Nghiên cứu đặc điểm hình thái mô u trên chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư thanh quản người

TÀ I LIỆ U TH A M K H Ả O Lê Thị Diễm Hồng, Nguyễn Thị Hồng Nhiên, Nguyễn Thị Hồng Vân, Nguyễn Viết Thân Nguyễn Xuân Thắng, 2007 Nghiên cứu tác đụng chống viêm mạn saponin flavonoid kim ngân (Lonic rajaponica Thunb.) Tạp chí dược học, 378, tr.24­29 Phạm Thanh Kỳ, Phí Tùng Lâm Vũ Thị Nguyệt Minh, 2005 Kết nghiên cứu flavonoid mức hoa Irắng (Holarrhena anditysenterica wall­Apocynaceae) Tạp chí Thơng tin Y được, 11, tr.25­27 Bachir B; Albert JC; Mourad K; and Francois T 1992 FJavonoid glycosides from Erica cinerea Phytochemistry 31, pp.2483­2486 Di Carlo G; Mascolo N, Izzo, AA; and Capasso F 1999 Flavonoids: old and new aspects of a class of natural therapeutic drugs Life Science, 65, pp.337­353 Fuchs J, Milbrađt R, 1993 Skin anti­inflammatory activity of apigenein­7­glucoside in rats Aizneimittelforschung, 43, pp.370­372 KrenV, Martinkova L 2001 Glycosides in medicine: the role of glycosidic residue in biological activity Current Medicial Chemistry 8, pp.1303­1328 Nguyen Huy Thuan, 2013 Synthesis of flavonoid and sterol glycosides by biotransformation, (doctoral dissertation), Sun Moon University, Korea Ren G, Hou J, Fang Q, Sun H, Liu X, Zhang, L, and Wang PG (2012) Synthesis of flavonoi 3­O­glycoside by UGT78D1 Glycoconjugate Journal, 29, pp.425­432 Sambrook J, Russell D w, 2001 Molecular cloning: A laboratory manual 3rdedition.Cold Spring: Harbor Laboratory Press NewYork, USA 10 Sirakhada D, Lee HC, Sohng JK., 2010 Genetic engineering approach for the production of rhamnosyl and allosyi fiavonoids from Escherichia coll Biotechnology and bioengineering, 107(1), pp.154­62 11 Srivastava, JK, Gupta, s, 2009 Extraction, characterization, stability and biological activity of fiavonoids isolated from chamomile flowers Molecular and celỉular Pharmacology, , pp.138 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI MƠ u TRÊN CHUỘT THIẾU H T MIỄN DỊCH MANG KHỐI UNG THƯ THANH QUẢN NGƯỜI Ths N guyễn T h ị B ìn h * TÓM T T H ởng dẫn; PGS TS Trịnh X uân Đàn* Ung thư biểu mô quản bệnh lý ác tính thường gặp đứng thứ hai ung thư vùng đầu cổ sau ung thư vòm Xuất phát từ thực tế, Việt Nam vẩn đề tạo mô h nh ung thư biểu mô quan người chuột nuđe chưa nghiên cứu nhiêu Chính v vậy, chúng tơi tiên hành nghiên cứu với mục tiêu: Xây đựng mô h nh tạo khối ung thư quản người chuột thiểu hụt miễn dịch kỹ thuật ghép dị lồi; Mơ tả đặc điểm h nh thái mả u chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư quản người Đối tưọ­ng phương pháp nghiên cứu: 10 chuột nhắt BALB/c thiếu hụt miễn dịch, khơng có tế bào lympho T (nude mice, Foxnlnu) nhập từ Công ty Charles­River (Hoa Kỳ) Dòng tế bào úng thư biểu mô quản n p ố i Hep­2 mua từ công ty ATCC, Hoa Kỳ Tiến hành tiêm vào