CHUỘT THIẾU HỤT MIỄN DỊCH n ThS Bs Nguyễn Tuấn Anh ThS Nguyễn Hoàng Phi, ThS Đặng Xuân Định Trường Đại học Y khoa Vinh I ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bệnh nguy hiểm có tỷ lệ tử vong cao Theo thông báo Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu ung thư (IARC) thuộc Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), năm 2008, giới có khoảng 12,7 triệu ca mắc với 7,6 triệu người chết ung thư Dự báo vào năm 2030, năm có 21,4 triệu người mắc bệnh ung thư 13,3 triệu người chết bệnh Một thành tựu nghiên cứu ung thư từ cuối kỷ 20 nhà khoa học tạo chuột mang ung thư người Tế bào ung thư người dung nạp chuột mang khối ung thư người Trên mơ hình chuột mang ung thư người này, người ta đánh giá hình thành, phát triển khối u áp dụng để phát hiện, điều trị cho bệnh nhân ung thư Đứng trước thách thức mức độ ác tính, kháng điều trị ung thư gan, cần phải có phương pháp dược chất để điều trị Chính vậy, đề tài “Nghiên cứu xây dựng mơ hình đặc điểm hình thái ung thư gan người ghép chuột thiếu hụt miễn dịch” tiến hành với mục tiêu: xây dựng mơ hình tạo khối ung thư gan người chuột thiếu hụt miễn dịch; nghiên cứu đặc điểm hình thái mô u chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư gan người II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng vật liệu nghiên cứu 1.1 Đối tượng nghiên cứu - 10 chuột nhắt BALB/c thiếu hụt miễn dịch (nude mice) - Dòng tế bào ung thư gan tế bào Hep-3B mua từ Công ty ATCC (Hoa Kỳ) 1.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu Labo nuôi cấy tế bào đầy đủ trang thiết bị SỐ 7/2018 Dụng cụ hóa chất để tiến hành ghép tạo u chuột Phương pháp nghiên cứu 2.1 Kỹ thuật nuôi cấy tế bào ung thư gan người Hep-3B Các tế bào ung thư gan dịng Hep-3B ni cấy đĩa ni cấy tế bào đường kính 10cm mơi trường ni cấy tương ứng EMEM có bổ sung 10% FBS 1% kháng sinh Penicillin Streptomycine Mật độ tế bào môi trường xác dịnh cách sử dụng buồng đếm Neubauer 2.2 Tạo khối ung thư gan người chuột thiếu hụt miễn dịch Chuột thiếu hụt miễn dịch (nude mice, Foxn1nu) ni điều kiện phịng sạch, khơng khí lọc có áp lực dương tính (25 ± 0,50C, độ ẩm 52 ± 5%), ánh sáng tự động điều khiển bật lúc 7h00, tắt lúc 19h00 Thức ăn nước uống tiệt trùng trước sử dụng Chuột chia thành nhóm lồng Chuột nude lồng giá cách ly Tạp chí KH-CN Nghệ An [14] HOẠT ĐỘNG KH-CN Khối ung thư gan đùi chuột sau ghép 11 ngày Ghép tế bào ung thư vào da đùi chuột Chuột thiếu hụt miễn dịch nuôi ổn định ngày trước lúc tiến hành thí nghiệm Cố định tiêm 0,1ml vào da đùi phải (106 tế bào/chuột) Quá trình thao tác thực điều kiện vô trùng tuyệt đối Chuột ăn uống theo chế độ ăn bình thường; theo dõi chỗ tiêm toàn thân chuột hàng ngày; đo u cân trọng lượng lần/ tuần x tuần Khối u đánh giá theo phát triển vị trí tiêm (đùi phải) lần tuần, kích thước u tính theo cơng thức: V=D x R2 x 0,5 V: thể tích khối u D: chiều dài khối u R: chiều rộng khối u Trọng lượng chuột: Cân hàng tuần cân điện tử có độ xác 10-3 2.3 Phân tích mơ bệnh học khối u hình thành chuột Sau kết thúc thí nghiệm, tiến hành lấy mẫu mô bệnh phẩm khối u chuột bảo quản khối u dung dịch Formalin 10% vòng 24-48 giờ, nhuộm Hematoxylin- Eosin (HE) xác định hình thái siêu vi thể khối u kính hiển vi điện tử truyền qua III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết nuôi cấy tế bào Hep- 3B Sau 24 giờ, tế bào bám bề mặt đáy chai nuôi Thay môi trường nuôi cấy