Phương pháp nuôi ấu trùng trong thạch được sử dụng để thu ấu trùng giun tròn phục vụ chẩn đoán và nghiên cứu một số bệnh giun tròn. Nghiên cứu này được tiến hành với mục đích cải tiến phương pháp nuôi ấu trùng trong thạch giúp tăng khả năng sống sót và giảm thời gian phát triển của ấu trùng đến giai đoạn gây nhiễm.
CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC đậm so với lơ ĐC Trong độ đậm màu lô TN3 cao (đạt 8,55 điểm) cao 2,30 điểm so với lô ĐC (6,25 điểm), tiếp đến lô TN2 (8,00 điểm), cao 1,75 điểm so với lơ ĐC, sau lơ TN1 (6,75 điểm) cao lô ĐC 0,50 điểm Như vậy, việc bổ sung Px-Agro Super giúp cải thiện đáng kể màu chân gà Việc bổ sung PX-Agro super có ảnh hưởng đến việc tăng màu da chân gà thành phần Px-Agro Super chứa sắc chất tạo màu đặc trưng (Xanthophyl, Lutein, Zeaxanthin ß Caroten) Ngồi ra, bổ sung chế phẩm làm tăng độ đậm màu da chân gà Màu sắc da chân gà tiêu khơng có ý nghĩa đánh giá chất lượng thịt, có giá trị thương mại (Schuberth Ruhland, 1978) tiêu có ảnh hưởng lớn tới thị hiếu người tiêu dùng Ở Việt Nam, người tiêu dùng thường thích chọn gà có màu da chân vàng (vấn đề màu sắc da chân gà nhược điểm lớn gà thịt thương phẩm nuôi nhốt) Điều đồng nghĩa với việc gà ăn thức ăn có bổ sung Px-Agro Super thuận lợi việc bán sản phẩm đầu đáp ứng thị hiếu người tiêu dùng KẾT LUẬN Việc bổ sung chế phẩm Px-Agro Super với mức khác (1, 2, 3%) không làm ảnh hưởng đến tiêu chất lượng thịt gà, góp phần làm tăng tỷ lệ phần thịt có giá trị (thịt đùi thịt lườn) Đồng thời, bổ sung chế phẩm Px-Agro Super làm tăng độ đậm màu da chân gà TÀI LIỆU THAM KHẢO Đặng Thái Hải (2006) Đáp ứng đàn gà thịt Cobb500 với phần protein thấp bổ sung số axít amin khơng thay thế, Tạp chí KHKT Nơng nghiệp, 4(6): 56-60 Nguyễn Thị Hải, Trần Thanh Vân Đoàn Xuân Trúc (2008) Khảo nghiệm khả sản xuất gà thương phẩm Sasso nuôi vụ Thu - Đông Thái Ngun Tạp chí Chăn ni, 2: 9-10 Nguyễn Thị Mai, Bùi Hữu Đồn Hồng Thanh (2009) Giáo trình Chăn nuôi gia cầm, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Proudman J.A., W.J Mellon and D.I Anderson (1970) Utilization of feed in fast and slows growing lines of chickens, Poul Sci., 49: 177-82 Schuberth L and Ruhand R (1978) Cơ sở sinh học nhân giống nuôi dưỡng gia cầm (Người dịch: Nguyễn Chí Bảo) Nhà xuất Khoa học Kỹ Thuật Hà Nội, trang 486-24 Schilling M.W., V Radhakrishan, Y.V Thaxton, K Christensen, J.P Thaxon and V Jackson (2008) The effects of broiler catching method on breast meat quality, Meat Sci., 79: 163-71 Nguyễn Trọng Thiện, Phùng Đức Tiến, Nguyễn Quý Khiêm, Đỗ Thị Sợi, Lê Thị Thu Hiền Nguyễn Thị Mười (2010) Khả sản xuất gà ông bà Hubbard Redbro nhập nội lai chúng, Tạp chí KHCN Chăn ni, 24: 1-8 Vũ Đình Tơn Hán Quang Hạnh (2010) Xác định mức sử dụng bột giun quế (Perionyx excavatus) thích hợp phần ăn gà broiler (Hồ x Lương Phượng) nuôi thả vườn, Tạp chí KHPT, 8(6): 949-58 Trần Cơng Xn (1995) Nghiên cứu mức lượng thích hợp phần nuôi gà broiler: Ross 208, Ross 208-V35, Tuyển tập công trình nghiên cứu KHKT chăn ni (1969-1995), NXB Nơng nghiệp, Hà Nội, trang 127-33 10 Yu L.H., E.S Lee, J.Y Jeong, H.D Paik, J.H Choi and J.C Kim (2005) Effects of thawing temperature on the physicochemical properties of pre-rigor frozen chicken breast and leg muscles, Meat Sci., 71: 375-82 CẢI TIẾN PHƯƠNG PHÁP NI ẤU TRÙNG GIUN TRỊN TRONG THẠCH Vũ Hồi Nam1, Cơng Hà My1 Bùi Khánh Linh1* Ngày nhận báo: 22/06/2020 - Ngày nhận