đa đui bên phải chuột dung dịch chứa tê bào ung thư với số lượng lx 106 tế bào/chuột cho tổng số 10 chuột Sau theo dõi h nh thành khồi u ưên chuột lấy mô u làm giải phẫu bệnh sau ghép tuần Kết quả: 10 ngày sau ghép tế bào, 10/10 (Ỉ00%) chuột h nh thành khối u, kích thước khối u đạt 37,2 ± 7,1 mm3 Sau tuần, khối u phát triển đạt kích thước trung b nh 593,6 ± 117,2 mm3 Trên tiêu nhuộm HE: tế bào u CO h nh đa điện, nhân to nhỏ khơng đều, tăng kiềm tính, chất màu thơ đậm, nhiều h nh ảnh nhân chia bất thường tỷ lẹ nhân so với bào tương lớn Một sổ nơi tế u bị loạn sừng tạo thành cầu sừng Quan sát mơ u kính hien vi điện tửừuỵền qua cho thấy tế bào ung íhư có h nh cầu, h nh bẩú dục h nh đa diện có nhân lớn chiếm gần 2/3 tể bào phản ánh tỷ iệ hạt nhân cao Một số tế bào ung thư có h nh ảnh lõm hạt nhân * Đại học Y Dược Thái Nguyên 581 Kết luận kiến nghị: ­ Đã ứng đụng thành công tạo mô h nh tạo khối ung thư quản người chuột thiếu hụt miễn dịch Toàn số chuột nude đểu phát triển khối u có kích thước trung binh 593,6 ± ỉ 17,2 mm3sau tuần ghép írên chuột nude H nh thái vi thể siêu vi thể khối u sau ghép tuần xác định dược khối ung thư quản người chuột íhiểu hụí miễn dịch ià ung thư biểu mơ tế bào vảy quản ­ Tiếp tục nghiên cửu sâu để hồn thiện mơ h nh u qn chuộc nude (như nghiên cứu tạo mạch khối u, chế lan tràn tổ chức di cãn xa khối u ) làm sờ nghiên cứu thuốc dự phòng, điều trị ung thư quàn * Từ khóa: Ưng thư quản người; H nh thái mô u; Chuột thiếu hụt miễn dịch M o r p h o lo g ica l s tu d y a n d u ltr a str u c tu r o f tu m o r tiss u la ryn g al ca rc in o m a in n u d m ic b a rin g h u m a n Summ ary Laryngeal carcinoma is the second common malignancy in head and neck cancers In Vietnam modeler laryngeal carcinoma in rhe nude mouse has not been studied much So, we researched: morphological study and ultrastructure of tumor tissue in nude mice bearing human laryngeal carcinoma with objects: establishment of human larynx carcinoma on nude mice by xenograft method; morphology study and ultrastructure of tumor tissue in nude mice bearing human laryngeal carcinoma Marterials and methods: In this study, we have implanted human laryngeal carcinoma cells (Hep­2 cells line, supplied by ATCC, the USA) into athymic mice (Ba B/c immudeficient mice, namey Foxnlnu, purchaged from Charles­River Co., the USA) by subcutaneous injection of the cancer cells (with X106cells per one mouse) on one thigh of the mice Results: The results for ten days after cell transplantation 10/10 (100%) mice formed tumors, tumor size reached 37.2 ± 7.1 mm3 After weeks, the tumor growth reached an average size of 593.6 ± 117.2 mm3 On a HE staining: tumor cells have polyhedral shape, to small irregular workers, increased alkaline, coarse dark pigment, more unusual images, multiplication, division, proportion