lần/tuần Tốc độ tăng sinh gấp đơi dịng tế bào Hep-3B khoảng 2224 Bảng Kích thước khối ung thư gan đùi chuột Ngày sau ghép 11 Kích thước khối u (mm , n=1) 37,2 SE 7,1 Dễ dàng nhận thấy, sau khối ung thư xuất vào thời điểm 11 ngày sau ghép, khối phát triển liên tục theo thời gian 14 74,6 11,5 18 107,9 10,6 21 214,2 25 392,4 34,8 85,5 Biến đổi trọng lượng chuột so với lần cân trước (g) SE SỐ 7/2018 0,13 0,05 593,6 117,2 đến kết thúc thí nghiệm Tại thời điểm 21 ngày sau ghép tế bào, vòng tuần, khối u tăng gần gấp lần kích thước (bảng 1) Bảng Biến đổi trọng lượng chuột lần cân Ngày sau ghép 28 11 0,16 14 0,59 18 -0,15 21 -0,20 25 -0,16 28 -0,17 0,1592 0,2721 0,3412 0,1842 0,2168 0,1472 0,2103 0,1092 Tạp chí KH-CN Nghệ An [15] HOẠT ĐỘNG KH-CN Mức thay đổi trọng lượng chuột không nhiều lần cân Sau 3-4 ngày, trọng lượng chuột tăng khoảng 0,05-0,59 gram vòng 14 ngày sau ghép tế bào ung thư (bảng 2) Sau đó, trọng lượng chuột có xu hướng giảm 0,15-0,20 gram 3-4 ngày giai đoạn 18-28 ngày sau ghép tế bào Kết giải phẫu bệnh lý khối u qua tiêu nhuộm HE siêu vi thể khối u kính hiển vi điện tử truyền qua 2.1 Hình ảnh đại thể Khối ung thư gan đùi chuột đại thể 2.2 Một số hình ảnh vi thể siêu cấu trúc mơ ung thư gan ghép chuột Hình ảnh siêu cấu trúc tế bào ung thư với nhân kéo dài (1), nhân lõm (2) IV BÀN LUẬN Trong nghiên cứu này, ghép thành công tế bào Hep-3B chuột nude, kết quả: vòng 5-7 ngày sau ghép xuất khối u da Tỷ lệ mọc u 100% đặc biệt khơng có chết lỗi kỹ thuật so với Mclemore TL cs(1987), tỷ lệ tử vong 5% Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu số tác giả công bố: tỷ lệ thành công kỹ thuật ghép dị loài từ 85-100% Bên cạnh đó, ưu điểm kỹ thuật thời gian thực nhanh, vịng 1-1,5 tuần đánh giá hiệu tạo khối ung thư động vật Kỹ thuật tạo khối u với kích thước tương đối đồng mặt sinh học với khối u người V KẾT LUẬN Tạo khối ung thư gan người da đùi chuột thiếu hụt miễn dịch, tương đồng mặt sinh học ung thư gan bệnh nhân./ Tài liệu tham khảo Mô ung thư gan chuột (H.E x 200) Bào ung thư gan xâm nhập lớp SỐ 7/2018 Ames B.N., Gold L.S (1990), “Too many rodent carcinogens: a review”, Pharmacol Ther, 63, pp 265-311 American Academy of Otolaryngology- Head and Neck surgery, “Laryngeal Cancer Factsheet”, Source: www.entnet.org Andocs, G., Okamoto, Y., Osaki, T., Tsuka, T., Imagawa, T, Minami, S., Balogh, L.,Meggyeshazi, N., Szasz, O (2009) “ Oncothermia research at preclinical level”, Electromagn Biol Med., 28(2), pp.148- 65 Hồ Anh Sơn, Nguyễn Lĩnh Toàn, Bùi Khắc Cường, Nguyễn Văn Ba (2012), “Tạo khối ung thư vú người chuột nude”, Tạp chí Y - Dược học Quân sự, KC.10, tr 1-5 Nguyễn Lĩnh Toàn, Hồ Anh Sơn, Bùi Khắc Cường (2012), ‟Xây dựng mơ hình ung thư phổi người”, Tạp chí Y - Dược học Quân sự, KC 10, tr 1-6 Tạp chí KH-CN Nghệ An [16] ... KH-CN Khối ung thư gan đùi chuột sau ghép 11 ngày Ghép tế bào ung thư vào da đùi chuột Chuột thiếu hụt miễn dịch ni ổn định ngày trước lúc tiến hành thí nghiệm Cố định tiêm 0,1ml vào da đùi phải... điện tử truyền qua 2.1 Hình ảnh đại thể Khối ung thư gan đùi chuột đại thể 2.2 Một số hình ảnh vi thể siêu cấu trúc mô ung thư gan ghép chuột Hình ảnh siêu cấu trúc tế bào ung thư với nhân kéo dài... hiệu tạo khối ung thư động vật Kỹ thuật tạo khối u với kích thư? ??c tương đối đồng mặt sinh học với khối u người V KẾT LUẬN Tạo khối ung thư gan người da đùi chuột thiếu hụt miễn dịch, tương đồng