phản biện: 10/07/2020 Ngày báo chấp nhận đăng: 31/07/2020 Học viện Nông nghiệp Việt Nam *Tác giả liên hệ: TS Bùi Khánh Linh Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tel: 0888945599 Email: bklinh5@gmail com KHKT Chăn nuôi số 260 - tháng 10 năm 2020 77 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC TÓM TẮT Phương pháp nuôi ấu trùng thạch sử dụng để thu ấu trùng giun trịn phục vụ chẩn đốn nghiên cứu số bệnh giun tròn Nghiên cứu tiến hành với mục đích cải tiến phương pháp ni ấu trùng thạch giúp tăng khả sống sót giảm thời gian phát triển ấu trùng đến giai đoạn gây nhiễm Kết thu cho thấy, tỷ lệ ấu trùng sống sót trì 60% vòng ngày, đồng thời rút ngắn thời gian phát triển ấu trùng đến giai đoạn L3 Sự rút ngắn thời gian nuôi số lượng ấu trùng thu từ phương pháp hữu ích cho thí nghiệm xác định yêu cầu tăng trưởng cho phát triển, đánh giá tác động hợp chất ấu trùng giun trịn Từ khố: Giun trịn, giun móc, ấu trùng, thạch ABSTRACT A modified agar plate method for culturing nematoda larvae Agar plate method (AP) used for maintenance and collection of nematoda larvae This study aims to modify the AP method, shortening the time larvae develop to infective stage (L3) and increasing the larval survival rate The results showed that, the larvae survival rate remained above 60% during a 7-day period, while the larval development time were reduced This data is useful for further studies on identifying the growth requirements for development, as well as assessing the impacts of numerous substances on nematoda larvae Keywords: Nematode, Hookworm, larvae, Agar ĐẶT VẤN ĐỀ Các lồi giun trịn truyền qua đất (soil transmitted helminths - STHs) gây ảnh hưởng lớn đến sức khỏe cộng đồng nước phát triển, có Việt Nam (Santarem ctv, 2011) Ước tính tỷ người bị nhiễm STHs toàn giới, đặc biệt nơi điều kiện sống cịn nghèo khó (WHO, 2011) Trong đó, lồi giun móc, giun đũa, giun lươn, giun tóc nhóm giun trịn quan tâm nhiều nhất, có tỷ lệ nhiễm cao chó có khả truyền lây sang người Đối với bệnh giun móc giun lươn, nghiên cứu sâu bệnh yêu cầu lượng lớn ấu trùng giun giai đoạn L3, giai đoạn mầm bệnh có khả lây nhiễm cho người động vật Ấu trùng L3 thu sử dụng cho thử nghiệm đánh giá thuốc chế phẩm sinh học in vitro, phân tích điều chế kháng nguyên phục vụ cho mục đích chẩn đốn sớm, để gây nhiễm cho động vật thí nghiệm Do phương pháp thu trứng từ phân động vật bệnh ni hình thành ấu trùng bước tiến hành quan trọng nghiên cứu bệnh Phương pháp Baermann phương pháp thường quy sử dụng để thu ấu trùng 78 giun trịn, nhiên phương pháp có số nhược điểm định hệ thống thiết kế thí nghiệm cồng kềnh, số lượng ấu trùng thu đươc không cao ấu trùng có khả bám vào hệ thống ống dẫn hay vải gạc, khó điều chỉnh điều kiện cho phát triển chúng.Trong đó, phương pháp ni ấu trùng thạch phương pháp sử dụng số phịng thí nghiệm ký sinh trùng giới để thu ấu trùng hiệu (Buonfrate ctv, 2015; Jucelene, 2003), chưa giới thiệu Việt Nam Trứng giun sau thu đặt bề mặt thạch agar thường, nở thành ấu trùng quan sát thấy dễ dàng, thơng thường phải 5-10 ngày để ấu trùng phát triển đến giai đoạn L3 (https:// www.cdc.gov/dpdx/hookworm/index.html) Ở thí nghiệm này, tiến hành cải tiến phương pháp nuôi ấu trùng thạch nhằm rút ngắn thời gian nuôi cấy đồng thời tăng tỷ lệ nở phát triển ấu trùng Kết từ nghiên cứu tảng cho nghiên cứu giun tròn phục vụ mục tiêu nghiên cứu khác giảng dạy ký sinh trùng thú y