of workers than large cytoplasm Some public health where the tumor neurosis horn for horn and forming Observe tumor tissue on a microscope transmission electron shows cancer cells are spherical, oval or polyhedral shape which has a large private accounts for nearly 2/3 of each cell reflects the high proportion of nuclei Some cancer cells have nuclci concave image Conclusions and recommendations: We built successful models to create the volume on laryngeal cancer immune deficient mice All the nude mice developed tumors were average size of 117.2 + 593.6 mm3, weeks after transplantation in nude mice Morphology study and ultrastructural morphology of tumor tissue in nude mice bearing human larynx carcinoma weeks after tumor transplantation showed that the new tumors formed in mice have featured images of laryngeal squamous cell carcinoma * Key words: Human laryngeal carcinoma Hep­2; Nude mice; Genograft I.Đ Ặ T V Ấ N Đ Ung thư quản bệnh lý ác tính thường gặp đứng thứ hai ung thư vùng đầu cổ sau ung thư vòm Hafng năm Mỹ, 10.000 nam giới khoảng 3.000 phụ nữ mắc ung thư quản Hầu hểt bệnh nhân 65 tuổi Ở V iệt Nam, ung thư quản xểp thứ hai sau ung thư vòm họng ung thư đầu cổ đứng hàng thứ chín (3%) ung thư tồn thân Bệnh thường gặp nhiều nam (80%), lứa tuổi 40 ­ 60, xu hướng tỉ lệ người trẻ mắc bệnh ngày nhiều [1] Thực tế cho thấy nghiên cứu xác định chất đặc điểm tế bào ung thư làm sờ cho việc áp dụng mô h nh thử nghiệm tiền lâm sàng Các mô h nh ung thư trước tạo động vật có nguồn gốc đồng lồi Đó bước tiến lớn tạo mô h nh ung thư Tuy nhiên, 582 hạn chế mơ h nh khối u khơng mang đặc tính sinh học giống khối u người, điều hạn chế lớn nghiên cứu chế bệnh lý áp dụng thử nghiệm điều trị cho loại ung thư người Do vậy, yêu cầu cấp thiết cần phải có mô h nh động vật bị ung thư m ang đặc tính sinh học ung thư nguyên tế bào ung thư người để phục vụ nghiên cứu tiền lâm sàng ung thư quản Xuất phát từ thực té, Việt Nam, vấn đề tạo mô h nh ung thư biểu mô quản người ưên chuột nude chưa nghiên cứu nhiều Chính v vậy, tiến hành đề tài “Nghiên cứu đặc điểm h nh thái mô u chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư quản người” với mục tiêu: ­ Xây dựng m h ìn h tạo kh ố i un g th quản người c hu ột thiếu h ụ t m iễn đich k ỹ thuật ghép d ị loài ­ M tả đặc điểm h ìn h thái m ô u ch uột thiếu h ụt m iễn dich m a ng kh ố i u ng th quản người II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 Đối tượn g nghiên cứu ­ 10 chuột nhắt BALB/c thiếu hụt miễn dịch, khơng có tế bào lympho T (nude mice, F ox n lnu) nhập từ Công ty Charỉes­River (Hoa Kỳ) ­ Môi trường nuôi cấy bảo quản tế bào: môi trường EM EM (Eagle's M inimum Essential Medium), Catalog No 30­2003, ATCC bổ sung 10% FBS 1% kháng sinh Penicillin Streptomycine ­ Dòng tế bào ung thư biểu mô quản người Hep2 mua từ công ty ATCC, H oa Kỳ 2.2 P h ưo ng p h áp nghiên cứu 2.2.1 Nuôi c y ghép tế bào ung thư biểu 1Ì1Ơthanh quản người vào chuột Nuôi cấy tế bào ung thư biểu mô quản người môi trường EMEM, bổ sung 10% FBS ỉ % kháng sinh Penicillin Streptomycine Mỗi chai ni cấy diện tích 75 cm2‘cấy chứa 106 tế bào Tế bào nuôi cấy tăng sinh thay môi trường lần/tuàn điều kiện nhiệt độ 37°c, C 5% Khi tế bào phát triển đạt 75­80% điện tích, tiến hành cấy chuyển sang chai Trước ghép, rửa tế bào lần dung địch PBS IX , sau tách dung dịch Trypsin­EDTA IX Hút dung dịch cấy tế bào ung thư biểu mô quản người chuẩn bị vào bơm tiêm ml với số lượng 107/ml c ố định chuột nude tiêm 0,1 ml vào da đùi phải (106 tế bào/chuột) Quá tr nh thao tác thực điều kiện vô trùng tuyệt đối 2.2.2 Theo dõi xác định hình thành khếỉ ung thư chuột ­ Đánh giá khối u, theo dõi phát triển vị trí tiêm (đùi phải) lần/tuần, quan sát, sờ nắn đo kích thước khối u thước xác NSK ­ Xác định kích thước khối u: đo khối u theo hai kích thước dài X rộng thước xác NSK (Nhật Bản), lần/tuần Xác định kích thước khối u theo phương pháp Yamaura c s ­ Theò dõi trọng lượng chuột lần/tuần, xác định bién đổi trọng lượng chuột lần cân 2.2.3 Xác định hình thái vi thể siêu vi thể khối ung thư chuột Sau tuần tiến hành giết chuột, bóc tách khối u, bảo quản dung địch Formalin 10% 24­48 Tiếp theo, đúc khối paraffin khối u, cắt iát dày ụm , nhuộm HE (Hematoxylin Eosin) Đọc, phân tích h nh thái vi thể mơ u kính hiển vi quang học Lấy mẩu mơ vùng u làm tiêu cho kính hiển vi điện tử truyền qua theo phương pháp Hayat MA (1989) Xác định đặc điểm h nh thái mô ung thư kính hiển vi điện tử truyền qua JEM 10I0 (JEOL, Nhật Bàn) Viện Vệ sinh Dịch tễ Trang ương 2.3 X lý sổ liệu: Sử đụng phần mềm SPSS15.0 583 HI KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết nuôi c y, tăng sinh tế bào ung íhư biểu m quản người Tế bào ung thư biểu mô quản người địng Hep2, cơng ty ATCC (Hoa Kỳ) cung cấp Đây dòng tê bào ung thư chuẩn quốc tê nhiều nhà nghiên cứu giới áp dụng thử nghiệm in vitro in vivo Tế bào ung íhư quản Hep2 tế bào biểu mơ, có tính bám dính tốt Có khả tăng sinh nhanh Để chủ động thời gian nuôi cấy phục vụ cho thử nghiệm invitro sau phục vụ ghep tế bào lên chuột nude, tiến hành quan sát tốc độ tăng sinh đòng tế bào H nh Tế bào ung thư biểu mô quản ngày sau nuôi cấy Tế bào ung thư biểu mô quản người nuôi cấy, tăng sinh chai 75 cm2 Sau 24 gieo tế bào, thấy tế bào bắt đầu tăng sinh Với số lượng tể bào gieo ban đầu khoảng 0,3 ­ 0,4 X loVchai, diện tích che phủ chai đạt khoảng 25 ­ 30% Tốc độ tăng sinh tế bào cao khoảng ­ ngày sau gieo Sau ngày, diện tích che phủ chai ni lên tới 65 ­ 70% Sau thời điểm này, tốc độ tăng sinh tế bào chậm lại đạt 80% diện tích chai ni sau ­ ngày Theo khuyến cáo nhà cung cấp, lúc thời điểm thu hoạch tế bào để tiến hành thử nghiệm íưu giữ s