KHKT Chăn nuôi số 260 - tháng 10 năm 2020 CHĂN NUÔI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3 Phương pháp nuôi ấu trùng thạch 2.1 Vật liệu nghiên cứu Tiến hành pha mơi trường thạch có nồng độ khác nhau: cho bột agar thành phần khác hoà với nước cất theo tỷ lệ (bảng 1), hấp nhiệt độ 121oC vòng 20 phút để dung dịch đồng nhất, đồng thời loại bỏ vi khuẩn, nấm Đổ thạch đĩa petri, dày khoảng cm chờ 20-30 phút để thạch đơng Mẫu phân chó sử dụng thí nghiệm thu thập theo phương pháp ngẫu nhiên đơn giản Gia Lâm, Trâu Quỳ, Hà Nội Mẫu được tiến hành kiểm tra phịng thí nghiệm Bộ mơn Ký sinh trùng - Khoa Thú y - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Giun móc sử dụng thí nghiệm làm đại diện cho số lồi giun trịn khác 2.2 Phương pháp thu trứng giun móc Nhỏ dung dịch cặn có trứng giun móc lên bề mặt thạch, đĩa thạch chứa khoảng 1000 trứng Đặt đĩa thạch (đường kính 30mm) vào đĩa petri to (đường kính 90mm) có chứa 5ml Glycerin 25% Đậy nắp lại, quấn parafilm để tủ ấm 37oC - nhiệt độ tối ưu để trứng phát triển thành ấu trùng Sau ngày, chuyển nhiệt độ tủ ấm xuống 25oC để phù hợp với nhiệt độ phát triển ấu trùng Sau 24h, lấy đĩa thạch kiểm tra theo tiêu theo dõi nhỏ 0,5ml PBS 1X láng bề mặt thạch Mẫu phân chó dương tính với giun móc hịa với nước muối bão hồ, lọc qua rây lọc chuyển vào ống fancol, ly tâm 6.000 vòng/phút 10 phút Giữ lại 2ml phần chuyển vào ống mới, bổ sung 8ml nước cất, ly tâm 6.000 vòng/phút 10 phút Giữ lại phần cặn, rửa lần với nước cất cách ly tâm 10.000 vịng/phút phút Phần cặn Bố trí thí nghiệm thu chứa trứng giun móc Hút nhỏ lên Thí nghiệm bố trí làm lơ theo bảng phiến kính, quan sát kính hiển vi đếm số lượng trứng thu Bảng 1: Tỷ lệ thành phần ba môi trường thạch khác Lơ (Lơ đối chứng) (Lơ thí nghiệm) (Lơ thí nghiệm) Thành phần Thạch thường (2%) Thạch thường (2%) bổ sung thêm peptone (0,25%) Thạch thường (2%) bổ sung thêm peptone (0,25%) Nystatin (200 UI/ml) 2.4 Phương pháp đánh giá kết Sau 24h, kiểm tra ấu trùng nở hàng ngày cách đếm số ấu trùng nở kính hiển vi có độ phóng đại 10 Tỷ lệ phát triển ấu trùng đánh giá vào ngày thứ nhất, thứ 4, thứ thứ 10 Theo dõi 10 ngày - Tỷ lệ phát triển ấu trùng giun móc = (%) (kết tỷ lệ phát triển giá trị trung bình lặp lại đĩa thạch khác nhau) Kích thước 30 ấu trùng ngẫu nhiên đo trực tiếp đĩa thạch ngày cách soi kính hiển vi có độ phóng đại 400 sử dụng phần mềm Infinity Analyzer KHKT Chăn nuôi số 260 - tháng 10 năm 2020 2.5 Phương pháp xử lý số liệu Xử lý số liệu phương pháp thống kê sinh học So sánh thống kê giá trị trung bình sử dụng phần mềm Medcalc 19.2 (https://www.medcalc.org/index.php) Sự sai khác cơng thức coi có ý nghĩa thống kê P≤0,05 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi đến kích thước ấu trùng giun móc Kết đo 30 ấu trùng môi trường thạch khác cho thấy khác biệt kích thước ấu trùng lơ thí nghiệm từ ngày đến ngày 10 (Hình 1) 79 CHĂN NI ĐỘNG VẬT VÀ CÁC VẤN ĐỀ KHÁC Hình Kích thước ấu trùng giun móc (n=30) Lơ 1: mơi trường thạch thường; Lơ 2: môi trường thạch+bổ sung peptone; Lô 3: môi trường thạch+bổ sung peptone thuốc kháng nấm Quan sát kích thước ấu trùng lô cho thấy phát triển ấu trùng vượt trội hẳn so với lô Ở lô 1, ấu trùng đạt kích thước lớn vào ngày thứ trung bình 500μm, ấu trùng lơ đạt tới kích thước 600μm ngày thứ Đối với lơ có bổ sung peptone, ấu trùng phát triển nhanh, tăng từ 303±45μm ngày thứ đạt kích thước 601±47μm vào ngày thứ (P