ổ lượng tế bào chai ni đạt trang b nh 106 tế bào 3.2 Kích thuức khổi ang th quản chuột nude Kết 10 ngày sau ghép tế bào, 10/10 (100%) chuột h nh thành khơi u, kích thưởc khối u đạt 37,2 ± 7,1 mm3 Sau mần, khối u phát triển đạt kích thước trung b nh 593,6 ± 117,2mm3 (bảng 1) Bảng Kích thước khối ung thư quản đùi chuột Ngày sau ghép Kích thu c khối u (mm3, n = 10) SE U I 37,2 7,1 t_14 74,6 11,5 t_18 107,9 10,6 t_2I 214,2 34,8 t_25 392,4 85,5 t_28 593,6 117,2 , i f f J f| UP Dễ dàng nhận thấy, sau khối ung thư xuất vào thời điểm 11 ngày sau ghép, k h Ễ B y phát triển ĩ ên tục theo thời gian đến kết thúc thí nghiệm Tốc độ phát triển mạnh khối u đạt ỉ J H c khoảng 200 mm3 thời điểm 21 ngày sau ghép tế bào, vòng tuần, khổi u tăng gần gấp l l l l k í c h thước ­ Kểt theo dõi trọng lượng chuột nude 584 J H Bảng Biến đổi trọng lượng chuột lần cân Ngày sau ghép Bỉến đối trọng lượng chuột so vói lần can trước (g) SE t_4 0,13 0,1592 tj 0,05 0,2721 tjl 0,16 0,3412 t_J4 0,59 0,1842 t_18 ­0,15 0,2168 t 21 ­0,20 0,1472 t_25 ­0,16 0,2103 L.28 ­0,17 0,Í092 Mức thay đổi trọng lượng chuột không nhiều lần cân Sau 3­4 ngày, trọng lượng chuột tăng khoảng 0,05 ­ 0,59 gram vòng 14 ngày sau ghép tế bào ung thư Sau đó, trọng lượng chuột có xu hướng giảm 0,15­0,20 gram 3­4 ngày giai đoạn 18­28 ngày sau ghép íế bào Biến đồi khối lượng 1.5 I 0.5 -0.5 t­ t­ til t_14 tjs t_ĩl tj5 tỈ ­1 H nh Biểu diễn biến đổi khối lượng chuột theo thời gian Diễn biến thay đổi khối lượng chuột minh họa rõ nét đồ thị, nhận thấy hai giai đoạn thay đôi khối lượng Giai đoạn 1, tương ứng với tăng trọng lượng chuột, so với bảng 1, lúc khoi ung thư đạt kích thước trang b nh 74,6 ± 1 ,5 mm3 Sau đó, giai đoạn giảm khơi lượng chuột song hành với tăng kích thước khối u Kết kfcjh thước khối u quản người chuột nude sau ghép tuần nghiên cứu tương tự n h ự m n g Hua CS [4] Tác giả nghiên cứu ảnh hưởng cua pi^­N­acetylglucosammyltransferaseS (p3GnT8) đặịrsự phát triển ung thư biểu mơ tế bào vảy quản (dịng Hep 2) cht nude Ket quả: n hóm |fơ ỉột không điều trị với p3GnT8, khối u phát triển sau ­ tuần kích thước trung b nh khôi u vào n g ||h ứ 28 719 ± 28 mm3 Cịn nhóm chuột tiêm p3GnT8­s, khối u xuất hiên sau tuân đạt kích t h * u n g b nh vào ngày 28 1.240 ± 35mm3, cịn nhóm tiêm p3GnT8­si, khôi u xuất sau tuấn l l g ó kích thước trung b nh vào ngày 28 293 ± 16 mm3 So sánh to c t e te f c khối u quản người ghép chuột nude với kích thước khối u quản' » g i Narenđra p Singh Krishna B Verma [6] nghiên cứu vê tác dụng artesunate điểu t | | | g thư biểu mô tế bào vảy quản Theo hai tác giả này, kích thước khối u quản bệnh n iỆ Ệ o dược 22.500 mm3 lớn gấp khoảng 32 lần so với kích thước khơi u quan người phát triển chuột nude nghiên cứu Sau m ột thời gian bệnh nhân điều trị artesunate, kích thước khối u giảm 70% cịn 6.750 mm3 3.3 Đặc điểm vi thể khối u đ i chuột nude H nh ảnh mô bệnh học cho thấy tế bào u tạo thành đải, mật độ tế bào cao Te bào u có h nh đa diện, nhân to nhỏ khơng đều, tăng kiềm tính, chất màu thô đậm, nhiều h nh ảnh nhân chia bất thường, tỷ lệ nhân so với bào tương lớn M ột số nơi tế u bị loạn sừng tạo thành cầu sừng Những té bào ung thư xâm nhập lòng m ạch xâm lấn phá hủy mơ vân M ung thư thường có hoại từ lớn nhỏ Mô đệm đải xơ mảnh bị thâm ĩử iêm tê bào viêm lympho H nh 2A H nh 2B H nh 2A H nh ảnh TB ung thư (HEx 100) H nh 2B H nh ảnh tế bào ung thư đày đặc xâm lấn phá hủy mô vân (400X) Kết tương tự nghiên cứu Andreas p Kyriazis c s [2], M anuela Sacchi c s [5] cơng bố trước H nh ảnh vi thể khối u quản chuột nude có đặc điểm giống khối u quản nguyên phát người Điều có ý nghĩa để nghiên cứu đặc tính sinh học h nh thành phát triển khối u, từ tiếp tục nghiên cứu t m chất phương pháp trị liệu ung thư điều trị ung thư quản thực nghiệm, từ áp dụng cho điều trị ung thư quản người dịng Hep (loại ung thư biểu mơ tế bào vảy) Trên giới có nhiều tác già nghiên cứu tác dụng loại thuốc phương pháp trị liệu ung thư quản chuột nuđe Như nghiên cứu Shilpa c s [8]: chất methanol chiết xuất từ rễ cùa Rubia corđiíolia Linri thuộc họ Rubiaceace giảm tăng sinh tế bào ung thư làm biến đổi h nh thái vi thể tế bào này, gây chết tế bào ung thư nhiều hay tùy thuộc vào liều thời gian điều trị (24 giờ, 48 giờ) 3.4 Đặc điểm hình ỉháỉ siêu c u trúc khối u kính hiển vỉ điện tử truyền qua Quan sát mơ u kính hiển vi điện tử truyền qua cho thấy tế bào ung thư có h nh càu, h nh bàu dục h nh đa điện, nhân lớn chiếm gần 2/3 tế bào phản ánh tỷ lệ hạt nhân cao Các nhân đa h nh dạng thay đổi từ tròn đến kéo dài bất định h nh, với nhiễm sắc thể phân tán hạt nhân bật Một số tế bào ung thư có h nh ảnh lõm hạt nhân Trong bào tương tế bào ung thư thường có quan khác xuất hạt chế tiết Ty thể phong phú có xu hướng tập trung thành nhóm, chúng cho thấy có thay đổi kích thước h nh dạng, từ h nh tròn­h nh bầu đục đến kéo đài­ h nh ống với màng đôi không gian màng tăng lên Ờ số vùng, quan sát thấy tượng sưng phồng ty thể Lưới nội bào phong phú thấy giãn với nhiều ribosome tự do, polyribosome hạt glycogen bị phân tán suốt bào tương Đơi nh n thấy máy Golgi tế bào ung thư Lysosome, sợi myelin, giọt lipiđ không gian bào 586 nh n thấy Điểm đáng ý số tể bào ung thư gắn vào thể nối (đesmosomes) ngăn cách không gian bào M ột loại tể bào khác t m thấy mô ung thư tế bào nhày Các tế bào xuất b nh thường dễ dàng phân biệt với tế bào ung thư h nh dạng bầu dục cùa chúng túi nhày Những túi đặc trưng giọt chất nhày, chiếm số lượng lớn bào tương đẩy hạt nhân đầu tế bào, túi xuất có liên quan chặt chẽ với m áy Golgi lưới nội bào Trong bào tương có vài ty thể nhiều hạt glycogen Ngoài ra, hồng cầu đại thực bào quan sát thấy • I' V ­ 'W‘ -ỳ 'Ể Ê Ê Ê íỊÌỄ ÍÊ Ễ ÍễÊ mMêẩầmhm mmmM Bhh IB H nh 3A H nh H nh ảnh tế bào ung thư H nh 3B H nh 3A (1) nhân lớn, chất nhiễm sắc nằm rải rác, (2) bào tương có hạt lipit Hiển vi điện tử truyền qua X 1500 H nh 3B tế bào có nhân bị kéo đài (1), nhân bị lõm(2j Hiển vi điện tử truyền qua X 1000 Kết nghiên cứu siêu cấu trúc khối u quản loại biểu mô tế bào vảy cùa phù hợp với nghiên cứu Chutima Hanjavanit cs [3], Shilipa cs [7] Như vậy, với việc quan sát h nh thái cấu trúc siêu vi thê té bào ung thư kính hiển vi điện tử truyền qua kính hiển vi điện tử quét với độ phóng đại lớn xác định đặc điểm siêu cấu trúc íể bào ung thư so với tế bào b nh thường, từ làm sở cho việc xác định nguồn gốc phân loại nhiều loại ung thư biệt hóa Ngồi ra, kính hiển vi điện tử traỵên qua(TEM) giúp xác định chắn tổn thương mức siêu vi tể bào ung thư sau điều trị Theo nghiên cứu Shallipa c s tác dụng điều trị methanol chiết xuất từ rễ Rubia cordiforỉia với liều 30mg gây độc cho tế bào ung thư quản tế bào Hep­2 iàm chết tế bào ung thư theo chế chết theo chương tr nh (apoptosis) Dưới kính hiển vi điện tử truyền qua tác giả quan sát thấy tế bào có ty thể bị sưng phồng, đứt gãy ADN, chất nhiễm sắc đông tụ sát màng nhân, màng tế bào biến Cuối cùng, tế bào ung thư chết theo kiểu hoại tử chết theo chương tr nh (apoptosis) Điều rât có ý nghĩa mở hướng nghiên cứu tác dụng dược chất với thực tế điều trị ung thu quản nước ta, nhằm cải thiện t nh trạng bệnh nhân nâng cao chất lượng sống cho bệnh nhân IV K Ế T LƯẶN VÀ K IẾ N N G H Ị ­ Đã ứng dụng thành công tạo mô h nh tạo khối ung thư quản người chuột thiếu hụt miễn dịch Toàn số chuột nude phát triển khối u có kích thước trung b nh 593,6 ± 117,2 111IÌ13 sau tuần ghép ĩrên chuột nude Diễn biến khối lượng chuột tỉ lệ nghịch với thay đổi kích thước khối u ­ H nh thái vi thể siêu vi thể khối u sau ghép mần xác định khối ung thư quàn người chuột thiêu hụt miễn địch ung thư biểu mô tế bào vảy quản ­ Tiếp tục nghiên cứu sâu để hồn thiện mơ h nh u quản chuột nude (như nghiên cứu tạo mạch khối u, ché lan tràn Eổ chức xa khối ũ ) làm sở nghiên cứu thuốc dự phòng, điều trị ung thư quản 587 T À I L IỆU TH A M T H Ả O Võ Quổo Trứ, Trần Minh Trường (2009), Đối chiếu lâm sàng h nh ảnh học MRI ung thư quản”, Tạp chí Y Học TP Hồ Chí Minh, tr 239­242 Andreas p Kyriazis, et al (Ỉ978), “Growth Patterns and Metastatic Behavior of Human Tumors Growing in Athymic Mice”, Canc r R s arch, 38, pp 318628 Chutima Hanjava (2004), “Squamous cell carcinoma in rudd Scardinius erythrophthalmus: histopathology, Infrastructure, and ưansmission”, Int r-R s arch, 61, pp 215­226 Dong Hua, et al (2012), “p3GnT8 Regulates Laryngeal Carcinoma Cell Proliferation Via Targeting MMPs/TIMPs and T G F­pl” , Asian Pacific Journal o f Canc r Pr v ntion, 13, pp 2087" 2093 ­3190 Manuela Sacchi, et al (1990), “Local Adoptive Immunotherapy of Human Head and Neck Cancer Xenografts in Nude Mice with Lymphokine­activated Killer Cells and Interleukin 2”, Canc r R s arch , 50, pp 3113­3118 Narendra p Singh, Krishna B Verma (2002), “Case report of a laryngeal squamous cell carcinoma treated with artesunat ”, Archiv o f Oncology ;10(4), pp 279­280 PN Shilpa, et al (2012), “Induction of Apoptosis by Methanolic Extract of Rubia CordifoIiaLinn in HEp­2 Cell Line is Mediated by Reactive Oxygen Specics”, Asian Pacific Journal o f Canc r Pr v ntion, 13, pp 2753­2758 NGHIÊN CỨU TỎNG HỢP MỘT SỎ DÃN XUẤT CỦA QUINAZOLINE ThS Nguyễn T h ị C ức*; ThS Ngô Thanh H ườ ng* H ướng dẫn: TS Đoàn M H ng TÓM T T Nghiên cứu quy tr nh tổng họp đẫn xuất quinazoline xác định điều kiện để tổng hợp dẫn xuất quinazoline Phương pháp: Phương pháp tổng hợp hữu cơ, phương pháp tinh chế: sắc ký cột, sắc ký mỏng phương pháp kết tinh Phương pháp xác định cấu trúc: phổ khối (MS), phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (H'­NMR, Cỉ3 ­ NMR) hai chiều (COSY, HSQC, HMBC) Kết quả: Tổng hợp đẫn xuất quinazoline xác định cấu trúc chúng: ­ 6­ttÌfluoromethoxyquinazoIin­4(3H)­one (QN1, hiệu suất: 80,4% ­ 7~chloroquinazolin­4(3H)­one (QN2, hiệu suất: 73,2% ­ 5­chloroquinazolin­4(3H)­one (QN3, hiệu suất: 85,0% ­ 6,7­đifiuoroquinazolin“4(3H)­one (QN4), hiệu suấí: 72,3% ­ 6,7, 8­trimethoxyquinazolin­4(3H)­one (QN5), hiệu suất: 70,6% Kết luận: Bằng phương pháp tổng hợp hữu nhiệt độ phản ứng từ 150 ­ I70°c, thời gian phản ứng từ 10 -14 tổng hợp 05 đẫn xuất quinazoline với hiệu suất tương đối cao 70,6 ­ 85% xác định cấu trúc hợp chất tổng hợp đượe * Từ khóa: Dân xuất quinnazoline; Tổng hợp S tu d y o n sy n th sis o f q u in a zo lin d rivativ s Sum m ary Study on syntheis of quinazoline derivatives Determination of conditions for synthesis of quinazoline derivatives Methods: Organic synthesis, refined methods: Column Chromatography, Thin Layer Chromatography and crystallization methods Method of determining the structure: mass spectrometry (MS), infrared spectroscopy (1R), nuclear magnetic resonance spectroscopy DC (Hl­NMR, CỈ3 ­ NMR) and two­dimensional (COSY, HSQC, HMBC) * Đại hoc Y Được Hải Phòng 588 ... ? ?Nghiên c? ?u đặc điểm h nh thái mô u chuột thi? ?u hụt miễn dịch mang khối ung thư quản người? ?? với mục ti? ?u: ­ Xây dựng m ô h ìn h tạo kh ố i un g th quản người c hu ột thi? ?u h ụ t m iễn đich k ỹ thuật... mm3sau tuần ghép írên chuột nude H nh thái vi thể si? ?u vi thể khối u sau ghép tuần xác định dược khối ung thư quản người chuột íhi? ?u hụí miễn dịch ià ung thư bi? ?u mơ tế bào vảy quản ­ Tiếp tục nghiên. .. tạo mô h nh tạo khối ung thư quản người chuột thi? ?u hụt miễn dịch Toàn số chuột nude phát triển khối u có kích thư? ??c trung b nh 593,6 ± 117,2 111IÌ13 sau tuần ghép ĩrên chuột nude Diễn biến khối